慢病毒包装原理及应用
2020年慢病毒包装原理-介绍.pdf
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
慢病毒包装原理
慢病毒包装原理
慢病毒包装是利用细胞中自身的基因表达机制，将外源基因引入细胞中，使其成为一种慢性感染病毒，它能在基因组中数月甚至多年连续作用，从而带来相应的治疗效果。
慢病毒包装主要是将需要表达的基因和病毒质粒结合，这种具有可复制性的结构，携带着外源基因，并利用病毒的自复制性能力将基因投射到感染细胞内，这种基因的稳定表达能够产生慢性的治疗效果。
慢病毒包装有助于保持病毒的稳定性，防止出现突变情况，而且能够更加精准地靶向特定的病灶。
此外，经过慢病毒包装之后，所生成的新型病毒可以有效防止外源基因的过早衰竭和可能造成的其他副作用，从而为基因治疗的药物的应用带来很大的便利。
慢病毒系统简介及应用
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体，然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。
当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3' 端形成1~4个U。
U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA茎环结构（stem loop）。
在siRNA表达载体中，构成siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4个U 3 '突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。
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三质粒表达系统包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的 控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白 vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒 G 蛋白 (V SV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型慢 病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载 体进行浓缩，提高了滴度； 转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，还保 留 350 bp 的 gag 和 RRE，并在其中插入目的基因或标志基因 ( 绿色荧光蛋白 GFP) 。将 载体系统分成三个质粒最大的益处是使序列重叠的机会大大减少，减少载体重组过程中产生 RCV 的可能性。通过三质粒共转染 293T 细胞，超速离心后病毒滴度可达 109IU /m l 。
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所 有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗 粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假 病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目 的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
学海无 涯
二、这一系统的目的，主要是为了解决以下问题： 1.对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基 因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为 RNAi，cDNA 克 隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。 2. 进行稳转细胞株的筛选； 3. 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液； 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒 介 导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 三、慢病毒载体介绍 慢病毒载体（ Lentiviral vector, LVs ）是在 HIV-1 病毒基础上改造而成的病毒载体系 统，它能高效的将目的基因（或 RNAi ）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基 因组是正链 RNA ，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为 DNA ， 形成 DNA 整合前复合体，进入细胞核后， DNA 整合到细胞基因组中。整合后的 DNA 转录 mRNA ，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生 RNAi 干扰。 慢病毒载体介导的基因表达或 RNAi 干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细 胞 基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分 裂细 胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合 率低的 腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。大量文 献研究表 明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视 网膜、造血 干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。 慢病毒载体不表达任何 HIV-1 蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫 反应也较低，不影响病毒载体的第 2 次注射。 四、慢病毒载体的构建
慢病毒包装原理介绍精编WORD版
慢病毒包装原理介绍精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
慢病毒包装的原理
慢病毒包装的原理
慢病毒（lentivirus）是一类RNA病毒，通常被用于基因转染和基因治疗。
慢
病毒包装是指将需要传递的外源基因包装到慢病毒颗粒中，以便将其传递到目标细胞中。
慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装信使RNA（mRNA）和包
装蛋白等多个步骤。
首先，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装。
慢病毒的组装是一个复杂的
过程，它涉及到病毒基因组的复制、转录和翻译等多个步骤。
在这个过程中，病毒基因组的RNA被转录成mRNA，然后被翻译成包装蛋白和其他病毒结构蛋白。
