实验1大肠杆菌的培养和分离

2、流程
计算称量 溶解 调pH 分装
加塞，包扎 灭菌
倒平板
①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在 将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用_三__角__漏__斗___。 ②加塞：试管用塑料盖或_棉__花__塞___；三角瓶口用_封__口__膜__ 或_6_层__纱__布___封口,再用_牛__皮__纸____或报纸封口。 ③包扎：用牛__皮__纸____或报纸
否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差 可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而 发生污染，甚至使容器爆炸。
灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_烘__箱__ 中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_污__染__。
⑤倒平板、制斜面
操作平台：超净台 灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开 __紫__外__线___和___过__滤__风____，灭菌30min.
实验1： 大肠杆菌的培养和分离
大肠杆菌（E.coli）
革兰氏___阴___（填阴或阳）性菌 代谢类型： 异养，兼性厌氧型 生长适宜温度： 37℃左右
易培养、生活周期短等特点。 分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。 大肠杆菌在人体的_肠__道__中一般对人体无害，但任何 大肠杆菌如果进入_泌__尿__系__统___都会对人体产生危害。 大肠杆菌是__基__因___工程中被广泛采用的工具。 质粒、 EcoRⅠ限制酶、E.coli-DNA连接酶、受体细胞
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3、调节pH 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5
4、有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
三、无菌操作
1.无菌操作的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有
防止__杂__菌_ຫໍສະໝຸດ Baidu__污染的方法。 _各__种__器__具__必须无菌、
紫外灯 过滤风
思考题： 一、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？ 1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打 开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。 2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。 3、整个操作在酒精灯火焰旁进行 4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。
二、培养基灭菌后，需要冷却到60℃后才倒平板， 你用什么办法来估计培养基的温度呢？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的 温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体 培养基上大量生长繁殖时，所 形成的肉眼可见的具有一定形 态结构的子细胞群体。
大肠杆菌
不同微生物形成的菌落具有不同 大肠杆菌菌落： 的特征，是鉴定菌种的重要依据。白色或乳白色，光滑
如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。
酵母菌
放线菌
霉菌
二、 培养基
1、培养基的种类 (固体、半固体、液体) 2、成分 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子
栓松紧一致，勿使漏气。
3）加热排气打：开排气阀，使水沸腾以排除锅内的 _冷__空__气__。_待__冷__空__气__完__全__排__尽__后，关上排气阀。
4）保温保压当：锅内压力升到_______1kg/cm2时，控制 热源，维持压力至__1_5___min。
5）出锅切：断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压 力降至___0_时，打开__排__气__阀__，旋松螺栓，打开 盖子，取出灭菌物品。
3、常用的灭菌和消毒的方法
灭菌方法：
高压蒸汽灭菌
培养基、无菌水、
各种耐高温的玻璃金属器具
洒精灯灼烧灭菌 接种环等金属器具 干热灭菌 需要保持干燥 消毒方法：耐高温的玻璃金属器皿 高压蒸汽灭菌锅
煮沸消毒法
1kg/cm2 、121℃
巴氏消毒法
下维持15min.
化学药剂消毒法（酒精、氯气等）
紫外线消毒法
倒平板：待培养基冷却至__６__０_ ℃时，将每只培 养皿倒入_1_0_～__1_2___ml未凝固的固体培养基，置 于_水__平__位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底 部，待凝，使之形成平面。_倒__置____备用。 制斜面：将未凝固的固体培养 基的试管_斜___放，冷却待凝使即 成为斜面。
超净工作台
主要包括：__培__养__基___也必须要无菌、 _转__移__菌__种____时不能带入其他杂菌
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
消毒：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内 部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死 芽孢和孢子。
灭菌：使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生 物，包括芽孢和孢子。
思考题
三、为何要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养 基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠 落培养基，造成污染。 四、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微 生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上 滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 五、如何检查培养基是否受杂菌的污染？ 将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生 则未受杂菌污染。
④灭菌 高压蒸气灭菌法
1）加水： 向外层锅内加入适量的水，加水的要求是不__触__及__内__胆_.
2）装锅：物品放置的要求_整__齐__、__稳__定__、__留__出__空__隙___：
加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_排__气__槽__内。 再以_两__两__对__称_方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
四 、 操作步骤
（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）
1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克， 氯化钠0.5克，水50ml （配固体培养基再加琼脂1克）
（二）液体培养基接种培养
主要器具：接种环、摇床等 操作方法：先将接种环进行_灼__烧__灭菌, __冷__却__后 的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基 中，加塞。置于３__７__℃摇床振荡培养１２小时。