蛋白质分子量标准(宽)

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P0061蛋白质分子量标准

蛋白质分子量标准产品简介：碧云天生产的蛋白质分子量标准(Protein Molecular Weight Marker)包含了从14.4 kD到116 kD共7种纯化的蛋白质(见右图)，适合作为SDS-PAGE的蛋白质分子量标准。

本蛋白质分子量标准已经配制在1X的SDS-PAGE上样缓冲液中，可以直接使用。

根据上样孔的大小，本蛋白质分子量标准通常每次上样5-10微升，就可以用染色观察到非常清楚的蛋白条带。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：本蛋白质分子量标准用1X SDS-PAGE上样缓冲液配制，不适用于非变性PAGE胶。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 将蛋白质分子量标准置于沸水浴或100℃加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

2. 在上样时根据加样孔的大小每孔上样5-10微升蛋白质分子量标准。

3. 通常电泳至蓝色的溴酚蓝基本上到达凝胶的底部时停止电泳。

4. SDS-PAGE胶用常规考马斯亮蓝染色，或用碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液(P0017)染色后，对于蛋白质分子量标准可以观察到如右图的清晰条带。

5. 如果采用银染方法检测蛋白条带，上样量应该适当减少。

使用本产品的文献：1.Lin X, Zhao J, Qian J, Mao Y, Pan J, Li L, Peng H, Luo Y, Yan J.Identification of immunodominant B- and T-cell combined epitopes in outer membrane lipoproteinsLipL32 and LipL21 of Leptospira interrogans.Clin Vaccine Immunol. 2010 May;17(5):778-83.2. Lin X, Sun A, Ruan P, Zhang Z, Yan J.Characterization of conserved combined T and B cell epitopes in Leptospira interrogans majorouter membrane proteins OmpL1 and LipL41.BMC Microbiol. 2011 Jan 26;11(1):21.3. Yang Y, Xia T, Zhi W, Wei L, Weng J, Zhang C, Li XPromotion of skin regeneration in diabetic rats by electrospun core-sheath fibers loaded with basicfibroblast growth factor.Biomaterials. 2011 Jun;32(18):4243-54.4. Yang Y, Xia T, Chen F, Wei W, Liu C, He S, Li X.Electrospun fibers with plasmid bFGF polyplex loadings promote skin wound healing in diabeticrats.Mol Pharm. 2012 Jan 1;9(1):48-58.5. Sun Q, Xiong J, Lu J, Xu S, Li Y, Zhong XP, Gao GK, Liu HQ.Secretory TAT-peptide-mediated protein transduction of LIF receptor α-chain distal cytoplasmicmotifs into human myeloid HL-60 cells.Braz J Med Biol Res. 2012 Jun 21..6. He S, Xia T, Wang H, Wei L, Luo X, Li X.Multiple release of polyplexes of plasmids VEGF and bFGF from electrospun fibrous scaffolds towardsregeneration of mature blood vessels.Acta Biomater. 2012 Jul;8(7):2659-69. doi: 10.1016/j.actbio.2012.03.044. Epub 2012 Apr 3.7. Wang H, Zhang Y, Xia T, Wei W, Chen F, Guo X, Li X.Synergistic Promotion of Blood Vessel Regeneration by Astragaloside IV and Ferulic Acid from ElectrospunFibrous Mats.Mol Pharm. 2013 Jun 3;10(6):2394-403. doi: 10.1021/mp400031y. Epub 2013 May 8.8.Liu Q, Liu L, Zhou J, Shin HD, Chen RR, Madzak C, Li J, Du G, Chen J.Biosynthesis of homoeriodictyol from eriodictyol by flavone 3'-O-methyltransferase from recombinant Yarrowia lioplytica: Heterologous expression, biochemical characterization, and optimal transformation.J Biotechnol. 2013 Sep 20;167(4):472-8. doi: 10.1016/j.jbiotec.2013.07.025. Epub 2013 Jul 29.9. Zhao L, Liu Q, Yan S, Chen Z, Chen J, Li X.Multimeric immobilization of alcohol oxidase on electrospun fibers for valid tests of alcoholic saliva.J Biotechnol. 2013 Oct 10;168(1):46-54. doi: 10.1016/j.jbiotec.2013.08.015. Epub 2013 Aug 19.10.Chen F, Wan H, Xia T, Guo X, Wang H, Liu Y, Li X.Promoted regeneration of mature blood vessels by electrospun fibers with loaded multiple pDNA-calcium phosphate nanoparticles.Eur J Pharm Biopharm. 2013 Nov;85(3 Pt A):699-710. doi: 10.1016/j.ejpb.2013.07.009. Epub 2013 Jul 24.11.Luo X, Jia G, Song H, Liu C, Wu G, Li X.Promoting antitumor activities of hydroxycamptothecin by encapsulation into acid-labile nanoparticles using electrospraying.Pharm Res. 2014 Jan;31(1):46-59. doi: 10.1007/s11095-013-1130-4. Epub 2013 Jul 25.12.Cai C, Zhao D, Ma C, Zhang Y, Wu X, Wei G, He D.Connexin 43 expression in Sprague-Dawley rat seminiferous epithelium after in utero exposure to flutamide.Syst Biol Reprod Med. 2014 Oct;60(5):257-62. doi: 10.3109/19396368.2014.921738. Epub 2014 May 27.13.Liu Y, Lu J, Li H, Wei J, Li X.Engineering blood vessels through micropatterned coculture of vascular endothelial and smooth muscle cells on bilayered electrospun fibrous mats with pDNA inoculations.Acta Biomater. 2014 Oct 7. pii: S1742-7061(14)00446-2. doi: 10.1016/j.actbio.2014.10.004.。

