功能化纳米材料研究与蛋白质选择性富集分离技术

功能化纳米材料研究与蛋白质选择性富集分离技术

蛋白质组学以大规模分析细胞或生物体内的蛋白质为目的，主要开展表达蛋白质组学和功能蛋白质组学两类研究工作。生物体内蛋白质种类繁多，性质复杂，数量庞大，尤其是蛋白质翻译后修饰，对现行的蛋白质组学研究方法和技术提出了许多挑战。因此，发展蛋白质研究新技术与新方法，对于解决生物学、疾病诊断和治疗等方面的科学问题有着重大的意义。

功能化纳米材料在科学发展的各个领域都有着广泛应用，相对于普通材料而言，它们具有极大的比表面积和极高的表面活性，特别适于生物医学领域的应用。针对蛋白质组学研究中面临的磷酸化和糖基化蛋白质高效选择性富集方面的热点难点问题，将功能化材料与蛋白质分析结合起来，开展了一系列研究工作，发展了一些基于功能化材料的磷酸化和糖基化蛋白质组学研究新技术新方法。与IMAC相比，磁性纳米新材料具有更高的选择性，并且对低pH溶液、盐类、其它低分子污染物有更高的耐受性。我们先后研究合成了TiO2、ZrO2、Ga2O3等金属氧化物包覆的磁球，并成功用于磷酸化肽段的富集。同时还合成了Fe3O4@C@Ta2O5和Fe3O4@C@SnO2磁球用于磷酸化肽段的富集，展现了优越的富集选择性。同时，我们还研究了糖肽和糖蛋白的富集鉴定新方法。首先合成了纳米级金粒子，然后通过高温煅烧将这些纳米金颗粒烧结到MALDI-QIT-TOF-MS靶板上，再利用金和巯基之间的相互作用在这些纳米金颗粒表面修饰上巯基苯硼酸，用来选择性富集糖基化的肽或者蛋白质。进而发展了利用“三明治”固定方法在硼酸纳米磁性微球表面固定了凝集素蛋白（Con A），并将其用于糖基化蛋白的分离富集。球表面直接固定Con A相比，利用上述“三明治”方法固定的Con A量提高了三倍。Con A纳米磁球、硼酸磁球和商品化的Con A磁球用来进行人肝癌细胞株7703细胞裂解液中糖蛋白的分离富集。利用Con A纳米磁球共鉴定了包含184个糖基化位点在内的172条糖肽，这些糖肽共对应

到101个糖蛋白，占鉴定蛋白总数的约68%。利用商品化的Con A磁球共鉴定了69条糖肽，对应于51个糖蛋白，占鉴定蛋白总数的约65%。而利用硼酸纳米磁Con A纳米磁球制备方法简单，成本较低，固定效率高，使用也极为方便，亲和效率和商品化的Con A磁球相当，并且由于其“三明治”法固定的第一步是利用了硼酸—单糖的可逆反应，还能方便地利用这一性质对作为基底的硼酸磁球进行回收再利用，极大地节省了成本。