DNA疫苗
基因疫苗分类
基因疫苗分类
基因疫苗可分为以下三种类型：
1. DNA疫苗：将编码目标抗原的DNA序列注射到患者体内，利用宿主细胞自身机制表达目标抗原，从而刺激免疫应答。
2. RNA疫苗：类似DNA疫苗的原理，但使用的是RNA序列。
RNA疫苗可以被更快地转录和翻译，从而快速刺激免疫反应。
3. 病毒载体疫苗：将目标抗原的DNA或RNA序列植入到病毒载体中，利用病毒本身的复制和传递机制，引导宿主免疫系统对目标抗原产生免疫反应。
例如，新冠病毒疫苗就是一种使用腺病毒载体的基因疫苗。
浅谈DNA疫苗的原理
浅谈DNA疫苗的原理作者：张涛来源：《健康科学》2018年第10期摘要：DNA疫苗是上世纪末出现的一种新型疫苗，其自身对于治疗与预防病毒性疾病与肿瘤疾病具有显著的效果。
与传统的疫苗相比较，DNA疫苗自身具有较高的免疫效果，临床应用较为方便，并且生产成本较低，但存在一定的安全性。
基于此，本文从DNA疫苗的优点与缺点入手，详细分析其安全性，并对其疫苗原理进行深入研究，以供参考。
关键词：DNA疫苗；免疫机制；原理；安全性引言：随着我国DNA重组技术的突破与应用，DNA疫苗逐渐诞生，并以当前的分子生物学技术为基础，不断进行完善，逐渐形成当前一种全新的免疫防治剂。
近年来，DNA疫苗研究逐渐在世界范围内开展，并且其研究的范围与内容逐渐扩宽，例如，对于当前人与动物的病毒性、细菌性以及寄生性疾病研究，并进入到临床试验阶段。
一、DNA疫苗的优点与缺点（一）优点对于当前的DNA疫苗来说，与传统的普通疫苗相比较，其自身具有良好的优点，主要表现在以下几方面：第一，DNA疫苗可以有效避免免疫出现逃逸情况，充分发挥处自身的作用，同时，还可以制备多价核酸疫苗，满足当前的需求。
第二，DNA疫苗与传统的疫苗存在明显的差别，例如，传统疫苗可能存在因毒力残留或者毒力回复而引起致病的危险，但DNA疫苗不会出现上述情况。
同时，DNA疫苗可以持续在靶器官进行抗原表达，引導人体的体液免疫与细胞免疫发挥出作用。
第三，可以灵活利用DNA疫苗自身的性能将其制定为标记性疫苗，灵活应用在当前的临床监测中。
第四，DNA疫苗自身具有良好的安全性与稳定性，便于进行存储，同时制造成本较低，使用较为方便，可以通过不同的途径进行接种。
（二）缺点虽然DNA疫苗自身具有较多的优点，但其自身还存在一些不足之处，随着研究的不断深入，其问题也逐渐呈现，例如，当前DNA疫苗的法律规定还不够完善，甚至部分方面规定尚处于探索阶段；质粒导入宿主细胞的效率不高，直接导致当前的疫苗免疫效率受到影响。
DNA疫苗的免疫途径及优缺点概述
DNA疫苗的免疫途径及优缺点概述作者：杜海燕韩俊伟李磊常卫波来源：《农家致富顾问·下半月》2016年第06期摘要：核酸疫苗是继灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程重组蛋白疫苗之后的第三代疫苗，分为DNA疫苗和RNA疫苗两种。
但目前对核酸苗的研究以DNA疫苗为主。
DNA 疫苗导入宿主体内后，被细胞（组织细胞、抗原递呈细胞或其它炎性细胞）摄取，并在细胞内表达病原体的蛋白质抗原，通过一系列的反应刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。
它在感染性疾病、变态反应和癌症等疾病的预防和治疗上有着广泛的应用前景。
关键词：DNA；疫苗；免疫途径一、DNA疫苗的免疫途径核酸疫苗导入动物体的方法和途径各异，注射是导入DNA疫苗的一种简便而有效的方法。
目前常用的为肌肉直接注射和金颗粒包被裸露质粒基因枪轰击两种方法。
注射法可将质粒直接注入肌肉、皮内、皮下、免疫器官以及血液。
骨骼肌细胞吸收和表达外源DNA 的能力较强，其结构特点是有丰富的T小管系统和肌浆网结构，T小管中有较多的细胞外液，这些结构上的特殊性有可能使骨骼肌纤维直接摄取外源DNA。
有人认为注射过程中针头直接损伤肌纤维膜，使外源DNA 沿破口进入肌浆中，也有人认为DNA通过肌浆网进入肌浆中，在肌细胞膜中可能存在特异性DNA 结合蛋白，用编码荧光素酶的质粒DNA免疫小鼠后发现，表达的酶活性呈DNA剂量依赖关系，而且报告基因可持续表达19个月。
皮肤组织的多种细胞如郎罕氏细胞、树突状细胞、巨噬细胞等都具有抗原递呈细胞（APC）的特性，皮肤角质细胞可分泌IL-1及TNF-α此外皮肤的表皮附近富含淋巴组织，这些都有利于抗原的递呈、诱导免疫反应的发生。
有学者皮内一次性注射13～15μg裸DNA，可见质粒DNA及其表达产物分布于各种表皮和真皮细胞，并诱发较强的细胞免疫反应和体液免疫应答，特异性抗体可持续70周，特异性CTL持续17个月。
粘膜组织是机体的第一道防御屏障，其中也含有许多可促进和调节免疫应答的细胞成分，粘膜免疫对防御粘膜局部感染或起源于粘膜的全身感染尤为重要。
DNA疫苗
DNA疫苗：不同于传统的疫苗，DNA疫苗旨在将病原微生物的某种专门组分的裸露DNA编码直接注入机体内。
尽管此类疫苗尚未面世，但其在技术上的飞速发展有可能开创免疫学的新纪元。
DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA(有时也可是RNA)，它可经一定途径进入动物体内，被宿主细胞摄取后转录和翻译表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能刺激机体产生非特异性和特异性2种免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。
DNA疫苗能诱导细胞免疫和体液免疫。
消除导入可能与"减毒"疫苗相关的强毒力病毒的危险性。
使用一次，即能产生长期免疫力，无须增加剂量，并可提高依从性。
多个病原体的基因可装在同一个质粒上，减少了疫时多次注射的不适。
DNA可以干粉形式保存数年，且仍保持起活性。
