微生物实验室建立、使用及培养基配制验收常见问题
微生物检测中培养基的质量控制措施
干货微生物检测中培养基的质量控制措施！培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确等都直接影响到检测结果的准确性。
本文对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论，谈一些观点和看法。
希望有助于微生物检测工作的小伙伴们更好地开展工作。
培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
培养基的购置与验收1、购置从培养基自身的质量来看，不同生产厂家的产品，甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。
依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商，这是培养基购买过程中重要的步骤。
应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业；企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。
要求生产企业提供：培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。
2、验收购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。
每批培养基到货后都应对培养基的质量进行检测，满足检测方法规定的要求后方可投入使用。
培养基的储存干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的保存期限以厂家提供为准，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并尽快用完。
应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。
微生物实验室建立、使用及培养基配制验收常见问题
生物安全二级实验室
1、 符合BSL-2实验室建设要求。 2、 实验室门口带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。 3、 有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区 域处还有供长期使用的存储空间。 4、 在实验室的工作区域处应有存放个人衣物的条件。 6、 在实验室所有的建筑内配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查 和验证，以保证符合要求。 7、 在实验室内配备生物安全柜。 8、 设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装臵。 9、 考虑机械通风，如使用窗户自然通风，有防虫纱窗。 10、有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养 箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。 11、实验室出口有在黑暗是可明确辨认的标识。
生物安全防护的基本原则(三要素)
• 安全设备、个体防护装臵和措施 。 • 实验室的特殊设计和建设要求 。 • 严格的管理制度和标准化的操作程序和规程目标 确保实验室工作人员不受实验对象侵染， 确保周 围环境不受其污染的目的。
洁净实验室与生物安全实验室的区别
• 洁净实验室只针对实验环境提出洁净要求，不提 供对人员或环境的生物安全保护。(超净工作台不 能替代生物安全柜)。 • 普通的微生物实验(不进行病原微生物分离与鉴定) 只要求在洁净实验室进行。 • 进行病原微生物分离与鉴定必须在生物安全实验 室中进行。
洁净实验室与生物安全实验室的区别
含尘浓度 空气洁净等级 尘粒粒径 (μm) ≥0.5 ≥5 ≥0.5 ≥5 ≥0.5 ≥5 ≥0.5 尘粒数 （个／m3 ） ≤3,500 0 ≤350,000 ≤2,000 ≤3,500,000 ≤20,000 ≤10000000 含菌浓度 沉降菌 (Φcm碟 0.5h） ≤1 ≤3 浮游菌 (个／m3) ≤5 ≤100
c)生物安全防护水平为三级的实验室适用于操作能够引起人 类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物 与人、动物与动物间传播的微生物； d)生物安全防护水平为四级的实验室适用于操作能够引起人 类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已 经宣布消灭的微生物。
微生物实验思考题
微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。
本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。
一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。
要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。
要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。
要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。
二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。
保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。
常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。
保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。
2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。
在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。
同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。
