第二发酵工业菌种与种子的扩大培养PPT.ppt
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第二章发酵工业微生物菌种ppt课件
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(1) 曲霉属(Asprgillus)：曲霉种类繁多、分布 广泛，工业上利用曲霉生产各种酶制剂和有机 (2) 青霉属（Penicillium）：j既是使果实腐 酸。如米曲霉（ Asp. oryzae）用于酿酒和L败和实物变坏的有害菌，又是青霉素后葡萄 乳酸生产。制酱油用的酱油曲霉以及制造柠檬 糖酸的产生菌。 酸、草酸、葡萄糖酸和糖化酶、酸性蛋白酶、 (3) 根霉属（Rhizopus）：用于米酒、黄 果胶酶、单宁酶等的黑曲霉 (Asp. niger)。 酒生产。此外，广泛用作淀粉糖化菌、有机 酸发酵以及甾体转化等许多方面。 (4) 毛霉属（Mucor）：产生蛋白酶，有分 解大豆蛋白的能力。腐乳、酱油、转化甾族 化合物。土曲霉：衣康酸
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连续培养菌种的筛选 比生长速率(u):每克菌体每小时增长的 菌体量.u=1/XdX/dt.
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比生长速率u
A B
r
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基质浓度
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限 制 性 基 质
当进行流加时基质浓度<r 时,A菌先被洗出; 当进行流加时基质浓度>r 时,,B菌先被洗出;
培养液
固体培养法
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2.随机分离方法 （1）.抗生素产生菌筛选 试验菌的灵敏性，以及与抗生素有关的酶、 酶的抑制剂（例如棒酸）、激活剂、抗体 等建立起来的高灵敏度、专一的检测技术。 （2）.药理活性化合物的筛选 （3）.生长因子产生菌的筛选 （4）.多糖生产菌的筛选 （5）.免疫激活剂产生菌的分离
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(3) 乳酸菌：由糖类生成乳酸的一类细菌总称为乳 酸菌，有乳链球菌和乳酸杆菌之分，主要用来制 造乳制品。凡发酵产物中只有乳酸者，称为同型 乳酸发酵；凡发酵产物中除乳酸外还有乙酸等和 CO2者，称为异型乳酸发酵。肠膜状明串珠菌属 于乳酸菌族，是制药工业生产有旋糖酐的重要菌。 (4) 大肠杆菌：工业上利用大肠杆菌的谷氨酸 脱羧酶，进行谷氨酸定量分析。还可以利用 大肠杆菌制取天冬氨酸、苏氨酸和缬氨酸等。 医药方面用它制造治疗白血症的天冬酰胺酶。 另外，在研究细菌遗传变异方面，以及构建 基因工程菌时，大肠杆菌是理想的研究材料。
《菌种扩大培养》课件
重要性
菌种扩大培养是微生物实验和工业生 产中的重要环节，它能够提供足够数 量的微生物用于实验或生产，是实现 微生物利用的关键步骤。
菌种扩大培养的基本原理
生长曲线
菌种扩大培养需遵循微生物的生长曲线，即适应期、对数生长期和稳定期。在适应期，微 生物需要适应新的环境；在对数生长期，微生物快速分裂繁殖；在稳定期，微生物繁殖速 度减缓，细胞开始出现分化。
菌种活性检测
定期检测菌种的活性，确保菌种在 培养过程中保持较高的活性。
03
菌种扩大培养的技术与设备
微生物培养技术
微生物培养基
选择适宜的培养基成分，如碳源、氮 源、无机盐等，以支持微生物的生长 和繁殖。
无菌技术
培养条件控制
根据微生物的特性，控制培养温度、 湿度、pH值等条件，以获得最佳生长 效果。
工业生产
在工业生产中，菌种扩大 培养可用于发酵、酶工程 、生物制药等领域，提供 足够数量的目的产物。
农业生产
在农业生产中，菌种扩大 培养可用于菌肥、生物农 药等的生产，提高农作物 的产量和品质。
02
菌种扩大培养的步骤
菌种选择与纯化
菌种选择
选择适合工业化生产的菌种，考 虑其生长速度快、产率高、对环 境的适应性等。
新型发酵技术如连续发酵、分批补料发酵等能够提高菌种的发酵效率和产物得率 ，降低能耗和资源消耗。
新型发酵技术还有助于解决传统发酵工艺中存在的瓶颈问题，如高细胞密度培养 和产物抑制等，为菌种扩大培养提供新的解决方案。
智能化、自动化技术的进一步发展
智能化、自动化技术能够实现菌种扩大培养过程的实时监测 、控制和优化，提高培养过程的稳定性和可重复性。
《菌种扩大培养》PPT课件
目录 Contents
菌种扩大培养是微生物实验和工业生 产中的重要环节，它能够提供足够数 量的微生物用于实验或生产，是实现 微生物利用的关键步骤。
菌种扩大培养的基本原理
生长曲线
菌种扩大培养需遵循微生物的生长曲线，即适应期、对数生长期和稳定期。在适应期，微 生物需要适应新的环境；在对数生长期，微生物快速分裂繁殖；在稳定期，微生物繁殖速 度减缓，细胞开始出现分化。
菌种活性检测
定期检测菌种的活性，确保菌种在 培养过程中保持较高的活性。
03
菌种扩大培养的技术与设备
微生物培养技术
微生物培养基
选择适宜的培养基成分，如碳源、氮 源、无机盐等，以支持微生物的生长 和繁殖。
无菌技术
培养条件控制
根据微生物的特性，控制培养温度、 湿度、pH值等条件，以获得最佳生长 效果。
工业生产
在工业生产中，菌种扩大 培养可用于发酵、酶工程 、生物制药等领域，提供 足够数量的目的产物。
农业生产
