诊断临床病原体检查
临床常见病原体检测方法及诊断意义
临床常见病原体检测方法及诊断意义简介本文介绍了临床常见病原体的检测方法及其诊断意义。
病原体检测对于正确诊断并治疗疾病至关重要，因为不同的病原体可能导致不同的病情和治疗方法。
常见病原体检测方法以下是常见病原体检测的一些常用方法：1. 病原体培养：通过将患者样本接种到特定培养基中，培养条件适合病原体生长繁殖，然后观察培养结果，鉴定病原体种类。
2. PCR（聚合酶链式反应）：通过扩增病原体DNA或RNA片段，使其数量增加到可以观察到的水平。
PCR可用于检测细菌、病毒、真菌等多种病原体。
3. 血清学检测：通过检测患者血液中的抗体或抗原，判断是否存在特定病原体感染。
血清学检测方法包括ELISA、免疫荧光等。
4. 影像学检查：通过X射线、CT、MRI等影像学技术，观察病变部位或病原体引起的影响，如肺部感染的阴影。
诊断意义病原体检测的诊断意义在于确定病原体种类及其数量，对选择合适的治疗方案和预后评估具有重要意义。
1. 确定病原体种类：不同的病原体可能导致不同的疾病，因此准确确定病原体种类有助于明确疾病的诊断。
2. 指导治疗方案：针对不同的病原体，可能需要使用特定的抗生素或抗病毒药物进行治疗。
病原体检测结果可以指导医生选择合适的治疗方案，避免盲目使用药物。
3. 预后评估：某些病原体可能与严重的疾病及不良预后相关。
通过病原体检测及其数量的评估，医生可以更好地评估患者的预后情况，采取相应的治疗措施。
结论临床常见病原体的检测方法及其诊断意义对于疾病的准确诊断和治疗具有重要作用。
通过选择合适的病原体检测方法，并正确解读检测结果，可以更好地指导医疗决策和改善患者预后。
病原诊断检验指标
病原诊断检验指标病原诊断检验指标引言病原体是致病性微生物，如细菌、病毒、真菌和寄生虫等，可以引发各种感染性疾病。
准确快速地识别和鉴定病原体对于疾病的控制和治疗至关重要。
病原诊断检验指标是指用于识别和检测病原体的生物学、化学和免疫学方法和试剂物质。
本文将详细介绍病原诊断检验指标的种类和应用。
一、细菌感染的病原诊断检验指标1. 细菌培养：将患者的临床样本（如血液、尿液、痰液等）接种到含有营养物质的培养基中，利用细菌的生长特性进行培养。
培养后，通过观察形状、颜色、菌落大小等特征，以及鉴定试剂盒的使用，可以确定感染的细菌种类。
2. 细菌DNA检测：通过提取患者样本中的细菌DNA，利用PCR技术扩增特定的细菌基因片段。
利用PCR产物的特异性，可以确定细菌的存在与否。
3. 细菌抗生素敏感性测试：将培养出的细菌与一系列抗生素接触，观察抗生素对细菌的抑制作用。
根据细菌对不同抗生素的敏感性，可以确定最佳的抗生素治疗方案。
二、病毒感染的病原诊断检验指标1. 病毒抗原检测：通过检测患者样本中病毒抗原的存在与否，采用免疫学方法，如ELISA、免疫荧光等。
病毒抗原检测可以快速诊断病毒感染, 如乙型肝炎、流感等。
2. 病毒核酸检测：该方法通过提取患者样本中的病毒RNA或DNA，利用PCR技术进行扩增和检测，以确定病毒的存在与否。
病毒核酸检测常用于HIV、HPV等病毒感染的诊断。
三、真菌感染的病原诊断检验指标1. 真菌培养：将患者样本接种到含有真菌生长所需的培养基中，观察培养物的生长情况，确定是否存在真菌感染。
一些真菌培养需要特定的培养条件和培养时间较长。
2. 真菌抗体检测：通过检测患者血液中特定的真菌抗体，如组织胞浆菌、念珠菌等，可以诊断出真菌感染的存在。
四、寄生虫感染的病原诊断检验指标 1. 寄生虫卵团检测：通过显微镜观察患者样本中是否存在寄生虫卵团，如蛔虫、钩虫等。
该方法适用于肠道寄生虫感染的初步筛查。
2. 寄生虫抗原检测：通过检测患者样本中寄生虫特定抗原的存在与否，采用免疫学方法，如ELISA、免疫荧光等。
临床病原学检查
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑷耐药基因检测 如MRSA中mecA基因检测
耐药性统计和分析
100
WHONET 80
60
东部
西部
40
北部
20
0 第一季度 第二季度 第三季度 第四季度
建立本院、本地区和本国的细菌耐药 性监测数据库和网络
第三节
医院感染检查（Nosocomial Infection）
医院感染检查
易感因素 3.抗生素敏感试验的结果解释以及它们与
临床抗生素剂量的关系 4. 各种临床标本中的主要致病菌及临床
