凝胶层析

凝胶层析

凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术，又称之凝胶过滤，分子筛层析或排阻层析

凝胶种类及性质

（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）

⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G 后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途：

Sephadex G-10 葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 葡聚糖凝胶G-25 分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-50 葡聚糖凝胶G-50 分离范围1500-30000

Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000

Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000

Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000

Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000

⑵

Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

Sephadex LH-60，是─Sephadex G-50的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（3）

DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子

DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子

（4）

sephacryl：为葡聚糖偶联丙烯基，再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度，能承受比普通凝胶更大的静水压力，由于属于部分大网孔型凝胶，可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚至是病毒颗粒

Sephacryl S100分离范围是1kD~100kD之间；

Sephacryl S200分离范围是5kD~250kD之间;

Sephacryl S300分离范围是10kD~1500kD之间

AKTA用此填料。

（二）琼脂糖凝胶：瑞典称sepharose；美国称Bio-gel A；英国称Segavac；丹麦称Gelarose。Sepharose 主要有三种型号：2B，4B，6B，阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量。

Bio-GA有6个型号：0.5M,1.5M,5M,15M,50M,150M。阿拉伯数字乘以1000000表示排阻限度。Sagavac分为：2F,4F,6F,8F,10F2℃4C6℃8C10℃阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分含量，F表示粉

末状，C表示颗粒状。Gelarose有5种类型：2%，4%，6%，8%，10%。百分数表示干胶量。琼脂糖凝胶属于大孔胶，由于其工作范围的下限几乎相当于葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶的上限，所以多用于分离400000以上的物质，比如核酸和病毒。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000

DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000

（三）聚丙烯酰胺凝胶：

是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。这种胶在极端ph下可被水解，水解后形成的羧基，具有离子交换的性质。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