核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制

核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制•一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g （2）分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml （3）DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。

以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。

所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

蛋白标准品（Marker）知识汇总

蛋白Mar‎k er可分‎为：一、未预染的M‎a rker‎即宽分子量蛋白标准‎、高分子量蛋‎白标准以及‎低分子量蛋‎白标准;二、预染的Ma‎r ker即‎单色预染和‎多色预染。

在weste‎r n blot 过程中，分子量Ma‎r ker就‎像个螺丝钉‎一样没虽然‎是个小细节‎，然而就是这‎样一个小细‎节对实验结‎果有着不可‎忽视的作用‎。

这个 Weste‎r n Blot 参‎照家族的一‎员的作用主‎要是用来指‎示蛋白条带‎所对应的分‎子量大小，只有标准量‎精确无误了‎，实验结果才‎有说服力，除此之外，蛋白标准还‎有表示转移‎成功或者蛋‎白在凝胶上‎的电泳程度‎等等的作用‎，所以选择正‎确的蛋白M‎a rker‎也是wes‎t ern blot实‎验成功的必‎要条件之一‎。

总体来说，蛋白分子量标准可以‎分成未染蛋‎白分子量标‎准、预染蛋白分‎子量标准二‎个级别。

以下是关于‎蛋白分子量‎标准的小叙‎：一. 未染色(pre mixed‎)蛋白分子量标准未染色的蛋‎白分子量标准是最‎简单，也是最准确‎的一种。

由于没有附‎带染料分子‎或者是标记‎分子，所示大小正‎好是蛋白原‎本的大小，是精确判断‎蛋白大小必‎须的。

现在的Ma‎r ker多‎数都选用预‎混和的Ma‎r ker，方便不同大‎小的蛋白比‎较。

预混的Ma‎r ker通‎常有几条带‎加倍浓度作‎为指示，因为混合的‎条带越多，越不好记，谁知道哪条‎是那条!数到眼都花‎了。

所以当看到‎特别浓的那‎几条标志带‎就记得是哪‎里了。

不过要记得‎，小带通常都‎不那么容易‎看清楚的。

在选择上来‎说，当然是选择‎其中至少有‎一条条带和‎自己的目的‎蛋白大小相‎近的最好，越近越好。

如果你的蛋‎白不幸在两‎条跨度较大‎M arke‎r条带之间‎，选别的Ma‎r ker吧‎。

预混的Ma‎r ker 使‎用上不如预‎染Mark‎e r(pre-stain‎e d)好用，因为电泳过‎程中完全看‎不到，要和目标蛋‎白一起等到‎最后染色才‎―开蛊‖，无法对实验‎起预示参照‎作用。

