微生物综合性实验__水中细菌总数的测定
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
自来水中细菌总数的测定
学生设计性实验论文题目：水中细菌总数的测定姓名学号20121321专业生物技术班级123 相关实验课程名称＿＿微生物学实验＿指导教师及职称实验学期2013~2014 学年一学期太原师范学院教务处编印水中细菌总数的测定摘要水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
通过此方法我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。
引言水资源是人类生产生活的最关键资源。
如今，生态环境遭到严重破坏，水体污染严重，水资源的保护和水污染的治理成为现代社会最关注的问题。
水污染不仅加剧了灌溉可用水资源的短缺，成为粮食生产用水的一个重要制约因素，而且直接影响到饮水安全、粮食生产和农作物安全，造成了巨大经济损失，因此，必须对生活用水及其水源水进行严格的细菌学检查。
细菌总数的测定是测定水样是否符合饮用水标准,被测水样中的细菌总数可说明其被有机物污染的程度.细菌数越多,有机物质含量越大。
我国饮用水的卫生学标准：在1mL自来水中细菌总数不得超过100个。
关键词水中细菌总数肉膏蛋白胨琼脂培养基水资源保护目的及意义1、学习水样的采取方法以及检测水中细菌总数的方法。
2、了解检测水中细菌总数的原理及其应用中的优、缺点。
3、了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性。
基本原理水中细菌总数可以说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机质含量越大。
细菌总数是指1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后所生长的菌落数。
本实验采用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水是一种重要的自然资源，因此水的质量非常重要。
水的污染问题已经引起了越来越多的人关注。
而微生物是水中的主要污染物之一，尤其是细菌总数和大肠菌群，这些污染物对人体的影响是非常大的。
在这篇报告中，我们将介绍我们对这两种污染物的检测结果。
1. 实验材料我们使用了以下材料进行实验：- 水样：我们选择了来自自来水厂和自然水源（例如河流和湖泊）的样本。
- 培养基：我们使用了通用富营养基和多氯芬酸钠培养基进行实验。
2. 实验方法我们使用了以下步骤来检测水中的微生物：- 取样：我们使用无菌技术取样。
具体而言，我们先用消毒过的杯子收集水样，然后用无菌注射器将水转移到无菌容器中。
- 稀释：我们用无菌盘子将水样稀释至适当的浓度。
- 培养：我们将每个稀释后的水样盛放于培养基中，然后将培养皿放入孵化箱，控制温度在30℃，进行孵化48小时。
- 计数：我们使用显微镜和计数计数室对每个水样中的细菌进行计数。
3. 实验结果我们进行了3次独立的实验，每次实验都使用了来自不同水源的样本。
下面是我们的检测结果。
- 细菌总数我们使用通用富营养基在每个水样中进行了细菌总数的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源细菌总数（CFU/mL）自来水厂8 × 104 5 × 104湖泊2 × 105 3 × 105河流5 × 105 6 × 105-大肠菌群我们使用多氯芬酸钠培养基进行了大肠菌群的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源大肠菌群（CFU/mL）自来水厂不可检测不可检测湖泊1 × 103 1 × 103河流2 × 103 2 × 1034. 结论我们的实验结果表明，不同来源的水样中细菌总数和大肠菌群的数量有很大的不同。
实验10 水中细菌总数的测定
一、目的要求
❖ 学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法；
❖ 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
❖ 水样 ❖ 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 ❖ 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
三、基本原理
❖ 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一 个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子 细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计 数方法。
❖ 将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞 存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养 后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落 的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算 出样品中的含菌数。
❖ 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。
❖ 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
❖ 菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。
若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
实验十一 水中细菌总数和大肠菌群数的检测
3、结果计算
根据阳性管数查表得大肠菌群数。
五、思考题
1、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。 2、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？
实验十一
水中细菌总数和大肠菌群 数的检测
一、实验目的
1、学习并掌握水体细菌学的检验 2、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法
二、实验原理
1、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）
2、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（MPN法） 大肠菌群以大肠杆菌为主，能在37℃48h内发酵乳糖产酸、
产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。
Байду номын сангаас（最好在30~300个之间）
（二）水中大肠菌群数的测定
1、初发酵实验
在3倍浓缩乳糖培养基中加入3个梯度样品各10ml（5个重
复），混匀37 ℃培养24h。
2、平板分离
不产酸不产气和不变浑浊 阴性
产酸产气或仅产酸
阳性
划线接种 于伊红美 兰平板， 37 ℃培养
24h
菌落为深紫黑色，具 金属光泽或紫黑色不 带金属光泽或淡紫红 色中心较深
最大概率数法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算 取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管 的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为 阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。
三、实验材料
1、水样 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养
基（带指形管）、伊红美兰固体培养基
四、实验方法
（一）水中细菌总数的测定（混合平板法） 1、样品采集和稀释
自来水、纯净水、饮料作原样、 10-1 、10-2三个稀释度 污水作10-1 、10-2 、10-3三个稀释度 2、取3个稀释度样品各1ml于平皿中，再倒入50℃左右牛肉 膏蛋白胨培养基约15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后37 ℃倒置培养。每个稀释度作3个重复。 细菌总数＝同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数
实验八九水中细菌总数与大肠菌群数的测定
例次
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2
10-3
仅有一个稀释度在此范围： 1365
164
20
