大鼠神经行为缺损评分与脑梗死率相关性研究分析_张俊清

大鼠神经行为缺损评分与脑梗死率相关性研究分析张俊清1，孟智宏2，樊小农3（1.内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院，内蒙古包头014010；2.天津中医药大学第一附属医院，天津300193；3.天津中医药大学第一附属医院针灸研究所，天津300193）摘要：目的：研究经典线栓法制备局灶性脑梗死模型大鼠的神经功能评分与脑梗死率的相关性。

方法：采用ZeaL-onga 法制作大鼠局灶性脑梗死模型，在不同时间段采用Zausinger 六分法对脑梗死大鼠进行神经功能缺损评分，并用TTC （2、3、5－氯化三苯基四氮唑）溶液对脑组织染色，计算脑梗死率。

结果：六次神经功能缺损评分与脑梗死率之间呈显著相关性（r 1=－0.528；r 2=－0.535；r 3=－0.529；r 4=－0.512；r 5=－0.535；r 6=－0.5888）。

结论：经典线栓法制备的局灶性脑梗死模型（大脑中动脉栓塞）中，大鼠的肢体运动功能与脑梗死率有相关性，第六次神经功能缺损评分与脑梗死率相关性最大，针刺能够改善神经功能缺损情况，提高评分，降低脑梗死率。

关键词：大脑中动脉缺血模型；神经功能缺损评分；脑梗死率；相关性中图分类号：R364．17文献标识码：A 文章编号：1000－1719（2012）11－2140－03Analysis on Correlation between Rats NeurobehavioralScores and Cerebral Infarction Rate ZHANG Jun-qing 1，MENG Zhi-hong 2，FAN Xiao-nong 2（1.The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College ，Inner Mongolia University of Science ＆Technology ，Baotou 014010，InnerMongolia ，China ；2.First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine ，Tianjin 300193，China ；3.Institute of Acupuncture ＆Moxibustion ，First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM ，Tianjin 300193，China ）Abstract ：Objective ：To study the relation between neurobehavioral scores and cerebral infarction rate in rats model which was made by method of classic suture method．Methods ：ZeaLonga method was used to make focal cerebral infarction model．In different periods ，Zausinger six points method was used for neural function defect scale ，and with TTC （2，3，5－chlorinated three four nitro-gen phenyl ）solution to make brain tissue dyeing ，the calculation of cerebral infarction rate was made．Results ：The neural function defect scales and cerebral infarction rate at six time points had a significant correlation （r 1=0.528；r 2=0.535；r 3=0.529；r 4=0.512；r 5=0.535；r 6=0.5888）．Conclusion ：In the focal cerebral infarction model （brain artery embolization ）made by classic su-ture method ，rat body movement function and cerebral infarction rate have correlation ，the sixth correlation of neural function de-fect scale and cerebral infarction rate is the largest．Acupuncture can improve neural function defects ，improve the grade ，reduce the rate of cerebral infarction．Key words ：MCAO ischemia model ；neural function defect scale ；cerebral infarction rate ；correlation收稿日期：2012－05－17基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）；针刺手法的量效关系及生物学机制研究（2010CB530506）作者简介：张俊清（1979－），男，内蒙古呼和浩特人，博士研究生，研究方向：针刺治疗脑血管病机理及针刺手法疗效关系。

通讯作者：孟智宏（1963－），男，教授、主任医师，博士研究生导师，研究方向：针刺治疗对心脑组织保护作用，针刺手法量效关系及生物学基础。

神经功能缺损评分是一种被广泛应用的脑缺血模型评价方法。

资料显示，50% 70%的脑梗死存活者遗留瘫痪、失语等，神经功能缺损评分可直观的反映这些症状和体征，症状与体征的检测又可以反映脑损伤与恢复的程度。

脑梗死灶体积的测定是评价局部脑缺血及缺血性脑损害程度最重要的客观指标之一，是公认的评价药物是否具神经保护效果的金指标。

TTC （2，3，5－氯化三苯基四氮唑）染色法能够直观地显示脑缺血发生的部位和程度，进而对脑梗死体积做出评价。

神经功能缺损评分是评价造模成功的标准，也是神经功能缺损的反应，梗死率是评价脑缺血损伤程度最准确的指标，二者之间是否存在相关性，相关程度如何罕见报道。

本研究复制大鼠大脑中动脉缺血模型（MCAO ），以针刺频率的慢、中、快（1、2、3次/s ）和针刺时间的短、中、长（5s 、60s 、180s ）的两因素三水平针刺参数搭配组合9种针刺参数组，以捻转手法刺激“内关穴”，以神经行为缺损评分、脑梗死率为效应指标，通过偏相关分析研究神经功能缺损评分与通过TTC 计算脑梗死率的相关性，以及相关的程度。