蛋白质分子量标准

蛋白质分子量标准蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，它们具有复杂的结构和多样的功能。

蛋白质的分子量是描述其特性的一种重要指标，对于理解蛋白质的结构和功能具有重要意义。

以下是对蛋白质分子量标准的详细介绍：1.序列长度序列长度是指蛋白质中氨基酸的数目。

一般而言，蛋白质的序列长度在几百到数千个氨基酸之间。

序列长度是影响蛋白质分子量的主要因素之一，也是蛋白质结构与功能多样性的基础。

2.分子量计算分子量是指蛋白质分子的相对质量，通常以道尔顿（Da）为单位表示。

分子量的计算方法是根据氨基酸的相对分子质量和蛋白质的序列长度计算得出。

此外，还可以通过质谱等技术进行直接测定。

3.氨基酸组成蛋白质是由二十种不同的氨基酸组成的。

不同氨基酸的组成比例和顺序也会影响蛋白质的分子量和性质。

例如，酸性或碱性氨基酸通常会降低蛋白质的分子量，而疏水性氨基酸则会增加蛋白质的分子量。

4.二维结构二维结构是指蛋白质在折叠后的平面结构。

二维结构通常会影响蛋白质的三维结构和功能。

通过X射线晶体衍射等技术，可以测定蛋白质的二维结构，进而推断其三维结构。

5.三维结构三维结构是指蛋白质在折叠后的立体结构。

三维结构是决定蛋白质功能的关键因素之一。

通过核磁共振、冷冻电镜等技术，可以测定蛋白质的三维结构。

6.动力学性质动力学性质是指蛋白质折叠和去折叠的速度和过程。

这些性质会影响蛋白质的稳定性和反应速度。

通过荧光猝灭、快速混合等手段，可以研究蛋白质的动力学性质。

7.生物学功能生物学功能是指蛋白质在生物体内的作用和功能。

不同蛋白质具有不同的生物学功能，如催化反应、识别信号、运输物质等。

了解蛋白质的生物学功能有助于理解其在生命过程中的作用和调控机制。

总之，蛋白质的分子量标准是描述其特性的一种重要指标，对于理解蛋白质的结构和功能具有重要意义。

同时，还需要考虑其他因素如序列长度、氨基酸组成、二维结构、三维结构、动力学性质以及生物学功能等来全面了解蛋白质的性质和功能。

蛋白质大小范围

蛋白质大小范围蛋白质是由氨基酸链组成的生物大分子，是构成生命体的重要组成部分，具有多种功能，包括结构支撑、催化反应、信号传递等。

蛋白质具有非常广泛的大小范围，从几千达尔顿（Da）到数百万达尔顿不等。

下面将详细介绍蛋白质的大小范围。

1. 低分子量蛋白质低分子量蛋白质是指分子量小于10000 Da的蛋白质。

低分子量蛋白质通常具有短氨基酸序列和紧密折叠结构，这使得它们适合在环境中进行快速的反应。

例如，一些小型酶类就属于低分子量蛋白质，如萘乙酰胆碱酯酶（Molecular weight 67200 Da）。

中等分子量蛋白质一般指5000 Da到50000 Da间的蛋白质。

这种蛋白质通常有长氨基酸序列，它们形成的复杂结构可以传递更多的信号和信息。

例如，肌球蛋白的分子量为42000 Da左右。

高分子量蛋白质是指分子量大于50000 Da的蛋白质，通常由数百或数千个氨基酸组成。

这种大型蛋白质的折叠结构非常复杂，具有多种功能。

一些著名的高分子量蛋白质包括细胞骨架蛋白质（Molecular weight >1 million Da）、胶原蛋白（Molecular weight 300,000-400,000 Da）和人血清白蛋白（Molecular weight 66,000 Da）。