①DNA接种载体(如质粒)的结构简单，提纯质粒DNA的工艺简便，因而生产成本较低，且适于大批量生产；②DNA分子克隆比较容易，使得DNA疫苗能根据需要随时进行更新；③DNA 分子很稳定，可制成DNA疫苗冻干苗，使用时在盐溶液中可恢复原有活性，因而便于运输和保存；④比传统疫苗安全，虽然DNA疫苗具有与弱毒疫苗相当的免疫原性，能激活细胞毒性T淋巴细胞而诱导细胞免疫，但由于DNA序列编码的仅是单一的一段病毒基因，基本没有毒性逆转的可能，因此不存在减毒疫苗毒力回升的危险(Davis等，1999)，而且由于机体免疫系统中DNA疫苗的抗原相关表位比较稳定，因此DNA疫苗也不象弱毒疫苗或亚单位疫苗那样，会出现表位丢失(Donnelly等，1999)；⑤质粒本身可作为佐剂，因此使用DNA疫苗不用加佐剂，既降低成本又方便使用(Babiuk等，1999)；⑥将多种质粒DNA简单混合，就可将生化特性类似的抗原(如来源于相同病原菌的不同菌株)或1种病原体的多种不同抗原结合在一起，组成多价疫苗，从而使1种DNA疫苗能够诱导产生针对多个抗原表位的免疫保护作用，使DNA疫苗生产的灵活性大大增加直接肌肉注射注射的DNA在肌肉细胞中以环型分子存在，不能复制，并不能整合到宿主细胞染色体中。
基因工程疫苗
基因工程疫苗概述1 绪论现代意义的疫苗，就是一种使用抗原、通过诱发机体产生特异免疫反应、预防和治疗疾病或达到特定医学目的的生物制剂。
目前用于人类疾病防治的疫苗有20多种，根据预防对象可分为病毒疫苗和细菌疫苗，根据技术特点则分为传统疫苗和新型疫苗。
传统疫苗主要包括减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗；新型疫苗以基因工程疫苗为主，主要包括：基因工程疫苗（基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗及蛋白工程疫苗）、遗传重组疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗以及微胶囊可控缓释疫苗等。
人类自1796年第一次成功使用疫苗到现在已经制备了近60余种不同的疫苗(表1),这些疫苗使人类最终免除了天花的灾难,同时每年还使数以百万的人免遭多种疫病的侵害。
表1 主要人用疫苗的发明时间及成份时间疫苗成份1796 年天花疫苗异源病毒1885 年狂犬病疫苗灭活病毒1897 年鼠疫疫苗弱毒/灭活细菌1920 年伤寒疫苗灭活细菌或多糖1923 年白喉疫苗灭活毒素1926 年百日咳疫苗灭活毒素1927 年卡介苗弱毒菌1927 年破伤风疫苗灭活毒素1935 年黄热病疫苗弱毒病毒1936 年流感疫苗灭活病毒1955 年脊髓灰质炎注射疫苗灭活病毒1962 年脊髓灰质炎口服疫苗弱毒病毒1964 年麻疹疫苗弱毒病毒1967 年腮腺炎疫苗弱毒病毒1970 年风疹疫苗弱毒病毒1981 年乙肝疫苗蛋白质1985 年流感嗜血菌疫苗多糖1990 年甲肝疫苗灭活/弱毒病毒2基因工程疫苗即DNA 疫苗（遗传工程疫苗），是用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物或重组体本身（多数无毒性、无感染能力、有较强免疫原性）制成的疫苗。
基因工程疫苗就是用基因工程方法或分子克隆技术分离出病原的保护性抗原基因, 将其转人原核或真核系统使其表达出该病原的保护性抗原, 制成疫苗或者将病原的毒力相关基因删除掉或进行突变,使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗或突变苗,基因工程疫苗只含有病原的部分组成,而常规疫苗往往是一个完整的病原体,因此基因工程疫苗的最大优点是安全性好, 对致病力强的病原更是如此。
DNA疫苗
➢DNA疫苗诱导的CTL反应是否会对 其他细胞产生杀伤作用。
DNA疫苗的发展前景
近年来，许多畜禽病毒性传染 病，已不能依靠传统疫苗如灭 活疫苗、弱毒疫苗等对其进行 防治，DNA疫苗的出现使得 这一状况得到改善。编码病毒、 细菌和寄生虫等不同种类抗原 基因的质粒DNA，能够引起 脊椎动物如哺乳类、鸟类和鱼 类等多个物种产生强烈而持久 的免疫反应。 DNA疫苗被称 为继灭活疫苗和弱毒疫苗、亚 单位疫苗之后的“第三代疫 苗”，具有广阔的发展前景。
Genic Guard
——基因疫苗
疫苗的发展
第一代疫苗
减毒和灭活疫苗
第二代疫苗
基因工程蛋白质或多肽疫苗
第三代疫苗
基因疫苗
”基因疫苗的发展
Wolff等：小鼠基因治疗试验(1990) • 对照动物
– 将带有报告基因的质粒DNA直接肌肉注射入 • 意外发现：
– 肌细胞内：检测到该外源基因的表达产物
• 1992年， Tang等 – 将表达人生长激素的基因质粒DNA，导入小鼠的 表皮细胞 – 小鼠血中：检测到特异性抗生长激素抗体 – 再次注入加强剂量质粒： • 免疫反应增强。
（3）价格低廉 • 质粒经转化细菌扩增后，
其提取、纯化等制备过 程远比蛋白质纯化技术 简单得多，省钱、省时 和省力，适宜于规模性 生产；
• DNA疫苗在常温下性能 稳定，可以室温保存， 不需要冷链运输，容易 保证高效接种率。
（4）多途径免疫接种， 易为免疫对象所接受，也有利 于模拟自然感染途径。 – 注射方式（皮内、皮下、肌 内等），也可以用基因枪注 射接种 – 非注射方式：口服、鼻内滴 注、鼻腔喷雾接种等
重组DNA技术在疫苗制备中的应用
重组DNA技术在疫苗制备中的应用随着科技的不断发展，重组DNA技术在医学领域的应用越来越多。
其中，利用重组DNA技术制备疫苗已成为目前疫苗制备的主流方法之一。
本文将详细介绍重组DNA技术在疫苗制备中的应用。
一、重组DNA技术概述重组DNA技术，即基因重组技术，是人类通过改变生物体基因序列的技术手段。
它能够从不同生物中挑选出需要的基因并进行组合，使得生成的新基因拥有更优良的特性。
利用重组DNA技术可以生产出许多对人类生命有重要意义的分子，如生长激素、胰岛素、白细胞介素-2等。
这些分子疗法不仅在治疗某些疾病方面具有显著的疗效，而且也开辟了新型的疫苗制备技术。
二、疫苗制备简介疫苗是一种用于预防传染病的生物制品。
制备疫苗的过程就是将病原体的毒素或者抗原蛋白质通过某种技术手段克隆、生产出来，制成疫苗，让人体误认为是真正的病原体，并产生免疫应答。
疫苗使得人体内产生的抗体和细胞免疫能够客观地识别并击败入侵的病原体，从而有效预防人们感染这种病原体。
传统的疫苗制备方法主要是通过培养和提取病原体或者使用已经灭活的病原体，缺点是操作繁琐，时间长，制备成本高。
而基因重组技术的发展使我们可以在短时间内制备出大量的可重复、强效和安全的疫苗，这被认为是一种划时代的发展。