3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。
接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。
培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。
4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。
这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。
5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。
数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。
总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。
三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。
需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。
培养基制备的注意事项
培养基制备的注意事项培养基是一种供细菌、真菌、细胞或组织在实验室中生长和繁殖的营养液体或固体介质。
正确制备培养基对于实验结果的准确性和可重复性非常重要。
下面是一些培养基制备的注意事项：1. 材料准备：所有使用的实验器具和试剂必须是干净的，以避免污染。
使用无菌技术，如滤器、自洁灭菌器等对培养基进行无菌处理。
2. 配置培养基：按照配方将所需的试剂和溶液添加到适当的容器中，正确称量每种试剂，确保溶液的浓度和配方准确无误。
3. pH调节：培养基的pH值对于生物体的生长和繁殖至关重要。
使用pH计准确测量和调节培养基的pH值，添加酸或碱来调节。
4. 无菌技术：在制备培养基的过程中，必须保持无菌环境，以避免细菌、真菌或其他微生物的污染。
操作时要佩戴手套和口罩，使用无菌匙、试管和培养皿。
5. 消毒：对于固体培养基，可以使用高温烘箱或自洁灭菌器进行消毒。
对于液体培养基，可以使用高压灭菌器或滤过器进行消毒。
6. 搅拌和混合：在配制培养基时，搅拌和混合是必要的，以确保各种试剂充分溶解并均匀分布在培养基中。
7. 灭菌：对于固体培养基，可以在灭菌后将其分装到无菌的培养皿或试管中，迅速盖好或封闭，以防止再次受到污染。
8. 贮存和保存：正确贮存和保存培养基可以延长其有效期。
固体培养基应存放在阴凉干燥的地方，避免阳光直射。
液体培养基应贮存在冰箱或冷藏室中，避免温度过高或冻结。
9. 质量控制：每批新制备的培养基应进行质量控制，包括对培养基的外观、pH值和无菌状态进行检查。
10. 记录和标记：在制备培养基的过程中，要及时记录每个步骤的操作和实验条件。
对于贮存的培养基，要标明制备日期、配方、pH值和其他相关信息。
总之，培养基的制备需要严格遵守无菌操作、正确配方和消毒等注意事项。
做好培养基制备的工作可以确保实验的可靠性和重复性，为后续的实验提供可靠的基础。
微生物试验常犯错误
微生物试验常犯错误,欢迎大家发言微生物试验常犯错误,欢迎大家发言请大家来讨论微生物试验常犯错误,给大家以参考，互相学习。
有助于少犯错误，节省时间欢迎多多发言大家不要把微生物试验的范围想得太窄了，一切用到微生物的试验都可以说是微生物试验，例如：微生物的培养、转化、基因克隆、基金敲除、上发酵罐....都可以拿出来讨论阿我先说说吧我们实验室很多人习惯把要刷的平板、研钵、吸管等先放在水池里，等一段时间再刷但是水池里面会有人倒少量的有机溶剂（稀释后），洗电泳槽的水也倒在水池里。
我觉得这样的话会污染平板、研钵....，如果洗不干净的话会影响微生物的培养。
建议大家不要把要洗的东西放在水池里呵呵容易造成污染我在微生物试验犯的错误比较多,比如刚开始进实验室时候,无菌观念不强,结果污染过N次;后来污染解决了,本人比较懒,不做平行和梯度,结果浪费了时间,数据也不能用.现在好多了,我的体会是做试验别怕麻烦.呵呵是啊很多小细节大家不注意的话会引起大问题还有个很多人容易忽视问题就是——设计实验的时候不做对照，等实验做完了，虽然结果很好，就是用不了，特郁闷。
很喜欢这个讨论..期待中..一定要按照正规的步骤来，不能自行省略。
例如做菌种复苏的时候，有选择性培养基的最好用选择性培养基，这样培养出来的大概就可以确定是目的菌了。
我以前用BHI（据说是很万能的培养基）复苏的菌种，结果到了后来才发现不是我需要的，而都是杂菌，耽误了很长的时间。
培养后，还要进行生化鉴定，革兰染色及PCR鉴定物种。
选择性培养基在经过了四十八小时的培养后，抗性降低，再培养出的可能就全是杂菌了。
呵呵大家喜欢就都参加进来，前事之见后事之师Absolutely!做微生物实验需要的是100％的细心，一点小小的粗心造成的结果就会很严重的，可能几天的功夫都白费了！我提一个关于倒平板的小细节吧：怎样倒平板才能尽量少的产生冷凝水？1.要等熔化的固体培养基温度大概被手背温度高一点（即不烫手背）的时候才开始倒。
【微生物】菌种实验操作中常见问题汇总及分析
【微生物】菌种实验操作中常见问题汇总及分析在实验操作中往往都会遇到这样那样的问题。
不过，没关系，记住下面这十一条小诀窍让您轻松实验!（1）平板上有过多的水分；（2）划线时接种环未经反复灼烧。
（3）多区划线，三区或四区划线。
（1）灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。
（2）琼脂培养基不能反复溶化。
反复溶化会破坏培养基中的营养成分。
（3）培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。
（4）含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。
大多数平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。
（1）干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。
（2）亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。
（3）抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。