意义 5.什么是药敏试验及基本检验方法
• 参考书： 《现代病原学检验与临床实践》 上海科学技术文献出版社 倪语星 主编
医院感染检查
8.医院环境监测和消毒灭菌监测 ➢空气培养：沉降法采样 ➢物体表面监测：压印法 ➢医务人员手部细菌监测 ➢消毒灭菌效果监测
小结
复习思考题：
名词解释：微生物直接检测、微生物 非培养检测、医院感染、药敏试验、 耐药性、联合用药
问答题：
1.简述病原学诊断的基本原则 2.医院感染的定义、感染源、感染途径及
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测 ➢ 痰（咽拭子）培养
病原菌——肺炎链球菌，肺炎克雷 伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌，金 黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌等 半定量3+~4+为致病菌，1+~2+怀疑 为污染菌
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测 ➢ 痰（咽拭子）培养
甲型溶血性链球菌是亚急性细菌性心 内膜炎的主要致病菌
内源性：患者自身皮肤、口腔、咽部和胃 肠道固有的正常菌群等（免疫力低下患 者）
医院感染检查
临床感染之病原体检验
(二)细菌学检验程序
1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。
由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多， 一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病 有关，另外由于接受药物治疗，使某些细 菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此， 在分析结果时应紧密结合临床。
3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾 炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑 膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口 腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。
第四节 上呼吸道感染
(一)常见病原体 1.革兰阳性
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓 链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒 状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母 菌、放线菌、奋森螺旋体; 2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、
铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动 杆菌、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体
4. 呼吸道还可见病毒感染，常见 普通感冒或流行性感冒，咽炎 和扁桃腺炎等，均应结合临床 进行诊断。
第五节 下呼吸道感染
1.革兰阳性
(一)常见病原体
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、
肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核
分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆
菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;
2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠
3.抗体检测
为病毒检测的快速诊断方法，较常用。 (1)中和试验：主要检测中和抗体lgG，此抗
