月季的花药培养课件
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课题2月季的花药培养.ppt
17
诱导丛芽或胚状体的培养基配方
在1000ml.MS培养基中添加GA 、IBA和BA,质 量浓度分别为 0.1mg/L 、0.5mg/L 和 1mg/L 。
GA 赤霉素 IBA 吲哚丁酸,生长素的一种。 BA 苄氨基腺嘌呤,一种细胞分裂素，如6— BA最为常见。
诱导丛芽或胚状体的培养基配方
在MS培养基各种成分量减半，但需添加IAA, 质量浓度为1. 5mg/L
6
注意：
①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞 核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）
②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖 细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花 粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。
③两个精子和一个营养核的基因型相同。
④
4个花粉管细胞核
1花粉母细胞 减数分裂 4个小孢子 有数分裂
加 验氨发基现酸，、有酪蛋些白植水物解的物、愈酵伤母组提织取和物悬及椰浮子培汁养等物有机在附M加S
成 培分养。基与上其生它培长养得基比的B基5本培成养分基相上比，要M好S培，养而基另中一的硝些酸植盐、
钾 物和，铵在的B含5量培高养，基这上是它更的适明宜显。特点。
16
月季花药的MS培养基配方
在1000ml.MS培养基中添加以下成分别
2.4------D 0.4mgKT0.2mgIAA
4mg
调节pH至5.8
KT---激动素是一种非天然的细胞分裂素，化学名
称为6-糖基氨基嘌呤，主要生理作用：促进细胞分 化、分裂、生长；诱导愈伤组织长芽；解除顶端优 势；促进种子发芽、打破侧芽的休眠；延缓叶片衰 老及植株的早衰；调节营养物质的运输；促进结实； 诱导花芽分化；调节叶片气孔张开等。
课标领航
诱导丛芽或胚状体的培养基配方
在1000ml.MS培养基中添加GA 、IBA和BA,质 量浓度分别为 0.1mg/L 、0.5mg/L 和 1mg/L 。
GA 赤霉素 IBA 吲哚丁酸,生长素的一种。 BA 苄氨基腺嘌呤,一种细胞分裂素，如6— BA最为常见。
诱导丛芽或胚状体的培养基配方
在MS培养基各种成分量减半，但需添加IAA, 质量浓度为1. 5mg/L
6
注意：
①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞 核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）
②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖 细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花 粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。
③两个精子和一个营养核的基因型相同。
④
4个花粉管细胞核
1花粉母细胞 减数分裂 4个小孢子 有数分裂
加 验氨发基现酸，、有酪蛋些白植水物解的物、愈酵伤母组提织取和物悬及椰浮子培汁养等物有机在附M加S
成 培分养。基与上其生它培长养得基比的B基5本培成养分基相上比，要M好S培，养而基另中一的硝些酸植盐、
钾 物和，铵在的B含5量培高养，基这上是它更的适明宜显。特点。
16
月季花药的MS培养基配方
在1000ml.MS培养基中添加以下成分别
2.4------D 0.4mgKT0.2mgIAA
4mg
调节pH至5.8
KT---激动素是一种非天然的细胞分裂素，化学名
称为6-糖基氨基嘌呤，主要生理作用：促进细胞分 化、分裂、生长；诱导愈伤组织长芽；解除顶端优 势；促进种子发芽、打破侧芽的休眠；延缓叶片衰 老及植株的早衰；调节营养物质的运输；促进结实； 诱导花芽分化；调节叶片气孔张开等。
课标领航
课件10：3.2 月季的花药培养
是
()
A．材料的选择最常用的方法是焙花青-铬矾法，这
种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色
B．材料消毒时需先用酒精浸泡，然后用氯化汞或
次氯酸钙溶液浸泡，最后用无菌水冲洗
C．接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株
形成后需要光照
D．若接种的花药长出愈伤组织或形成胚状体后，要
适时转换培养基，以便进一步分化成再生植株
[跟随名师·解疑难]
1．镜检花粉发育时期的方法比较
项目
醋酸洋红法
焙花青-铬矾法
方法的 使用
常用的方法
花粉细胞核不易着色时，使用 该方法
不
花药在卡诺氏固定液中固定
将花药放在载玻片→滴1滴
同
20 min→取出，放在载玻片上
步骤 1%醋酸洋红→用镊柄捣碎
点
→焙花青-铬矾溶液染色→盖
花药→盖上盖玻片→镜检