（4）兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。
按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察，时间过短或时间过长，单菌落的特征都不会很明显。
如单增李斯特氏菌显色培养基，时间短单菌落看不到卵磷脂环，时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。
OXA、PALCAM的观察也如此，时间过长，李氏菌使整个平板成黑色，不利于观察单个菌落。
（1）温度的掌握。
卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。
（2）定量。
过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。
（1）真菌类。
25-28℃培养（2）细菌类。
李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在30℃左右。
（3）其他一般在36℃左右。
常用的方法主要有划线、三点接种、穿刺接种、倾注接种、涂布接种、液体接种。
染色时间的掌握、冲洗的方法。
（1）接种的方法。
（2）氧化型和发酵型实验操作。
（3）阳性菌种的对照。
（4）接种前的纯化。
挑取单个菌落进行一系列的生化。
（1）抑制：是在亚抑制剂量因子作用下导致微生物生长停止，但在移去这些因子后生长仍可以恢复的生物学现象。
（2）死亡：在致死剂量因子的作用下或在亚致死剂量因子长时间的作用下，导致微生物生长能力不可逆丧失，即使移去这种因子后生长仍不能恢复的生物学现象。
实验中可能出现的常见问题与解决办法
实验中可能出现的常见问题与解决办法实验中可能出现的常见问题与解决办法一．污染污染是指由于微生物的侵染，在组织培养容器中滋生大量菌斑，使组培材料不能正常生长和发育的现象，主要有以下5方面的原因：1.器具灭菌：实验的所有器具都要在121°C消毒25min，若灭菌温度不够或者时间不足，都会导致污染。
灭菌时要求冷空气完全排除，否则会达不到指定温度。
其次，要做好灭菌登记，杜绝出现人为失误造成的污染。
此外，在接种过程中，每用一次都要在火焰上彻底灼烧，特别在接触到污染物时极易引起器具污染。
2.外植体：很多材料在灭菌后其实还是带菌的，不过量比较少，短期应该观察不到被感染的现象。
3.接种操作：首先，接种人员的手，手腕要用酒精棉球好好擦拭。
其次，对于放置在外的培养物（灭菌好的培养基）其瓶子外壁上有灰尘与微生物，放入超净台前可以用酒精消毒一下。
再者，很容易出现瓶口的污染，所以接种人员的技术要娴熟，干练。
4.环境条件：加强环境的灭菌消毒。
若有污染的材料不可以就地清洗，必须高压杀菌后再清洗，否则会导致大量孢子弥漫。
此外，要及时打扫卫生，定期蒸熏消毒。
保证环境的干净。
5.超净工作台：要定期对初过滤器进行清洗和更换。
此外，每次使用前要提前20min打开机器预处理，并对台面进行酒精喷雾消毒。
二．材料死亡实验过程中，很可能出现材料死亡，主要有以下几个方面：1.外植体灭菌过度：一旦材料太小或灭菌时间太长，剂量太大，就会导致材料死亡，所以要严格控制时间。
2.污染：大量污染会造成材料死亡。
3.培养基配置出现问题：在激素配置或营养成分配置出现问题时，材料易死亡，常常发生在无生长点的材料和愈伤组织中。
4.培养环境的恶化：温度过高，透气不好，培养过于密集，久不转移，有害气体的累积都会造成培养材料的死亡。
【措施】：【1】.选用较为温和的灭菌剂，降低药物浓度，减少灭菌时间，或选取较为坚强的外植体（eg：生长季节取芽）【2】注意个人卫生，严格按照规则进行操作。
微生物试验用培养基的质量保证
培养基的制备方法
使用容器 配制培养基所用容器不得影响培养基质量，一般为玻璃容器。 禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免金属离子与培养基成分结合，生成 有害物质，影响细菌生长。 实验室指南（ WHO) 含代谢药物或抑制剂的培养基应使用专用的玻璃器皿，如不使用专用的玻璃 器皿必须对玻璃器皿的洗涤程序进行验证。
用于环境监控的培养基应特别小心防护，严密包装和终端灭菌。 如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前应进行100%的预培 养。 防止将外来的污染带到环境中及避免出现假阳性结果。
培养基的质量控制
一般性状 1、 制成平板或分装于试管的培养基应检查；容器和盖子的 破裂，装量。 2、固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。 3、其他 如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的 汽
培养基的质量控制
实验室配制的培养基监控项目 外观、性状、pH、适用性试验、定期的稳定性检查以及 培养基有效期的确定。
培养基的质量控制
适用性检査 时间 1、采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱 水培养基的适用性检査试验可只进行1次。 2、如果培养基制备的方法未经验证，那么，配制的每一批培养基必须进 行适用性试验。 方法 根据培养基的用途参照《中国药典2015版》附录无菌检查或微生物限度 检查项下有关规定进行。
微生物试验用培养基的质量保证
杜平华
培养基的质量保证
培养基是绝大多数微生物试验的基础。 培养基的质量是微生物试验成功与否的关键因素。 适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是 提供优质培养基的保证。
培养基的质量保证
优质培养基的保证
制备方法
。
贮藏条件 质量控制试验
主要影响因素
规范化管理 培养基的配置 培养基的储存 培养基的适用性检查
微生物检测注意这些才能保证结果准确性
在微生物检验操作过程中，要保证做样环境（如超净台、房间）以及所用工器具的洁净程度，同时保证人员各种操作的规范性，尽量保证其无菌性，防止因人为原因操作失误而出现误差结果，同时在适宜温度进行培养，为合理决策和指导生产提供依据。
为保证检测结果的准确性，我们应做好以下几个方面：培养基的灭菌及使用1.每次配置时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。