三、重组DNA技术在疫苗制备中的应用1. HPV疫苗人乳头瘤病毒（HPV）是导致宫颈癌、阴道癌、肛门癌和口咽癌等处恶性肿瘤的原因之一。
对HPV感染的疫苗主要是通过重组DNA技术制备的。
主要制备过程就是将HPV的Gardasil和Cervarix等两个主要表位型疫苗中的HPV L1衣壳蛋白基因，克隆到大肠杆菌表达系统中，通过大量表达，提取纯化其衣壳蛋白，冷冻干燥后，就得到了一种基于重组DNA技术的HPV疫苗。
2. 乙型肝炎疫苗乙型肝炎病毒（HBV）是导致乙型肝炎的主要病原体。
针对乙型肝炎的首批重组DNA疫苗制备，就是通过从乙型肝炎病毒中克隆HBV表位型抗原阳性菌株，将其G（表位型）基因带到酵母表达系统中进行表达，得到纯化的HBV表位型抗原蛋白，制成冻干粉，加入适宜量的辅料，就成为质量稳定的重组DNA疫苗。
DNA疫苗的作用机制
DNA疫苗的作用机制高晓佩;管晓燕;白国辉;刘建国【摘要】BACKGROUND: In 1990, Wolff et al. reported that DNA was examined as a gene therapy tool, and emerged as a promising therapy after observations that simple injection of naked plasmid DNA and RNA led to profound transgene expression in vivo.DNA vaccines are recognized for harboring several distinguishing characteristics and advantages (including low cost, ease and rapidity of manufacturing, and stability) making them a method for addressing global health threats in the future. OBJECTIVE: To review the status and research progress of DNA vaccines in the view of mechanism of action: innate immune signaling from bacterial DNA, transfecting somatic cell by DNA vaccines, cross-presentation and cross-activation, transfecting antigen presenting cells by DNA vaccines, and apoptosis. METHODS: The first author retrieved the databases of PubMed and CNKI for the articles concerning DNA vaccines published between January 2000 and June 2017 using the keywords of "DNA vaccine, gene vaccine, plasmid DNA, cross-presentation, transfection, apoptosis"in English and Chinese, respectively. A total of 105 literatures were searched, and 47 eligible articles were included in accordance with the inclusion criteria. RESULTS AND CONCLUSION: The immunogenicity of DNA vaccines in humans has been limited by low expression levels of antigen, in comparison with the conventional protein vaccines in the past two decades. Studies on the mechanism of action of DNA vaccines in terms ofantigen-presenting cell types able to cross-present DNA-encoded antigens, the activation of innate immune responses due to DNA itself and induction of cell apoptosis have suggested the opportunities to increase the immunogenicity of these vaccines.%背景:1990年Wolff 等发现将RNA和DNA表达载体直接注射小鼠骨骼肌,可以检测到相应的蛋白表达,这揭示DNA可以直接用于疾病的治疗和免疫,基因疗法和DNA疫苗应运而生.随着近年来的研究发展, DNA 疫苗迅速显示出了几个显著特点(包括低成本、生产制造的简单便捷、及稳定性),使其成为未来解决全球卫生问题的最有前景的方法之一.目的:从来自细菌DNA 的先天免疫信号、DNA 疫苗直接转染组织细胞、交叉激活和交叉呈递机制、DNA疫苗直接转染APCs及细胞凋亡机制5个方面综述DNA疫苗的作用机制.方法:第一作者通过电子计算机检索2000年1月至2017年6月为止PubMed数据库及CNKI中国期刊全文数据库收录的与 DNA 疫苗有关的文献.英文检索词"DNA vaccine、gene vaccine、DNA plasmid、cross-presentation、transfection、apoptosis",中文检索词"基因疫苗、DNA疫苗、DNA质粒、交叉呈递、细胞凋亡、细胞转染",总计得到中英文文献105篇,47篇文献符合标准.结果与结论:在DNA疫苗发展的20多年里,研究人员发现人类DNA疫苗与传统蛋白疫苗相比,只能获得有限的抗体表达水平.