[解析] 确定花粉发育的时期最常用的方法是醋酸洋 红法，有些植物细胞核不易着色时，需采用焙花青-铬矾法。 在形成愈伤组织或胚状体前，没有叶绿素的形成，不进行光 合作用，不需要光照；幼小植株形成后开始进行光合作用， 需要光照。花药离体培养的不同阶段，对主要营养的需求不 一样，所以要适时转换培养基。
[答案] A
答案：(1)生殖细胞 营养细胞 (2)小孢子四分体时期单核期 双核期 8 2 (3)醋酸洋红 (4)70%的酒精、0.1%的氯化汞 溶液(或 1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液) (5)与花丝 相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成
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月季组织培养中的三种培养基及使用顺序 (1)脱分化培养基：1 000 mL MS 培养基加入 0.4 mg 2， 4-D、0.2 mg KIN、4 mg IAA。 (2)生芽培养基：MS 培养基中添加 GA、IBA 和 BA，质 量浓度分别为 0.1 mg/L、0.5 mg/L 和 1 mg/L。 (3)生根培养基：MS 培养基各成分用量减半，添加 IAA， 质量浓度为 1.5 mg/L。 三者使用的顺序为：先用脱分化培养基，再用生芽培养 基，然后用生根培养基。如果先用生根培养基，再用生芽培 养基，则不能生芽。
高二生物月季的花药培养PPT课件
17
三、被子植物胚囊的形成 1、雌蕊的组成
柱头、花柱、子房 2、子房的结构
18
花粉管 精子
珠被 极核 卵细胞
子房壁
珠孔
被子植物子房的结构
胚珠的结构
19
3、卵细胞的形成
胚珠的外层是珠被，里面是胚囊。胚囊是由胚珠
内的胚囊母细胞（大孢子母细胞）发育而成。胚
囊母细胞经过减数分裂，产生四个细胞，称为大
孢子，每个大孢子内的染色体数目都比胚囊母细
31
⑤单核期花药的挑选
为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开 放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选 作实验材料。
⑥选择完全未开放花蕾的原因
完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花 药，菌少、易消毒 ⑦花药培养时间
一般月季的花药培养时间选在五月初到五月的中 旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及 生理状态会比较好，可能提高花粉的诱导成功率32
②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药 开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养 基上，以便进一步分化出再生植株
③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个 花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开 裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培 养基上，否则这些植株将很难分开。
胞减少一半。这4个细胞排成一行，其中靠近珠
孔的3个细胞退化，最里面的发育为胚囊细胞，
胚囊细胞的核连续进行三次有丝分裂，但是每次
核分裂后，并不接着进行细胞质分裂，就形成了
8个细胞核的胚囊。开始，这 8个细胞核分别位于
胚囊的两端，每端4个，接着，每端各有1个细胞
核移到胚囊的中央，这就是极核，所以再胚囊中
4个生殖细胞核 有分
三、被子植物胚囊的形成 1、雌蕊的组成
柱头、花柱、子房 2、子房的结构
18
花粉管 精子
珠被 极核 卵细胞
子房壁
珠孔
被子植物子房的结构
胚珠的结构
19
3、卵细胞的形成
胚珠的外层是珠被，里面是胚囊。胚囊是由胚珠
内的胚囊母细胞（大孢子母细胞）发育而成。胚
囊母细胞经过减数分裂，产生四个细胞，称为大
孢子，每个大孢子内的染色体数目都比胚囊母细
31
⑤单核期花药的挑选
为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开 放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选 作实验材料。
⑥选择完全未开放花蕾的原因
完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花 药，菌少、易消毒 ⑦花药培养时间
一般月季的花药培养时间选在五月初到五月的中 旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及 生理状态会比较好，可能提高花粉的诱导成功率32
②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药 开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养 基上，以便进一步分化出再生植株
