HPLC测定口腔溃疡散中色胺酮_靛蓝_靛玉红的含量

HPLC 测定口腔溃疡散中色胺酮、靛蓝、靛玉红的含量

闫 玮, 张 楠, 刘建利

*

(西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术省部共建教育部重点实验室,陕西西安710069)

收稿日期:2008 07 24

基金项目:国家自然科学基金(30070905);陕西省重点实验室基金(03JS008,04J S06,05JS53)作者简介:闫 玮(1984-),女,硕士研究生。E m ai :l angel w e i 0724@163.co m

*通讯作者:刘建利,教授,博士生导师,从事天然产物提取分离、结构修饰与仿生合成。Te:l (029)88302411E ma i :l jlliu @ .cn

关键词:口腔溃疡散;色胺酮;靛蓝;靛玉红;H PLC

摘要:目的:建立口腔溃疡散(青黛、白矾、冰片)中色胺酮、靛蓝、靛玉红含量测定方法。方法:色谱柱为Sh i m P ack 型C 18柱,流动相:甲醇 水(65 35),柱温:30 ,流速:0.8mL /m i n ,检测波长:289n m 。结果:色胺酮在0.125~7.5 g /mL 范围内线性关系良好(r =0.9997),平均回收率为99.55%,RSD =1.05%(n =6),靛蓝在0.375~22.5 g /mL 范围内线性关系良好(r =0.9996),平均回收率为98.93%,RSD =1.15%(n =6),靛玉红在0.5~30 g /mL 范围内线性关系良好(r =0.9992),平均回收率为98.90%,RSD =1.21%(n =6)。结论:本法简便、快速、准确,可用于该制剂的质量控制。中图分类号:R 927.2 文献标识码:A 文章编号:1001 1528(2009)05 0743 03

口腔溃疡散处方来源于 卫生部药品标准 中

药成方制剂一册。处方由青黛、白矾、冰片三味中药组成,其中青黛为方中君药,约占处方总量的50%,具有清热解毒,消溃止痛之功效。现有的口腔溃疡散质量控制是采用薄层色谱的方法通过对组方中所

含有的靛蓝、靛玉红两种成分进行鉴定[1,2]

。为提高完善质量标准,本试验采用高效液相色谱法,同时测定口腔溃疡散中色胺酮(tr yptanthrin)、靛蓝(i n d i go)、靛玉红(ind ir ub i n )3种有效成分的含量,以控制成药质量,效果良好,定量准确快速。三种成分结构见图1

。

(a)(b)(

c)

图1 色胺酮(a),靛蓝(b),靛玉红(c)的结构

1 仪器与试药

岛津LC 10AT 高效液相色谱仪,二级管阵列检测器。色胺酮为实验室自制(纯度大于98%);靛蓝,靛玉红对照品购自中国药品生物制品检定所。口腔溃疡散(北京同仁堂,批号6100056、7100022、7100034)购自西安市大庆路药材市场,甲醇(色谱纯),超纯水。2 色谱条件

色谱柱:Sh i m Pack C 18(4.0mm 150mm,5

m ),流动相:甲醇 水溶液(65 35);柱温:30 ;流

速:0.8m L /m in ;检测波长:289nm;进样量:20 L 。3 实验方法

3.1 对照品溶液的制备

色胺酮的合成参照文献

[3]

的方法合成,黄色针

状结晶,m p :269~270 ,熔点与波谱数据与文献报道一致。精密称取色胺酮、靛蓝、靛玉红对照品各1m g 、3m g 、5m g ,用氯仿溶解,定容至100mL ,再将混合贮备液分别稀释至10 g /mL 、30 g /mL 、50 g /mL 作为对照品溶液,避光保存。3.2 标准曲线的制作

分别吸取0.125、0.25、1.25、2.5、5、7.5m L 对照品溶液置于10mL 量瓶,每种浓度对照品溶液进样20 L ,按上述色谱条件测定,记录峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,分别得到3种标品的回归方程:色胺酮:Y =30020X -9032.6,r =0.9997;靛蓝:Y =14189X +9606.5,r =0.9996;靛玉红:Y =134854X -49687,r =0.9992。结果表明色胺酮在0.125~7.5 g /mL 、靛蓝在0.375~22.5 g /mL 、靛玉红在0.5~30 g /m L 范围内呈现良好的线性关系。3.3 供试品溶液的制备