在DNA疫苗作用机制中DNA转染组织细胞或者专职抗原呈递细胞、专职抗原呈递细胞交叉激活及交叉呈递DNA编码的抗原,同时DNA激活先天的免疫应答、诱导细胞凋亡,基于这些理论的研究为将来改善DNA疫苗的免疫效果提供理论支持.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)008【总页数】6页(P1281-1286)【关键词】DNA疫苗;基因疫苗;DNA质粒;作用机制;交叉激活;组织构建;细胞凋亡【作者】高晓佩;管晓燕;白国辉;刘建国【作者单位】遵义医学院口腔医学院,贵州省遵义市 563099;遵义医学院口腔医学院,贵州省遵义市 563099;贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室,贵州省遵义市 563006;贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室,贵州省遵义市 563006;遵义医学院口腔医学院,贵州省遵义市 563099;贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室,贵州省遵义市 563006【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 IntroductionDNA疫苗是编码抗原或抗原表位来构建的封闭环状DNA质粒[1]。
DNA疫苗原理
DNA疫苗原理DNA疫苗是一种新型的疫苗，与传统疫苗相比，具有更好的安全性和有效性。
DNA疫苗的原理是利用DNA分子编码疫苗抗原，通过注射DNA疫苗，激活机体免疫系统，诱导抗体产生，从而达到预防疾病的目的。
本文将详细介绍DNA疫苗的原理及其应用。
一、 DNA疫苗的制备DNA疫苗的制备是将编码疫苗抗原的DNA序列插入到载体DNA中，形成重组DNA，然后将其注射到宿主体内。
载体DNA通常是病毒或质粒，其中质粒是最常用的载体。
质粒是一个环状DNA分子，可在细胞内自主复制和表达。
将编码疫苗抗原的DNA序列插入到质粒中，形成重组质粒，然后通过电穿孔、化学转化或热休克等方法将其导入到细胞内。
细胞内的核酸代谢酶会将重组质粒转录成mRNA，然后翻译成疫苗抗原蛋白，最终激活机体免疫系统，诱导抗体产生。
二、 DNA疫苗的免疫机制DNA疫苗的免疫机制主要涉及细胞免疫和体液免疫两个方面。
细胞免疫是指通过激活T细胞和自然杀伤细胞等机制来清除感染细胞和病原体。
体液免疫是指通过激活B细胞和产生抗体等机制来清除病原体。
1. 细胞免疫DNA疫苗通过诱导T细胞免疫来清除感染细胞和病原体。
T细胞分为两种类型：CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
CD4+ T细胞主要调节和增强其他免疫细胞的功能，如B细胞和CD8+ T细胞。
CD8+ T细胞则直接杀伤感染细胞和病原体。
DNA疫苗通过激活抗原特异性的CD4+ T 细胞和CD8+ T细胞，来清除感染细胞和病原体。
此外，DNA疫苗还可激活自然杀伤细胞，从而增强机体的免疫力。
2. 体液免疫DNA疫苗通过诱导体液免疫来清除病原体。
体液免疫是指通过激活B细胞和产生抗体等机制来清除病原体。
DNA疫苗可激活抗原特异性的B细胞，从而产生抗体。
抗体是一种特异性蛋白质，能够结合病原体表面的抗原，阻止其进入细胞并促进其清除。
DNA疫苗可诱导机体产生高水平的特异性抗体，从而达到预防疾病的目的。
三、 DNA疫苗的应用DNA疫苗可用于预防多种疾病，如流感、艾滋病、乙肝、肺结核等。
DNA疫苗研究进展
• 至今，DNA疫苗已被用于至少40种不同的病毒感染、9种 至今， 疫苗已被用于至少40种不同的病毒感染、 疫苗已被用于至少40种不同的病毒感染 不同的细菌感染和9种不同的寄生虫感染以及阮病毒感染。 不同的细菌感染和9种不同的寄生虫感染以及阮病毒感染。 其中在34个病毒模型中、 个细菌模型中以及4 34个病毒模型中 其中在34个病毒模型中、8个细菌模型中以及4个寄生虫模 型中已被报道具有保护性。 型中已被报道具有保护性。目前在鼠身上已进行了大量的 这方面研究， 这方面研究，而在非人类灵长类动物如牛和鳝鱼中也同样 有效。 有效。DNA疫苗在癌症模型的临床前实验中也获得了成 疫苗在癌症模型的临床前实验中也获得了成 功。
寄生虫病 肿瘤
疟疾，利什曼原虫病，血吸虫病 疟疾，利什曼原虫病， 结肠癌，乳腺癌，B细胞淋巴瘤 结肠癌，乳腺癌，
自身免疫性疾病 类风湿关节炎 变态反应性疾病 尘螨
Байду номын сангаас
• 像其他疫苗一样，DNA疫苗的安全性问题也是必须考虑 像其他疫苗一样， 疫苗的安全性问题也是必须考虑 的重要问题。目前主要反映在两个方面： 的重要问题。目前主要反映在两个方面：一是外源基因染 色体整合问题。人们十分担心外源基因导入体内后， 色体整合问题。人们十分担心外源基因导入体内后，是否 会与细胞染色体基因组发生整合，从而导致细胞转化、 会与细胞染色体基因组发生整合，从而导致细胞转化、癌 变等负面后果。对此安全问题， 变等负面后果。对此安全问题，许多实验室采用现代分子 生物学技术和手段，研究和分析了这种整合可能性。 生物学技术和手段，研究和分析了这种整合可能性。至少 到目前为止都未有表明疫苗DNA能整合进染色体基因的 到目前为止都未有表明疫苗 能整合进染色体基因的 现象或证据，且有一点得到共识，即作为病毒DNA疫苗 现象或证据，且有一点得到共识，即作为病毒 疫苗 方面的危险性不会高于各病毒的自然感染。二是可能引发 方面的危险性不会高于各病毒的自然感染。 的自身免疫反应问题。质粒DNA和其他疫苗一样也是一 的自身免疫反应问题。质粒 和 种外源性物质，对此问题，学术理论上已经探索了多年， 种外源性物质，对此问题，学术理论上已经探索了多年， 不过到目前为止，无论是大量的实验研究或理论分析， 不过到目前为止，无论是大量的实验研究或理论分析，都 基本肯定了DNA疫苗使用的安全性。总的来说，DNA疫 疫苗使用的安全性。 基本肯定了 疫苗使用的安全性 总的来说， 疫 苗的安全性研究所积累的资料和大量的动物及人群临床试 可以初步认为DNA疫苗是一种相对安全的疫苗形式。 疫苗是一种相对安全的疫苗形式。 验，可以初步认为 疫苗是一种相对安全的疫苗形式