体持续时间长有诊断意义，阳性率和特异 性均高。双份血清效价4倍增高。 (2)特异性IgM抗体测定：此抗体在病后4天即 可出现，2周可达高峰，常用于早期诊断。 用 ELISA、间接免疫荧光法等检测，敏感 性和特异性较高。
传染病护理学中的病原体检测与诊断方法
传染病护理学中的病原体检测与诊断方法随着科学技术的不断进步，传染病的诊断和检测方法也得到了显著提升。
病原体的快速准确检测和诊断，在预防和控制传染病的过程中起着至关重要的作用。
本文将介绍传染病护理学中常用的病原体检测与诊断方法，包括传统方法和现代技术。
一、传统方法1. 临床表现观察法通过观察患者的临床症状和体征，医生可以初步判断患者可能感染的病原体。
例如，咳嗽、发热、呕吐、腹泻等症状可能是呼吸道、肠道等病原体感染的信号。
2. 细菌培养法细菌培养法是一种传统的病原体检测方法。
通过将临床标本如血液、尿液、痰液等放置在适宜的培养基上，培养并分离出潜在的病原体。
这种方法不仅可以检测病原体的存在，还可以进一步进行药敏试验，指导药物的选择和治疗方案的制定。
3. 血清学检测法血清学检测法是通过检测患者体内特定病原体相关抗体的变化来进行诊断的。
这种方法通常是通过ELISA（酶联免疫吸附试验）等技术，检测血液中病原体抗原的抗体水平。
血清学检测法可以用于许多传染病的早期诊断和流行病学调查。
二、现代技术1. 分子生物学方法分子生物学方法在传染病护理学中得到了广泛应用，其中包括PCR （聚合酶链反应）和核酸杂交等技术。
PCR可以检测和扩增微生物的特定DNA或RNA序列，快速准确地识别和鉴定病原体。
核酸杂交则可以检测和分离出含有特定核酸序列的病原体。
2. 免疫学方法免疫学方法包括流式细胞术、酶联免疫吸附试验和荧光免疫分析等技术。
这些方法通过检测血液或其他标本中的特定抗体或抗原来快速诊断传染病。
例如，ELISA可以检测到特定病原体抗原或抗体的存在，并且具有高灵敏度和特异性。
3. 生物传感器方法生物传感器是一种利用生物分子与生物传感器中的生物元件之间的相互作用进行传感和检测的技术。
生物传感器可以检测和识别微生物感染和病原体。
这种技术的优点是操作简便、快速高效，减少了传统方法中繁琐的检测流程。
总结：传染病护理学中的病原体检测和诊断方法不断发展与完善。
临床常见病原体检查
02
病毒检查
病毒分离培养
分离培养
将病原体从患者体内或环境中分 离出来，在细胞培养基中进行培 养，观察病毒对细胞的感染和增
殖过程。
培养基选择
根据病毒的种类和特性选择适宜的 培养基，如动物细胞、昆虫细胞或 植物细胞培养基。
培养条件
病毒分离培养需要在一定的温度、 湿度和气体环境条。
衣原体抗原检测
衣原体抗原检测的优点是操作简便、快速，适用于大 量人群的筛查。
衣原体抗原检测是通过检测患者体内是否存在衣原体 抗原，来判断是否感染衣原体。
衣原体抗原检测的缺点是敏感性较低，可能出现假阳 性或假阴性的结果，需要结合临床表现和其他检查结 果进行综合判断。
衣原体核酸检测
培养分离的缺点是操作复杂、 耗时较长，需要专业人员操作 和解读结果。
组织病理学检查
组织病理学检查是一种有创性的真菌检查方法，通过取疑似感染部位的活组织进行病理学检 查。
组织病理学检查的优点是可以观察到真菌在组织中的侵犯情况和组织反应，有助于确诊和评 估病情。
组织病理学检查的缺点是有创伤性，需要专业人员操作和解读结果。
感染。
直接镜检通常使用涂片或刮片法， 将疑似感染部位的标本涂抹在载 玻片上，然后进行显微镜检查。
直接镜检的优点是操作简便、快 速，但敏感性较低，有时需要多
次检查才能确诊。
培养分离
培养分离是真菌检查的常用方 法，通过将疑似感染部位的标 本接种在培养基上，观察真菌 的生长和繁殖情况。
培养分离的优点是特异性高， 可以明确病原体的种类和药敏 试验，有助于指导临床治疗。
支原体培养分离是诊断支原体感染的重 要方法，通过采集患者呼吸道分泌物、 痰液等标本，在培养基上进行培养，观 察支原体是否生长繁殖，从而确定是否
临床病原体检查(1)
耐甲氧西林葡萄菌筛选试验
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27
细菌耐药性检查
耐药菌监测试验
耐青霉素肺炎链球菌检测试验
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28
小结
1、如何进行病原体检查标本的
采集及送检？
