丙酮酸标准曲线
转氨酶活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的重要作用及其在临床诊断中的意义。
2. 学习转氨酶活性测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法在测定转氨酶活性中的应用。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
其中，谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）是两种常见的转氨酶。
当肝细胞受损时，ALT和AST会释放到血液中，导致血液中这两种酶的活性升高。
因此，测定血液中ALT和AST的活性可以反映肝脏的功能状况。
本实验采用分光光度法测定血液中ALT的活性。
在实验中，ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸，丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，丙酮酸2,4-二硝基苯腙在碱性溶液中呈棕红色，通过测定其吸光度可以计算出ALT的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜动物肝脏、血清、丙氨酸、α-酮戊二酸、2,4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、NaOH、蒸馏水等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 准备工作：将新鲜动物肝脏和血清分别置于冰浴中，制备肝匀浆和血清样品。
2. 样品处理：将肝匀浆和血清样品按照一定比例加入反应体系中，加入丙氨酸、α-酮戊二酸和磷酸盐缓冲液，混匀后置于恒温水浴锅中反应。
3. 测定吸光度：在反应结束后，取出反应体系，加入2,4-二硝基苯肼和NaOH，混匀后立即在分光光度计上测定吸光度。
4. 标准曲线绘制：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 计算ALT活性：根据样品的吸光度，从标准曲线上查出对应的丙酮酸浓度，再根据公式计算ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线后，发现线性关系良好，相关系数R²>0.99。
2. 样品处理：实验过程中，肝匀浆和血清样品均未出现明显的分层现象，说明样品处理得当。
3. 吸光度测定：实验过程中，分光光度计的吸光度读数稳定，说明仪器性能良好。
转氨酶实验前讨论
简便，但-酮戊二酸的干扰使得实验设计上对总体思路 的彻底达成有一定难度。
特异性、精确度高
但，实验条件要原辅酶I在340nm处有最大光吸收，因此伴随 还原辅酶I不断被氧化，340光吸收值随之下降， 下降速率和ALT活力成比例，籍此测定ALT活力。
比色法原理：
速率法原理：
1、以蒸馏水（dH2O）确定722分光光度计的100%T，然后测 定所有实验数据。
2、数据整理：标准曲线各点所获OD值减去丙酮酸含量为零管 的OD值，对应各自丙酮酸含量。 3、标准曲线：以丙酮酸含量为横坐标，以上述求差后的OD值 为纵坐标，按比色法原理要求作图。
4、丙酮酸含量不卡门氏单位的回归分析：以丙酮酸含量和其对 应的卡门氏单位，分析两组数据之间的相关性（可作图辅助自 己判断），利用计算机求算最佳线性拟合，由R方（决定系数） 判断，大于0.999，获得回归方程。
5、样品结果计算：由丙酮酸-OD520标准曲线求得丙酮酸含量， 带入丙酮酸含量不卡门氏单位线性回归方程，求得对应的卡门 氏单位。注意样品各自的稀释倍数。
谷丙转氨酶的测定 （改良赖氏法）
谷-丙转氨酶（ALT），催化 丙氨酸与α-酮戊二酸生成 谷氨酸和丙酮酸：
金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖氏法（Reitman-Frankel法）。 其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。 丌同之处在于作用时间： King法60min ，Mohun法和 Reiman法30min。 King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下不底物作用60 min，生成 1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下不底物作用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
两种方法各有很强的优势与不足，而 他们测定的是同一个体系，可否巧妙 的取长补短？
丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理
丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理一、概述在生命科学研究中，分子生物学领域的检测试剂盒广泛应用于疾病诊断、基因表达分析和药物筛选等方面。
丙酮酸激酶检测试剂盒是一种用来测定丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase，简称PK）活性的试剂盒。
本文将从以下几个方面介绍丙酮酸激酶检测试剂盒的测定原理：•丙酮酸激酶简介•丙酮酸激酶检测试剂盒组成•丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理二、丙酮酸激酶简介丙酮酸激酶是一种在糖酵解过程中起关键作用的酶，它能够催化丙酮酸与磷酸化物（如ADP）反应生成磷酸丙酮酸和ATP。
丙酮酸激酶广泛存在于真核生物和原核生物的细胞质中，是细胞能量代谢的重要调控因子。
三、丙酮酸激酶检测试剂盒组成一般来说，丙酮酸激酶检测试剂盒由以下几个组分组成： 1. 丙酮酸激酶底物：一种特定的丙酮酸底物。
2. 辅酶：用于促进丙酮酸激酶的催化活性。
3. PK反应缓冲液：用于维持反应环境的稳定性。