2.培养基配置时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。
3.一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。
4.灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。
5.灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过3天。
而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。
6.在使用时，要根据当班次的使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水域温度（先化好的可从水域取出，放在水浴锅锅盖上）待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。
7.做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死；也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。
8.每瓶培养基均要做空白。
9.尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。
10.培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。
做样环境的维持一.大环境（房间）1.做样时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境（最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作）。
2.如果在原来的原料微生物检测室进行做样，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。
二.小环境（超净台）1.定期清洁初效过滤器，要及时更换。
2.做样前，将超净台内部进行清洁，用75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。
3.关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。
4.每次做样后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用75%酒精进行擦拭消毒。
培养基质量控制
培养基质量控制一、引言培养基质量控制是微生物学实验中非常重要的环节，它直接影响到实验结果的准确性和可重复性。
合理的培养基质量控制能够确保培养基的成份和性能符合实验要求，提高实验的可靠性和可比性。
本文将介绍培养基质量控制的目的、方法和常见问题的解决方案。
二、目的培养基质量控制的目的是确保培养基的成份和性能符合实验要求，保证实验结果的准确性和可重复性。
它包括对培养基原料的选择和采购、培养基配制过程的控制、培养基pH值的调整、无菌操作的严格执行等方面。
三、方法1. 培养基原料的选择和采购- 选择优质的原料供应商，确保原料的质量可靠。
- 对原料进行必要的检测和鉴定，确保其符合实验要求。
- 定期检查原料的保质期，避免使用过期的原料。
2. 培养基配制过程的控制- 严格按照配方比例和步骤进行培养基的配制。
- 使用纯净水或者蒸馏水作为溶剂，避免水质污染对培养基质量的影响。
- 培养基配制过程中要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
3. 培养基pH值的调整- 使用合适的酸碱调节剂来调整培养基的pH值。
- 使用pH计准确测量和调整培养基的pH值。
- 注意培养基pH值的稳定性，避免因pH值的变化而影响实验结果。
4. 无菌操作的严格执行- 无菌操作是培养基质量控制中非常重要的环节。
- 在无菌操作室内进行培养基的制备和保存，确保无菌环境。
- 使用无菌器具和耗材，并进行必要的消毒处理。
- 培养基的保存和传递过程中要注意防止污染，避免细菌和真菌的侵入。
四、常见问题的解决方案1. 培养基溶解不彻底或者浮现沉淀- 检查原料是否充分溶解，可以加热或者搅拌促进溶解。
- 检查原料是否过期或者质量不佳，更换新的原料。
- 检查溶剂水质是否符合要求，使用更纯净的水溶解。
2. 培养基pH值偏高或者偏低- 使用合适的酸碱调节剂来调整pH值。
- 使用准确的pH计进行测量和调整。
- 检查酸碱调节剂的浓度和使用方法是否正确。
3. 培养基浮现细菌或者真菌污染- 检查无菌操作是否严格执行，注意操作的环境和器具的无菌性。
微生物的实验室培养常见问题解答
微生物的实验室培养常见问题解答1.什么叫培养基？琼脂是什么性质？有哪些作用？人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质在常规培养条件下呈现固态只起凝固作用，微生物不能利用2.培养基的种类，按物理性质可分为哪些？他们各自有哪些作用？在实验室中最常用的培养基是哪种？培养基按物理性质分为液体培养基和固体培养基液体培养基：选择培养/扩大培养/富聚培养，工业生产菌种的大量繁殖（目的是增加目的菌的数量）固体培养基：分离、鉴定、活菌计数和保藏菌种3.培养基的种类，按用途可以分为哪些？请举例说明。
按用途分为选择培养基和鉴别培养基选择培养基：①加入某种化学物质：a.加抗生素筛选出真菌（如酵母菌、霉菌）和耐药菌b.加高浓度食盐筛选出金黄色葡萄球菌（耐盐突变体细菌）②改变培养基中营养成分：a.缺乏氮源时筛选出固氮微生物b.缺乏碳源时筛选出自养微生物c.以石油为唯一碳源时筛选出分解石油的微生物d.以纤维素为唯一碳源时筛选出分解纤维素的微生物e.以尿素为唯一氮源时筛选出分解尿素的微生物③改变微生物培养条件：a.将培养基放在高温环境培养筛选出耐高温的微生物b.用普通培养基在无氧条件下培养筛选出厌氧型和兼性厌氧型微生物鉴别培养基：伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌（菌落呈现黑色）4.培养基中配方成分主要有哪些？如何通过培养基的营养组成判断微生物的同化类型？一般都含有水、碳源、氮源和无机盐自养型微生物的培养基主要以无机营养为主；异养型微生物的培养基主要以有机营养为主5.培养基在满足主要营养物质的基础上，还需要满足什么条件？