③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个 花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开 裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培 养基上，否则这些植株将很难分开。
胞减少一半。这4个细胞排成一行，其中靠近珠
孔的3个细胞退化，最里面的发育为胚囊细胞，
胚囊细胞的核连续进行三次有丝分裂，但是每次
核分裂后，并不接着进行细胞质分裂，就形成了
8个细胞核的胚囊。开始，这 8个细胞核分别位于
胚囊的两端，每端4个，接着，每端各有1个细胞
核移到胚囊的中央，这就是极核，所以再胚囊中
4个生殖细胞核 有分
《月季花药培养》课件
适宜的温度、光照和湿度 有利于花药分化和植株生 长。
常见问题及解决方法
花药变黑
可能是由于细菌或真菌感染，应立即更换无菌培养基。
花药不分化
可能是培养基配方不合适，尝试调整培养基成分。
植株生长缓慢
可能是环境条件不适宜，调整温度和光照条件。
培养花药的注意事项
• 进行花药培养前，确保所有实验器具和培养基无菌。 • 选择健康的花药，避免使用受伤或感染的花朵。 • 注意花药的培养温度和光照条件，保持适宜的湿度。
总结和展望
通过学习花药培养的方法和技巧，我们能够更好地繁殖月季植株并提高繁殖 效率。未来，我们可以进一步研究优化花药培养条件，以及利用花药培养技 术改良月季植株和育种。
1
收集花药
选择健康的花朵，剪下花药并放入无菌培养基。
2
培养花药
置于合适的温度和光照条件下，观察花药的生长和分化。
3
分化植株
将花药中的愈伤组织分离培养，培养出月季植株。
影响花药培养效果的因素
1 花药质量
健康的花药有更好的分化 和生长能力。
2 培养基配方
3 环境条件
合适的培养基成分和浓度 对花药培养效果至关重要。
《月季花药培养》PPT课 件
探讨月季花药培养的方法和技巧，介绍培养花药的重要性，步骤，影响培养 效果的因素，解决常见问题，以及花药培养的注意事项。
花药培养的重要性
花药培养是一种重要的植物繁殖方法，可以大大提高繁殖效率和遗传多样性。 通过花药培养，我们可以快速繁步骤
《月季的花药培养》培训讲座课件
3．影响花药培养的因素 (1)影响花药培养的主要因素是 材料的选择 和 培养基的组成 。 (2)接种的花药时期：花期 早期 的花药比 后期 的更容易产生花 粉植株，一般在 单核期 ，细胞核由中央移向细胞一侧，花 药培养成功率最高。
课堂互动探究
热点考向示例 第十八页，共随二堂十八达页。标检测
教科书问题解答
活页规范训练
(3)花药培养所采用的培养基可能因植物 种类 不同而有所差异， 花药供体植物的 生长条件 和材料的 低温预处理 也是重要的影响 因素。 [思维激活1] 为选择到适于花药培养的时期，应选择何种花蕾？ 提示 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。
课堂互动探究
热点考向示例 第十九页，共随二堂十八达页。标检测
诱导出根，然后进
花药培养技术 行移栽。
取材为花药，培养
的为单倍体幼苗，
植株弱小，高度不
育，必须用秋水仙
素处理，使染色体
加倍，恢复正常植
株的染色体数，而
且为纯种。
第十四页，共二十八页。
• 练习1.
• 答：F2代紫色甜玉米的基因型组成可能 为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育 种方法，将F2代中的紫色甜玉米与白色 甜玉米〔aasusu〕进行测交，可以选择 出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。但 这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要 至少三年的选种和育种时间。如果利用 花药培养的技术，在F1代产生的花粉中 就可能有Asu的组合，再将花粉植株进行 染色体加倍，就可以直接得到紫色甜玉 米的纯合体〔AA第s十五u页，共s二十八u页。 〕。这种方法可以
课堂互动探究
热点考向示例第二十三页，随共二堂十八达页标。 检测
教科书问题解答
活页规范训练
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热点考向示例 第十八页，共随二堂十八达页。标检测
教科书问题解答
活页规范训练
(3)花药培养所采用的培养基可能因植物 种类 不同而有所差异， 花药供体植物的 生长条件 和材料的 低温预处理 也是重要的影响 因素。 [思维激活1] 为选择到适于花药培养的时期，应选择何种花蕾？ 提示 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。
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热点考向示例 第十九页，共随二堂十八达页。标检测
诱导出根，然后进
花药培养技术 行移栽。
取材为花药，培养
的为单倍体幼苗，
植株弱小，高度不
育，必须用秋水仙
素处理，使染色体
加倍，恢复正常植
株的染色体数，而
且为纯种。
第十四页，共二十八页。
• 练习1.
