荧光偏振免疫分析

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均相酶免疫测定
沈富兵
概述
用于小分子激素和半抗原(如药物)的测定 原理 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后, 标记酶的活性会发生改变,不用分离结合 和游离酶标记物,通过测定标记酶的活性 的改变,而确定抗原或抗体的含量。
最具代表性的两种技术
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
辅酶Ⅰ(NAD)
还原型辅酶Ⅰ(NADH)
340nm处最大吸收峰
克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay
荧光偏振免疫测定
(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)
荧光免疫分析法
荧光抗体技术:检测组织或细胞中抗原
仪器的启动
↓ 1,2,3,4号缓冲液更新

冲洗管路 ↓ 探针内部清洗 ↓
样品检测
仪器的关闭
探针内部清洗 ↓
关机
AxSYM日常保养
每周保养
探针外部清洗 ↓
冲洗站清洗
↓ 1,3号注液器清洗 ↓ 清洁过滤网
每周保养
↓ FPIA和MEIA的光路检查

清洁样品篮和样品管托架 ↓ 清洁运行中心转盘和纤维杯转盘
FPIA的评价:
操作简便:避免多次洗涤步骤;
快速:各物质混匀,孵育数分钟后即可测定;
环保;
有颜色和浑浊的溶液不干扰检测结果。
美国雅培制药有限公司 诊断产品中国部
跨世纪全自动免疫发光系统
CAP TODAY 调查结果-2003
产品(台数) Mar. 2003 Abbott AxSYM/ i2000/i2000 sr 4000+/100+/ 100+ 15000+/120 0+/1200+ Bayer Centaur/ ACS180 >800/>700 >2000/>20 00 Beckman Access/ Access 2 >1500/>25 0 >2500/>12 5 DPC Immulite/ Immulite 2000/100 --/--/100 >5000/>200 0/200 ->1000 J&J Vitros ECi Roche 2010/1010/ E170 600/200/50 4000/2000/ 300
时间分辨荧光免疫测定 荧光免疫测定分析技术:
检测体液中微量物质
荧光偏振免疫测定(FPIA)
定义:
荧光偏振免疫测定 (fluorescence polarization
immunoassay,FPIA),为一种均相荧光免疫测
定方法,其利用荧光物质在溶液中被单一平面的 偏振光照射后,可吸收光能而产生另一单一平面 的偏振发射荧光,该荧光强度与荧光 标记物质在 溶液中旋转的速度与分子大小呈反比,常采用抗
克隆酶供体免疫分析 CEDIA
cloned enzyme donor immunoassay
酶放大免疫测定技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
酶:6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD) 底物: 6-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖酸 G-6-PD
AxSYM®在全美的仪器拥有量最多, 大于4000台
Instrument Placements
5000 4000 3000 2000 1000
AxSYM ACS 180 Immulite 2000 RxL HM Immuno 1 Elecsys 2010 Centaur Access ECI
0
Source: Information Dynamics 2000
纤维杯容器
玻璃纤维杯用于MEIA方法 的微粒子捕捉 通过仪器上的纤维杯容器自 动排放
可一次放置250个纤维
杯用于MEIA方法的分 析 可连续放置,纤维杯 的放置可任意方向
纤维杯
特性: •表面玻璃纤维网 •中间强力吸水棉 特制的分离杯,使固液相分离, 立体冲洗彻底,大大提高了反 应的特异性
缓冲液/微粒子洗液, FPIA缓冲液/洗液 系统控制中心对库存进行跟踪和更新
废物的管理 分为液体和固体废物,十分容易的废物处理 可直接进行废液的排放 上机可维持8小时
标准品
特性: 半定量:单点Index定标 定量:2点Master和6点Standard定标
多种选择,标准曲线稳定时间长, 同时可保存4个不同批号标准曲线, 节省试剂,无须配置
美国 非美国
20000 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0
美国 非美国 总数
全球自动化免 疫系统接受最多 的仪器- AxSYM :有近20000台!
0 17 0/ 01 /1 10 ci E 20 0 os 00 tr /2 Vi te li mu Im /2 80 ss S1 ce AC Ac r/ au nt Ce M SY Ax
原-抗体竞争反应原理,适用于小分子半抗原(如
药物浓度)的检测。
原理:
光的本质是电滋波,光是各个方向电滋波的混合 物,当光线通过偏振滤光片后,形成只有一个方
向的电滋波,称之为偏振光。荧光物质经单一平 面的偏振光(蓝色光,485nm)激发后,可吸收 光能跃入激发态,在其恢复至基态时,释放能量 并发射出单一平面的偏振荧光(绿色光,525nm ~550nm) 。
试剂,消耗品,废物跟踪--了如执掌,随时添加 随时添加试剂,消耗品--保证仪器可连续运行
仪器功能特点
试剂盒自动开盖--避免试剂蒸发和交叉污染,提供更可
靠结果
试剂自动振荡混匀--防止试剂不均 试剂自动切换--节省试剂,使用方便 定标点数--1点,2点和6点,多种选择,节省试剂
hTSH(Ⅲ)功能灵敏度可达0.01μ IU/ml
样品中心
特殊的清洗站
特殊的探针
运行中心
FPIA光路
纤维杯 放落器
运行中 心探针 MEIA光路 3号液 1号液 喷嘴 喷嘴
运行中 心转盘
运行中心
特殊的注射器
光路系统
运行中心
Kitting运行步骤 此步骤将样品和所需试剂加入反应杯 反应杯被送入运行中心转盘进行余下步骤的操作 运行转盘 FPIA法的清洗,反应和读数在此转盘进行。此转盘
仪器功能特点
双向选择能力--为将来扩充为LAS系统提供平台
读条码能力--避免人为误放,可随意放置样品和试剂
自动稀释功能--可成批,任意和单独选择,扩展可检出范围 自动转测功能--为临床诊断提供更多依据,并减少病人负