在农业生产中，菌种扩大 培养可用于菌肥、生物农 药等的生产，提高农作物 的产量和品质。
02
菌种扩大培养的步骤
菌种选择与纯化
菌种选择
选择适合工业化生产的菌种，考 虑其生长速度快、产率高、对环 境的适应性等。
新型发酵技术如连续发酵、分批补料发酵等能够提高菌种的发酵效率和产物得率 ，降低能耗和资源消耗。
新型发酵技术还有助于解决传统发酵工艺中存在的瓶颈问题，如高细胞密度培养 和产物抑制等，为菌种扩大培养提供新的解决方案。
智能化、自动化技术的进一步发展
智能化、自动化技术能够实现菌种扩大培养过程的实时监测 、控制和优化，提高培养过程的稳定性和可重复性。
《菌种扩大培养》PPT课件
目录 Contents
发酵工程种子的扩大培养(共57张PPT)
第22页，共57页。
4、接种量的确定
接种量指移入种子液的体积和接种后培养液体积之比。
接种量大小取决于生产菌种的生长繁殖速度。过大过小
都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为7～15%，而由北京
棒状杆菌发酵谷氨酸只需1%。
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第23页，共57页。
4、接种量的确定
一般认为大一点好。 采用较大的接种量可缩短菌丝体繁殖达到高峰的时间， 使产物形成提前到来；生产菌占优势，减少杂菌生长的机 会。 接种量过多，往往又会使菌丝生长过快，培养液黏度增加， 造成溶解氧不足，而影响产物的合成。 接种量过小，引起发酵前期菌体生长缓慢，使发酵周期延 长，菌丝量少，产生菌丝团，导致发酵异常等
4—摇瓶液体培养 5—茄子瓶斜面培养 — 6 固体培养基培养 2021/10/21 7、8—种子罐培养 9—发酵罐
第6页，共57页。
6 返回
（二）实验室阶段
实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常 见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此形象 地将这些培养过程称为实验室阶段。
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第11页，共57页。
e.g 产黄青霉菌
原始菌种 斜面试管 获得孢子
250ml 茄子瓶（大米或小米） 25 ~28 ℃ ，4~14天
成熟（在真空下抽去水分，使水分含量在10%以
下，于4 ℃冰箱保存）。
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第12页，共57页。
对于不产孢子的赤霉素生产菌（ Gibberelline fujikuroi），也可用大米固 体培养基在茄子瓶中培养菌丝体，用作种子 罐种子。
在原料方面：
不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养 基，这有两个方面的原因: 一是成本、二是驯化。
第二章种子扩大培养ppt课件
2. 种子罐种子制备
可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。 孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养 后形成大量的菌丝，这样的种子称为一级种子；
把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。
如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更 多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子；
将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。
（二）生产车间种子制备
实验室制备的孢子或液体种子移种至 种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因 不同菌种而异，但其原则为采用易被菌 利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐 等，如果是需氧菌，同时还需供给足够 的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝） 体在培养液中均匀分布，获得相同的培 养条件。
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
定义：菌种的扩大培养就是把保藏 的菌种，即砂土管、冷冻干燥管中 处于休眠状态的生产菌种接入试管 斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种 子罐，逐级扩大培养后达到一定的 数量和质量的纯种培养过程。这些 纯种的培养物称为种子。
种子罐培养 e.g. yeast： 原始菌种（出发菌种） 10ml 麦汁试管 250ml 三角瓶培养
（25 °C ~27°C ，3天） （25°C， 2天）
5~10 L卡氏罐 （15 °C ~20 °C ，3~5天）
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。
可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。 孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养 后形成大量的菌丝，这样的种子称为一级种子；