dna疫苗工艺
dna疫苗工艺DNA疫苗工艺是一种新兴的疫苗生产技术，其主要原理是基于人类DNA的基因工程，将人类DNA中的相关基因序列提取并克隆到载体中，通过转染技术将之导入目标细胞中，使其可以表达对应的蛋白质，进而诱导机体产生免疫反应，从而防止与相应的疾病的感染。
DNA疫苗与传统疫苗最大的区别在于其所采用的疫苗制备方式。
传统疫苗往往采用病毒或细菌分离纯化、灭活或减毒等方法得到，具有接种剂量需求严格、生产成本高昂等缺点，而DNA疫苗则可通过基因技术生产、保存方便、易于大规模生产、无需繁琐的灭活、减毒等处理程序，并可实现快速疫苗开发。
DNA疫苗主要包括以下制备步骤：1. 目标基因的克隆和限制性酶切DNA疫苗通常选择目标基因的全长或片段进行克隆。
在制备DNA疫苗前，需先将目标基因片段插入载体中，得到重组质粒。
为了方便基因插入，载体和目标基因要使用不同的限制酶进行切割。
2. 电泳纯化重组质粒经酶切后，需要经过电泳纯化步骤。
一般通过常规的琼脂糖凝胶电泳，以纯化目标DNA片段。
3. DNA浓缩和纯化纯化的目标DNA需要进一步浓缩和纯化。
此步骤通常使用DNA浓缩试剂盒来处理，可实现病毒和杂质的去除，从而提高目标DNA的浓度和纯度。
4. 动物细胞培养和转染DNA疫苗需要经由动物细胞进行表达，因此需要进行细胞培养和转染。
一般来说，选用急性期细胞获得高表达效率，如293T细胞等。
转染后，将措施对诱导毒素的产生以及细胞反应产生干扰，保证DNA疫苗的高效表达。
5. 病毒部生产和纯化经过转染后，细胞通过表达目标基因，在细胞表面或细胞外分泌目标蛋白质。
因此，将病毒部取出、经过两次凝胶纯化后，纯化目标蛋白质，经过过滤处理得到DNA疫苗。
DNA疫苗具有免疫原性强、安全性高、使用方便等优点，被广泛应用于多种疾病的预防和治疗。
但这一兴起的疫苗制备技术也存在一定的挑战，需要加速研究高效基因导入、基因表达调控和疫苗的体免疫等技术问题，提高DNA疫苗的生产效率和质量。
疫苗分类的名称
疫苗按成分可分为灭活疫苗、DNA疫苗、类毒素等种类。
1.灭活疫苗：灭活疫苗主要是诱导特异性抗体的产生，要维持血清抗体水平需要多次接种。
此类疫苗常选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后用理化方法灭活，使之完全丧失对原发靶器官的致病力，而保留相应的免疫原性。
2.DNA疫苗：DNA疫苗是将编码目的抗原蛋白基因序列的质粒经肌肉注射导入宿主细胞，通过转录系统表达抗原蛋白，诱导宿主产生针对该抗原蛋白的免疫应答，从而达到免疫目的的新型基因工程疫苗。
其不仅能够诱导良好的体液免疫反应，还可诱导较强的细胞免疫应答，具有环境友好和可靠的生物安全性等特点。
3.类毒素：类毒素，又称减力毒素，变性毒素。
是指一些经变性或经化学修饰而失去原有毒性而仍保留其免疫原性的毒素。
医学微生物学中将类毒素定义为：将细菌外毒素用0.3%~0.4%甲醛处理脱去其毒性，保存其免疫原性即为类毒素。
DNA疫苗
G IS开展屏东县琉球乡埃及伊蚊的研究, 1997年张念台等[15]以小琉球地区为例,详细介绍了利用地理信息系统数位高程资料,通过数学运算产生埃及伊蚊发生的物理、环境因子,包括坡度、坡向、全天光空域、水份梯度等地理信息,再配合埃及伊蚊发生的其它生物因子,如发育生长率、累积生长率、人口户数图层等,绘制出埃及伊蚊在小琉球地区的分布概率图。
此图显示[15],在琉球乡中福与本福2个村,埃及伊蚊分布概率最高。
对照近年来琉球地区实地调查资料,1994年9月后,琉球地区埃及伊蚊亦仅在本福和中福2个村发现,预测结果和实地调查资料基本吻合。
作者认为,应用G IS不仅可预测病媒的发生和分布,若在资料库中加入登革热流行的相关资料,也可以预测登革热的发生概率,为登革热防治和监测策略的制定提供更好的参考。
4 参考文献[1]行政院卫生署,传染病防治法[S].1999.[2]行政院卫生署.八十八年台湾地区登革热防治研究会资料[M].1999,20～22.[3]周玲,吴盈昌,乐怡云,等.台湾地区登革热流行之现况分析[A].行政院环境署第九届病媒防治技术研讨会论文集[C],1997,5～7.[4]Hw ang JS.Eco logy of A edes mo squitoesand their relati onsh i p s w ith dengueep idem ics in T ai w an area[J].Ch inese J.Entomo l1991,6∶105～127.[5]L in TH.Surveys on dengue vecto rmo squitoes in Chungho[J].T aibei H ealthR epo rt1996,6∶14～17.[6]黄基森.台湾地区斑蚊生态及其与登革流行之关系[A].行政院环保署第四届媒防治技术研讨会论文集[C],1991,105～107.[7]黄正中,陈锦生.埃及斑蚊与白线斑蚊在台湾分布现况之探讨[J].东海生物,1986,13∶22～42.[8]黄旌集,陈锦生.簇虫对登革热病媒蚊分布之影响[A].行政院环保署第九届病媒防治技术研讨会论文集[C],1999,33～44.[9]邓华真,钟兆麟,王升岑灿,等.嘉兴沿海地区登革热病媒之分布调查及其原因探讨[J].中华昆虫,1996,16∶155～165.[10]行政院卫生署、环境保护署.登革热防治第二期计划[R].1995.[11]王正雄,林建辉,廖建辉.台湾的病媒管制与环保[M].高雄医志,1994,10:62～66.[12]洪玉珠,徐尔烈,陈锦生,等.台湾地区登革热病媒蚊孳生源清除成效抽测[A].行政院环保署第九届病媒防治技术研讨会论文集[C],1997,61～62.[13]Su M D&Chang N T.F ram ewo rk fo rapp licati on of G IS on the monito ring ofdengue vecto rs[J].Kaoh siung J.M ed.Sci,1994,10∶94～101.[14]苏彦守.地理资讯系统用於屏东倒琉球乡埃及斑蚊的研究[A]国立屏东技术学院森林资源技术系专题讨论论文[C],1995,12.[15]张念台,陈朝圳,苏彦守.利用地理资讯系统估测琉球乡埃及斑蚊的发生[A].行政院环保署第九届病媒防治技术研讨会论文集[C],1997,45～59.收稿日期:2000-01-10文章编号:1007-2705(2000)01-0022-03【综述】DNA疫苗胡洁 (福建省医学科学研究所,福州350001)摘要:本文介绍了DNA疫苗的特性及其引起免疫应答的性质,影响疫苗效果的若干因素及应用前景。