分析TTC 计算脑梗死率与六次神经功能缺损评分的相关性。

1材料和方法1.1试剂与仪器水合氯醛（分析纯）（天津市瑞科有限公司）、多聚甲醛（分析纯）、PBS 溶液、TTC 粉末、生理盐水（天津市联星生物技术有限公司）。

1.2实验动物与分组（1）实验动物：三级动物（SPF）Wistar成年健康雄性大鼠，250 280g，由北京军事医学科学院实验动物中心，实验动物质量合格证号：0014091；动物防疫合格证号（京丰）动防2006055；实验动物生产许可证：SCXK（军）2007－004；（2）实验设计及分组：参照Zea-Longa线拴法复制MCAo模型，分为基础组和针刺组。

基础组包括正常组、假手术组、模型对照组、非针刺组4组，针刺组按针刺时间（5s、60s、180s），针刺频率（60次/min、120次/min、180次/min），两因素三水平正交设计，选用L9（34）正交表（见表1），构成九种针刺参数（用罗马数字Ⅰ－Ⅸ），（见表2）刺激内关穴，共计13组，每组18只大鼠。

表1实验设计方案因素水平表因素水平A：针刺频率（次/s）B：针刺时间（s）11慢5短22中60中33快180长（3）针刺的次数和指标检测：每12h针刺干预1次，72h内共针刺6次，针刺干预前各组大鼠首先进行神经功能缺损评分。

正常组、假手术组、非针刺组、针刺组在造模72h后断头取脑进行TTC染色计算脑梗死率，模型对照组在造模麻醉苏醒后干预进行TTC染色计算脑梗死率。

1.3实验方法（1）模型制备方法：参照Zea Longa 线拴法复制大脑中动脉缺血模型（MCAo），主要步骤：禁食水12h，10%水合氯醛腹腔注射麻醉（250mg/kg）至动物对疼痛刺激反应消失为止，约5 15min。

背位固定于大鼠手术板，局部消毒后备皮。

取颈部正中稍偏左切口22.5cm，分离甲状腺，暴露左侧胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌间的三角区，钝性分离左侧颈总动脉和颈外动脉，并用0号手术线结扎颈外动脉。

在分叉处和近心端处分别用小动脉夹夹闭一段颈总动脉，然后用1mL注射器针头在近心端处扎一个小孔，用直径0.265mm的渔线缓慢插入，待插进之后，放开分叉处的动脉夹，将渔线继续进入颈内动脉，直至遇到阻力为止，渔线进入颅内深度为18 20mm（渔线事先已做好标记），此时插入的渔线正好封闭大脑中动脉开口，阻断大脑中动脉的血流。

插线成功后结扎颈总动脉及针孔处，放开另一个动脉夹，剪去多余的手术线并滴上2 3滴庆大霉素，分层缝合，清理伤口后放入笼中。

（2）造模成功判定方法：模型组：大鼠造模清醒后，按Zausinger六分法对其神经功能进行评分，去除未造模成功及病情过轻过重的模型，即评分为0、4和5分的大鼠；评分为1、2、3分的均视为造模成功，入组观察。

Zausinger六分法标准如下，0分：不能自发行走；1分：自由走动状态下向病变对侧旋转；2分：抓住鼠尾，大鼠向病变对侧旋转；3分：对于施向病变对侧的侧压力抵抗力下降者；4分：不能伸直病变对侧前爪，甚至全身向对侧屈曲；5分：无神经功能缺损。

（3）针刺干预方法：参照华兴邦等“大鼠穴位图谱的研制”，内关穴位于前肢内侧，离腕关节约3mm左右的尺桡骨缝间。

针具选用苏州医疗用品厂生产的“华佗牌”毫针，规格0.30mmˑ40mm。

针刺时间：造模成功后待大鼠清醒，即给予第一次针刺，每12h针刺1次，共72h，针刺6次。

（4）观察指标及方法：神经行为学评分Zausinger 六分法，具体见造模成功的判定方法。

脑梗死率：TTC染色法计算脑梗死率，大鼠取脑后，速冻分离去除嗅球、小脑和低位脑干，大脑部位等分切成5片，每片2mm。

将脑片置于事先配好的0.4%TTC溶液中（0.4gTTC粉末溶于40mLPBS，即1mol/L的K2HPO4溶液，现配现用，避光保存），用锡纸包上（避光），37ħ温孵15 20min。