把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。
如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更 多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子；
将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。
（二）生产车间种子制备
实验室制备的孢子或液体种子移种至 种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因 不同菌种而异，但其原则为采用易被菌 利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐 等，如果是需氧菌，同时还需供给足够 的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝） 体在培养液中均匀分布，获得相同的培 养条件。
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
定义：菌种的扩大培养就是把保藏 的菌种，即砂土管、冷冻干燥管中 处于休眠状态的生产菌种接入试管 斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种 子罐，逐级扩大培养后达到一定的 数量和质量的纯种培养过程。这些 纯种的培养物称为种子。
种子罐培养 e.g. yeast： 原始菌种（出发菌种） 10ml 麦汁试管 250ml 三角瓶培养
（25 °C ~27°C ，3天） （25°C， 2天）
5~10 L卡氏罐 （15 °C ~20 °C ，3~5天）
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。
工业微生物种子的扩大培养 教学PPT课件
● 固体培养基培养孢子 ● 液体培养法
2）生产车间种子制备
⑴ 种子罐级数的确定
种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数
级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会， 减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。
种子质量的判断方法
❖通常检测的培养液中参数
➢ pH是否在种子要求的范围之内 ➢ 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 ➢ 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 ➢ 有无杂菌污染
●种子液生化分析项目主要有：营养基质的消 ●耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等
2.影响种子质量的因素
接种量
染菌控制
影响种子质量 的因素
种龄
培养基 培养条件
培养基：
主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。
糖份少而氮源多些(菌体增殖为主要目的) 。
与发酵培养基的主要成分相近
*培养温度和湿度：
● 菌体总量适宜 ● 种子生命力旺盛，能缩短延长期，生产性能及生理状态稳定 ● 无杂菌和噬菌体的污染
2.种子制备的过程
●大致可分为：
●实验室种子制备阶段 ●生产车间种子制备阶段
2.种子制备的过程
●种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段
1）实验室种子的制备
● 一般采用两种方式
温度过低，菌种生长发育缓慢 ❖ 温度过高会使菌丝过早自溶 湿度低，孢子生长快； ❖ 湿度大，孢子生长慢
pH：
选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适 当的菌量
❖ 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的 pH，以便种子能尽快适应新的环境
通风和搅拌：
溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用
2）生产车间种子制备
⑴ 种子罐级数的确定
种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数
级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会， 减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。
种子质量的判断方法
❖通常检测的培养液中参数
➢ pH是否在种子要求的范围之内 ➢ 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 ➢ 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 ➢ 有无杂菌污染
●种子液生化分析项目主要有：营养基质的消 ●耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等
2.影响种子质量的因素
接种量
染菌控制
影响种子质量 的因素
种龄
培养基 培养条件
培养基：