2、医院常见病原体检查项目有
哪些？有何临床意义？
3、如何进行病原体检查及对细
菌耐药监测？
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29
性传播疾病病原体检查
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4
感染类型发生变化的原因
• 改善了卫生条件
• 提高了生活水平
• 菌苗、疫苗接种
• 抗菌药物的应用
• 现代检查和治疗手段
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5
临床病原菌检查的意义
• 感染性疾病的明确诊断 • 通过药敏实验指导合理用药 • 病原体监控和耐药性监控
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6
标本的采集和运送
• 血液
• 尿液
临床感染常见病原体检查
• 细菌检查 • 真菌检查 • 病毒检查 • 支原体检查 • 螺旋体检查 • 立克次体检查 • 衣原体检查 • 寄生虫检查
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12
医院感染常见病原体检查
医院感染常见病原体
• G-杆菌为主(发酵和非发酵菌) • 真菌 • 葡萄球菌 • 厌氧菌
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13
医院感染常见病原体检查
药物敏感试验
K-B纸片琼脂扩散法
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22
细菌耐药性检查
药物敏感试验
稀释法
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23
细菌耐药性检查
药物敏感试验
E试验
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24
细菌耐药性检查
耐药菌监测试验
实验诊断-临床病原体检测
萼状病毒（Calicivirus）科 特异性IgM和IgG抗体
近期感染和早期诊断
• 传染源 急性感染病人 亚临床感染者
• 传播途径 粪口途径 密切接触传播
第五节 性传播疾病病原体检测
• 性传播性疾病（sexually transmitted disease，STD）：是 指通过各种性接触而传播的侵犯皮肤、 性器官及全身多脏器的疾病，简称性 病（venereal disease）
慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎， 肝硬化，肝癌。
慢性HBsAg携带者。 • Anti-HBs或抗HBs：中和抗体
乙型肝炎病毒血清标记物检测
• HBeAg：有乙型肝炎，是病毒复制活跃， 传染性强的指标；持续阳性易转变为慢性 肝炎； HBeAg+和 HBsAg+可垂直传播。
• Anti-HBe或抗Hbe：出现于急性感染的恢 复期，持续时间较长。意味着HBV部分被 清除或抑制，复制减少，传染性降低。
• 怀疑厌氧菌感染，采用床边接种为宜。
脓液及创伤感染分泌物标本
• 开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤采取 脓液或病灶深部分泌物，置于斯氏运送培养 基送检。
• 封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽取， 怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。
• 大面积烧伤的创面分泌物：用无菌棉纤多点 采取脓液或分泌物，置于无菌试管中送检。
2、特点
（1）感染源
病原体来源于住院病人、 医务人员、探视者、陪护人员， 来自于医院环境及未彻底消毒 灭菌的医疗器械、血液制品的 污染菌等，大多为条件性致病 菌，且有程度不同的耐药性。
（1）感染源
细菌为最常见的病原体， 以革兰阴性杆菌为主。近十余 年来常见耐甲氧西林葡萄球菌 医院感染，留置导尿等的凝固 酶阴性葡萄球菌感染率上升， 手术切口和尿路肠球菌感染也 不少见。厌氧菌和深部真菌作 为机体正常菌群常引起内源性 感染。
诊断学临床常见病原体检测
掌 1、临床各类标本的采集、运送和检查的方法；
