试剂配制

1xHBS

Nacl 8.76g ddw 900ml 1M HEPES 20ml 用NaoH 调PH7.4 定容至1L 0.22um过滤，4度保存

1xPBS

Nacl 8.0g Kcl 0.2g Na2HPO4·7H2O 2.16g /Na2HPO4·12H2O 3.4785g KH2PO4 0.2g

ddw 定容至1L PH7.4 高压灭菌

RNase配制

RNase 0.1g 加33ul 3M NaAc 再加ddw至9ml，100°C 15min，冷却至室温，再加1M Tris-Hcl（PH7.4）1ml，分装后-20°C保存

细胞消化胰酶的配制（TE Trypsin EDTA ）0.25% Trypsin 0.02% EDTA

100mlPBS 高压灭菌后，趁热加入0.02g EDTA，溶解后，调PH 7.4 ，放在4度冷却，再称取胰酶0.25g加入，用转子溶解混匀，0.22ul过滤

考马斯亮蓝染色液配制（500ml）

甲醇Methenol 225 ml 乙酸Acetic acid 50ml ddw 225ml R-250 1g ，棕色瓶子避光保存

考马斯亮蓝脱色液配制

甲醇Methenol 225 ml 乙酸Acetic acid 50ml ddw 225ml

5%BSA

5gAlbumin Bov（BSA）用TBST定容至100ml

20xTBST配制

TrisBase 48.4g Nacl 160g 20%Tween 20ml 浓Hcl 12M 23.75ml 调PH 7.6 ddw至1L

RIPA细胞裂解液

EGTA 1mM ，Na2EDTA 1mM，TrisHCL 25mM,Nacl 150mM，1% NP-40，1% Sodium deoxycholate（脱氧胆酸钠）ddw至1L

还可以加入2.5mM Sodium Pyrophosphate （焦磷酸钠）， 1mM b-glycerophisphate （b磷酸甘油），1mM Na3VO4，1ug/ml Leuptin

1% NP-40 (去垢剂)，0.1% SDS (去垢剂)，2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)，2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)，1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂) 1.5 mM EDTA ( 蛋白酶抑制剂)，1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)

PMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)

Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)

Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/ml

Aprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg

/ml)

（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中； Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0); Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；

Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中

均于-20℃保存

细胞裂解液的主要目的：

1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；

2. 溶解蛋白；

3. 蛋白变性使其稳定；

4. 抑制蛋白酶活性