超大分子量蛋白质一般指分子量超过数百万Da以上的大分子。

这些蛋白质通常是在细胞膜上定位，可以通过跨越膜通道来形成复杂的跨膜结构。

例如，巨大的病毒鞭毛蛋白（Molecular weight > 20 million Da）就属于超大分子量蛋白质范畴。

总之，蛋白质具有非常广泛的分子量范围，从几千到数百万达尔顿的不等。

不同分子量的蛋白质具有不同的生物学功能，构建了整个生物的复杂结构。

因此，对于生物学研究来说，掌握蛋白质不同分子量范围的特点和生物学功能是非常重要的。

生化第3章_蛋白质_2

3000 ~ 80000D), G-100 (分级范围 4000 ~ 150000D)。
• 测得几种标准蛋白质的洗脱体积〔Ve〕 • 以相对分子质量对数（logM）对Ve作图，得标准曲线 • 再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕 • 从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量
4. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE)
1. 球状蛋白质（globular protein): 外形接近球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，多数蛋白质属于这一类。 2. 纤维状蛋白质 (fibrous protein): 分子类似纤维或细棒, 又可分为可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。
二. 依据蛋白质的组成分类按照蛋白质的组成，可以分为简单蛋白和结合蛋白。
×100% = 55.8/0.335 ×100 = 16700
2. 蛋白质的沉降分析：利用超离心法（ultracentrifuge）测定蛋白质及其它生物大分子的分子量，有两种方法：沉降速度法和沉
降平衡法。
1）沉降速度法 (sedimentation velocity):
•
在 60 000～80 000 rpm 的高速离心力作用下，蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动，形成沉降界面，界面的移动速度代表蛋白质分子的沉降速度。
★ 蛋白质沉淀的几种方法：
1.可逆沉淀: 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，称为可逆沉淀或非变性沉淀。可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法。 1）pI 沉淀法：在温和条件下，通过改变溶液的 pH 或电荷状况，使 pr 从胶体溶液中沉淀分离。
2）盐析法：加入大量中性盐（NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4）使 pr

蛋白质分子量标准(高)使用说明书

蛋白质分子量标准（高）Protein Molecular Weight Marker (High)使用说明书Takara Code : D531A浓度: 10 μg/μl制品内容（约200次量）Protein MW Marker（high）50 μl5×Loading Buffer 1000 μl1 M DTT（Dithiothreitol）100 μl制品说明Protein Molecular Weight Marker（High）是由五种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的，它的分子量范围为：44.3 KDa～200KDa。

进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，经考马斯亮蓝R－250染色后的各种蛋白质的条带强度均一。

每微升本制品的蛋白量为10 μg，稀释20倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每次取5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。

以每次使用5 μl（20倍稀释液）计算时本制品约可使用200次。

保存条件制品原液可在-20℃下长期保存，制品的20倍稀释液可在-20℃下保存2～3个月，制品的原液和制品的20倍稀释液都应避免多次反复冻融。

制品中的各种蛋白质种类使用注意推荐使用7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶。

浓度太高，高分子量的蛋白分离效果不好，有可能聚集于分离胶的上部。

使用方法1. 首先按以下方法配制“稀释液”。

1 M DTT2 μl 5×Loading Buffer 20 μl* 稀释液可于室温下放置一个月左右。

2.按以下方法稀释本制品。

稀释液22 μl灭菌蒸馏水73 μl* 20倍的制品稀释液可在-20℃下保存2～3个月，但应避免多次反复冻融。

如果一次稀释量较多时，可以小量分装后在-20℃下保存，以避免反复冻融。

3. 均匀混合后，100℃加热处理5分钟，然后取5 μl进行7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for SDS-PAGE mini gel）。

