微生物限度和无菌检查法验证 PPT课件
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微生物限度检查概述(中药制剂检验课件)
中药制剂微生物限度检查概述
二、必备知识
(一)供试品抽样、保存及检验量
供试品一般按批号随机抽样。每批取检验用量 的3倍量。每批抽样应至少含有2个以上最小包 装单位。
中药制剂微生物限度检查概述
二、必备知识
(一)供试品抽样、保存及检验量
所需样品必须保存在阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以 防原染菌状况发生变化。
物污染程度的方法。主要包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌
数测定。药品制剂中污染活菌数量通常以每克或每毫升供试药品作 为计量单位。
基础 知识
应在不低于B级背景下的A级单向流 空气区域内进行。
检查 条件
意义
确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质 量。保证用药的有效性和安全性；可作为衡量药 品生产全过程卫生水平的根据之一。
中药制剂微生物限度检查概述
二、必备知识
(一)供试品抽样、保存及检验量
检验量系指每次检验所需的供试品量（g、ml或cm2）。
每种药品固体和半固体制剂的检验量为10g（大蜜丸不得少于4 丸）；液体制剂为10ml；膜剂为100cm2（不得少于4片）。
贵重药品、微量包装药品的检验量可酌减。要求检查沙门菌的 供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性 对照）。
二、必备知识
（二）供试液制备
稀释液和冲洗液
①稀释液和冲洗液0.9 ％的氯化钠水溶液 ②pH7.0氯化钠-蛋白 胨缓冲液
中药制剂微生物限度检查概述
、一般供试品（水溶性）： 或 稀释液→1:10供试液
、非水溶性供试品
或
乳化剂（司盘 、单硬脂酸甘油、聚山梨酯 ）→+
→1:10供试液
、具抑菌活性的供试品
微生物检验技术培训PPT课件
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
24
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
微生物限度方法学验证PPT课件
菌液制备 (3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培
养基上， 23～28℃培养5～7天，加3～5ml0.9％无菌氯 化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加0.9％ 无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-
4～ 10-6，使菌数约为50～100cfu/ml。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
菌液组：测定所加的试验菌数。 平皿法：取试验用的1ml菌液（约50～100cfu），分别注 入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，按平皿法测定其菌落数。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
供试品对照组：取规定量供试液，按菌落计数方法测定 供试品本底菌数。（和试验组采用同法）
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌 计数所规定的方法及要求进行。对各试验菌的回收率 应逐一进行验证。验证试验至少应进行3次独立的平行 试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
细菌计数验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化，中和、 离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组， 以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时， 可用相应的稀释剂替代供试品，加入试验菌，使最终菌 浓度为每1ml 供试液含50～100cfu，按试验组的供试液 制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
样品稀释级的选择：最低稀释级，1g或1ml。
培养基：营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、 营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
养基上， 23～28℃培养5～7天，加3～5ml0.9％无菌氯 化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加0.9％ 无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-
4～ 10-6，使菌数约为50～100cfu/ml。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