主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。
糖份少而氮源多些(菌体增殖为主要目的) 。
与发酵培养基的主要成分相近
*培养温度和湿度：
● 菌体总量适宜 ● 种子生命力旺盛，能缩短延长期，生产性能及生理状态稳定 ● 无杂菌和噬菌体的污染
2.种子制备的过程
●大致可分为：
●实验室种子制备阶段 ●生产车间种子制备阶段
2.种子制备的过程
●种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段
1）实验室种子的制备
● 一般采用两种方式
温度过低，菌种生长发育缓慢 ❖ 温度过高会使菌丝过早自溶 湿度低，孢子生长快； ❖ 湿度大，孢子生长慢
pH：
选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适 当的菌量
❖ 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的 pH，以便种子能尽快适应新的环境
通风和搅拌：
溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用
发酵工程第二章发酵工业菌种ppt课件
样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触 一个稀释度的菌液；
同一稀释度三个以上重复,取平 均值；
每个平板上的菌落数目合适， 便于准确计数；
①初筛
初筛是从分离得到的大量菌种中将合成目的产物的菌种筛 选出来的过程。初筛可分为两种情况进行：
a.平板筛选 对于在分离纯化阶段没有进行平板定性法挑选 出来的菌株，可以先进行平板定性筛选。在初筛时，使 用平板快速检测法，将复杂而费时的化学测定改为平板 上肉眼可见的显色或生化反应，可以减少筛选的工作量， 大幅度地提高筛选效率。
研究方法 1、模拟自然培养法：原位培养、培养条件优化、单细胞操作。
2、宏基因组分析法：测序分析未培养微生物的基因组，结合蛋白质组学， 了解其代谢途径、基因表达调控机制等。
第二节 发酵工业菌种的分离筛选
菌种的来源
根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保 藏部门索取或购买；
从大自然中分离筛选新的微生物菌种。
度、碳源和氮源类型及浓度等，使目的微生
物在最适宜条件下迅速繁殖，数量增加，成
为人工环境下的优势种。
3. 富集培养
富集培养的策略 （1）控制培养基的营养成分 用促进某特定微生物生长繁殖的选择性培养基或培养条件。 可用抑制其他微生物生长繁殖的选择性培养基或培养条件。
例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有 利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯 种分离就会顺利得多。
在科学研究中，通过菌种选育还可以了解菌种的 遗传学性质
2.1 工业发酵菌种概述
10
1
微生物物种
100 已发现物种
被利用物种
细菌
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第二节 发酵工业菌种的选育
工业菌种的分离：菌株分离是将混杂着各种微生 物的样品按照实际需要和菌株的特性采取迅速、 准确、有效的方法对它们进行分离、筛选。进而 得到所需微生物的过程。
工业菌种的育种：是运用遗传学原理和技术对 某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方 位的改造。通过改造，可使现存的优良性状强 化，或去除不良性质或增加新的性状。
二、新种分离与筛选的步骤 5. 毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的， 将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品 工业有关的菌种，更应慎重。
有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵 母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须 作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通 过两年以上的毒性试验。
二、已工业化产品生产菌的介绍
4. 常用的基因表达系统 （2）真核细胞表达系统
➢ 酵母(既是微生物又是真核细胞) 生长迅速，营养要求不高，易培养； 安全性好； 比哺乳动物细胞操作简单； 具有一定的修饰蛋白的能力。
二、已工业化产品生产菌的介绍
4. 常用的基因表达系统
（2）真核细胞表达系统 ➢ 中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）表达系统 具有准确的转录后修饰功能； 具有产物胞外分越功能，便于下游产物分离纯化； 具有重组基因的高效扩增和表达能力； 具有贴壁生长特性，也可进行悬浮生长； CHO很少分泌自身的内源蛋白。
α -淀粉酶：黑曲霉、米曲霉、米根酶、枯草牙孢 杆菌和地衣牙孢杆菌
二、已工业化产品生产菌的介绍
4. 常用的基因表达系统 （1）原核生物
大肠杆菌(1977年Boyer)、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌
生长迅速、蛋白产量高; 表达蛋白的纯化、分离及分析快速； 外源基因的导入相对容易； 已建立了整套表达理论及技术.