4. 7.5%、10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝R-250染色后的结果如下。

Western-blotting

Western blotting
定义：
印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。
1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。
电泳要点
上样电泳：
贪多嚼不烂不要过多重复使用电泳Buffer 最佳分辨区——分离胶的2/3
电泳结果检查：
同样的样品跑2块胶丽春红S SYPRO Tangerine
转膜
膜的选择转膜方法转膜后确认特殊处理
2021/6/7
15
膜的选择
硝酸纤维素膜
价格便宜
简单快速封闭非特异性抗体结合
预染分子量标准
单色预染多色预染
修饰分子量标准
预混分子量标准
高分子量标准低分子量标准宽分子量标准
预染分子量标准
单色预染多色预染
修饰分子量标准
糖基化磷酸化荧光标记
不可不加--内参的选择
原因：校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差
种类：GAPDH、beta-actin、 beta-tubulin
位点） 3. 多种标记的二抗可供选择
缺点：
1. 交叉反应引起的非特异性条带 2. 额外的二抗孵育以及条件优化
间接Western Blotting操作流程:
Western Blot一般流程
蛋白样品的制备 SDS聚丙烯酰胺
凝胶电泳
转膜封闭一抗杂交二抗杂交底物显色
电泳
蛋白样品的制备上样样品的定量电泳凝胶成分注意事项
而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为 Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法

常用蛋白质分子量标准参照物(精)

十、常用蛋白质分子量标准参照物十一、层析法常用数据表及性质（一）离子交换纤维素*：英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。

还有DE-11，纤维性，50～250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。

注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.（三）琼脂糖凝胶的技术数据十二、常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。

2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。

Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。

C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。

柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。

Na2Ac·3H2O分子量 = 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。

7．磷酸盐缓冲液Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。

Na2HPO4·2H2O分子量 = 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。

血清蛋白的分类与特征

血清蛋白的分类与特征（以区带电泳为主要技术分类）一、白蛋白（albumin,Alb）由肝实质细胞合成，分子量6.64万，等电4～5.8，半寿期（15～19天，占血浆总蛋白的40%～60。

血浆白蛋白浓度可以受饮食中蛋白质摄入的影响，在一定程度上可以作为个体营养状态的评价指标，有较广泛的载体功能。

正常参考值：35～50g/L。

血浆白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义。

低白蛋白血症，可见于以下几种原因：（1）白蛋白合成减低：常见于急性或慢性肝病。

（2）由于营养不良或吸收不良。

（3）遗传性缺陷：无白蛋白血症。

（4）组织损伤（外科手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。

（5）白蛋白异常丢失：如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。

（6）白蛋白分布异常：如门脉高压时，大量蛋白质从血管内渗入腹腔。

目前已发现20种以上白蛋白的遗传性变异，这些个体可以不表现病症，在电泳分析时其白蛋白区带可以出现1条或2条宽带，有人称之为双白蛋白血症。

当某些药物大量应用（如青霉素大量注射使血浓度增高时）而与白蛋白结合时，也可使白蛋白出现异常区带。

二、α1区带球蛋白1、α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin,α1AT或AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为5.5万，等电点4.8，半寿期4天，电泳中位与α1区带，是这一区带的主要组分。

正常参考值：成人780～2000mg/L、新生儿1450～2700mg/L。

低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。

2、α1-酸性糖蛋白（α1-acid glycoprotein,AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等电点2.7～3.5，半寿期5天，电泳位于α1区带，成人正常参考值：500～1500mg/L。

AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。

蛋白质电泳分子量标准(蛋白marker 14.4-97.4 kd)

蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker 14.4-97.4 kd）【篇名】：探究蛋白质电泳分子量标准1. 引言在生物学研究中，蛋白质电泳是一种重要的实验方法，用于分离和分析蛋白质。

而蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker）则是在蛋白质电泳实验中用来确定待测蛋白分子量的重要工具。