菌液组：测定所加的试验菌数。 平皿法：取试验用的1ml菌液（约50～100cfu），分别注 入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，按平皿法测定其菌落数。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
供试品对照组：取规定量供试液，按菌落计数方法测定 供试品本底菌数。（和试验组采用同法）
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌 计数所规定的方法及要求进行。对各试验菌的回收率 应逐一进行验证。验证试验至少应进行3次独立的平行 试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
细菌计数验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化，中和、 离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组， 以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时， 可用相应的稀释剂替代供试品，加入试验菌，使最终菌 浓度为每1ml 供试液含50～100cfu，按试验组的供试液 制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
样品稀释级的选择：最低稀释级，1g或1ml。
培养基：营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、 营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
药品微生物限度与无菌检查ppt课件
药品微生物实验室 质量管理指导原则
环境保证
对照培养基 培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法验证
药品洁净实验室微生物 检测和控制指导原则
有效的结果
可靠的结论
药品微生物检验替代 方法验证指导原则
结果判断
微生物鉴定 指导原则
案例
阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似
al Institutes for Food and Drug Control Nation
非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
<1111>Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Product
非无菌药品微生物限度标准
<63>Mycoplasma Tests
支原体检查法
<71>Sterility Tests
无菌检查法
<1035>Biological Indicators for Sterilization
安瓿折断后，断 面应平整
Luzhou Institutes for Food and Drug Control
玻璃安瓿表面消毒方案比较
• 杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3min、5min、10min）用 75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样
• 酒精灯过火1秒钟（3秒钟、5秒钟、10秒钟）后直接用湿棉签 擦拭取样
药品微生物实验室质量管理指导原则 无菌检查用隔离器系统验证指导原则 灭菌法 药品微生物检验替代方法验证指导原则
/ /（日本药典收载）
L非uzh无ou 菌Ins药ti品tut微es 生for物Fo限od度an检d D测rug指Co导nt原rol则 中药饮片微生物限度检查法？来自药品微生物检验的过程控制
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
《无菌检查》课件
依据实验室要求，检测一个或多个标准或信号软件的病菌
2
实记录和报告结果。
3
实验室无菌检查的注意事项
包括规范操作程序、防止交叉污染和定期测试设备。
四、临床无菌检查
临床无菌检查标准
根据患者特定病情决定 检测标准和检测次数。
临床无菌检查的步骤
应用广泛，从基础科学 研究到制造和销售药物。
二、无菌检查方法
常规无菌检查方法
培养使用表面标本及清洁液 和甘露醇比较量和筛查试验 方式的细菌。
快速无菌检查方法
使用快速培养技术和基于PCR 的方法，检测微生物量级。
其他无菌检查方法
例如，乙醛蒸汽灭菌和过滤 器迷你灭菌方法。
三、实验室无菌检查
1
实验室的无菌检查标准
包括消毒、取样、传送、 接种、包埋、切片、镜 检、报告。
临床无菌检查的注 意事项
保持专业和标准操作规 程、消毒操作正确严格。
五、无菌检查的错误处理
无菌检查中可能出现的 错误
包括假阳性、假阴性和误判。
如何处理错误结果
根据实验室标准进行重测和 仔细分析结果。
最佳实践
定期校准仪器、对环境进行 空气质量监测等。
无菌检查对科研和临床的意义
确保实验过程和患者手术，保证实验结果的准确度和患者康复率。
展望无菌检查的未来发展
应用检测技术的广泛发展会推动无菌检测技术的创新。
六、无菌检查的质量控制
1
无菌检查的质量控制标准
依赖于清洁、组织和疫情控制，以
如何提高无菌检查的准确性
2
确保实验过程中的无菌操作标准。
和可靠性
常规检测和建立标准化的无菌检测
操作程序。
3
无菌检查的重要性
