电导率测定法

电导率测定法取各个样品20ml，在各样品溶液温度为20℃、40℃、60℃时，分别测定其电导率。

盐度测定方法取各个样品，在恒温水浴中保持在各样品溶液温度为20℃、40℃、60℃时，分别测定其盐度。

浊度测定方法取各个样品50ml，在各样品溶液温度为20℃、40℃、60℃时，分别测定各样品的独度值。

黏度测定方法取各个样品150ml，在各个样品溶液温度为20℃、40℃、60℃°分别测定各样品的點度值。

表面张力测定方法取各个样品20ml，在各个样品温度为20℃、40℃、60℃时，分别测定各样品的表面张力。

粒径测定方法取各个样品溶液20ml,用马尔文激光粒度仪测定各个样品溶液的粒径分布。

Agilent Eclipse Plus C18（2.1mm×100mm，1.8μm）色谱柱，流动相为乙腈-水溶液，柱温为40℃，流速为0.35ml/min。离子源为ESI 源，正离子模式，质谱扫描范围m/z100~1100，毛细管电压4000V，干燥气流速11L/min，干燥气温

度350℃；雾化气压力50Psig，碎片电压150V，分析质荷比。通过UPLC-Q-TOF/MS 技术进一步进行MS/MS 分析，确定碰撞能量，推测其可能的裂解途径，最终确定化学结构。采用UPLC- Q- TOF/MS 技术对比体外图谱化学成分峰，对大鼠血浆中的成分进行分析鉴别，鉴别出大鼠血浆中原型成分及其代谢产物。

血浆样品的处理精密吸取血浆0. 25 mL，加入内标( 20 mg•L－1盐酸麻黄碱甲醇溶液) 20 μL，氨水100 μL，涡旋30 s，再加仿 2. 5 m L，涡旋3min，超声20 min，静置2 h，4000 r •min－1离心5min，收集层液，层液再加氯仿 1 m L，涡旋3min，超声20 min，静置1 h，4000 r •min－1离心5min，收集层液，并 2 次收集到的下层液，50℃水浴上用氮气吹干，用甲醇溶解并定容至100μL，2 000 r•min-1离心10 min，取上液50 μL 进样［2］。内标法以峰高定量物质组分吸收研究

SD 大鼠随机分为6 组，每组4 只分别连续给大鼠灌胃制备液马钱子单煎液、马钱子-甘草共煎液真溶液、马钱子-甘草共煎液悬浮液、马钱子-甘草共煎

液沉降颗粒，马钱子-甘草共煎液全相态体系等供试品，分别于给药前及给药后不同时间点，用肝素化的毛细管从大鼠眼眶后静脉丛采血0. 3mL，给药后的釆血时间为：5，10，15，20，30，45min，1，2，3，5，8，12，24h。采集的血液置肝素化试管中，离心，分离血浆，

置-80℃冰箱保存，采用LC-DAD-TOF/MS

技术，测定其药代动力学行为。在1h、3h 每组取2 只动物处死，剩余动物在最后48h 处死，剥离脏器，分别匀浆后测定有效成分及其代谢物的含量

血浆样品的处理精密吸取血浆0. 25 mL，加入内标( 20 mg·L－1盐酸麻黄碱甲醇溶液) 20 μL，氨水100 μL，涡旋30 s，再加仿 2. 5 m L，涡旋3min，超声20 min，静置2 h，000 r ·min－1离心5min，收集层液，层液再加氯仿 1 m L，涡旋3min，超声20 min，静置1 h，000 r ·min－1离心5min，收集层液，并 2 次收集到的下层液，50℃水浴上用氮气吹干，用甲醇溶解并定容至100μL，2 000 r·min-1离心10 min，取上液50 μL 进样［2］。内标法以峰高定量

通过前段时间马钱子-甘草汤液相态研究，已初步摸索液相条件如下：流动相乙腈-酸水(18：82) ，流速1.0mL•min-1，检测波长264 nm，进样量10μL，柱温：30℃。同时对上述实验得以下结果：

结论1：与药典比较，单煎和配伍煎煮后马钱子碱和士的宁含量均较药典含量低，推测可能由于煎煮药材对生物碱提取有损失。这是符合实验规律的。

结论2：与的单煎相比较，经配伍甘草后，其毒效成分马钱子碱和士的宁含量均又所下降，下降比例分别为9.25%和68.94%，分析这可能是其减毒的因素之一。

结论3：单煎液进行拆分后，其种马钱子碱的含量分别为：胶体＞溶液＞沉淀＞混悬。士的宁的含量分别为：胶体＞溶液＞沉淀＞混悬。由此判断单煎液不同相态中2种毒效物质呈现出相同变化规律，且其总和马钱子碱为1.5077，士的宁为2.1910，均大于单煎液中的含量，推测可能是测量误差。

结论4：配伍液进行拆分后，其种马钱子碱的含量变化分别为：沉淀＞内液＞混悬＞溶液。而士的宁的含量变化分别为：沉淀＞胶体＞混悬＞溶液。由此判断单煎液不同相态中2种毒效物质呈现出相同变化规律，且其总和马钱子碱为0.760510966，士的宁为1.097531，均小于配伍中的含量。

对于利用HPLC-Q-TOF/MS技术，分别对比马钱子-甘草共煎液，马钱子、甘草单煎液、马钱子-甘草共煎液不同相态体系中化合物结构的变化，考察是否有新的化合物产生分目前尚未取得进展，还需进一步探索。下面是近期即将开展的实验设计：

首先，SD 大鼠随机分为6 组，每组4 只分别给大鼠灌胃（按0.2g/kg大鼠体重计算）制备液马钱子单煎液、马钱子-甘草共煎液真溶液、马钱子-甘草共煎液悬浮液、马钱子-甘草共煎液沉降颗粒，马钱子-甘草共煎液全相态体系等供试品，分别于给药前及给药后不同时间点，用肝素化的毛细管从大鼠眼眶后静脉丛采血0. 3mL，给药后的釆血时间为：5，10，15，20，30，45min，1，2，3，5，8，12，24h。采集的血液置肝素化试管中，离心，分离血浆，

置-80℃冰箱保存，采用LC-DAD-TOF/MS技术，测定其药代动力学行为。在1h、3h 每组取2 只动物处死，剩余动物在最后48h 处死，剥离脏器，分别匀浆后测定有效成分及其代谢物的含量。

初步条件设为：Agilent Eclipse Plus C18（ 2.1mm×100mm，1.8μm）色谱柱，流动相为乙腈-水溶液，柱温为40℃，流速为0.35ml/min。离子源为ESI 源，正离子模式，质谱扫描范围m/z100~1100，毛细管电压4000V，干燥气流速11L/min，干燥气温度350℃；雾化气压力50Psig，碎片电压150V，分析质荷比。通过UPLC-Q-TOF/MS技术进一步进行MS/MS 分析，确定碰撞能量，推测其可能的裂解途径，最终确定化学结构。采用UPLC- Q- TOF/MS 技术对比体外图谱化学成分峰，对大鼠血浆中的成分进行分析鉴别，鉴别出大鼠血浆中原型成分及其代谢产物。