还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求6.培养乳酸杆菌时，还需要在培养基中添加什么？培养细菌时的PH？培养霉菌呢？培养厌氧型微生物呢？培养乳酸杆菌时添加维生素培养细菌时将pH 调至中性或微碱性；培养霉菌时将pH 调至酸性培养厌氧微生物时要提供无氧的条件7.牛肉膏和蛋白胨的功能是什么？主要能提供哪些营养物质？功能：提供营养物质和能量牛肉膏提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素8.获得纯净培养物的关键是？防止外来杂菌的入侵9.对实验操作的空间、操作者的衣着和手要进行什么操作？消毒和灭菌10.用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基要进行什么操作？灭菌11.实验操作应在什么附近进行？酒精灯火焰附近进行12.消毒和灭菌的定义分别是什么？实验室常用的消毒和灭菌的方法分别是什么？消毒消毒：用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子常用方法：煮沸消毒法、牛奶用巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灭菌灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌13.为什么常用70%酒精作为消毒剂？需要灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌的分别有哪些？70%的酒精杀菌效果最好，浓度过高，会使菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口干热灭菌：培养皿、试管、吸管等耐高温、需保持干燥的物品高压蒸汽灭菌：如培养基、无菌水14.培养基丢弃之前要做什么操作？为什么？灭菌防止污染环境或感染操作者15.高压蒸汽灭菌为达到良好的灭菌效果，压力为多少？温度为多少？维持多长时间？高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法是什么？100千帕，121摄氏度，15-30分钟16.高压蒸汽灭菌中，把锅内的水加热煮沸的原因是什么？不这样做会引起什么结果？将锅内的冷空气彻底排除，不然会导致温度达不到121摄氏度17.紫外线消毒在照射前需要喷洒什么可以加强消毒效果？石炭酸或煤酚皂等消毒液18.培养牛肉膏蛋白胨培养基的流程是什么？如果要调节PH，需在哪步操作之前？计算→称量→溶化→(调节pH)→灭菌→倒平板先调PH-分装-后灭菌19.为什么称取时动作要迅速？牛肉膏、蛋白胨都易吸潮20.溶化过程中不断用玻璃棒搅拌的作用是什么？防止琼脂糊底而导致烧杯破裂21.培养基灭菌后为什么要冷却到50摄氏度左右才能用来倒平板？用什么来估计培养基的温度？温度过高烫手，温度过低琼脂会凝固而倒不出用手摸不烫手温度大约在50摄氏度左右22.为什么要在酒精灯火焰附近进行倒平板？为什么锥形瓶瓶口要通过火焰？营造一个无菌区，防止杂菌侵入污染通过灼烧灭菌防止外瓶口微生物污染培养物23.如果不小心将培养基溅到皿盖和皿底之间的部位，这个培养基还能用来培养微生物吗？为什么？不能，空气中的微生物可能皿盖与皿底之间的培养基上滋生24.倒平板操作中，平板冷却凝固后还需要如何操作？为什么？平板冷却凝固后需倒置目的：①防止皿盖上的冷凝水落入培养基中造成污染；②减少水分挥发25.微生物的接种技术包括哪些？其核心是什么？接种方法很多，最常用接种方法是？平板划线法、稀释涂布平板法，除此以外还包括斜面接种，穿刺接种等方法核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度最常用接种方法是：平板划线法、稀释涂布平板法26.菌落的概念是什么？由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体27.平板划线的原理是什么？过接种环(工具)在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面28.划线前灼烧接种环的原因是什么？每次划线之前都要灼烧接种环的原因是什么？划线操作结束后灼烧接种环的原因是什么？第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物以后每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者29.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高杀死菌种30.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线末端开始划线？线条末端细菌的数目比线条起始处要少。
【检测】微生物检测过程中的细节问题汇总（包含稀释液、培养基制作及基本操作等）！
【检测】微生物检测过程中的细节问题汇总（包含稀释液、培养基制作及基本操作等）！一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液贮存液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g；蒸馏水 500mL；用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2（图1-1、1-2），用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL，分装于合适容器，121℃高压灭菌15min。
二、培养基制作① 计算出所需数量，用电子称、称量纸、药勺来称取。
② 放入比所用蒸馏水大的烧瓶中，使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
※ 备注：即使是同一培养基，各个厂家的配制方法多少有些不同，所以一定要充分参照培养基上的说明。
2.1 倾注培养培养基：●平板计数琼脂等：高压灭菌后保存，使用时加温溶解。
●去氧胆酸盐琼脂培养基：使用时将培养基粉末加温溶解。
※备注：倾注培养时，向培养基分注的步骤参照下述的注意事项：①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕，最好在15分钟以内完成。
②每个平皿的分注量约15-20ml。