握 2、临床常见病原体的种类分布及变迁情况 ；
3、耐药病原体检测的意义。
熟
医院感染常见病原体的检查。
悉 了 1、药敏试验的原理和方法
解 2、性传播疾病病原体检查的内容
一、临床各类标本的采集运送和检查方法 二、病原体耐药性检测 三、临床常见病原体检测 四、病毒性肝炎检测 五、性传播疾病病原体检测 六、医院感染常见病原体检测
药物敏感试验
耐药筛选试验：以单一药物、单一浓度检测细菌耐药性。
折点敏感试验：是仅用特定抗生素检测细菌耐药性。
药物敏感试验
报告方法：
• 敏感(susceptible，S) S ：测试菌能被测定药物常规剂量给药后 在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。
• 耐药(resistant，R) R：测试菌不能被在体内感染部位可能达到的 抗菌药物浓度所抑制。
执行标准均来自临床实验室标准协会（CLSI）
（一） 概 念
耐药性（drug resistance）：是指细菌对药物所具有的相 对抵抗性。
固有耐药性（intrinsic resistance）：是由细菌染色体基 因决定而代代相传的耐药，如肠道杆菌对青霉素的耐药。
获得耐药性（acquired resistance）：是细菌与药物反复接 触后对药物的敏感性降低或消失，大多由质粒介导其耐药性 ，但亦可由染色体介导。
（一）细菌感染检查项目的选择
PCR技术 基因探针技术
细菌感染
抗原抗体检测
培养
涂片镜检
（二）病毒感染检查项目的选择
特异性抗体检测
电镜检查
细胞培养
核酸检测（PCR）
（三）真菌感染检查项目的选择
临床病原体检查的常用方法
病原体是指侵犯人体、导致人体受感染的微生物，其中对人体伤害性最大的是病毒和细菌。
当人体被病原体入侵之后，这些微生物开始在人体中繁殖生长、释放毒性，进而导致人体出现不同的病症，这个过程就称为感染。
但是人体在被病毒入侵以后，能够激发人体内的抵抗力，与病毒对抗，这也就是我们常说的免疫力。
然后身体内部的免疫和入侵后的病毒，不断对抗，如果身体免疫能力强，那身体就不形成感染，病原体便会逐渐消失，如果身体免疫力较弱，无法对抗强悍的病毒，那将会形成感染，感染一旦恶化、扩散，就会对人体造成生命安全的威胁。
对抗感染性病毒，除了机体自身的免疫功能，还可以借助外力，比如抗菌药物，在药物的帮助下，可以有效击退病毒，将疾病治愈。
一、临床病原体检查临床病原体检查的目的主要是为了明确是否已经发生感染，确定病原体属于什么类型，其次是将体外抗微生物药物敏感实验结果呈现出来。
此外，检查临床病原体也是为了配合流行病学的调查，协助密切监察病毒的发生趋势，然后及时向有关部门报告。
一般来讲，展开一次临床病原体检查，首先要通过医生和护士采集标本，然后由检验师送往检验科进行检验，检验科通过直接显微镜检查、血清学检查、细菌培养等方式进行检验，然后出具检验报告，最后再由医生明确诊断，分析后予以合理的用药。
二、临床病原体标本采集在采集标本的过程中，要遵循以下几个原则，第一，要根据患者的患病史，同时结合患者的临床表现，确定采集什么类型的标本，然后再选择患者病变发生明显的部位进行采集；第二，要明确采集标本前，患者是否使用过抗生素药物，一般在发病的早期，患者会采取抗生素药物治疗，来对抗病毒，如果患者使用过抗生素，要在标本采集上注明，以免影响标本的检验结果；第三，采集标本的环境要干净卫生，采集后的标本要置于无菌器皿中，并且密封完好，以免在采集、运送过程中被污染；第四，标本在采集之后，必须立刻贴上标签，和检验申请单一起送入检验科，以免出现差错。
总之，要遵循无菌、及时、符合要求、标清注明的原则。
实验诊断-临床常见病原体检测：性传播疾病病原体检测
实验诊断-临床常见病原体检测：性传播疾病病原体检测性传播疾病病原体检测性传播疾病（sexually transmitted disease， STD）简称性病，是一类能通过各种性接触、类似性行为及间接接触而传播，主要侵犯皮肤、性器官和全身脏器损害的疾病。
包括梅毒、淋病、艾滋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、生殖器疱疹、尖锐湿疣、生殖器念珠菌病、细菌性阴道病、滴虫病等20余种疾病，其中前3种属于《中华人民共和国传染病防治法》规定管理的乙类传染病。