4. 酶标试剂：用于测定反应终点的标记试剂。
5. 正样品：已知浓度的丙酮酸激酶样品，用于构建标准曲线。
四、丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理丙酮酸激酶检测试剂盒测定原理基于丙酮酸激酶催化丙酮酸与磷酸化物反应的特性。
具体步骤如下：1. 样品制备将需要测定丙酮酸激酶活性的样品收集，并通过离心等方法，将样品从细胞或组织中提取出来，得到纯化的丙酮酸激酶。
2. 反应体系配置按照试剂盒说明书中的配方，将丙酮酸底物、辅酶和PK反应缓冲液按一定比例混合，制备反应底物液。
3. 样品处理将制备好的样品与反应底物液按照一定比例混合，使得反应体系达到相应的浓度。
4. 反应过程将混合好的反应物置于适当的温度下孵育一段时间，使丙酮酸激酶催化底物发生反应，生成磷酸丙酮酸和ATP。
5. 酶标反应将反应终止或稀释后的样品取出，加入酶标试剂，进行酶标反应。
酶标试剂中的特定物质与ATP反应，产生荧光或颜色信号。
6. 信号测定使用合适的光谱仪或读板仪器，测定酶标反应后的荧光或颜色信号的强度。
丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒说明书
货号：MS2204 规格：100管/96样丙酮酸（pyruvic acid PA）含量测定试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
测定原理：丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈显色。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，4℃避光保存；试剂二：液体12.5mL×1瓶，4℃保存。
丙酮酸提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL样本和25μL试剂一，混匀，静置2min，加入125μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。
丙酮酸含量计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0466x + 0.0675； x为丙酮酸含量（µg/mL），y为吸光值。
ALT,AST测定方法
ALT,AST测定⽅法3.8.2.1⼩⿏肝、肾、⼼组织ALT含量测定1实验原理⾕丙转氨酶作⽤于由丙氨酸及α-酮戊⼆酸组成的基质，在⼀定的反应条件下，产⽣⼀定量的丙酮酸。
在酶反应到规定时间时，加⼊2,4-⼆硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终⽌了酶反应。
2,4-⼆硝基苯肼分别与反应产⽣的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊⼆酸形成各⾃对应的2,4-⼆硝基苯腙。
在碱性条件下，虽然⼆种苯腙分别显出红棕⾊，但由于丙酮酸⽣成的颜⾊较深，以同等克分⼦计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊⼆酸⽣成的颜⾊的3倍，利⽤这⼀差别可以反映出丙酮酸的⽣成量。
本实验设⾕草转氨酶活⼒为：样品液与ALT 基质液在37℃下反应60min时每⽣成1µmol丙酮酸所需的酶量为1个活⼒单位（U）。
2试剂配制（1）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏⽔中，定容到1000mL。
（2）20µmol/L丙酮酸钠标准溶液称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。
现配现⽤。
（3）ALT基质液称取α-酮戊⼆酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78mg（L-丙氨酸0.85mg）溶解于30mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）中，溶解后校正pH⾄7.4，再⽤pH7.4的磷酸缓冲液定容⾄100mL，置冰箱中保存备⽤（可保存⼀周）。
可加⼊氯仿数滴防腐。
（4）0.02% 2，4—⼆硝基苯肼溶液称取20mg2，4—⼆硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待2，4—⼆硝基苯肼全部溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100mL，过滤后盛于棕⾊中，置冰箱中保存备⽤。
（5）1mol/L NaOH溶液：称取4g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到100mL。
（6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16 g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到1000mL。
丙酮酸差量法测定大蒜中大蒜辣素含量方法的建立
丙酮酸差量法测定大蒜中大蒜辣素含量方法的建立朱君芳;许建;高杰【摘要】通过测定经酶促反应后大蒜鳞茎中的丙酮酸含量,以灭酶组大蒜鳞茎中丙酮酸含量为本底,应用丙酮酸差量法计算得出大蒜鳞茎中大蒜辣素含量,并对测定条件进行优化.结果表明:大蒜本底灭酶条件为100℃水浴加热30 min,酶促反应温度为30℃,酶促反应时间为10 min,在520 nm下测定吸光度值,丙酮酸含量浓度在10 ～ 50 μg/mL内与吸光度呈良好的线性关系,大蒜辣素测定精密度相对标准偏差为0.88％,重现性相对标准偏差为1.05％.该方法操作简单、稳定、重复性好,对于测定大蒜中大蒜辣素切实可行.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)011【总页数】4页(P148-151)【关键词】大蒜;丙酮酸;差量法;大蒜辣素含量【作者】朱君芳;许建;高杰【作者单位】新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,新疆乌鲁木齐830052【正文语种】中文大蒜(Allium sativum L.)是百合科(Liliaceae)葱属(Allium)草本植物，是一种葱蒜类蔬菜，以鳞茎、嫩叶和花茎为食用器官，是一种重要的调味蔬菜［1］。