• 答：F2代紫色甜玉米的基因型组成可能 为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育 种方法，将F2代中的紫色甜玉米与白色 甜玉米〔aasusu〕进行测交，可以选择 出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。但 这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要 至少三年的选种和育种时间。如果利用 花药培养的技术，在F1代产生的花粉中 就可能有Asu的组合，再将花粉植株进行 染色体加倍，就可以直接得到紫色甜玉 米的纯合体〔AA第s十五u页，共s二十八u页。 〕。这种方法可以
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《月季花药培养》课件
花药处理
去除花药周围的残留花瓣和叶片 ，确保花药暴露在培养基上，以 便于后续操作。
花药的消毒与去雄
消毒方法
使用适宜的消毒剂对花蕾进行表面消毒，以去除表面微生物 。
去雄步骤
在显微镜下操作，用镊子小心去除花药中的雄蕊，确保雌蕊 不受损伤。
花药的接种与培养
接种技术
将处理好的花药移植到准备好的培养基上，确保花药与培养基紧密接触。
技术进步
随着生物技术的不断进步，未来月季花药 培养的成功率和技术难度有望得到进一步
改善。
经济效益提升
随着技术的成熟和成本的降低，月季花药 培养有望为花卉产业带来更大的经济效益
。
应用领域拓展
月季花药培养不仅可用于月季新品种的培 育，还可应用于其他花卉、果树、药用植 物等领域，具有广阔的应用前景。
社会效益增强
通过花药培养，可以繁殖大量优质月 季，保护和保存珍贵的花卉资源，避 免品种退化和消失。
月季花药培养的未来发展方向
优化培养条件
进一步研究月季花药培养的最优条件 ，提高花药培养的成功率和效率。
基因编辑技术的应用
结合基因编辑技术，定向改造月季的 性状，提高花药的再生能力和花苗的 质量。
拓展应用范围
将花药培养技术应用于其他花卉和农 作物，扩大其应用范围，为农业生产 提供更多帮助。
月季花药培养的原理
月季花药培养的基本原理是植物细胞的全能性。
月季花药中的单倍体细胞在适宜的培养条件下，能够诱导分化形成完整的植株。
通过花药培养获得单倍体植株后，再经秋水仙碱诱导加倍后筛选纯合二倍体植株， 可进行遗传转化和基因工程改良。
01
月季花药培养的过 程
花药的选择与处理
选择健康的花药
去除花药周围的残留花瓣和叶片 ，确保花药暴露在培养基上，以 便于后续操作。
花药的消毒与去雄
消毒方法
使用适宜的消毒剂对花蕾进行表面消毒，以去除表面微生物 。
去雄步骤
在显微镜下操作，用镊子小心去除花药中的雄蕊，确保雌蕊 不受损伤。
花药的接种与培养
接种技术
将处理好的花药移植到准备好的培养基上，确保花药与培养基紧密接触。
技术进步
随着生物技术的不断进步，未来月季花药 培养的成功率和技术难度有望得到进一步
改善。
经济效益提升
随着技术的成熟和成本的降低，月季花药 培养有望为花卉产业带来更大的经济效益
。
应用领域拓展
月季花药培养不仅可用于月季新品种的培 育，还可应用于其他花卉、果树、药用植 物等领域，具有广阔的应用前景。
社会效益增强
通过花药培养，可以繁殖大量优质月 季，保护和保存珍贵的花卉资源，避 免品种退化和消失。
月季花药培养的未来发展方向
优化培养条件
进一步研究月季花药培养的最优条件 ，提高花药培养的成功率和效率。
基因编辑技术的应用
结合基因编辑技术，定向改造月季的 性状，提高花药的再生能力和花苗的 质量。
拓展应用范围
将花药培养技术应用于其他花卉和农 作物，扩大其应用范围，为农业生产 提供更多帮助。
月季花药培养的原理
月季花药培养的基本原理是植物细胞的全能性。
月季花药中的单倍体细胞在适宜的培养条件下，能够诱导分化形成完整的植株。
通过花药培养获得单倍体植株后，再经秋水仙碱诱导加倍后筛选纯合二倍体植株， 可进行遗传转化和基因工程改良。
01
月季花药培养的过 程
花药的选择与处理
选择健康的花药
人教版《月季的花药培养》课件ppt1〔完美版〕
3 通常每瓶接种花药 7-10个，温度控制在 25℃ 左 右，不需要光照。幼小植株形成后才 需要光照。
4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变 化
每个人的心灵深处都有着只有他自己 理解的 东西。 对具有高度自觉与深邃透彻的心灵的 人来说 ，痛苦 与烦恼 是他必 备的气 质。 在一切创造物中间没有比人的心灵更 美、更 好的东 西了。 唯有心灵能使人高贵。所有那些自命 高贵而 没有高 贵的心 灵的人 ，都像 块污泥 。 一个人只要他有纯洁的心灵，无愁无 恨，他 的青春 时期， 定可因 此而延 长。 能充实心灵的东西，乃是闪烁着星星 的苍穹 ，以及 我内心 的道德 律。 你的心灵常常是战场。在这个战场上 ，你的 理性与 判断和 你的热 情与嗜 欲开战 。 无所事事并非宁静，心灵的空洞就是 心灵的 痛苦。
胚状体发育途径 烟草花药培养
部分花药通过胚状体途径形成小植株
愈伤组织发育途径 水稻花药培养
接种在平板上的水稻花药
部分花药产生愈伤组织
愈伤组织转接种到再生培养基
愈伤组织分化形成再生植株
(三)、影响花药培养的主要因素
1、材料的选择
不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有 直接的影响. （一般选月季的初花期）
花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月， 开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。
知识回顾
• 单倍体育种的过程？
正常植株（2N）
花药离体培养（N） 单倍体植株（N）
植株（2N）
秋水仙素处理， 使染色体翻倍
特点：1 明显缩短育种年限
2 后代植株都为纯合子。
课题2 月季的花药培养
花的结构
花托 花萼 花瓣 雄蕊
生殖细胞将再进行一次有丝分裂，形成两个精子
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基因工程的原理和技术
点点生物学教学
月季的花药培养
讨论:
怎样能够在大肠杆菌中产生 人的胰岛素?