二、已工业化产品生产菌的介绍
问题： 生产抗生素的微生物能不能用于生产氨基酸？
微生物（包括动、植物细胞）几乎可以生产 我们所需的一切产品，但是涉及到工业化生 产对于某一种特定的产品，只有特定的微生 物才具有大量表达的潜力。
例： 礼来(Eli lilly),花了10年的时间从40 万株微生物中，发现了三种有潜力的新 抗生素。
1. 采样
二、新种分离与筛选的步骤 1. 采样 （2）采样季节
以温度适中，雨量不多的秋初为好。
（3）采土方式
在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取 离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸 袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、 地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中 微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步 分批寄回，以便及时分离。
二、新种分离与筛选的步骤 2. 增殖培养
为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物 至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择 性培养基，选择一定的培养条件来控制。
例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维 素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源， 那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常 生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样 对下阶段的纯种分离就会顺利得多。
生产特性要符合工艺要求
二、已工业化产品生产菌的介绍
1. 抗生素生产有关的微生物
抗生素是次级代谢产物，需要生物体进行复 杂的代谢，目前发现的生物来源如下：
放线菌（链霉 素四环素；红 霉素等）
真菌（青霉素、头孢等） 一些产芽孢的细菌
植物或动物来源
二、已工业化产品生产菌的介绍
2. 氨基酸生产有关的微生物
氨基酸生产菌的要求： 代谢途径比较清楚， 代谢途径比较简单
谷氨酸发酵的菌种： 棒杆菌属，短杆菌属、节杆菌 属或小杆菌属的棒型细菌
其它氨基酸生产菌： 常规菌种一般也是以谷 氨酸生产菌选育而成； 工程菌，大肠杆菌，枯 草芽孢杆菌
二、已工业化产品生产菌的介绍
3. 食品酶制剂生产有关的微生物
开发一个新酶，都要经过一系列研究的毒理 试验。关于食品用酶，美国需要得到FDA的批准。 目前已同意使用的仅仅少数微生物能用于生产食 品用酶。
一、菌种的来源
根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂 或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。
二、新种分离与筛选的步骤 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长 培养特性。
采样：有针对性地采集样品。
增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌 种增殖培养后，在数量上占优势。
二、新种分离与筛选的步骤
3. 培养分离
尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生 物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。 在这—步，，好一点。纯种 分离的方法有划线分离法、稀释分离法。
二、新种分离与筛选的步骤
4. 筛选 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件， 通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得适 合于工业生产用菌种。
分离：利用分离技术得到纯种。
发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包 括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、 发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生 长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。
二、新种分离与筛选的步骤 1. 采样
（1）采样对象
以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼 泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物 的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野 果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物， 腐败物品，某些水域等。
第二发酵工业菌种与种子的扩大培养
第一节 发酵工业菌种概述
菌种在发酵工业中起着重要作 用，它是决定发酵产品是否具有产 业化价值和商业化价值的关键因素、 是发酵工业的灵魂。
一、发酵工业用菌种的特点及要求
能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高 效地合成产物
有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌 种改造的可操作性要强 遗传性能要相对稳定 不易感染它种微生物或噬菌体 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学 上最好与致病菌无关）
二、新种分离与筛选的步骤
6.培养分离中要解决的问题 （1）“分离什么和从哪里分离出?” （2）必须充分考虑所分离微生物的生产能力、
生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其 提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性 及遗传操作的难易程度等。 （3）选择适宜的培养分离方法和检测方法。