分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从平皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。
③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时，下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染，所以要用酒精棉擦拭，再将瓶口用火焰灭菌。
2.2 平板培养基：平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里，使之凝固。
●TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基：加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。
为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀（注意不要起泡）。
● EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。
● 卵黄甘露醇高盐琼脂培养基：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉（纱布）擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。
加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里（6%卵黄）搅拌摇匀凝固后干燥表面（搅拌时不要起泡）。
若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。
微生物实验中常见的问题汇总
微生物实验中常见的问题汇总一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
微生物实验中常见的问题汇总
微生物实验中常见的问题汇总一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
临床微生物实验室培养标本不合格的原因分析及解决对策
临床微生物实验室培养标本不合格的原因分析及解决对策摘要：目的：对临床微生物实验室不合格标本进行研究，找到根本原因，并且提出切实可行的解决措施，进而保证检验的准确性。
方法：对2014年1-6月中，送检的不合格微生物标本进行统计和分析。
结果：从检验的结果中可以看出，不合格的标本数量为142例，其不合格率为2.35％。
标本不合格的情况很多，其中包括痰标本、尿标本、条码不清或者是血培养污染等等。
结论：要通过准确和可靠的检验方式来对标本进行检验，并且在检验的过程中要加强沟通合作，这样才能最大限度地提升送检标本的质量。
关键词：微生物标本；不合格标本；预防措施通过微生物实验对医生的给药和临床诊断都会提供相应的指导。
其中进行标本的采集工作是至关重要的工作内容，同时也是合理控制标本的关键步骤。
由于医学检验本身具有较高的严谨性，因此，采用科学合理的方式来对标本进行采集和检验是保证医学准确性的重要途径。
资料与方法1.1标本来源为了对微生物标本进行检验和分析，选取了某医院2014年1月-6月各大门诊部送来的微生物实验室的标本。
其中包括痰标本、尿标本、粪标本以及血液、胸腹腔积液标本等等。
总标本数为6049例，其中不合格标本主要有142例。
1.2方法在具体的检验工作中，对不合格标本进行分类，明确其科室、保存的内容以及不合格的原因。
最其进行统计和分析，找到不合格的原因。
结果2.1不合格标本的分布情况以及比例状况在所有的6049例检验标本中可以看出，共有142例不合格，可见标本的不合格率为2.35％。
在所有的不合格标本中，不合格率最高的就是呼吸科，主要为4.17％，其次就为内科护理单元，不合格率为3.49％。
除此之外，还包括消化科、内分泌科以及肾内风湿科。
2.2不合格标本原因分类及构成比例在所有不合格标本中，痰标本的不合格率相对较高，占所有不合格标本的41.93％，尿标本的不合格标本占18.3％，不合格标本原因分类及其构成比例可以从表1中得到具体表现：表1 不合格标本原因分类及构成比例讨论3.1不合格标本的发生在进行临床工作的过程中，必不可少的就是标本的采集，其中比较关键的环节就是标本的质量控制，因为质量控制工作是保证检验准确性的重要前提。
微生物检验常见问题解答
微生物检验常见问题解答微生物检验常见问题解答你知道什么是微生物检验吗?你对微生物检验常见问题了解吗?下面是yjbys店铺为大家带来的微生物检验常见问题解答的知识，欢迎阅读。
一、方法验证1.做过验证的样品微生物检验方法是否都需要按照新的方法进行重新验证?答：对于微生物限度检查的产品而言，由于培养时间调整，应重新进行验证。
对于无菌检查的产品而言，如果方法未作实质性调整，可以不必重新验证。
个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，对这些品种，应对收载方法的适用性进行验证。
2. 以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标准再验证?答：参见问题1。
3. “新增抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜” 比如注射用克林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方法。
4. 微生物方法学验证时，培养时间是否跟样品日常检验所培养时间一致?答：应该一致。
5. 微生物限度验证时，如果一个方法只有金葡回收率达不到要求，该方法时是否可以用来做细菌霉菌的检测方法?答：按药典的规定，一个计数方法通过验证，是指所有试验菌的回收率均达到要求。
如果采用各种方法以及方法的组合仍无法使金葡回收率达标，则可以采用使金葡回收率最高的方法作为计数方法。
6. 薄膜过滤的冲洗量不能超过1000ml，我公司的喹诺酮类产品原来的方法是每张膜冲洗量为1500和2000ml，请问有没有合适的方法将冲洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合规定?答：有几种办法可以降低冲洗剂的用量：1)降低接触滤膜的供试品的浓度;2)改进冲洗的方式，如少量多次地冲洗、降低蠕动泵的转速等;3)添加中和剂，如高价金属离子。