本文将探讨蛋白质电泳分子量标准的概念、应用以及其在生物学研究中的重要性。

2. 蛋白质电泳分子量标准的概念蛋白质电泳分子量标准是一系列已知分子量的蛋白质，它们被用作电泳实验中的参照物。

常见的蛋白marker包括14.4-97.4 kd等不同分子量的标准物质，通过蛋白电泳实验，可以通过蛋白marker的分离情况来确定待测蛋白的分子量。

3. 蛋白质电泳分子量标准的应用蛋白质电泳分子量标准可用于验证电泳实验的准确性，评估蛋白质分子的大小和形状，以及在分析未知蛋白质时提供参照标准。

通过与已知分子量的蛋白marker进行对比，未知蛋白的分子量可以被确定，从而为后续的生物学研究提供重要参考。

4. 蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中的重要性在生物学研究中，蛋白质电泳分子量标准的应用极其重要。

它不仅可以帮助科研人员确定蛋白质标准品的分子量，还可以作为蛋白质分析实验的质量控制工具，确保实验结果的准确性和可靠性。

蛋白marker在蛋白质电泳实验中的使用，也有助于扩大科学家对蛋白质研究的视野，从而推动生物学领域的进步。

5. 个人观点作为生物学研究领域的从业人员，我深刻理解蛋白质电泳分子量标准的重要性。

对于生物学实验来讲，实验结果的准确性是至关重要的，而蛋白marker作为质量控制的一个重要环节，能够有效提高实验数据的可信度，也为科研人员提供更可靠的实验结果。

6. 总结蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中具有重要作用。

通过对蛋白marker的使用，科研人员可以准确地确定蛋白质的分子量，从而为生物学研究提供可靠的数据和结果。

深入了解和掌握蛋白质电泳分子量标准的实验原理和应用方法，对于开展生物学研究具有重要的意义。

即用型蛋白质分子量标准(高)使用说明书

即用型蛋白质分子量标准（高）Premixed Protein Marker (High)
使用说明书
Takara Code : DPP531A
浓度: 0.5 μg/μl
制品内容（约100次量）
Premixed Protein Marker (High) 500 μl
制品说明
Premixed Protein Marker (High) 是由加热变性好的五种不同分子量的蛋白质组成，它的分子量范围为：44.3 KDa～200 KDa。

本制品使用时无需任何处理，可以直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，经考马斯亮蓝R－250染色后的各种蛋白质的条带强度均一。

每微升本制品的蛋白量为0.5 μg，每次电泳取5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。

以每次使用5 μl计算时本制品约可使用100次。

保存条件: -20℃
使用注意
推荐使用7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶。

浓度太高，高分子量的蛋白分离效果不好，有可能聚集于分离胶的上部。

使用方法
1. 直接取5 μl本制品进行7.5％～10％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for
SDS-PAGE mini gel）。

2.7.5%、10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝R-250染
色后的结果如下。

V2012.01 KDa
200.0
116.0
97.2
66.4
44.3
200.0
116.0
97.2
66.4
44.3
KDa
7.5% 10%。

100kd蛋白质的直径

100kd蛋白质的直径摘要：1.蛋白质的基本概念2.100kD蛋白质的直径含义3.蛋白质直径的测量方法4.100kD蛋白质在生物体内的作用5.直径与蛋白质功能的关系6.总结正文：在我们生活的世界中，蛋白质是无处不在的，它们是构成生物体的重要组成部分。