菌落数×稀释倍数 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比<2，取平均值
2760
295
46
有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值
3890
271
60
所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者
入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样 ，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培 养24h，24h未产气继续培养至48h。
普通浓度发酵管中参加20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中参 加乳糖0.75ml
实验方法
多管发酵法测定水中总大肠菌群
3.平板别离： 〔1〕制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml 〔2〕选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板〔分区划线
无法计数 1650 513
所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者
27
11
5
没有任何稀释度在30-300之间 无法计数 305
12
选最接近该范围者
两个稀释度 菌落之比
菌落总பைடு நூலகம் （CFU/ml）
——
1.6×104
1.6
3.8×104
2.2
2.7×104
—— —— ——
5.1×105 2.7×102 3.1×104
实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数
目的要求
1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数 的方法 3、学习使用大肠菌群检索表
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况.初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g（mL)],可用稀释平板计数法检测.水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征:G—无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养，产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料和方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml; pH 7。
0乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵1×：蛋白胨 20g、牛胆盐 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7。
2－7。
4三倍浓缩液（3×）:除水以外,其余成分取三倍用量分装：1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。
灭菌条件：115℃ ,15min。
EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作，水用量为90％.水源：紫竹院河水仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂：牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1)，相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。
实验三 水中细菌总数的测定
实验三水中细菌总数的测定实验目的：1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.理解水质检测的原理和意义。
实验原理：在水体中存在着大量的微生物，其中包括细菌、藻类、真菌、原生动物等。
其中，细菌是最常见的一种。
水中细菌的检测可以对水质进行评估。
水中细菌的测定方法有多种，其中最常用的是悬浮液涂片法。
具体步骤如下：1.样品采集：准备好采集样品的器具，比如采样瓶。
在采集水样之前，要仔细洗手，并戴上手套。
2.处理样品：将样品过滤筛，去除水中的大颗粒。
然后用吸头从样品瓶中吸取适量的水样，放入卡片内。
3.制作涂片：将取出的水样涂在普通菌落计数板上。
涂片的方式要均匀，涂抹的厚度要适中。
制片完成后，可将板在37℃恒温条件下培养24小时。
4.统计菌落数目：待培养时间结束后，统计平板上的菌落数目。
实验步骤：1.准备实验药品和器具，保持清洁卫生，避免造成污染。
3.取出一片净化涂片，并用酒精灯或消毒灯消毒。
4.用吸头从采样瓶中取出适量的水样，均匀地涂在净化涂片上。
5.将制片好的涂片在恒温器中培养，待24小时后取出观察。
统计涂片上菌落的数目，计算出水样的细菌总数。
6.实验结束后，将药品和器具进行清理和消毒。
实验注意事项：1.实验过程中要注意保持清洁卫生，防止污染；2.涂片的制作要均匀，厚度不要过薄或过厚；3.涂片不要碰触手指等其他物体，否则影响菌落生长；4.待菌落计数板培养后不要翻盘，以免影响菌落的计数。
实验结果分析：通过实验，我们可以了解到水中细菌总数的检测方法，并从中得出有关水质的检测数据。
水中细菌总数越高，说明水质越差，这意味着我们在使用这种水源时需要更加谨慎和严格。
因此，水质检测对于保障人们的健康和生命安全非常重要，需要时常进行检测和监控。
自来水中细菌总数的测定
国家饮用水标准规定，饮用水中细菌总数每毫升不超过100个。
微生物学综合性实验论文题目：自来水中细菌总数的测定实验课程名称:微生物学实验姓名：某某某学号：000000000专业：生物科学班级：某某班指导老师：某某某自来水中细菌总数的测定姓名：某某某指导老师：摘要：本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是近似值【1】。
目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板，按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌落数对照国家饮用水标准来判断水质【2】。
良好的饮用水细菌总数应<100CFU/mL，而>500CFU/mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749—85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个。
对自来水用平板菌落计数技术测定细菌总数，通过观测得到每毫升自来水中菌落数为80个。
关键词：自来水牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板菌落计数技术乳白色菌落引言：各种天然水中常含一定数量的微生物，而水是微生物广泛分布的天然环境。
水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等【3】。
水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。
自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。
细菌总数是指1 mL水样在普通牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃经24h培养后，所生长的菌落数。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧细菌菌落总数【4】。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验六水中细菌总数与大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数与大肠菌群的数量,来测定特定地点的水质情况。
初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标,判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价,以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字:河流水;细菌总数测定;大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而就是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数就是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)],可用稀释平板计数法检测。