精密称取约0.2g 口腔溃疡散,精密称定,置烧瓶中,加氯仿适量,加热回流4h ,放冷至室温,转移至100mL 棕色量瓶内,加氯仿至刻度,摇匀,过0.45 m 微孔滤膜,续滤液为供试品溶液。

3.4 精密度试验

取色胺酮、靛蓝、靛玉红对照品溶液进样,每次20 L,重复进样5次。色胺酮、靛蓝、靛玉红面积积分值的RSD分别为0.75%、0.80%、0.91%,表明仪器精密度良好。

3.5 重复性试验

精密称定同一批(批号6100056)样品,按照供试品制备的方法分别制备5份供试品溶液,分别测定。结果色胺酮的RSD=2.15%,靛蓝的RSD= 1.73%,靛玉红的RSD=1.48%。

3.6 稳定性考察

取同一供试品溶液(批号6100056)于不同的时间(0、4、6、8、10h)进样各20 L,测定峰面积,色胺酮、靛蓝、靛玉红的RSD分别为0.68%、0.75%、0.82%,表明供试品溶液在10h内稳定。

3.7 加样回收率实验

精密称定已知含量的口腔溃疡散(批号6100056)6份,各约0.09g,分别精密加入一定量的色胺酮、靛蓝、靛玉红对照品溶液,按3.3项下方法制备,以上述色谱条件测定,每份样品进样20 L,结果见表1。

表1 回收率测定结果(n=6,a色胺酮、b靛蓝、c靛玉红)

称样量/g

样品中含量/ g

a b c

加入量/ g

a b c

实际测得含量/ g

a b c

回收率/%

a b c

0.09252.60023.94831.2582.45524.00030.125 5.08247.65560.859100.2598.8597.82 0.09302.63224.07731.4252.50024.12530.250 5.13448.05661.22699.8298.8398.17 0.09352.66524.12531.6742.52524.25030.500 5.18548.22062.12299.8699.0498.65 0.09402.70024.21331.8242.60024.50030.725 5.31248.65462.585100.1498.7499.95 0.09452.73124.30532.0042.65024.72531.000 5.33648.91062.99898.1399.1599.80 0.09502.75824.44132.2522.67524.90031.250 5.41049.12563.25899.1298.9599.01

平均回收率/%99.5598.9398.90

RSD/%1.051.151.21

3.8 空白试验

按处方及生产制备工艺同种方法,制备不含青黛的阴性样品,按3.3项下的方法制备阴性样品溶液,进样量20 L,记录色谱图,其结果见图2 C,结果显示阴性样品溶液在色胺酮、靛蓝、靛玉红出峰处

无干扰。

A B

C

图2 (A)对照品、(B)样品、(C)阴性样品HPLC图谱

1.色胺酮

2.靛蓝

3.靛玉红

3.9 样品含量的测定

取3批口腔溃疡散,按照3.3项下的方法制备

供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶

液20 L,注入液相色谱仪进行测定,计算色胺酮、

靛蓝、靛玉红的含量,结果见表2,对照品及样品色

谱图分别见图2 A和图2 B。

3 讨论

3.1 流动相的选择 流动相的选择上我们采用甲

醇 水系统,考察了(40 60)、(60 40)、(65 35)、(70

30)等不同组成比例的效果,结果表明甲醇 水(65

表2 口腔溃疡散中(a)色胺酮、(b)靛蓝、

(c)靛玉红含量(n=3)

批号

平均含量/( g/g)

a b c

RSD/%

a b c

610005678.22377.60401.171.240.75 1.12

710002276.82360.24404.251.56 1.020.96

710003479.21375.01416.961.380.68 1.29

35)时出峰时间合理,峰型尖锐,效果较好,色胺

酮、靛蓝、靛玉红各自的保留时间分别为8.12、

12.84、23.45m in。

3.2 检测波长的选择 检测波长的选择上我们[4]