基因工程的基本原理:让人们感兴趣 的基因在宿主细胞中稳定和高效表 达.
点点生物学教学
月季的花药培养
基因工程的基本操作程序主要包括 五个基本步骤：
1）获得目的基因 2）形成重组的DNA分子 3）将重组DNA分子导入受体细胞 4）筛选含有目的基因的NA片段,导入 受体菌的群体中储存,各个受体菌药培养
用DNA重组技术将某种生物的总 DNA用特定的限制性内切酶切割成一个 个片段，然后将这些片段随机地连接在 某些质粒或其他载体上，再将它们转移 到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖 而构成各个片段的无性繁殖系（克隆）， 当这些克隆多到可以包括某种生物的全 部基因时喂棉铃虫， 如虫吃后不出现中毒症 状，说明未摄入目的基 因或摄入目的基因未表 达。如虫吃后中毒死亡， 则说明摄入了抗虫基因 并得到表达。
月季的花药培养
巩固练习
1为了培育节水高产品种，科学家将大麦中与抗旱 节水有关的基因导入小麦，得到转基因小麦，其 水分利用率提高了20%。这项技术的遗传学原理是 A．基因重组 B．基因突变 C．基因复制 D培养
1）人工合成
n 已知其序列 n 已知其mRNA 的序列 n 已知其翻译产物的氨基酸序列
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月季的花药培养
2）聚合酶链式反应 即PCR技术
点点生物学教学体），从中便可分离，对于基因定 位和基因工程的研究都很有用。
点点生物学教学
月季的花药培养
点点生物学教学
月季的花药培养
步骤二：形成重组DNA分子
1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一 个切口，露出黏性末端。
点点生物学教学
月季的花药培养
步骤一：获得目的基因
目的基因是人们所需要转移或改造的基因, 获取目的基因是实施基因工程的第一步 。
如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植 物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮 藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰 素基因等。
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月季的花药培养
目的基因的获得
人工合成 利用PCR技术扩增
②间接导入法常用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。
（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自 我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常 还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。 （2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基 因的载体。 （3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序， 很适合用作真核生物基因的载体。
氨苄青霉 素抗性基因
四环素 抗性基因
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月季的花药培养
步骤四：目的基因的表达
• 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因 完成了表达吗？ 不能，受体细胞必须表现出特定的性状， 才能说明目的基因完成了表达。
若不能表达， 要对抗虫基因 再进行修饰。
点点生物学教学
月季的花药培养
想通过基因工程得到抗虫棉， 怎样证明抗虫基因已经在棉 花细胞中表达了？
点点生物学教学
月季的花药培养
这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿使包含各个 特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的 方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片
段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这
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月季的花药培养
巩固练习
2利用苏云金芽孢杆菌的抗虫基因培育的抗虫棉是 否成功，最好检测 A．是否有抗生素产生 B．是否有目的基因表达 C．是否有抗虫的性状出现 D．是否能分离到目的基因
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月季的花药培养
巩固练习
3水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中天冬氨
酸、甘氨酸和丝氨酸构成发光环，现已将这种蛋
• 常用的受体细胞：
有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、 酵母菌和动植物细胞等。
• 将目的基因导入受体细胞的原理
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
点点生物学教学
月季的花药培养
①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等 方法。
（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。 （2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注 入宿主细胞。 （3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。 （4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主 细胞中。
2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产 生相同的黏性末端。
3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口 处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重 组DNA分子（重组质粒）
目的基因与运载体的结合过程，实际
上是不同来源的基因重组的过程。
点点生物学教学
月季的花药培养
点点生物学教学
月季的花药培养
步骤三：将重组DNA分子导入受体细胞
白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技 术中，这种蛋白质的作用是
A．促使目的基因导入受体细胞 B．促使目的基因在受体细胞内复制 C．使目的基因容易被检测出来 D．使目的基因容易成功表达
点点生物学教学
月季的花药培养
1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细 胞壁的通透性。
2）使含有目的基因的重组质粒进入受体 细胞。
3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而 复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很 短的时间内就能获得大量的目的基因。
点点生物学教学
月季的花药培养
步骤四：筛选含有目的基因的受体细胞
点点生物学教学
月季的花药培养
讨论:
怎样能够在大肠杆菌中产生 人的胰岛素?