原产于欧洲南部、西亚和中亚，西汉时期传入我国［2］。
目前大蒜在我国已广泛栽培，主要产地有河南、山东、河北、甘肃、江苏及新疆等地［3-4］。
大蒜有消炎、杀菌、降低胆固醇、抗癌、以及增强免疫力等多种功效。
大蒜的药用价值主要来源于大蒜辣素(allicin)。
大蒜辣素极易挥发，是一种具有特殊气味的无色油状物质［5-9］。
大蒜辣素以前体物质蒜氨酸存在于大蒜中，在完整的细胞中，蒜氨酸存在于细胞质中，而蒜氨酸酶存在于液泡中，细胞破碎后二者接触，继而蒜氨酸发生转化，生成大蒜辣素［10-11］。
大蒜辣素药用价值大，可加工为保健品和药品等，应用前景较广阔。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
实验操作
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S 管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测 定管，在30min保温期间再做空白管和标准管
1.标准曲线绘制：取试管5支，按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取各管光密度。各管光密 度减去0管光密度，然后以光密度的差值为纵 坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标， 绘制标准曲线。为了方便，可将光密度相当于 转氨酶的卡门氏单位列于其后
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
在测定前将底物液在37摄氏度水浴中预温5分钟，再按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取光密度，用测定管的光 密度减去对照管的光密度查标准曲线，即得到 待测血清中所含ALT的酶的活性。 参考值：5~25卡门氏单位
临床意义
ALT（GPT)广泛存在于机体各种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
血清转氨酶(GPT、GOT)活性的测定
血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。
酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。
血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。
在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。
一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。
改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。
卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。
而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。
七 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
2,4一二硝基苯肼 溶液（ml）
血清（ml）
0.5
—— 各管混匀后，置于37℃ 水浴中保温20min
0.5
0.1
0.4 mol/L NaOH 溶液（ml）
5.0
5.0
混匀，10min后，30min内在520nm处比色，以对照管调零，读取测定管吸光度值。
2 标准曲线的制备
取6支试管，编号，按下表3-12步骤操作：
试管编号 吸光度（A） 丙酮酸含量 （ μmol ）
1
2
3
4
5
6
1 标准曲线图绘制
1）用坐标纸绘制标准曲线 2）标明操作人、时间、仪器型号和图表名称
1.标准曲线图绘制
1.标准曲线要过原点 2.注明标准曲线名称:金氏 法测定血清谷丙转氨酶活 性 3.注明横纵坐标的名称及 单位 4.注明分光光度计型号
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
各管混匀后，置于37℃ 水浴中保温20min。 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
混匀，10min后，30min内在520nm处比色。以第1管调零，读取各管吸光度值。
原始数据记录
表1 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
试管编号
对照管
测定管
吸光度 （A）
表2 丙酮酸标准曲线的绘制
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。 在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶 （GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性 均较高。在正常的新陈代谢过程中， 血清内两种酶维持一定水平的转氨酶 活性（即正常值）。
转氨作用的机制：
体内主要两 种转氨酶？
谷草转氨 酶（GOT） 又称天冬 氨酸转氨 酶（AST）
心脏
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。
转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。
转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。
