土霉素钙预混剂效价检验操作

土霉素钙预混剂效价检验操作规程

4.8效价测定

4.8.1.器具

4.8.1.1.操作室光线明亮，操作室分为两部分，彼此分开；一部分为一般操作

间，一部分效价测定操作间。操作间内设有达到空气消毒的紫外线灯；

装有空调设备，控制室温20-25℃；操作台应稳固，台面用玻璃板垫平，

用水平仪校准,保持水平。室内应避免抗生素的污染。

4.8.1.2.双碟

为硬质玻璃，深16-17mm,内径约90mm，碟底表面要求平坦，厚薄均匀无凹凸现象。用过的双碟经0.11Mpa 、121℃30min高压蒸汽灭菌后用水冲洗，刷洗干净，再用蒸馏水清洗三次，晾干。

将双碟盛于适宜容器内在150-160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸汽灭菌30min，备用。

4.8.1.3.陶瓦盖

内径约103mm,外径约108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗，干燥。

4.8.1.4.钢管外径(8.0±0.1)或(7.8±0.1) mm,内径(6.0±0.1) mm和高(10

±0.1) mm,每套钢管重量差异不得超过±0.05g,钢管内外壁及两端面光

洁平坦,管壁厚薄一致.每次使用后先经0.11Mpa、121℃30min高压蒸汽

灭菌用水冲洗干净后，再用洗衣粉水在超声波中清洗30min，用水冲洗

再用蒸馏水冲洗二次，并在电炉上煮沸几分钟，晾干，在160～165℃

干热灭菌2h以上备用。

检查方法：用游标卡尺从不同的位置测量外径,内径及高度是否符合要求。

4.8.1.

5.钢管放置器

置于效价测定操作间内，钢管放置器为防止抗生素污染，应定期用75%

的酒精棉擦拭，并用酒精棉火焰烧小孔。

4.8.1.6.镊子

夹钢管用。夹钢管后，用水清洗，再用蒸馏水冲洗3次,置适宜容器内

在160～165℃干热灭菌2h。

4.8.1.7.恒温培养箱

隔水式为宜，35～37℃及26～27℃，隔板上可备有带孔玻璃板并垫平。

4.8.1.8.灭菌刻度吸管

吸取菌液及培养基用。实验用后应立即置5%石碳酸或1：1000新洁尔

灭溶液中消毒后，再按玻璃容器常规洗涤，晾干。置适宜容器中160℃

以上干热灭菌2h或121℃蒸汽灭菌30min烘干备用。

4.8.1.9.玻璃容器

包括移液管、刻度吸管及容量瓶等按“玻璃器皿检定规程”进行标定，要符合一等品规定，每次应用前用清洁液浸泡，水冲洗，纯化水冲洗三次，淋干。

4.8.1.10.称量管

用毕先用水冲洗淋干，置清洁液中浸泡2小时以上，自来水冲洗、蒸馏水冲洗三次，置于干燥器中备用。

4.8.1.11.电热恒温干燥箱室温+10℃～250℃

4.8.1.12. 恒温水浴锅37℃～100℃

4.8.1.13. 抑菌圈测定仪

仪器必须定期按抑菌圈测定仪检验规程进行自校符合规定方能使用。

4.8.1.14. 分析天平天平感量0.1mg

4.8.2. 方法管碟法

4.8.2.1 指示菌:藤黄微球菌

4.8.2.1.1 藤黄微球菌(28001)菌液制备

在测定样品前1～2天,从冰箱中取出传代用的母种(母种每月传代一次).放置室温片刻后,于甲酚皂液消毒和紫外灯消毒30分钟以上的洁净工作室内,按无菌操作,在火焰旁,接种在另一支斜面培养基上,置26～27℃的恒温培养箱中.培养24小时,取出在洁净室内,按无菌操作用灭菌过的培养基III 或0.9%的灭菌氯化钠溶液将斜面菌苔洗下,制成悬浮液.置2～8℃的冰箱中备用，保存期为一个月。

4.8.2.1.2 平皿培养基制备

采用抗生素检定培养基Ⅱ号,PH6.5～6.6.称取抗生素检定培养基Ⅱ号

27.0g,溶解于1000ml蒸馏水中,用6.0mol/L氢氧化钠H或1mol/L盐酸调节

PH,PH略高0.2～0.4,使消后的PH为6.5～6.6.然后分装于三角瓶内,用棉塞、牛皮纸、细绳子包扎好，放置压力蒸汽消毒器内，121℃蒸汽灭菌30分钟,待消毒完毕,冷却至60℃左右,取出.再取少许倒入平皿,凝固后于36±1℃恒温箱内,恒温培养2天后,肉眼检查无杂菌后备用.有效期限为15天。

4.8.2.1.3指示菌(28001)斜面培养基制备

称取营养琼脂32.0g于1000ml蒸馏水中,用6.0mol/LNaOH调节

PH,PH略高0.2～0.4,使消后的PH为7.0～7.2.然后分装于茄子瓶和试管内,用棉塞、牛皮纸、细绳子包扎好，放置于压力蒸汽消毒器内，121℃蒸汽灭菌30分钟，待消毒完毕，冷却至60℃左右，取出，摇匀铺成斜面。凝固后取少许于36±1℃恒温箱内，恒温培养2天后，肉眼检查无杂菌，放入冰箱备用。有效期为一个月。

4.8.2.1.4PH6.0缓冲溶液

主要成份及各称:磷酸氢二钾:2g；磷酸二氢钾:8g；加水使成1000ml,滤过,分装,121℃蒸汽灭菌30分钟。有效期为20天。

4.8.2.1.5 无菌水的制备

将蒸馏水分别分装于三角瓶和试管中,用棉塞、牛皮纸、细绳子包扎好, 121℃蒸汽灭菌30分钟.有效期为20天。

4.8.2.2 操作步骤

4.8.2.2.1 精确称取土霉素标准品适量于50ml烧杯中(使之配成1000u/ml),加

2%草酸溶液适量使pH值至1.5～2.0，重复搅拌，暗处放置45min后完全移入到50ml容量瓶中，加灭菌水定量制成每1ml中约含1000单位的溶液，静置，封好置5℃以下冰箱中备用（此标准品储备液使用期限为：7天）。使用时将标准液放至室温,再用缓冲溶液稀释成每ml含10-40单位的土霉素溶液。

样品的前处理：根据样品的估计效价，精密称取适量，加2%草酸溶液适量使pH值至1.5～2.0，重复搅拌，暗处放置45min后加灭菌水定量制成每1ml 中约含1000单位的溶液，静置，取上清液。即得供试品溶液，备用。

4.8.2.2.2称样量的计算：

W＝V×C／P

式中: W：为需标准品或供试品的重量（mg）；