基因工程的基本原理:让人们感兴趣 的基因在宿主细胞中稳定和高效表 达.
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月季的花药培养
基因工程的基本操作程序主要包括 五个基本步骤：
1）获得目的基因 2）形成重组的DNA分子 3）将重组DNA分子导入受体细胞 4）筛选含有目的基因的NA片段,导入 受体菌的群体中储存,各个受体菌药培养
用DNA重组技术将某种生物的总 DNA用特定的限制性内切酶切割成一个 个片段，然后将这些片段随机地连接在 某些质粒或其他载体上，再将它们转移 到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖 而构成各个片段的无性繁殖系（克隆）， 当这些克隆多到可以包括某种生物的全 部基因时喂棉铃虫， 如虫吃后不出现中毒症 状，说明未摄入目的基 因或摄入目的基因未表 达。如虫吃后中毒死亡， 则说明摄入了抗虫基因 并得到表达。
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1为了培育节水高产品种，科学家将大麦中与抗旱 节水有关的基因导入小麦，得到转基因小麦，其 水分利用率提高了20%。这项技术的遗传学原理是 A．基因重组 B．基因突变 C．基因复制 D培养
1）人工合成
n 已知其序列 n 已知其mRNA 的序列 n 已知其翻译产物的氨基酸序列
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2）聚合酶链式反应 即PCR技术
点点生物学教学体），从中便可分离，对于基因定 位和基因工程的研究都很有用。
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步骤二：形成重组DNA分子
1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一 个切口，露出黏性末端。
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步骤一：获得目的基因
目的基因是人们所需要转移或改造的基因, 获取目的基因是实施基因工程的第一步 。
如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植 物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮 藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰 素基因等。
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目的基因的获得
人工合成 利用PCR技术扩增
②间接导入法常用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。
（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自 我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常 还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。 （2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基 因的载体。 （3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序， 很适合用作真核生物基因的载体。
氨苄青霉 素抗性基因
四环素 抗性基因
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步骤四：目的基因的表达
• 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因 完成了表达吗？ 不能，受体细胞必须表现出特定的性状， 才能说明目的基因完成了表达。
若不能表达， 要对抗虫基因 再进行修饰。
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想通过基因工程得到抗虫棉， 怎样证明抗虫基因已经在棉 花细胞中表达了？
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这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿使包含各个 特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的 方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片
段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这
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2利用苏云金芽孢杆菌的抗虫基因培育的抗虫棉是 否成功，最好检测 A．是否有抗生素产生 B．是否有目的基因表达 C．是否有抗虫的性状出现 D．是否能分离到目的基因
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3水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中天冬氨
酸、甘氨酸和丝氨酸构成发光环，现已将这种蛋
• 常用的受体细胞：
有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、 酵母菌和动植物细胞等。
• 将目的基因导入受体细胞的原理
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
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①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等 方法。
（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。 （2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注 入宿主细胞。 （3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。 （4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主 细胞中。
2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产 生相同的黏性末端。
3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口 处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重 组DNA分子（重组质粒）
目的基因与运载体的结合过程，实际
上是不同来源的基因重组的过程。
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步骤三：将重组DNA分子导入受体细胞
白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技 术中，这种蛋白质的作用是
A．促使目的基因导入受体细胞 B．促使目的基因在受体细胞内复制 C．使目的基因容易被检测出来 D．使目的基因容易成功表达
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1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细 胞壁的通透性。
2）使含有目的基因的重组质粒进入受体 细胞。
3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而 复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很 短的时间内就能获得大量的目的基因。
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步骤四：筛选含有目的基因的受体细胞