在这篇文章中，我们将重点关注一种特定类型的蛋白质——100kD蛋白质，探讨其直径、功能及在生物体内的作用。

首先，让我们了解一下蛋白质的基本概念。

蛋白质是由氨基酸组成的大分子，它们在生物体内具有多样化的功能。

蛋白质的直径因种类不同而有所差异，100kD蛋白质就是其中一种。

那么，100kD蛋白质的直径到底是什么呢？一般来说，100kD蛋白质的直径指的是其分子量（以kD为单位）所对应的直径。

在一个典型的蛋白质分子中，直径通常在纳米级别。

值得注意的是，100kD蛋白质并非一个固定的概念，它可能包括多种不同类型的蛋白质。

接下来，我们来看看蛋白质直径的测量方法。

目前，测量蛋白质直径的主要方法有动态光散射、纳米颗粒跟踪分析等。

这些方法通过对蛋白质溶液进行测量，可以较为准确地得到蛋白质分子的直径。

在生物体内，100kD蛋白质发挥着重要的作用。

它们作为生物催化剂、结构蛋白、信号分子等，参与细胞的生长、分裂、代谢等过程。

此外，100kD蛋白质还与其他生物大分子如核酸、多糖等共同构建细胞内的复杂生物体系。

那么，100kD蛋白质的直径与其功能有何关系呢？一般来说，蛋白质的直径与其功能密切相关。

不同的直径可能导致蛋白质在生物体内的作用机制、活性、稳定性等方面产生差异。

例如，某些100kD蛋白质的直径变化可能导致其催化活性增强或减弱，进而影响生物体内的代谢过程。

总之，100kD蛋白质作为一种重要的生物大分子，其直径、功能及在生物体内的作用值得我们深入研究。

了解这些知识有助于我们更好地认识生命现象，为疾病的诊断、治疗和预防提供新的思路。

实验一蛋白质的定量测定

实验一蛋白质的定量测定——Folin-酚法一、目的要求（1）学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法；（2）制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。

二、实验原理（一）蛋白质定量测定的方法目前蛋白质含量测定有两类方法，一类是利用蛋白质的物理化学性质，如折射率，比重，紫外吸收等测定得知；另一类是利用化学方法测定蛋白质含量，如微量克氏定氮，双缩脲反应，Folin—酚试剂法（Lowry法）。

这两类方法各有优缺点，选用何种方法测定蛋白质含量，可根据实验要求和实验条件进行选择。

（二）Folin—酚法原理1.原理Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。

蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。

乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸，硫酸，溴等组成。

此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。

此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。

本法可测定范围是25—250ug蛋白质2.优缺点目前实验室多用Folin—酚法测定蛋白质含量。

此法的优点是：操作简单，迅速，不需特殊仪器设备，灵敏度高，较紫外吸收法灵敏10—20倍，较双缩脲法灵敏100倍，反应约在15min内有最大显色，并至少可以稳定几个小时。

缺点是此反应受多种因素干扰。

在测定时应排除干扰因素或做空白试验消除。

此法是在Folin—酚法的基础上引入双缩脲试剂，因此凡干扰双缩脲反应的基团，如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2以及在性质上是氨基酸或肽的缓冲剂，如Tris缓冲剂以及蔗糖，硫酸铵，巯基化合物均可干扰Folin—酚反应。

此外，所测的蛋白质样品中，若含有酚类及柠檬酸，均对此反应有干扰作用。

而浓度较低的尿素（约0.5%左右），胍（0.5%左右），硫酸钠（1%），硝酸钠（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）对显色无影响，这些物质在所测样品中含量较高时，则需做校正曲线。

蛋白质分子量标准(14.4-116kd, 非预染)

蛋白质分子量标准(14.4-116kd, 非预染)
蛋白质分子量标准（14.4-116 kd，非预染）指的是一组用于电泳分析的标准蛋白质混合物，其分子量范围在14.4千道尔顿（kd）到116千道尔顿（kd）之间。