无菌微生物限度检查及方法验证.ppt
• 非必要品禁止带入实验室，必要资料和记录应消毒后进入并应远离操作 台。
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
05版微生物限度检查法-PPT课件
细菌、霉菌及酵母菌计数
增订 计数方法的验证
对药品进行微生物限度检查法时，首先应进行检 测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌计数方法的 验证，以确认该计数方法是否科学、准确、客观。 若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检 验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试 液的制备，细菌、霉菌和酵母菌计数所规定的方法 及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行 验证。
●供试液的制备 用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制 备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、中和剂制 备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作 用。供试液制备妥后不得超过1h就加入检验用培养 基。
7类供试品供试液的制备，其中增订：
非水溶性供试品
①供试品5g，司盘80、单硬脂酸甘油酯、聚山 梨酯80
验证方法
①试验组：取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养 基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时， 取供试液，过滤、冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中， 过滤后，取出滤膜接入增菌培养基中。
②阴性菌对照组：设立阴性菌对照组是为了验证该控制
菌检查方法的特异性。方法同试验组，验证大肠埃希菌、 大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄 球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检查法时的阴 性对照菌采用大肠埃希菌。阴性对照菌不得检出。
在特殊情况下，营养琼脂培养基上长霉菌、酵母
菌或玫瑰红钠琼脂培养基上长细菌，则应分别点计 霉菌、酵母菌、细菌菌落数，以菌落数高的培养基 中的菌数为计数结果报告。
菌数报告规则
细菌数30~300，霉菌数30~100。 ①当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以 该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。
试验组的菌回收率=[（试验组平均菌落数–供试品 对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数 ]×100%
药物制剂的微生物学检验PPT课件
微生物药敏试验是测定微生物对 各种抗菌药物的敏感程度的方法。
通过药敏试验可以了解致病菌对 抗菌药物的敏感性和耐药性，为
临床合理用药提供依据等。
03
药物制剂的微生物污染 来源与控制
微生物污染来源
生产环境
生产车间、设备、容器具 等可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
常用的微生物计数法有直接计数法、 间接计数法和流式细胞计数法等。
微生物鉴定的方法
微生物鉴定的方法是根据微生 物的形态、生理生化特征等对 其进行分类和识别的技术。
常用的微生物鉴定方法有形态 学鉴定、血清学鉴定、基因型 鉴定等。
微生物鉴定对于确定病原微生 物、研究新发传染病等方面具 有重要意义。
微生物药敏试验
水源传播
生产过程中使用的水源，如清洗用 水、冷却水等，可能含有微生物， 进而污染药物制剂。
微生物污染的控制措施
环境控制
定期清洁和消毒生产环境，保 持车间卫生，降低微生物的滋
生。
人员管理
操作人员需经过培训，严格遵 守卫生规定，定期检查手部卫 生。
原材料控制
对原材料进行质量检查，确保 不携带微生物，并对辅料等进 行灭菌处理。
培养基是微生物生长繁殖的介质，由水、碳源、氮源、无机盐等组成，根据不同微 生物的需求，培养基的成分和配比也有所不同。
微生物培养法常用于分离、纯化特定的微生物，以及测定微生物的生理生化特征。
微生物计数法
微生物计数法是通过一定的技术手段， 对样品中微生物的数量进行计数的方 法。
微生物计数法在药物制剂的微生物限 度检查、环境监测等领域有广泛应用。
原材料
药物制剂的原材料，如药 材、辅料等，可能携带微 生物。
生产人员
操作人员的手部、衣物等 可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
无菌检测ppt课件
01
《医疗器械监督管理条 例》
02
《医疗器械注册管理办 法》
03
《医疗器械生产质量管 理规范》
04
《医疗器械生产质量管 理规范附录：无菌医疗 器械》
05
无菌检测案例分析
药品无菌检测案例
案例概述
某制药公司生产的注射用头孢曲松钠在使用后出 现发热、寒战等不良反应，经调查发现是不合格 产品导致。