7. 微生物限度检查法规定，技术方法验证时，采用上述方法若还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品检验。
请问，上述方法是指仅通过一种方法还是一定要通过几种方法联用的?答：应该要把可能采用的所有方法包括方法联用都进行验证。
【分享】培养基的制备、使用常见问题解答
【分享】培养基的制备、使用常见问题解答1培养基的制备正确制备培养基时微生物检验的最基础步骤之一。
使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。
培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置。
记录所有相关数据，如质量/体积、pH、制备日期、灭菌条件和制备人员等。
使用各别成分制备培养基时,应按照配方准确配制,记录所有细节信息,如;培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的方式、温度及时间)、配置日期、人员等,以便潮源。
1.水除特定要求,实验室用水的电导率在25℃下应不高于25uS/cm(相当于电阻率≥0.4MΩcm)。
微生物污染应不超过103CFU/mL，最好低于102CFU/mL。
应根GB/T 5750.12或其他有效方法,定期检验微生物的污染。
2.称量和复水称量所需量的脱水培养基(注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物质的培养基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培养基结块)后再加水至所需的量。
3.溶解和分装脱水培养基加水后适当加热,并不搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。
含琼脂的培养基在加热溶解前应浸泡几分钟。
4.pH的测定和调整用pH计测定pH,必要时在灭菌前调节pH，除特殊说明外,培养基灭菌后冷却至25℃时,要求pH的变化不超过0.2pH单位.通常使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L)的盐酸溶液调节pH。
如果灭菌后调节pH，溶液需灭菌。
注:商品化培养基在高压灭菌前后pH可能发生明显变化,但使用蒸馏水或去离子水时,灭菌前无需调节pH。
5.分装将配置好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积至少为体积的1.2倍。
6.灭菌①概述培养基和试剂的灭菌通常采用湿热灭菌或过滤灭菌。
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洁净实验室 工作区域 实验准备 区域 病原菌实验室 工作区域
实验室受控区域
污染物处理 区域
原则：洁污流线分明、流程简捷、层次清析去污有 效，能有效地切断感染途径，降低感染率。
围护结构、装潢装饰
围护结构（包括墙体）应符合国家对该类建筑的抗震要求和防火要求。 天花板、地板、墙间的交角应易清洁和消毒灭菌。 实验室防护区内围护结构的所有缝隙和贯穿处的接缝都应可靠密封。 实验室防护区内围护结构的内表面应光滑、耐腐蚀、防水，以易于清洁和 消毒灭菌。 实验室防护区内的地面应防渗漏、完整、光洁、防滑、耐腐蚀、不起尘。 实验室及设备间的高度应满足设备的安装要求，应有维修和清洁空间。 在通风空调系统正常运行状态下，采用烟雾测试等目视方法检查实验室防 护区内围护结构的严密性时，所有缝隙应无可见泄漏
洁净室原理
新风
新风机
一级过滤器
送风机 +
二级过滤器
送风
高效过滤器
走廊
更1
更2 （+）
洁净室 （++）
排 风 机
回风
BSL-2 实验室对环境的要求
1、洁净度：无要求 2、最小换气次数：可开窗通风 3、与室外方向相邻相通房间的压差：无要求 4、温度℃：18~27 5、相对湿度％：30~70 6、噪声dB(A)：≤60 7、最低照度lx：300 *上诉指标是建立BLS-2实验室的最低要求，建设者可根 据实际需要适当提高相应指标，如洁净度、压差等。
BSL-2 低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、致病性大肠 杆菌、沙门氏菌等； BSL-3 猪瘟病毒、狂犬病病毒、炭疽杆菌、艾滋病毒等 BSL-4 炭疽杆菌、霍乱弧菌、埃博拉病毒、天花病毒等。
塞拉利昂首都弗里敦中塞友好医院的中国移动实验室
我国首个生物安全防护等级最高的实验室—— 中国科学院武汉国家生物安全实验室（即武汉 P4实验室）
整体布局
微生物实验室自成一区，与其他实验室分开，门口设有门禁， 只有相关人员通过许可后才能进入。 实验室应明确区分辅助工作区和防护区，实验室工作区域外应 有存放备用物品的条件。 防护区中直接从事高风险操作的工作间为核心工作间，人员应 通过缓冲间进入核心工作间。 实验室辅助工作区应至少包括监控室和清洁衣物更换间；防护 区应至少包括缓冲间（可兼作脱防护服间）及核心工作间。
实验室主题框架为彩钢板玻璃隔断，颜色为哑白色。隔断普通 玻璃厚度为8MM,为防止沉积灰尘，窗料使用R25MM铝合金 圆弧压线；所有二维连接处的内侧均使用R50MM铝合金内圆 角，暴露在外的二维连接线的外侧则用R100MM铝合金外角连 接；彩钢板的三维连接处使用三维接点过度，而彩钢板与墙角 地面则用铝合金槽连接。吊顶材料亦为彩钢板。微生物检测室 地面为环氧树脂材料，具有无缝隙、耐腐蚀、平整、容易清洗 的特征。地面地脚线用阴角铝材装饰，美观且严密性好。
100级 10000级
100000级
大于100000 (相当于 300000级)
≤10
≤500
≥5
≤61800
生物安全实验室的主要技术指标
级别 洁净 度级 别 一级 _ 二级 _ 三级 7或8 四级 7或8 最小换 气次数 (次/h) 可开窗 可开窗 15或12 15或12 与室外方向上 温度℃ 相邻相通房间 的最小负压差 (Pa) _ _ -10 -10 18~28 18~27 15~25 18~24 相对湿 度% 噪声 dB(A) 最低照 度lx
微生物实验室的建 立与使用
汇报内容
一、什么是生物安全实验室 二、生物安全实验室与洁净实验室的区别 三、生物安全实验室的建立 四、生物安全实验室的管理与使用 五、培养基的验收、使用、保存注意事项
什么是生物安全实验室？