一、流行病学和临床类型（一）流行病学1.病原学细菌（淋病奈瑟菌，杜克雷嗜血杆菌等）、病毒（人类免疫缺陷病毒，人乳头瘤病毒，单纯疱疹病毒-Ⅰ等）、支原体（解脲脲原体，生殖支原体等）、螺旋体（梅毒螺旋体等）、衣原体（沙眼衣原体D-K型，L1，L2，L3型等）、真菌（白念珠菌等）和原虫（阴道毛滴虫等）。
2.传播途径性行为传播、间接接触传染、血液与血制品传播、对胎儿与新生儿的传播、职业传播（二）常见临床类型1.获得性免疫缺陷症（AIDS）又称艾滋病，由人类免疫缺陷病毒（HIV）通过结合细胞表面的CD4蛋白受体进入易感细胞引起部分免疫系统被破坏。
2.梅毒（shyphillis）是由苍白密螺旋体引起的疾病，一般过程可分为三个阶段：一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒。
3.淋病（gonorrhea）由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系统的急性或慢性化脓性感染。
4.非淋菌尿道炎（non-gonococcalurethritis，NGU）主要是由沙眼衣原体、解脲脲原体等通过性接触所引起的尿道炎症。
5.生殖器疱疹（genitalherpes）和尖锐湿疣(condyloma acuminatum) 分别由单纯疱疹病毒和人乳头瘤病毒所引起的性病。
6.软下疳（chancroid）由杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi) 感染而引起的性病。
二、检查项目和临床应用（一）AIDS病原体检测1.HIV的分离培养病毒培养是检测HIV感染最精确的方法。
临床病原体检查
2.AST选择与应用
1) K-B纸片琼脂扩散法：技术简单、所用试剂量少、 不需特殊设备、易于判断，自由选择用药，是临床 实验室普遍使用的定性药敏试验。
2) 稀释法：定量药敏试验技术，易于标准化，但试验 费时，多用于研究
3) E试验：直接定量药敏技术，结果准确、重复性好、 操作简便易行，但试纸条昂贵，多用于研究
可见生长的最低浓度 II. MBC：能杀死99.9%测试菌的最低药物浓度
常用AST方法
常用并比较成熟的实验室方法是NCCLS推荐 的方法
1) K-B纸片琼脂扩散法 2) 稀释法 3) E试验 4) 联合药敏试验 5) 一些特殊细菌的药物敏感试验
3)E试验
a) 药敏试验的直接定量技术，结合稀释法和 扩散法的原理、特点
标本采集和运送各论
1. 血液标本 2. CSF与其他无菌体液标本 3. 尿液标本 4. 呼吸道标本 5. 粪便标本 6. 泌尿生殖道标本 7. 创伤、组织和脓肿标本
1.血液标本
❖ 采集时间： ➢发热初期和高峰期(≥38℃）或低温（≤36℃） ➢已用抗菌药物治疗者，在下次用药前采集
❖ 采血量： ➢成人5 ～ 10ml/次， ➢婴儿和儿童1 ～ 2ml/次
临床医学五年制
实验诊断学
许 建 成 讲师
一、标本采集和运送 二、检测方法 三、临床感染常见病原学实验诊断 四、抗菌药物敏感性试验和细菌耐药性检查 五、医院感染的实验诊断
一、标本采集和运送 1. 基本原则 2. 各论
标本采集和运送基本原则
1. 采集的标本无外源性污染 2. 标本在应用抗菌药物或伤口局部处理前收集 3. 采集后及时送检 4. 不要在标本中添加任何防腐剂 5. 在检验申请单上医生应提供患者的临床资料
临床病原体检查
➢ 培养瓶消毒
➢ 采血量
➢ 采血套数
➢ 振摇
➢ 室温送检
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（二）尿标本的采集
➢ 晨起第一次尿液为佳 ➢ 冲洗外阴部、尿道口 ➢ 清洁中段尿 ➢ 导尿 ➢ 耻骨穿刺采集膀胱内尿液 ➢ 不得加防腐剂和消毒剂
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（三）粪便标本的采集
➢ 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。 ➢ 排便困难者，采用直肠拭子采集。 ➢ 根据细菌种类不同选用合适的运送培养液以提高阳性检
➢ Diagnosis.
➢ Source of the specimen.
➢ Ordering physician.
➢ Immunization history and antimicrobial therapy.
➢ Objective.