自动重测功能--避免错误结果
触摸式屏幕--提供更方便的操作模式
储存标准曲线数量--4条不同批号,前后交接,避免浪费
试剂前处理步骤--无,节省劳力,避免误差 质控--每日监控, L-J质控图可全面监控系统和试剂状

其它特性
清洗模式--按项目的不同选择不同的冲洗模式以达到
最佳冲洗效果
清洗方式--磷酸缓冲液清洗内部结构设计为最大剪切
力的探针清洗,特殊清洗站设计使探针内外壁清洗
试剂转盘 可放置20个试剂盒,每盒100测
试总计2000上机测试试剂 试剂可在仪器上连续放置336小 时 上机试剂可连续放置
试剂盒
特性:
•试剂盒独立包装,无须配置
•仪器自动开盖,避免蒸发和污染 •条形码自动识别种类和位置
•试剂盒有优秀的稳定性
样品中心
反应杯转盘 可放置90个反应杯并
AxSYM 分析项目的发展
目前在AxSYM上可提供的项目有超过80项 使用的技术有MEIA, FPIA, Ion Capture和REA
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
80 44 20 1994 1996 1998 2000 2002 48 49
AxSYM可提供之分析项目
485nm
偏振光
产生强偏振荧光 485nm 偏振光 产生偏振荧光吗?
荧光偏振免疫分析的特征:
AgF分子小,转动速度快,偏振荧光弱;
AgF-Ab分子大,转动速度慢,偏振荧光强;
若待检抗原多,则AgF-Ab少,AgF多,偏振 荧光弱; 待检抗原含量与偏振荧光强度成反比。
485nm
偏振光
肝炎/爱滋 甲肝抗体-IgM 甲肝抗体 甲肝抗体(定量) 乙肝表面抗原确证 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体(定量) 乙肝核心抗体 乙肝核心抗体-IgM 乙肝e抗原 乙肝e抗原(定量) 乙肝e抗体 丙肝抗体(第三代) 爱滋抗体 艾滋抗原/抗体 先天性疾病 风疹病毒-IgG 风疹病毒-IgM 弓形体-IgG 弓形体-IgM 巨细胞病毒-IgG 巨细胞病毒-IgM 肿瘤标志物 甲胎蛋白 癌胚抗原 前列腺特异性抗原 糖类抗原125 糖类抗原153 糖类抗原199 游离前列腺特异性抗原 总前列腺特异性抗原 B-2微球蛋白 PepsinogenⅠ/Ⅱ 甲状腺功能 三碘甲状腺原氨酸 甲状腺素 游离三碘甲状腺原氨酸 游离甲状腺素 超敏促甲状腺素 促甲状腺素 3.0 甲状腺摄取 抗-TPO 抗-Tg PTH 生殖/内分泌 总B人绒毛膜促性腺激素 促黄体生成素 促卵泡生成素 雌二醇 孕酮 催乳素 睾酮 心血管急诊 肌酸激酶(MASS) 心肌钙蛋白-I 心肌红蛋白 同型胱胺酸酸 BNP 代谢 铁蛋白 胰岛素 B12 叶酸 考的松 治疗药物 地高辛 茶碱 普鲁卡因 乙酰普鲁卡因酰胺 奎尼丁 卡马西平 苯巴比妥 丙戊酸 洋地黄 妥布霉素 庆大霉素 万古霉素 环孢霉素 滥用药物 苯妥英钠 酒精 三环类抗抑郁药 醚沙酮 安菲他明 天使尘 巴比妥类药物 安定 水杨酸盐药物 可卡因 鸦片类 AMP/METH 大麻类药物