• 是通过规范的实验室设计建造、实验设备的配臵、 个人防护装备的使用（硬件）、严格遵从标准化 的操作程序和管理规程等（软件）： 确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象 的伤害； 确保周围环境不受其污染； 确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实 验室。
空调、通风和净化
为满足BLS-2实验室温湿度要求，宜配备机械空调通风系统， 有特殊要求的可增设设计要求，如增设净化要求并按净化要求 进行送回（排）风系统设计等。这方面，应重点处理好以下几 个问题： 1、可以采用带循环风的空调系统。如果涉及化学溶媒，感染 性材料和动物实验，则应采用全排风系统。 2、实验室内各种设备的位臵应有利于气流由“清洁”空间向 “污染”空间流动，最大限度减少室内回流与漏流（生物安全 柜一般应臵于室内气流最下游，即最远离送风口处）。 *生物安全柜的排风不能代替室内排风。
生物安全实验室选址要求
• BSL1实验室：无须特殊选址，普通建筑物即可 • BSL2实验室：在建筑物内考虑设置通风系统 • BSL3实验室：在建筑物内自成隔离区 • BSL4实验室：远离城区，独立建筑物，或在建筑 物中的独立 隔离区
5 实验室设计原则及基本要求 5.1 实验室选址、设计和建造应符合国家和地方环境保护和建设主管部门等的规定和要求。 5.2 实验室的防火和安全通道设置应符合国家的消防规定和要求，同时应考虑生物安全的特殊要求；必要时，应事先征询消防主 管部门的建议。 5.3 实验室的安全保卫应符合国家相关部门对该类设施的安全管理规定和要求。 5.4 实验室的建筑材料和设备等应符合国家相关部门对该类产品生产、销售和使用的规定和要求。 5.5 实验室的设计应保证对生物、化学、辐射和物理等危险源的防护水平控制在经过评估的可接受程度，为关联的办公区和邻近 的公共空间提供安全的工作环境，及防止危害环境。 5.6 实验室的走廊和通道应不妨碍人员和物品通过。 5.7 应设计紧急撤离路线，紧急出口应有明显的标识。 5.8 房间的门根据需要安装门锁，门锁应便于内部快速打开。 5.9 需要时（如：正当操作危险材料时），房间的入口处应有警示和进入限制。 5.10应评估生物材料、样本、药品、化学品和机密资料等被误用、被偷盗和被不正当使用的风险，并采取相应的物理防范措施。 5.11应有专门设计以确保存储、转运、收集、处理和处置危险物料的安全。 5.12 实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等室内环境参数应符合工作要求和卫生等相关要求。 5.13 实验室设计还应考虑节能、环保及舒适性要求，应符合职业卫生要求和人机工效学要求。 5.14 实验室应有防止节肢动物和啮齿动物进入的措施。 5.15 动物实验室的生物安全防护设施还应考虑对动物呼吸、排泄、毛发、抓咬、挣扎、逃逸、动物实验（如：染毒、医学检查、 取样、解剖、检验等）、动物饲养、动物尸体及排泄物的处置等过程产生的潜在生物危险的防护。 5.16 应根据动物的种类、身体大小、生活习性、实验目的等选择具有适当防护水平的、适用于动物的饲养设施、实验设施、消毒 灭菌设施和清洗设施等。 5.17 不得循环使用动物实验室排出的空气。 5.18 动物实验室的设计，如：空间、进出通道、解剖室、笼具等应考虑动物实验及动物福利的要求。 5.19 适用时，动物实验室还应符合国家实验动物饲养设施标准的要求。
洁净实验室技术参数
1、新风量：要满足洁净室最小新风量、满足洁 净室正压要求的最小新风量、满足每个人所需 最小新风量之和。 保证供给洁净室内每人每小 时的新鲜空气量不小于40m3。 2、压差：洁净区与非洁净区之间的压差，应不 小于5Pa，洁净区与室外的压差，应不小10Pa。
洁净实验室技术参数
3、配电：有自备电源或不间断电源供电，持续 保证洁净实验室正常供电。 4、空气净化级别表
等级
级别
静态空气洁净度
≥0.5μm的微粒数/m3
浮游菌
（菌落数 /m3）
落菌量
(菌落数/φ0.05 μ,30min)
自净 换气 数
Ⅰ
100
≤3500
≤5
≤1
Ⅱ
Ⅲ
1000
≤35000
≤350000
≤75
≤150
≤2
≤3 21-26
10000
排水、电ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和消防
排水
含菌污水应经高温高压消毒或化学消毒后排放至市政 污水排放公用系统。
电气设臵
1、应设专用配电箱。 2、电源宜设臵漏电检测报警装臵。 3、应有可靠的接电系统，其接地电阻不宜大于1Ω。 4、实验室入口应有实验室工作状态的文字式灯光讯 号显示。 5、应设紧急发光疏散指示标志。
消防
建筑物耐火等级不低于二级。
特殊要求及安全设备
1、在生物安全实验室的入口，应明确标示出操作所接触 的病原体的名称、危害等级、预防措施负责人姓名、紧 急联络方式等，同时应标示出国际通用生物危险符号， 生物危险符号的颜色应为黑色，背景色为黄色。
实验室生物安全防护分级：
BSL：Biosafety level；P：Protect.
• 一级生物安全防护实验室，简称BSL1或P1 • 二级生物安全防护实验室，简称BSL2或P2 • 三级生物安全防护实验室，简称BSL3或P3 • 四级生物安全防护实验室，简称BSL4或P4
a)生物安全防护水平为一级的实验室适用于操作在通常情况 下不会引起人类或者动物疾病的微生物； b)生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人 类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严 重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并 且具备有效治疗和预防措施的微生物；
洁净实验室与生物安全实验室的区别
含尘浓度 空气洁净等级 尘粒粒径 (μm) ≥0.5 ≥5 ≥0.5 ≥5 ≥0.5 ≥5 ≥0.5 尘粒数 （个／m3 ） ≤3,500 0 ≤350,000 ≤2,000 ≤3,500,000 ≤20,000 ≤10000000 含菌浓度 沉降菌 (Φcm碟 0.5h） ≤1 ≤3 浮游菌 (个／m3) ≤5 ≤100
生物安全防护的基本原则(三要素)
• 安全设备、个体防护装臵和措施 。 • 实验室的特殊设计和建设要求 。 • 严格的管理制度和标准化的操作程序和规程目标 确保实验室工作人员不受实验对象侵染， 确保周 围环境不受其污染的目的。