这
些蛋白质随后会组装成完整的病毒颗粒。
其次，慢病毒包装的原理还涉及到包装mRNA的过程。
在病毒颗粒组装的过
程中，包装蛋白会识别并结合到病毒基因组的特定序列上，然后将mRNA包装到
病毒颗粒中。
这个过程是高度特异性的，只有符合特定序列的mRNA才能被包装
到病毒颗粒中。
最后，慢病毒包装的原理还涉及到包装蛋白的作用。
包装蛋白在病毒颗粒组装
的过程中起着关键的作用，它能够识别特定的RNA序列，并将其包装到病毒颗粒中。
此外，包装蛋白还能够保护包装的mRNA免受降解的影响，从而确保外源基
因的稳定传递。
综上所述，慢病毒包装的原理涉及到病毒颗粒的组装、包装mRNA和包装蛋
白等多个步骤。
这些步骤是高度协调和特异性的，能够确保外源基因的稳定传递到目标细胞中。
因此，对慢病毒包装原理的深入研究不仅有助于我们更好地理解病毒传播和基因转染的机制，还有助于开发更高效、更安全的基因治疗和基因转染技术。
慢病毒包装原理-介绍
慢病毒包装零碎简介及利用之杨若古兰创作一、慢病毒包装简介及其用处慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因医治载体.区别普通的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力.慢病毒载体的研讨发展得很快，研讨的也非常深入.该载体可以将外源基因无效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达.在感染能力方面可无效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多品种型的细胞，从而达到良好的的基因医治后果，在美国曾经开展了临床研讨，后果非常理想，是以具有广阔的利用前景.目前慢病毒也被广泛地利用于表达 RNAi 的研讨中.因为有些类型细胞脂质体转染后果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的按捺感化通常是短暂的，因此使其利用受到较大的限制.采取事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的计谋，不单使脂质体无效转染的细胞品种添加，而且对基因表达按捺后果也不减色于体外合成 siRNA ，在持久波动表达载体的细胞中，甚至可以发挥持久阻断基因表达的感化.在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指点 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾.当RNA 聚合酶Ⅲ碰到连续 4 个或 5 个 T 时，它指点的转录就会停止，在转录产品 3' 端构成 1~4 个U . U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依附的启动子，其特点是启动子本身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）.在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的公理与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合构成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA .构建载体前通常要通过合成 siRNA 的方法，寻觅高效的 siRNA ，然后从中挑选符合载体请求的序列，将其引入 siRNA 表达载体.慢病毒载体（ Lentiviral vector ）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够无效感染非周期性和有丝分裂后的细胞.慢病毒载体能够发生表达 shRNA 的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵和分化的后代细胞中表达 shRNA ，实此刻多品种型的细胞和转基因小鼠中特异而波动的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研讨基因功能，和发生特定基因表达降低的动物提供了可能性.慢病毒表达载体包含了包装、转染、波动整合所须要的遗传信息.慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所须要的所有辅助蛋白.为发生高滴度的病毒颗粒，须要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞以后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子.二、这一零碎的目的，主如果为了解决以下成绩：1. 对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效力，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大添加，这就为 RNAi，cDNA 克隆和陈述基因的研讨提供了一个有益的途径.2. 进行稳转细胞株的筛选；3. 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液；在细胞相干的实验操纵中，对于一些按惯例方法难以转染甚至没法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效力，以达到目的基因的高效瞬时表达.三、慢病毒载体介绍慢病毒载体（ Lentiviral vector, LVs ）是在 HIV-1 病毒基础上改造而成的病毒载体零碎，它能高效的将目的基因（或RNAi ）导入动物和人的原代细胞或细胞系.慢病毒载体基因组是正链 RNA ，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其本身携带的反转录酶反转为 DNA ，构成 DNA 整合前复合体，进入细胞核后， DNA 整合到细胞基因组中.整合后的DNA 转录 mRNA ，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或发生RNAi 干扰.慢病毒载体介导的基因表达或 RNAi 干扰感化持续且波动，缘由是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂.另外，慢病毒载体能无效感染并整合到非分裂细胞中.以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体比拟，比方不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相干病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有光鲜的特色.大量文献研讨标明，慢病毒载体介导的目的基因持久表达的组织或细胞包含脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等.慢病毒载体不表达任何 HIV-1 蛋白，免疫原性低，在打针部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第 2 次打针.四、慢病毒载体的构建1. 