80余项
AxSYM简介
系统描述
纤维杯容器
运行中心 系统控制中心
样品中心 供应中心
系统控制中心
样品/测试放置清单 结果浏览 报告/选择结果 动态时间显示和批处理结果 病人结果打印
结果保存和归档
定标浏览 Levey Jennings 质控图 库存监控 自动 “菜单操做保养” 帮助屏幕
质控品
特点: 半定量:阴,阳性质控 定量:高,中,低质控 多项质控 可供应全面的质控配套, 稳定的质控可作为动态 跟踪的依据,L-J质控图可 全面监控系统和试剂状态, 无须配置
AxSYM日常操作
简单三步,仪器自动完成所有工作
仪器的启动
开启电源:5-8分钟自检→进入主菜单 ↓ 启动:选择主菜单F3-STARTUP →READY状态 ↓ 清除固体和液体废物和更新记录 ↓ 更新库存 ↓ 纤维杯库存更新
含有36个位置。 一旦MEIA分样步骤完成,样品被放入纤维杯,在纤维 杯转盘进行清洗,加入底物,读数,所有的MEIA分 析在此进行,此转盘含有32个位置 分析结束后反应杯和纤维杯被自动扔入固体废物箱
供应中心
废液和 废物 1号液
4号液
2号液 3号液
供应中心
库存的管理 上机的大瓶试剂为通用试剂,例如:MUP,离子液,MEIA
样品中心
自动开盖器
样品中心
样品架 反应杯
试剂盒
连续,随机 和急诊模式
样品中心
样品转盘 由6个样品架组成,可放置90
个原试管/血清管/样品杯. 在系统中可连续加样 急诊项目少于11分钟出结果 条码可识别样品架和样品管
于联网和避免人为误放位置
可条形码识别样品和样品架位置,便
样品中心
携带率表现--6×106 IU/L β -HCG交叉测定于阴性标
本时携带率<1μ IU/L,2g/L 重组HBsAg交叉测定于阴 性标本时携带率<0.1μ g/L
每日维护保养时间—3分钟仪器自动完成
试剂特点
稳定性:
标准曲线稳定时间--同一批号的试剂
试剂开启后稳定时间--2~8℃尽效期 试剂可否长期上机--可以,且无冰箱 试剂有效期--一般至少6个月,最长可达1年 精密度--按NCCLS的EP5-T2标准小于5%CV 灵敏度--极佳的灵敏度,HBsAg可测0.17ng/ml,
可随时Hale Waihona Puke Baidu充 反应杯可随时加入而 不需按暂停系统操作
RV反应杯
Kitting技术 不同的分析项目有: •不同原理(FPIA,ICIA) •不同方法(夹心法,竞争法) •不同步骤(1步法,2步法,3步法) •不同反应时间和清洗量 将大包装试剂,样品分装到每个RV 反应杯中,分析软件来控制整个反 应过程,获得最完美地测试结果
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