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（一）血液标本的采集
➢ 适应症
➢ 采集时机
➢ 皮肤准备
烈性传染病标本的采集和运送不符合相关规定
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三、检查方法
➢ 直接显微镜检查。 ➢ 病原体抗原与抗体的检测。 ➢ 病原体核酸的检测。 ➢ 病原体的分离培养与鉴定。
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（一） 直接显微镜检查本检查法：
革兰染色：细菌、真菌 抗酸染色：抗酸杆菌（结核、麻风） 墨汁染色：隐球菌
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寄生虫感染检查项目的选择与应用评价
➢直接显微镜检查：观察寄生虫 生活史的各阶段，是寄生虫感 染的主要诊断依据。 ➢寄生虫抗体检测：辅助诊断。
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支原体感染检查项目的选择与应用
➢ 直接显微镜检查：无价值。 ➢ 分离培养：阳性可明确诊断。 ➢ 目前临床多检测支原体抗原
临床病原体检查
墨汁染色 新型隐球菌
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一、细菌真菌涂片检查的优缺点
优点：快速诊断或初步诊断 缺点：不能准确鉴定细菌真菌的属种；未进行
药敏试验，不能准确指导临床抗生素治疗。
细菌真菌培养鉴定和药敏试验（第二、三部分 ）
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第二部分 细菌真菌培养鉴定及临床意义
一 血液 二 中段尿 三 粪便 四痰 五 穿刺液 六 分泌物 七 器械
述多个项目；
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采集方法
要采集深部痰（sputum），而不是唾液和口水； 自然咳痰法(Expectorated sputum)： 最好为清晨第一口痰，用清水反复漱口用力咳出第
一口痰于无菌容器内; 支气管镜采集法（Bronchoscopy）；
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结果报告形式
报“正常菌群”： 培养出的均为不致病的细菌， 或培养出的细菌种类较多且无优势菌； 一般血液科或抵抗力极度低下的病人，不报正常菌群，
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细菌室接到已采集血液的培养瓶后，立即放入
自动血液培养检测仪，自动培养及实时检测
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结果报告形式
阳性初步结果报告： 仪器发出阳性报警，阳性标本平均检出时间约10小时； 取出阳性瓶，对血液涂片及革兰氏染色； 立即将涂片结果（G+、G-细菌，球菌或杆菌，或真菌）
电话通知相应科室，并将涂片结果在网上发出； 利用阳性血液进行K-B药敏试验，第二天将药敏结果电话
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3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
结核分枝杆菌（TB）菌体表面含有脂质成分，不易着 色，但一经着色后，即使在酸或乙醇的作用下也不容 易脱色；
抗酸性菌呈红色，其它细菌及细胞等背景呈蓝色； 油镜下仔细查遍整个涂片，或至少100个视野。
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3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
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• 泌尿生殖道标本 可用尿道口分泌物、外阴糜 烂面分泌物、宫颈口分泌物和前列腺液等。
• 创伤、组织和脓肿标本 首先清创，用无菌拭 子取材。
2021/3/11
二.检查方法
１.显微镜检查 • 悬滴法用于病原体的动力观察，暗视野或
相差显微镜用于病原体的生长、形态、运 动方式。 • 染色检查：革兰氏染色用于细菌和真菌的 检查；抗酸染色用于结核菌及放线菌的检 查；墨汁染色用于新型隐球菌的检查。
感染性疾病实验诊断程序
• 正确、规范采集和运送标本 • 通过直接显微镜查见病原体，或检出病原
体抗原成分，或通过分子生物学方法检测 到病原体核酸，结合病人病史、症状、体 征，可作出初步诊断 • 同时，进一步对病原体进行分离和鉴定， 确定感染病原体的类型 • 对细菌和真菌感染要进行抗生素敏感试验
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2.青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP） • 青霉素是治疗肺炎链球菌的首选药物，耐
药菌株对青霉素治疗无效。 • 应用苯唑西林纸片检测。
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3. 超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的检测
• 主要由革兰阴性杆菌产生，质粒介导的对 青霉素和三代头孢菌素以下类抗生素广泛 耐药。
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• 多 瓶 接 种 ① 厌 氧 菌 菌 血 症 占 菌 血 症 515%, ②有10%菌血症不是单一微生物引起, ③长期使用抗生素患者可呈现L型菌. ④免 疫低下患者易发生真菌感染；根据情况做 二种血培养瓶的培养,需氧和厌氧或需氧和 L型培养。
• 标本采集操作 应注意严格无菌操作，避免 污染杂菌。