检测结果
无菌检测ppt课件
目录
CONTENTS
• 无菌检测简介 • 无菌检测方法 • 无菌检测流程 • 无菌检测标准与法规 • 无菌检测案例分析 • 无菌检测的未来发展
01
无菌检测简介
无菌检测的定义
01
无菌检测是指通过一定的方法和 手段，对产品或环境中的微生物 进行检测，以确定其是否符合无 菌要求的过程。
采样
采样时间
选择合适的采样时间，确保样品 具有代表性。
采样部位
根据需要检测的物品或环境，选 择适当的采样部位。
采样方法
采用无菌操作，避免交叉污染和 外界微生物的引入。
样品处理
样品稀释
将采集的样品进行稀释，以便后续检测操作。
样品预处理
根据检测方法的要求，对样品进行适当的预处理 ，如加热、过滤等。
样品保存
国内标准
GB/T 14233.1-2008 - 医用输 液、输血、注射器具检验方法 第1部分：化学分析方法
GB/T 14233.2-2005 - 医用输 液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法
GB/T 16886.1-2011 - 医疗器 械生物学评价 第1部分：评价 与试验
相关法规与政策
选择适当的保存条件和方法，确保样品在检测前 不受污染。
6微生物无菌检查和限度检查
阳性对照
• 无抑菌作用或抗革兰氏: 金黄色葡萄球菌。 • 抗厌氧菌: 生胞梭菌。 • 抗真菌：白色念珠菌。
培养基
•需/厌氧菌: 巯乙醇酸盐液体培养基。 •真菌: 改良马丁培养基。
集菌仪
1、改良马丁培养基 2、硫乙醇酸盐培养基 3、硫乙醇酸盐培养基+金葡菌
1 23
Membrane filtration
实验七
一、药物无菌检查法--无菌药品（注射剂等） （p296） 二、微生物限度检查法--非无菌药品（口服及 外用药）（p304）
一、药物无菌检查法（p296） Microbiological Test of drugs
• 无菌药品（注射剂等）--药物无菌检查法。
• 直接接种法和膜过滤法。
• 药典规定：供试品允许，应采用膜过滤法
Microbial limit Tests
• 药典规定的口服药和外用药检查项目： • 1、细菌总数测定； • 2、霉菌和酵母菌总数测定。 • 检查g或ml被检药品内所含有的活菌数（需氧菌）。 • 平皿法或膜过滤法。
过程
报告结果
• 平皿法：
• 细菌平均菌落数30-300之间； • 霉菌平均菌落数30-100之间；
Calculation and Report: 两个稀释级为有效板
R
NH DH NLDL
NH= 高稀释级的菌落数 NL= 低稀释级的菌落数 DH=高稀释级的稀释倍数 DL= 低稀释级的稀释倍数 2≤R<5, Report
R<2, Report
Counting colonies
Ineffective plate
>300cfu/plate
Effective plate
药物制剂微生物检验PPT.
的规定，判供试品不符合规定。
第三节 药品微生物限度检测方法
微生物检验基本流程
1、领取并配制培养基 （并解释“定时定量”）
注意观察应聘者讲话时的形体语言，他们所讲的与表现出的形体语言是否一致？譬如当他们声称善于与人交际时，是否躬着背，摆出
2、擦拭工作台及墙壁 一副防御的姿势？对应聘者的眼神尤其要留心观察，当你期望他们直视你的时候，他们是否不自觉地躲闪？
㈡
由于某些供试品具有抗菌活性，在建
方
立测定方法或原测定法的检验条件发生改
法 变时，可能影响检验结果的准确性，必须
对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性
进行验证。
二、药品微生物限度检测的基本条件
1.检测用量 ㈢
取
样
量
①所有剂型＞2个
最小包装
②大蜜丸≥4丸
③膜剂≥4片
2.检测量
①半/固体制剂：10g ②液体制剂：10ml ③膜剂：100cm
4.菌落计数及报告方法
1（.34.）4设出计外广是告认识新宜朋友选的好取机会，细新旧菌朋友、多接酵触，母就能菌锻煅平自己均的交菌际能落力。数在30-300之间、霉菌 平均菌落数小于100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位 5号位是车的侧身，很多销售人员认为车的侧面很难介绍，其实这个地方是很重要的，因为买车的客户最关心的还是安全，销售人员可
9.0ml
9.0ml
23~28℃
倒置培养5d
玫瑰红钠 琼脂培养 基
稀 9.0ml
释 液
对照
对照 1.0ml
对照 对照
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
2.薄膜过滤法
10g或10ml 供试品
10－1 供试液
取相当于1g或1ml 供试液用滤膜过滤、 冲洗
微生物限度检验PPT课件
- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
13
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
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验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
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验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件