磁珠法回收琼脂糖凝胶DNA

磁珠法DNA胶回收试剂盒

Mag-MK Gel DNA Purification Kit

产品编号：SK8743/SK8744

包装规格：50次/100次

试剂盒组成

组分SK8743，50次SK8744，100次

Buffer MB2 30 ml 60 ml

PureMag Beads 1.5 ml 3 ml

Buffer MGB 30 ml 60 ml

Buffer MGW 24 ml 2×24 ml

TE Buffer(pH8.0) 5 ml 10 ml

操作手册1份1份

保存方法及注意事项

请将试剂盒中的PureMag Beads置于2~8°C保存，其余试剂室温保存，有效期详见包装。

Buffer MB2中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

产品介绍

本试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp~30 kb的DNA片段，回收效率可达70%。该试剂盒中的纳米磁珠能够特异性吸附核酸分子，去除其他杂质，得到高质量的DNA回收产物。所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。本试剂盒具有以下特点：

1. 适用范围广，回收效率高，对于100 bp~30 kb之间的DNA片段回收效率在70%以上，尤其对于长片段DNA片段的回

收，磁珠法比柱式法的回收效率高出20%左右。

2. 操作简单快速，整个回收过程仅须30分钟左右。

3. 无需离心，实现DNA回收的高通量化和自动化。

标准回收步骤

自备材料：磁力架、水浴锅、1.5 ml离心管和无水乙醇。

按瓶身标签说明在Buffer MGW中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。密封于室温保存。

Buffer MB2在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37°C溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

请提前将水浴锅调至65°C备用。

1. 通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开，用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切

下，放入1.5 ml离心管中，称重。

✓ 若胶块重量超过300 mg及胶浓度>1.5%，请将切下的目的胶块放入2 ml的离心管中。

✓ 尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。

✓ 若胶块体积太大，可先将胶块切成小块。

✓ 切胶过程尽可能快，减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。

2. 根据胶块的重量，按每100 mg琼脂糖胶块（如胶块不足100 mg则用水补充至100 mg）加入200 µl Buffer MB2。

3. 将含有胶块的离心管置于65°C水浴5-10 min，间或混匀，直至胶块完全溶化。

✓ 胶块完全溶化即可，过长时间的处理可能导致DNA损伤。

4. 取出离心管，若凝胶浓度≤1.5%，加入与Buffer MB2等体积的Buffer MGB和25 μl PureMag Beads；若凝胶浓

度>1.5%，分别加入与Buffer MB2等体积无菌ddH2O和Buffer MGB，再加入25 μl PureMag Beads，吸打混匀，室温静置2 min。

✓ 加PureMag Beads之前，请充分混匀。

✓ 请务必将PureMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留PureMag Beads吸打干净。

✓ 处理多个样品时，可先将Buffer MGB与PureMag Beads按8：1的体积比混匀，然后向每个离心管中加入225 µl上述混合液。

5. 将离心管置于磁力架上3~5 min，待PureMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。

✓ 吸弃上清前，若管口粘有少量PureMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有PureMag Beads吸附至管壁上。

✓ 当所有PureMag Beads完全吸至管壁时，上清液无色澄清，若5 min之后上清液是淡黄色，请适当延长吸附时间，直到上清液无色澄清。

✓ 吸弃上清时请勿吸入PureMag Beads，尽量吸净上清。

✓ 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管臵于磁力架上，再次吸取上清。

6. 加入900 μl Buffer MGW，吸打或者点振混匀，然后将离心管置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁上

之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。

✓ Buffer MGW首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。

✓ 吸弃上清前，若管口粘有少量PureMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有PureMag Beads吸附至管壁上。

✓ 吸弃上清时，请勿吸入PureMag Beads，尽量吸净上清。

7. 重复步骤6一次，室温开盖干燥15~20 min或者55°C恒温箱中开盖干燥5~7 min至管内无液体残留。

✓ 干燥前，请尽量吸净管内的液体。

✓ 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其臵于磁力架上，待所有PureMag Beads 完全吸至管壁之后再吸净管内的液体。

8. 加入50 µl TE Buffer (pH8.0)，65°C水浴5~10 min，间或混匀。

✓ 请将管壁上所有PureMag Beads悬浮在TE Buffer中。

✓ 根据实验需要可将TE Buffer用无菌的双蒸水（pH>7.5）代替。

9. 取出离心管并置于磁力架上1 min，待PureMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得回收

的目的DNA。

✓ 吸取上清前，请确保PureMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入PureMag Beads，否则影响产物纯度。

常见问题解答

1. DNA回收效率较低或者未回收到目的片段

a. 胶块溶解不完全。可适当延长水浴时间，并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。

b. 胶块体积太大，溶胶困难。可先将胶块切碎，再水浴溶胶。