DNA疫苗的研究进展
DNA疫苗的研究进展杨海;王芳宇【摘要】DNA疫苗是在分子生物学技术基础上发展起来的第3代新型疫苗,已体现出其竞争优势和应用潜能.同传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、临床应用方便等优点,但同样存在安全性的担忧.文章回顾了DNA疫苗的发展简史,阐述了DNA疫苗的免疫机理,分析了DNA疫苗研究现状,并对DNA疫苗的安全性提出了自己的观点与看法,旨在为DNA疫苗研究提供参考.%DNA vaccine was the third generation of vaccine, and had reflected the competitive advantages and application potential in the past. DNA vaccine was developed on the basis of molecular biology technologies. Compared with traditional vaccines, it had more advantages,such as good immune effect, low production cost, and convenient for the clinical application, but it also could be found safety concerns. To provide the references for DNA vaccine researchers, the DNA vaccine history, immune mechanism and research status quo were summarized, and the viewpoint about its security was presented in present paper.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)001【总页数】5页(P72-76)【关键词】DNA疫苗;免疫机理;安全性;研究进展【作者】杨海;王芳宇【作者单位】衡阳师范学院生命科学系,湖南衡阳 421008;衡阳师范学院生命科学系,湖南衡阳 421008【正文语种】中文【中图分类】S852.4疫苗是人类预防和控制各种疾病的重要武器，自人类发现疫苗的免疫作用至今，已有200多年的时间，近千种疫苗在疾病预防中得到应用，疫苗为人类的延续和健康做出了重要贡献。
dna疫苗的免疫原理
dna疫苗的免疫原理DNA疫苗的免疫原理是利用人体细胞的基因信息，通过注射或喷雾的方式，将一段包含特定病原体的DNA序列引入到人体细胞内。
这段DNA序列会被细胞核内的DNA复制机制转录成信使RNA，进而被翻译成相应的蛋白质。
这些蛋白质在细胞内被分泌或附着于细胞膜上，激活机体免疫反应。
DNA疫苗的制作过程包括选择目标疫苗基因、将该基因插入载体DNA，使其构建成质粒，然后将质粒引入细胞进行表达。
在接种DNA疫苗后，细胞会摄取DNA，并将其导入细胞核。
在细胞核内，质粒DNA释放出疫苗基因，并开始转录成信使RNA。
此时，信使RNA会被转运到细胞质进行翻译，产生与目标病原体相关的蛋白质。
这些疫苗蛋白质可能是病原体的表面抗原或其他能够诱导免疫反应的重要蛋白。
一旦这些蛋白质被合成出来，它们会被细胞内的机制分泌到细胞外或附着到细胞膜上。
通过细胞分泌或表面附着，这些特定的抗原可以被人体免疫系统中的抗原呈递细胞（如树突状细胞）识别，并激活体液免疫和细胞免疫反应。
体液免疫反应主要涉及B细胞，B细胞会产生抗体来中和或清除侵入体内的病原体。
细胞免疫反应主要涉及T细胞，T细胞会通过识别和杀死感染了特定抗原的细胞来消灭病原体。
因此，DNA疫苗通过提供感染的特定抗原，可以激活体液免疫和细胞免疫的两个重要免疫反应，从而为人体提供一定的保护免疫。
DNA疫苗的免疫原理是通过向人体细胞内引入特定病原体的DNA序列，进而转录和翻译成能够激活免疫反应的抗原蛋白。
这种疫苗可以激活体液免疫和细胞免疫反应，提供一定的保护免疫，以预防相关疾病的发生。
DNA疫苗
DNA疫苗是有目的地将DNA质粒导入机 体。 质粒携有编码蛋白的基因，体内低效率感 染细胞，表达抗原，引起免疫反应。 目的不是产生对DNA分子本身的抗体， 而是得到由受者细胞表达的蛋白。
途径： 注射－－肌细胞摄取质粒DNA。 通过将用金颗粒包裹的DNA打击皮肤，DNA可 进入组织。 将DNA通过滴鼻导入鼻组织中。 用金颗粒的方法，1ng DNA 可产生免疫反应， 1μg DNA有可能将数以千计的不同的基因导入 受者。
质粒有可能整合到宿主的基因组，引起插入突 变。 可诱发自身免疫反应。 可诱发免疫耐受。
引起发烧，不适，有的可以引起关节痛，活关节 炎，抽搐 ，致死和神 经 紊 乱 。
accine）：用微生物制成的用于预防 某些传染病的抗原性生物制品称为疫苗。习惯 上常将用细菌制备的生物制品称为菌苗、用病 毒、立克次体、衣原体或螺旋体等制备的生物 制品称为疫苗。 用于主动免疫的疫苗包括活的( 减毒) 微生物 ，杀死的微生物，微生物的成分，或分泌的毒 素( 脱毒的毒素)等。
质粒容易大量的导入。 DNA 非常稳定。 DNA极其耐受温度，利于储藏和运输。 DNA 序列容易进行实验室改变，可以对感染原的变异 可作出相应的反应。 产生的抗原蛋白与自然感染相同。 用编码许多病毒蛋白片段的质粒混在一起可制备广谱的 疫苗。 质粒不复制，只编码有作用的蛋白。 没有蛋白成分，故对载体本身不产生免疫反应。 由于抗原的存在，可产生直接针对病原体任何抗原的 CTL反应。
dna疫苗制备工艺研究 -回复
dna疫苗制备工艺研究-回复DNA疫苗制备工艺研究引言：DNA疫苗制备工艺是一项重要的生物制药研究领域，在过去几十年里取得了重大突破。