• 标本送检 接种血液样本的培养瓶应立即送 检，如因某种原因不能立即送检时，勿放 冰箱存放。
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尿液 常用清洁中段尿。对于厌氧菌采用膀胱 穿刺法收集、无菌厌氧小瓶运送。
粪便 取脓、血、粘液送检，排便困难及婴幼 儿可用直肠拭子采集，根据检验目的选用不同 的运送培养基及分离培养基提高检出率。
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细菌耐药性检查
抗菌药物的作用机制 • 干扰细菌细胞壁的合成，使细菌不能生长繁殖
。 • 影响细菌细胞蛋白质的合成，使细菌丧失生长
繁殖的物质基础。 • 破坏核酸的代谢，阻碍遗传信息的复制。
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• 抗生素的广泛使用所造成的抗生素的 选择性压力使医院感染控制面临严峻 挑战，因此对细菌耐药性的发生机制 和耐药监测便成为临床微生物检测中 的一项重要工作。
，12张 • 培养温度、时间：35℃，18-20小时 • 判断标准：NCCLS当年版
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• “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量 给药后在体内达到的血药浓度所抑制；
• “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位 可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临床治疗无 效。
• “中介”者提示该细菌对常规用量体液或组织 中的药物浓度的反应性低，使用高于正常确诊方法 • 病毒感染 细胞培养是最常用的病毒分离方法
，抗原和血清学检测临床应用最广泛 • 真菌感染 真菌培养和形态学检测最常用 • 寄生虫感染 从病人血液、体液、排泄物中检
• 产酶株不能单独采用青霉素类和三代头孢 治疗。
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临床感染常见病原体的检查
1.流行病学特点 • 新现和再现传染病 • 多重耐药的细菌的出现 • 医院感染和条件致病菌的增加 2.临床类型 • 细菌感染是临床常见的感染类型 • 病毒感染发病率最高 • 真菌感染的发病率明显上升
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呼吸道标本 鼻咽拭子、痰、纤支镜采集物，经 气管采集分泌物可避免正常菌群污染，是确定 下呼吸道感染的理想标本。
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• 脑脊液及其它体液 对于脑脊液常见病原菌如 脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌， 抵抗力弱，采集后应立即接种。对于胸、腹水 和心包积液由于含菌量少宜接种量大或按血培 养处理。
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抗菌药物的选择性压力
耐药菌株极少
抗生素暴露
耐药菌株为 主
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细菌的耐药性及其发生机制
1.遗传学机制
• 染色体介导的耐药 为细菌本身所固有的耐药 ，一般具有种属特异性,如肠球菌耐头孢菌素 ，一些革兰阴性杆菌耐万古霉素等。
• 质粒介导的耐药 耐药基因易于传播,目前该 类耐药在临床上占有重要地位。如由质粒介导 的产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌。
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104 cfu/ml
2.液体稀释法
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.125 0
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耐药菌监测试验
1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测 • 包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN) 。 • 不能使用青霉素和头孢菌素类抗生素治疗。
• 主动外排机制 如铜绿假单胞菌对多种常用的 抗生素耐药,主要是由于其外膜存在着独特的 药物泵出系统。
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药物敏感试验
1.纸片扩散法（K-B法） • 菌液浓度：0.5麦氏浊度（1.5×108CFU/mL） • 琼脂平板厚度：4mm（9cm，25ml；15cm，
60ml) • 抗生素纸片：9cm，6-7张（4张左右）；15cm
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2.生物化学机制
• 产生灭活酶或钝化酶 这些酶可使抗生素失活 。如产生β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯 霉素乙酰基转移酶等。
• 作用靶位的改变 作用靶位改变后使抗生素失 去作用位点。如甲氧西林耐药的葡萄球菌可以 产生一种新的青霉素结合蛋白，使细菌与β-内 酰胺类抗生素的亲和力降低而导致耐药。
标本的采集、运送和检查方法
一．标本的采集和运送 • 所有采集标本均置于无菌或清洁容器中，不能
接触消毒剂和抗菌药物。 血液：一般在发热初期和高峰期采集，如已用抗
生素，则在下次用药之前采集。成人采血量为 每次10-20毫升，儿童和婴儿为1.5-5毫升。专用 血培养瓶。 • 血标本采集次数 根据研究，仅采血一次分离率 约占80%，培养2次分离率约占90%，而培养三次 的分离率约占99%。