其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。
GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。
GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。
由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。
本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。
二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。
转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。
该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
丙酮酸含量的测定运用的是比色法。
丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。
三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：①磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。
转氨酶含量测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的重要作用及其在临床诊断中的意义。
2. 掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验，学习分光光度法在生物化学实验中的应用。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）是其中最为重要的两种。
当生物体内发生疾病或损伤时，细胞内转氨酶会释放到血液中，导致血液中转氨酶活性升高。
因此，转氨酶活性测定在临床诊断中具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定血清中谷丙转氨酶的活力。
谷丙转氨酶催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：丙氨酸、α-酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸盐缓冲液、血清样品等。
2. 实验仪器：分光光度计、移液器、恒温水浴锅、试管等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，分别加入2，4-二硝基苯肼和氢氧化钠，用分光光度计测定吸光度，以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清谷丙转氨酶活力测定：取血清样品，按照一定比例加入丙氨酸、α-酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和氢氧化钠，混匀后置于恒温水浴锅中反应一定时间。
取出后，立即用分光光度计测定吸光度，从标准曲线上查得丙酮酸浓度，根据反应体系中的丙酮酸与谷丙转氨酶的摩尔比，计算谷丙转氨酶活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，得出标准曲线方程。
2. 血清谷丙转氨酶活力测定：根据实验数据，计算谷丙转氨酶活力。
3. 结果分析：将实验测得的谷丙转氨酶活力与正常参考值进行比较，判断血清样品中谷丙转氨酶活性是否异常。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了转氨酶活力测定的原理和方法，学会了分光光度法在生物化学实验中的应用。
实验七血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
实验七血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定生化实验生化实验释的丙酮酸标准液(500μg/ml)0.1ml,再按下表操作。
各管混匀，于室温静置10分钟，520nm波长，以第11管为空白管比色，读取各管光密度将各管丙酮酸含量（5－50μg）按下式换算成谷丙转氨酶活力单位: 以每100ml血清中丙氨酸氨基转移酶活力单位为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲线。
2．酶活性的测定取干燥洁净试管2支，标明测定管和对照管，按下表操作。
混匀，静置10min，用分光光度计，在520nm波长，用蒸馏水调节零点，读取测定管和对照管光密度，以测定管光密度值减去对照管光密度值，然后从标准曲线上查出其酶的活力单位。
【注意事项】1．标本应空腹取血，当时进行测定或将分离的血清贮存于冰箱中。
2．酶的测定结果与酶作用时间、温度、PH及试剂加入量等有关，在操作时均应准确掌握。
3．测定试剂更换时，要重新制作标准曲线。
【临床意义】ALT广泛存在于一般组织细胞中,肝细胞中此酶含量最多。
肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心肌炎等亦有增高。
故血清丙氨酸氨基转移谷丙转氨酶活性得测定在临床诊断上具有重要意义。
【附注】1．酶活力的意义及测定方法研究酶促反应速度和各种因素对酶促反应速度的影响时，一般以酶的活力单位为观察指标。
酶活力是指酶催化化学反应的能力；酶活力的大小用酶活力单位表示，酶的一个国际单位为在25℃下，1分钟内催化1μmol/L底物的酶量，或是转化1微摩尔（1μmol）底物的有关基团的酶量。
测定酶活力时，常常用产物的生成量或是底物的消耗量来计算。
一般以测定产物增加量为好，因为产物从无到有，只要方法足够灵敏就可以准确测定。
2．测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的方法简介一类是分光光度法，另一类是比色法。
前者是测定酶速率的方法，需要紫外分光光度计与酶试剂。