DNA疫苗是基于重组DNA技术制备的，具有较高的安全性和可调控性。
本文将从病原体选择、目标基因的克隆、表达载体的构建、细胞培养、纯化和疫苗制备等方面详细介绍DNA疫苗制备的工艺流程。
一、病原体选择：DNA疫苗可以用于预防各种疾病，如流感、艾滋病、乙肝等。
在制备疫苗前，首先要确定目标疾病的病原体。
选择病原体时，要考虑其传染性、致病性和易感性等因素，同时还要考虑其基因组的稳定性和可克隆性。
二、目标基因的克隆：目标基因是制备DNA疫苗的关键。
首先需要对目标病原体的基因进行研究和分析，确定能够诱导免疫反应的基因。
然后，利用基因工程技术，将目标基因克隆到合适的表达载体中，以便后续的表达和纯化。
三、表达载体的构建：表达载体是将目标基因导入宿主细胞并表达的工具。
常用的表达载体包括质粒和病毒载体。
质粒是最常用的表达载体，它具有较高的稳定性和可控性。
病毒载体则具有高效的转染能力和基因表达能力。
根据实际需要，选择合适的载体构建表达载体。
四、细胞培养：表达载体构建完成后，需要将其导入宿主细胞并进行培养。
常用的宿主细胞包括大肠杆菌、哺乳动物细胞等。
大肠杆菌是最常用的宿主细胞，它具有高产量和易于培养的特点。
哺乳动物细胞则能够实现较高水平的蛋白质表达，但培养条件较为复杂。
根据实际需要选择合适的宿主细胞进行培养。
五、纯化：获得表达目标基因的细胞后，需要对其进行纯化，以获得高质量的目标蛋白质。
纯化过程一般包括细胞破碎、蛋白质提取、沉淀、层析等步骤。
在每个步骤中，都要进行监测和分析，以确保纯化的目标蛋白质质量和纯度。
六、疫苗制备：纯化的目标蛋白质经过适当的处理后，即可制备成DNA疫苗。
常用的制备方法包括冻干法、包封法和微胶囊法等。
制备完成后，需进行质量控制和稳定性检测，确保疫苗的安全性和有效性。
结论：DNA疫苗制备工艺研究对于新型疫苗的开发具有重要意义。
DNA
２
禽 用 ＤＮＡ 疫 苗 的 构 建
ＤＮＡ 疫 苗 由 病 毒 的 保 护 性 抗 原 基 因 和 载 体 质 粒 两 部 分
多 个 抗 原 表 位 的 免 疫 保 护 作 用 ， ＤＮＡ 疫 苗 生 产 的 灵 活 性 大 使 大增加 。
ａ ｔ ｎｕ ｔ ｄ， ｏ ｅ ｋｉ ｅ ｓ ｂｕ ｉ ｎ ｒ ｃ ｍ ｂ ｎ ｎｔ ｎ ，ｔ ． ｔ ｅ ａ ｅ ｗｈ ｌ ｌ ｄ，ｕ ｎ ｔ ｌ ａ ｄ ｅ ｏ ｉ ａ ｏ ｅｅ ｃ
ｐ ｏ ｃ ， ａ ｔｃ ｅ ｓ ｒ ｄｕ ｅＴｈｅ ｒｉ ｌ ｉ ｍａ ｎ ｙ ｄｉ ｃ ｓ ｄ ｏ ｓｒ ｃ ｉ ｎ ｉ ｌ ｓ ｕｓ ｅ ｃ ｎ ｔｕ ｔｏ ｓ ｒ ｔ ｇ ｍ，ｐｐ ｉ ａ ｉ ｎ ｅ ｆ ｃ ｏ ｔａ ａ ｅ ａ ｌｃ ｔｏ ｆｅ ｔ ｆ ＤＮＡ ａ ｃ ｎ ｔ ｒ ｖ ｎ ｖ ｃｉｅ ｏ ｐｅ ｅｔ ａ ｄ Ｕ ｅ ｎ Ｃ ｒ ａ ｆ ｗ ｏ ｉｕ ｄ ｓ ａ ｅ ｏ ｏ ｌｒ ｔ ｅ ａ ｅ ｙ ｆ ｅ ｆ ｖ ｒ ｓ ｉ ｅ ｆ ｐ ｕ ｔｙ， ｓ ｔ ｏ ｓ ｈ ｆ ｉ ｓ ａ ｓ ｎ ｉ ｎ ． ｉ ｘ ｅ ｔ ｄ ｏ ｅ ｐ ｄ ｔ ｔ ｅ ｔ ｉ ｌｏ ｍｅ ｔｏ ｅ Ｉ ｓ ｅ ｐ ｃ ｅ ｔ ｘ ｅ ｉｅ ｈ ｄ ｔ ｄｅ ｅ ｏ ｍｅ ｔ ｆ ｐ ｕ ｔｙ ｕ ｔｖ ｔｏ ｉ ｏ ｒ ｃ ｕ ｔ ． ｖ ｌ ｐ ｎ ｏ ｏ ｌｒ ｃ ｌｉａ ｉ ｎ ｎ ｕ ｏ ｎ ｒ ｙ Ｋｅ ｙｗｏｒｄ ＤＡＮ ｖ ｃ ｉ ｅ ｐｏ ｔ ｉｕ ｓ ａ ｅ ｓ ａ ｃ ｎ ｕｌ ｙ ｒ ｖ ｒ ｓ ｄｉｅ ｓ
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• Ulmer等（1993） – 将重组甲型流感病毒核蛋白( nucleoprotein，NP)的 cDNA片断插入含有巨细胞病毒(CMV)启动子的质粒中 – 将该质粒直接注射入小鼠的四头肌内 – 结果：小鼠产生了特异的细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答 和高滴度的抗体。
1994年在日内瓦召开的专题会议上将这种疫苗定名为基因疫 苗。
➢注射方式（皮内、皮下、肌内等），也可以用基 因枪注射接种
➢非注射方式：口服、鼻内滴注、鼻腔喷雾接种等
DNA注射剂量以实验动物种类而异。对小鼠而 言，最适宜的注射剂量为50~100ug，对小牛 注射则需500ugDNA，太少基因表达很低，太 高则不呈剂量相关。
年龄越小，DNA疫苗产生的效果越好
DNA疫苗的特点
主要包括基因工程亚单位疫苗，基因工程载体疫苗，核酸疫 苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程疫苗等五种。
基因疫苗
即将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上， 然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达 抗 原蛋白，诱导机体产生免疫应答。抗原基因在一定时限内的持 续表达，不断刺激机体免疫系统，使之达到防病的目的。
Genic Guard
——基因疫苗
疫苗的发展
第一代疫苗
减毒和灭活疫苗
第二代疫苗
基因工程蛋白质或多肽疫苗
第三代疫苗
基因疫苗
”基因疫苗的发展
Wolff等：小鼠基因治疗试验(1990) • 对照动物
– 将带有报告基因的质粒DNA直接肌肉注射入 • 意外发现：
– 肌细胞内：检测到该外源基因的表达产物
• 1992年， Tang等 – 将表达人生长激素的基因质粒DNA，导入小鼠的 表皮细胞 – 小鼠血中：检测到特异性抗生长激素抗体 – 再次注入加强剂量质粒： • 免疫反应增强。
②DNA分子克隆比较容易，使得DNA疫苗能根据需要 随时进行更新；
DNA分子很稳定，可制成DNA疫苗冻干苗，使用时 在盐溶液中可恢复原有活性，因而便于运输和保存；
④质粒本身可作为佐剂，因此使用DNA疫苗不用加佐剂， 既降低成本又方便使用.
⑤比传统疫苗安全，虽然DNA疫苗具有与弱毒疫苗相当 的免疫原性，能激活细胞毒性T淋巴细胞而诱导细胞免 疫，但由于DNA序列编码的仅是单一的一段病毒基因， 基本没有毒性逆转的可能，因此不存在减毒疫苗毒力回 升的危险 .