构建道理慢病毒属于逆转录病毒科，但其基因组结构复杂，除 gag、pol 和 env 这 3 个和单纯逆转录病毒类似的结构基因外，还包含 4 个辅助基因，vif、vpr、nef、vpu 和 2 个调节基因 tat 和 rev . HIV 21 是慢病毒中最具特征性的病毒，第一个慢病毒载体零碎即以此病毒为基础进行构建的.慢病毒载体的构建道理就是将 HIV 21 基因组中的顺式感化元件 ( 如包装旌旗灯号、长末端反复序列 ) 和编码反式感化蛋白的序列进行分离.载体零碎包含包装成分和载体成分：包装成分由 HIV 21 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式感化序列而构建，能反式提供发生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV 21顺式感化序列.同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点拔出的目的基因.为降低两种成分同源重组发生有复制能力的病毒 (RCV ) 的可能性，将包装成分的5 ′ LTR 换成巨细胞病毒 (CMV ) 立即初期启动子，3 ′ LTR 换成 SV 40 polyA 位点等.将包装成分分别构建在两个质粒上，即一个表达 gag 和 pol、另一个表达 env .根据这个道理，Naldini 和 Kafri 等构建了三质粒表达零碎.2. 三质粒表达零碎三质粒表达零碎包含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒.其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不发生病毒包膜蛋白及辅助蛋白 vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒 G 蛋白 (V SV 2G)，利用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且添加了载体的波动性，答应通过高速离心对载体进行浓缩，提高了滴度；转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，还保存 350 bp 的 gag 和 RRE，并在其中拔出目的基因或标记基因 ( 绿色荧光蛋白GFP) .将载体零碎分成三个质粒最大的好处是使序列堆叠的机会大大减少，减少载体重组过程中发生 RCV 的可能性.通过三质粒共转染 293T 细胞，超速离心后病毒滴度可达109IU /m l .3. 四质粒表达零碎为了减少 HIV 21 包装结构的序列同源性，进一步减少重构成 RCV 的可能性，Dull 等人将辅助基因去除.但因为 gag2pol 的转运须要 rev，是以，在上述的三质粒零碎的基础上，构建成四质粒表达零碎，该零碎加上含 rev 的质粒减少了发生RCV 的可能性，而且对非分裂期细胞转导效力无影响.五、慢病毒载体利用1. 将目的基因 /RNAi 基因转入难以转染的细胞，比方神经元细胞、干细胞或其它原代细胞；2. 将目的基因 /RNAi 基因转入动物组织，以期获得持久表达；3. 构建波动表达目的蛋白 /RNAi 的细胞系，再用exvivo的方法导入动物体内；4. 基因医治；5. 转基因动物；6. 基因敲除；7. 药物研讨：构建表达受体蛋白的细胞系，研讨药物的感化；8. 快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核细胞表达方法.。
关于慢病毒包装的简介
关于慢病毒包装的简介1、技术原理：慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。
其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。
慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。
慢病毒可以把外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达；因此成为导入外源基因的有力工具。
现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA 研究以及活体动物实验中。
2、技术优势：慢病毒与其他病毒比较，具有以下优势：① 表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；② 免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验；③ 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T 治疗作用于人体。
3、质量控制：① 基因序列测序② 载体酶切鉴定③ 慢病毒通过qPCR对病毒基因拷贝进行测定④ 一般情况下，慢病毒的滴度在108~109TU/ml4、应用：细胞感染：慢病毒可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，为神经领域、心血管领域、肝脏、肌肉、眼、肺、肿瘤及其他领域的科研工作者们提供更强有力的基因研究工具。
体内注射：神经系统病毒图片来源百度※独有的病毒分级纯化工艺，满足您从永生化细胞到原代细胞和干细胞，到动物体内水平等不同实验需求。
①基因过表达慢病毒服务②基因干扰慢病毒服务③ MicroRNA研究慢病毒服务④ CRISPR/Case9慢病毒服务。
最新慢病毒包装原理-介绍
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
慢病毒包装原理介绍定稿版
慢病毒包装原理介绍 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
慢病毒包装原理 介绍
精品文档慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途型病毒）为基础发展起来的基 I HIV-1 （人类免疫缺陷慢病毒（ Lentivirus ）载体是以慢它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，该载体可以将外源基因有效地整合到宿主研究的也非常深入。
病毒载体的研究发展得很快，心肌从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、染色体上，细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差， RNAi 目前慢病毒也被广泛地应用于表达对基因表达的抑制作用通常是短暂的，半衰期短，体外合成 siRNA 转移到细胞内的 siRNA的载体，然后转移到因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制细胞内转录 siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断效果也不逊色于体外合成 siRNA合聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 表达载体中，是由 RNA siRNA 基因表达的作用。