水中大肠菌群的数量可用来判断水源就是否被粪便污染,并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征:G-无芽孢杆菌,兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养,产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB)平板上划线分离,出现紫色、粉红色特征性菌落;复发酵验证:挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料与方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于水中细菌总数测定牛肉膏5g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g, 蒸馏水1000ml; pH 7、0乳糖胆盐蛋白胨培养基:用于初发酵1×:蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0、04%溴甲酚紫水溶液25mL(调pH值后加)、水1000mL、pH 7、2－7、4三倍浓缩液(3×):除水以外,其余成分取三倍用量分装:1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶,均装上德汉氏小管。
灭菌条件:115℃,15min。
EMB培养基:用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作,水用量为90%。
水源:紫竹院河水仪器:高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉,伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0、04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤:1),相关器械的灭菌操作,以及前往紫竹院取少量的样品水。
水中总大肠菌群的测定
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
水中细菌总数的测定
琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，
放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻
璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微 生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。
一.实验目的：
1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的 细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养 基平板上生长出来的菌落，计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。
2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用
烧杯接取自来水。
3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混 匀）、自来水样不稀释。
注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。
目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基，采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。
三、实验操作
1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌
的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转 过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出。
实验十一水中细菌总数的测定
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
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1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。
2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3）
3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。
四、实验步骤
1.水样的采集与处理
⑴饮用水：采样前，先用酒精棉球擦拭瓶口灭菌，以灭菌移液管或移液枪取水样。
⑵河水、湖水、池水：应取距水面10 cm~15 cm的深层水样。先将已灭菌的带玻璃塞的广口瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来使瓶口向上，拔去瓶塞，待水盛满后，将瓶塞盖好，再将瓶子从水中取出。在一定深度采水样时，需要用特制的采水器（图14-14）。采水器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。瓶盖上系有一绳索，拉吊绳索即可打开瓶盖，待水样瓶中水盛满后，放松绳索，即自行盖上瓶盖。水样采集后，将水样瓶取出，并立即用无菌棉塞或灭菌胶塞塞好瓶口，以备检验。
水样采集后应立即检验，如需要保存或运送，应采取冰镇措施，但一般要求不得超过4 h。
图14-14采水器
1-开瓶绳索2-铁框3-瓶盖4-水样瓶5-沉坠
2.细菌总数的测定
⑴饮用水：
①用灭菌吸管吸取0.2mL水样，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
②另取一空的灭菌培养皿，倾注15mL~20 mL牛肉膏蛋白胨培养基，作为空白对照。
③将平皿倒置于37℃培养箱内，培养24h，进行菌落计数。
⑵河水、湖水池水等：
①稀释水样：取3支装有4.5mL无菌水的试管。取0.5mL水样注入到第一支装有4.5毫升无菌水的试管内，摇匀，再自第一管取上述稀释液0.5mL，加入到第二支管内，如此稀释到第三管，分别制成稀释度为10-1、10-2、10-3的均匀稀释液。稀释倍数视水样污染程度而定，一般中度污染水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，严重污染水样取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
②自最后三个稀释度的试管中各取0.2mL稀释水，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
③待琼脂凝固后，将平皿倒置于37℃培养箱内，培养24h，进行菌落计数。
3.菌落计数方法：参见微生物学实验平板菌落计数部分。
五、实验结果（要求每组除自来水之外，还要选两种水源检测，共计三种）
将实验数据填入下表，并报告所检测水样的细菌总数。
1.自来水
平板
菌落数
自来水中细菌总数（个/mL）
2.河水、湖水或池水等
稀释度
10-1
10-2
10-3
平板
1
2
1
2
1
2
菌落数
平均菌落数
计算方法
细菌总数（个/mL）
3、对得到的菌落进行简单染色和革兰氏染色观察，画出菌体的形态图，说明革兰氏染色的结果。
水中细菌总数的测定
实验材料与设备：
1、试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、氢氧化钠、硫代硫酸钠、结晶紫、革兰氏染色所需的试剂。
2、器皿：500ml和250ml三角瓶、培养皿、试管、5ml和1ml移液器（吸头）、pH试纸（5-9）、载玻片、纱布、牛皮纸、棉绳。
3、设备：灭菌锅、培养箱、摇床、超净台、显微镜、电子天平、烘箱。
综合实验报告写作格式：
题目
作者（小组全部成员，自己为第一作者）
前言
材料方法
实验结果
结论
参考文献
贡献率（％）：
微生物综合实验水中细菌总数的测定
一、实验目的
1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。
2．了解和掌握平板菌落计数的原则。
3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。
二、实验原理
水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。
本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。菌落总数是指在一定条件下，1mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。