这些标准蛋白质通常用于凝胶电泳（如SDS-PAGE）中，以评估未知蛋白质的分子量大小。

这些标准蛋白质的分子量是已知的，因此可以通过与未知蛋白质在电泳凝胶上的迁移速度进行比较，来估算未知蛋白质的分子量。

这对于蛋白质研究和分析非常重要，因为分子量是蛋白质的一个重要属性，与其功能、结构和相互作用密切相关。

“非预染”指的是这些标准蛋白质没有预先用染料染色，因此在使用时需要与染料一起孵育，以便在凝胶上可视化。

常见的用于蛋白质染色的染料包括考马斯亮蓝和银染剂等。

请注意，具体的蛋白质分子量标准可能会因供应商和批次而异，因此在使用时应参考相关说明书和建议。

此外，对于某些特定的电泳条件和应用，可能需要使用不同分子量范围或类型的标准蛋白质。

蛋白质印迹方法

蛋白质印迹方法——原理和优化抽滤抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法。

利用真空使溶解的样品滤过膜，蛋白质吸附到膜上，同时样品中其它成分被真空抽走。

另外，也可直接将样品点在膜表面使之干燥。

随后可对固定在膜上的蛋白质进行分析。

点印记和狭缝印记是抽滤方法的两种变型，用多支管装置将样品加到膜上成点状或狭缝图样。

这些方法可用于快速定性筛选大量样品或定量分析类似样品，尤其是测试复杂分析中实验参数的适用性。

另一种抽滤方法的变型是格栅免疫印迹，这种方法适用于高度平行的样品分析，当样品量及其优先并且不能用常规方法如ELISA进行分析时使用。

格栅免疫印迹可用于表征变态反应原-特异性抗体应答，只需最小量的病人血清。

当准备抽滤印迹膜时，要考虑以下方面：去污剂可以抑制蛋白吸附到膜上。

用于样品溶解和漂洗的缓冲液所含去污剂不应超过0.05%，并且仅当必要时才能加入。

样品体积应足以覆盖每个孔中的膜面积，但所含蛋白量不应超过膜的结合能力。

含较多颗粒的样品可能堵塞膜孔，而高黏度样品将降低流速。

所以在结合前先通过预过滤或离心除去颗粒，只将上清加到膜上。

而粘性样品要用缓冲液稀释。

Western印迹Western印迹含一系列步骤，包括：用聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白样品。

将胶上的蛋白转移到膜上。

鉴定膜上特定蛋白。

下面将从理论和实践方面讨论Western印迹方法。

用1-D或2-D凝胶分离复杂蛋白质混合物印迹前分离复杂蛋白质混合物的最常见方法是一维（1-D）SDS-PAGE电泳，它根据蛋白质的分子量进行分离。

有时用非变性电泳分离天然蛋白质。

尽管这种方法通常缺乏变性电泳的分辨率，但当蛋白须保留生物活性时非常有用。

二维（2-D）凝胶电泳用于分析细胞、组织、和体液蛋白质的组成，是现代蛋白质组学的关键技术。

2-D免疫印迹可提供分子量和等电点信息，并可用于区分翻译后修饰产生的不同蛋白质形式。

有些情况下只进行1-D电泳分离也可用免疫印迹对蛋白分型。

分子量标准在凝胶中加入分子量标准或标记物可以在电泳分离后估计感兴趣蛋白质的大小。

常用蛋白质分子量标准参照物[参照材料]

7×105
2×106
15×106
150×106
1×104~2.5×105
2.5×104~7×105
5×104~2×106
2×105~15×106
5×105~15×107
Seravac Laboratories,
Maidenhead, England
Bio-GelA-0.5M
Bio-GelA-1.5M
Bio-GelA-5M
Bio-GelA-15M
Bio-GelA-50M
Bio-GelA-150M
10
8
6
4
2
1
0.5×105
1.5×106
5×106
15×105
50×106
150×106
<1×104~2.5×106
<1×104~1.5×106
1×104~5×106
4×104~15×106
1×105~50×106
60000~20×106
70000~40×106
60000~20×106
10000~4×106
70000~40×106
60000~20×105
10000~4×106
24~44
24~44
24~44
20~40
20~40
25~75
25~75
25~75
25~75
平均90
平均90
60~200
45~165
45~165
（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
型号
排阻的下限
（Mr）
分级分离的范围
（Mr）
膨胀后的床体积
（mL/g干凝胶）
膨胀所需最少时间
（室温，小时）