⑥将多种质粒DNA简单混合，组成多价疫苗，使DNA 疫苗生产的灵活性大大增加。
DNA疫苗发展中存在的问题
➢目前，DNA疫苗尚未得到广泛的应用，除了因为它是 一种新事物，不大为人所了解之外，它本身的安全问题 则是人们对它 的最大顾虑。DNA疫苗存在的问题如下：
➢外源DNA进入机体后是否整合到宿主基因组，导致 癌基因激活或抑癌基因失活。
➢鸡传染性喉气管炎病毒（ILT) 将分别构建的含有 鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gB、gC和gD基因的 重组真核表达质粒及空载体质粒分组注射雏鸡，攻 毒后观察免疫保护效果。结果表明，重组质粒诱导 了免疫应答，免疫保护率达到79%，该基因疫苗可 以作为预防ILV的1个补充。
DNA疫苗的优点：
①DNA接种载体（如质粒）的结构简单，提纯质粒DNA 的工艺简便，因而生产成本较低，且适于大批量生产；
抗原基因重组到表达载体上的重组质粒疫苗，经肌肉注射或黏 膜免疫等方法导入宿主体内，通过宿主细胞表达抗原蛋白，诱 导宿主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗 疾病的目的。
基因工程疫苗
基因疫苗
“基因工程疫苗”与“基因疫苗”
基因工程疫苗
也称遗传工程疫苗使用DNA重组生物技术，把天然的或人 工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中， 使之充分表达，利用表达的抗原产物，或重组体本身制成的疫 苗。
➢分泌到细胞外的抗原被带有相应抗体的B细胞捕捉，在T辅 助细胞分泌淋巴因子的刺激下转化为浆细胞，大量分泌抗体。
基因免疫的原理
DNA疫苗的构建
①目的基因的选择： 侧重于免疫原性，即所表达的目的蛋白刺激
机体免疫应答的能力。目的蛋白中是否具有受 MHC分子限制的T细胞抗原表位，是保证核酸免 疫有效的先决条件。核酸疫苗所选择的目的基因 应尽量避免有害基因成分，特别是病毒或肿瘤的 核酸免疫。
• 新型疫苗（1990-） – "第三次疫苗革命” – 美国纽约科学院：疫苗学的新纪元(1995）
• 又称为： – DNA疫苗(DNA vaccine) – 基因免疫(genetic immunization) – 核酸免疫(nucleic acid immunization)
概念
• 基因疫苗(genetic vaccine) 是指一类将
➢DNA疫苗长期在体内表达是否会诱导机体产生免疫 耐受，长远来说，导致机体免疫功能低下。 ➢DNA疫苗作为一种外来物质，是否会引起机体产生抗 DNA抗体。
➢DNA疫苗诱导的CTL反应是否会对 其他细胞产生杀伤作用。
DNA疫苗的发展前景
近年来，许多畜禽病毒性传染 病，已不能依靠传统疫苗如灭 活疫苗、弱毒疫苗等对其进行 防治，DNA疫苗的出现使得 这一状况得到改善。编码病毒、 细菌和寄生虫等不同种类抗原 基因的质粒DNA，能够引起 脊椎动物如哺乳类、鸟类和鱼 类等多个物种产生强烈而持久 的免疫反应。 DNA疫苗被称 为继灭活疫苗和弱毒疫苗、亚 单位疫苗之后的“第三代疫 苗”，具有广阔的发展前景。
（1）既能诱导细胞免疫反应，也能刺激产生体 液免疫反应
原因：表达产物 •一部分在降解后与MHCI类分子结合 •一部分也可分泌出去， 经抗原递呈细胞(APC)等 途径与MHC-II类分子结 合
（2）安全可靠
• 可根据需要设计、选择
DNA疫苗的抗原基因，靶
向性明确; • 质粒载体上的CpG基序具
有强烈的佐剂作用，故 DNA疫苗接种时一般不需 外加佐剂。
基因免疫的原理
➢质粒DNA导入细胞后，抗原编码基因表达抗原蛋白，随后 被降解为8~12个氨基酸短肽。
➢短肽上含有抗原表位，分别与MHC-1类和MHC-2类分子结 合并被呈递到细胞表面 ➢与MHC-Ⅰ类分子结合的短肽激活CD8+T细胞( Tc ),与 MHC-Ⅱ类结合的短肽激活CD4+T细胞（ Th ）。
Байду номын сангаас
②载体的选择： 构建DNA疫苗的质粒通常是非复制型的真核 表达质粒，能高水平地表达目的基因。
重组质粒可分为两个部分： ● 转录部分：由启动子、插入的目的抗原 cDNA和poly A终止子组成，指导目的蛋白 在体内表达，诱发特异性免疫应答。 ● 佐剂部分：CpG基序。
③启动子的选择： 质粒在宿主细胞内 表达外源性蛋白的 水平与调控DNA表 达的启动子关系密 切。表达水平的不 同又直接影响免疫 应答的强度和持续
（3）价格低廉 • 质粒经转化细菌扩增后，
其提取、纯化等制备过 程远比蛋白质纯化技术 简单得多，省钱、省时 和省力，适宜于规模性 生产；
• DNA疫苗在常温下性能 稳定，可以室温保存， 不需要冷链运输，容易 保证高效接种率。
（4）多途径免疫接种， 易为免疫对象所接受，也有利 于模拟自然感染途径。 – 注射方式（皮内、皮下、肌 内等），也可以用基因枪注 射接种 – 非注射方式：口服、鼻内滴 注、鼻腔喷雾接种等
基因枪
利用高压气体加速， 将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒 直接送入完整的植物组织或者细胞中 这一加速设备称为基因枪
DNA疫苗的应用
➢牛病毒性腹泻病毒（BVDV) 以表达BVDV1型主要糖蛋白 E2的质粒DNA肌肉注射小牛，可产生病毒中和抗体和抗原特 异的细胞增殖反应；免疫后16周进行攻毒试验，发现免疫牛 能产生针对BVDV1型和2型的血清中和抗体强烈的记忆抗体 反应，对牛有部分免疫保护作用
性。
④DNA疫苗的优化 ● 联合构建：在载体质粒中插入2个或2个 以上目的抗原基因，既能激活CD8＋T细胞产 生特异性CTL，又能激活CD4＋Th2细胞产生 体液免疫。 ● 协同构建：将目的基因与某种细胞因子的 基因构建成嵌合基因，以促进目的基因的免 疫效果。
⑤免疫途径、剂量、时间： 常见免疫途径有：