后者有金式(King)法，穆氏（Mohum）法与赖氏（Reitman Frankel）法3种。
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材：试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂：(1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml，4℃保存.②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml，4℃保存。
③将0。
1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0。
1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0。
1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴,4℃保存.（2）标准丙酮酸(含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg,用上述缓冲液准确定容为50mL。
此液须当日用当日配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α—酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7。
6以上的环境中酶活性下降)，加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
(4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α—酮戊二酸 2mmol/L）:称取α- 酮戊二酸29。
2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中，加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7。
4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0。
1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度.放置冰箱内保存。
(5）2。
4—二硝基苯肼溶液:取分析纯2，4-二硝基苯肼19。
8mg，用1mol/LHCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液：0.1M磷酸盐缓冲液PH7。
4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1相当于谷丙转氨酶单位0 28 57 97 150 200相当于谷草转氨酶单位0 24 61 114 190 —每个样做3个平行,置37水浴30分钟，各管加2,4—二硝基苯肼液0。
血清ALT标准曲线法
辅助诊断其他疾病
除了肝脏疾病外，血清ALT水平异常 还可能与其他疾病如心肌梗死、肌肉 疾病等有关。通过标准曲线法可以为 这些疾病的诊断提供辅助信息。
健康体检中的应用
在健康体检中，血清ALT是常规检测 项目之一。通过标准曲线法可以准确 测定ALT水平，为评估受检者健康状 况提供参考。
05 血清ALT标准曲线法优缺 点分析
血清ALT标准曲线法简介
定义
血清ALT标准曲线法是一种通过绘制标准 曲线来定量检测血清ALT水平的方法。该 方法使用已知浓度的ALT标准品，在相同 条件下与待测样品同时进行检测，通过 比较标准品与待测样品的信号强度，可 以计算出待测样品中ALT的浓度。
VS
原理
血清ALT标准曲线法的原理是基于酶促反应 的动力学原理。在特定条件下，ALT能够催 化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转氨反应， 生成丙酮酸和谷氨酸。通过检测反应体系 中丙酮酸的生成量，可以间接测定ALT的活 性。在标准曲线法中，使用一系列已知浓 度的ALT标准品绘制出标准曲线，然后根据 待测样品的信号强度在标准曲线上找到对 应的浓度值。
根据待测样本的吸光度值，在 标准曲线上查找对应的ALT浓 度，进而计算出待测样本的 ALT活性。
注意事项及常见问题解决方案
试剂保存
试剂应避光保存于4℃冰箱中，避免反复冻融。使 用前应检查试剂是否过期或变质。
仪器校准
分光光度计等仪器应定期进行校准和保养，确保 测量结果的准确性。
操作规范
实验操作过程中应严格遵守无菌操作规范，避免 交叉污染。同时要保证加样准确性和反应时间的 控制。
操作规范
实验操作过程中应严格遵守无菌操作规范，避免 交叉污染。同时要保证加样准确性和反应时间的 控制。
丙氨酸氨基转移酶活性标准曲线制作
四、样品测定
1.检测
混匀，室温放置3分钟，510nm波长，以空白管调零，测定各管 吸光值。
2. 计算：以各管所获吸光度值，从工作曲线中查寻或利用线 性方程计算即可获得样品度ALT活性。
参考值：
5 ~ 50U/L 0~ 25卡门（赖式）单位
小结
1.工作曲线必须过ห้องสมุดไป่ตู้点、截距为零。 2.离散值太大的处理、统计学 3.下次课预习：
ALT转氨基反应流程
转氨基作用
各管混匀，室温恒定3分钟，510nm波长，以“0”号管调零， 测定各管吸光度值制作工作曲线。
三、标准曲线制作
以各标准管活力单位为横坐标，吸光度 变化值为纵坐标，手工绘制工作曲线图，查 阅该图即可得样品ALT活性。
四、注意事项
1.防止试剂变性 2.校准液加量与活力对应关系
谢谢！
丙氨酸氨基转移酶标准曲线制作及 丙氨酸氨基转移酶活性测定
实验目的
掌握：实验原理及操作方法、标准曲线制 作及使用、方法学评价
熟悉：分光光度计的使用、丙酮酸钠含量 与 ALT活性的对应关系
了解：实验的注意事项
一、原理
样品中ALT在一定条件下，作用于 丙氨酸和α-酮戊二酸，生成一定量的丙 酮酸及L-谷氨酸，2，4-二硝基苯肼与 反应产生的丙酮酸生成2，4-二硝基苯 腙。在510nm波长，可推算出ALT的活 力。