在所构建的poly A RNA 不会带成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 3' 在转录产物 T 时，它指导的转录就会停止，聚合酶Ⅲ遇到连续当 RNA 4 个或 5 个尾。
聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是 RNA H1 RNA 启动子是两种和 1~4 个U 。
U6 端形成茎环结构50ntRNA 21ntRNA 和～启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～的正义与反义链，可由各自的启动 siRNA siRNA 表达载体中，构成（ stem loop ）。
在 RNA(small siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状子分别转录，然后两条链互补结合形成转录终止位点之间～ 5 T，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 hairpin RNA, shRNA)突出端的茎环结构，在细胞内进一' U 1~4 个3 的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有，然后 siRNA 。
慢病毒包装原理-介绍之欧阳家百创编
慢病毒包装系统简介及应用欧阳家百（2021.03.07）一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
慢病毒包装原理-介绍PDF.pdf
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
慢病毒包装原理-介绍资料
慢病毒包装原理-介绍慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
慢病毒包装的原理
慢病毒包装的原理慢病毒（lentivirus）是一类能够将基因信息稳定地整合到宿主细胞基因组中的病毒，因其具有较高的转染效率和广泛的宿主细胞范围而被广泛应用于基因治疗、基因编辑和细胞治疗等领域。
慢病毒的包装是指将外源基因载体包装入慢病毒颗粒中，使其具有传递和整合到宿主细胞基因组的能力。
本文将介绍慢病毒包装的原理及其相关技术。
慢病毒包装的原理主要包括载体构建、包装细胞系和包装技术三个方面。
首先是载体构建，即将外源基因插入到慢病毒基因组中，构建成慢病毒表达载体。
慢病毒基因组包括基因组RNA和辅助质粒DNA两种形式，通过重组技术将外源基因插入到慢病毒基因组中，并在适当的位点上加入启动子、终止子和调控元件，构建成慢病毒表达载体。
其次是包装细胞系的建立。
包装细胞系是指能够表达慢病毒包装蛋白的细胞系，通常采用293T细胞或HEK293细胞。
通过转染慢病毒表达载体和包装蛋白表达质粒，使其在细胞内表达慢病毒包装蛋白，从而实现慢病毒颗粒的包装和产生。
最后是包装技术，主要包括质粒转染、病毒包装和病毒收集等步骤。
质粒转染是指将慢病毒表达载体和包装蛋白表达质粒转染至包装细胞系，使其在细胞内表达慢病毒包装蛋白。
病毒包装是指慢病毒包装蛋白识别慢病毒基因组RNA，并将其包装成慢病毒颗粒的过程。
病毒收集是指通过超速离心或滤膜浓缩等方法，从包装细胞系的培养上清中收集慢病毒颗粒。
总的来说，慢病毒包装的原理是通过构建慢病毒表达载体，利用包装细胞系表达慢病毒包装蛋白，将外源基因包装入慢病毒颗粒中，最终实现慢病毒的包装和产生。
这一技术为基因治疗和基因编辑研究提供了重要工具，也为细胞治疗等领域的发展提供了有力支持。
随着基因治疗和细胞治疗的不断发展，慢病毒包装技术的进一步优化和改进将为相关研究和临床应用带来更多的机遇和挑战。
慢病毒包装原理
慢病毒包装原理
慢病毒是一类具有潜伏期和长期感染能力的病毒，它们能够有效地将自己的基因材料包装在宿主细胞内，并在细胞分裂过程中一代代地传递下去。
慢病毒的包装原理主要涉及它们与宿主细胞的相互作用和利用细胞的内源性机制。
慢病毒感染宿主细胞后，它们首先通过慢病毒外壳表面的膜蛋白与宿主细胞表面受体结合，进而与宿主细胞融合。
这种融合使得慢病毒能够进一步释放其基因材料到宿主细胞内。
在宿主细胞内，慢病毒的基因材料被转录成RNA，然后通过逆转录酶的作用，将其逆转录成DNA。
这个逆转录过程发生在细胞质内，将RNA转录成DNA以后，这段DNA能够进入细胞核，并被宿主细胞的转录机器读取和表达。
为了将自己的基因材料包装在宿主细胞内，慢病毒利用了宿主细胞的包装机制。
在细胞核内，慢病毒的DNA片段能够结合到一类被称为病毒RNA提取子（viral RNA packaging signal）的特定序列上。
这些特定序列与一类称为包装蛋白（nucleocapsid protein）的病毒蛋白结合。
此外，慢病毒还会在细胞核内包装自己的DNA片段。
通过与宿主细胞内的其他蛋白相互作用，慢病毒的DNA片段在细胞核内形成核心颗粒，这些颗粒随后能够与细胞膜相互作用，引导慢病毒的包装和释放。
总结起来，慢病毒的包装原理主要涉及它们与宿主细胞的相互
作用和利用细胞内的包装机制。
慢病毒通过与宿主细胞融合并释放其基因材料，然后经过逆转录过程将RNA转录成DNA。
在细胞核内，慢病毒的DNA片段利用病毒RNA提取子和包装蛋白相互作用，形成核心颗粒，最终包装和释放。
慢病毒包装原理及应用
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（Lentiv irus）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA表达载体中，是由RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA 合成的，这是因为RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带poly A 尾。
当RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续4 个或5 个T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成1~4 个U 。
U6 和H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRN A 和～50ntRN A 茎环结构（stem loop ）。
慢病毒包装原理-介绍之欧阳主创编
慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。
在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。
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慢病毒包装系统简介及应用
一、慢病毒包装简介及其用途
慢病毒（Lentivirus ）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi 的研究中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA 半衰期短，体外合成siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的siRNA 表达载体中，是由RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA 合成的，这是因为RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA 不会带poly A 尾。
当RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续4 个或5 个T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物3' 端形成1~4 个U 。
U6 和H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA 和～50ntRNA 茎环结构（stem loop ）。
在siRNA 表达载体中，构成siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于RNA 聚合酶Ⅲ启动子和4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA 。
构建载体前通常要通过合成siRNA 的方法，寻找高效的siRNA ，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA 表达载体。
慢病毒载体（Lentiviral vector ）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。
慢病毒载体能够产生表达shRNA 的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA ，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
二、这一系统的目的，主要是为了解决以下问题：
1. 对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为RNAi，cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。
2. 进行稳转细胞株的筛选；
3. 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液；
在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。
三、慢病毒载体介绍
慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs ）是在HIV-1 病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi ）导入动物和人的原代细胞或细胞系。
慢病毒载体基因组是正链RNA ，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA ，形成DNA 整合前复合体，进入细胞核后，DNA 整合到细胞基因组中。
整合后的DNA 转录mRNA ，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生RNAi 干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi 干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。
另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。
以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。
大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。
慢病毒载体不表达任何HIV-1 蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2 次注射。
四、慢病毒载体的构建
1. 构建原理
慢病毒属于逆转录病毒科，但其基因组结构复杂，除gag、pol 和env 这3 个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外，还包括4 个辅助基因，vif、vpr、nef、vpu 和2 个调节基因tat 和rev 。
HIV 21 是慢病毒中最具特征性的病毒，第一个慢病毒载体系统即以此病毒为基础进行构建的。
慢病毒载体的构建原理就是将HIV 21 基因组中的顺式作用元件( 如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。
载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由HIV 21 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的HIV 21顺式作用序列。
同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。
为降低两种成分同源重组产生有复制能力的病毒(RCV ) 的可能性，将包装成分的 5 ′LTR 换成巨细胞病毒(CMV ) 立即早期启动子，3 ′LTR 换成SV 40 polyA 位点等。
将包装成分分别构建在两个质粒上，即一个表达gag 和pol、另一个表达env 。
根据这个原理，Naldini 和Kafri 等构建了三质粒表达系统。
2. 三质粒表达系统
三质粒表达系统包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。
其中包装质粒在CMV 启动子的控制下，表达HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G 蛋白(V SV 2G)，应用VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，提高了滴度；转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，还保留350 bp 的gag 和RRE，并在其中插入目的基因或标志基因( 绿色荧光蛋白GFP) 。
将载体系统分成三个质粒最大的益处是使序列重叠的机会大大减少，减少载体重组过程中产生RCV 的可能性。
通过三质粒共转染293T 细胞，超速离心后病毒滴度可达109IU /m l 。
3. 四质粒表达系统
为了减少HIV 21 包装结构的序列同源性，进一步减少重组成RCV 的可能性，Dull 等人将辅助基因去除。
但由于gag2pol 的转运需要rev，因此，在上述的三质粒系统的基础上，构建成四质粒表达系统，该系统加上含rev 的质粒减少了产生RCV 的可能性，而且对非分裂期细胞转导效率无影响。
五、慢病毒载体应用
1. 将目的基因/RNAi 基因转入难以转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞；
2. 将目的基因/RNAi 基因转入动物组织，以期获得长期表达；
3. 构建稳定表达目的蛋白/RNAi 的细胞系，再用exvivo的方法导入动物体内；
4. 基因治疗；
5. 转基因动物；
6. 基因敲除；
7. 药物研究：构建表达受体蛋白的细胞系，研究药物的作用；
8. 快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核细胞表达方法。