酶联免疫技术
酶联免疫检测方法
酶联免疫检测方法
酶联免疫检测是一种常用的生物技术方法，它结合了酶标记和免疫反
应的原理，可用于检测生物样品中特定分子的含量，如蛋白质、抗体、激
素等。
具体步骤如下：
1.准备样品：从生物样品中提取目标分子，例如血液、尿液、细胞等。
2.免疫反应：将一定浓度的目标分子加入到反应孔中，并加入与目标
分子特异性的抗体，使两者发生免疫反应。
3.洗涤：对反应孔进行洗涤，以去除未与抗体结合的杂质以及剩余的
抗体。
4.添加荧光标记的二抗：向反应孔中加入荧光标记的二抗，使其与已
结合的抗体形成复合物。
5.洗涤：对反应孔进行再次洗涤，以去除未结合的荧光标记的二抗。
6.酶标记：向反应孔中加入用酶标记的物质（如酶标记的抗体），使
其与已结合的荧光标记的二抗形成复合物。
7.洗涤：对反应孔进行最后一次洗涤，以去除未结合的酶标记化合物。
8.反应染色：向反应孔中加入染色物质，使其与酶标记化合物发生颜
色反应，形成分析结果。
最终，检测结果可以通过测量反应孔中染色物质的光密度或荧光强度
来评估样品中目标分子的浓度。
酶联免疫检测方法具有高灵敏度、高特异
性和高通量等优点，广泛应用于医学、生物工程、食品安全等领域。
免疫印迹 酶联免疫
免疫印迹酶联免疫
免疫印迹和酶联免疫都是生物化学和免疫学领域常用的实验技术，用于检测特定蛋白质的存在和浓度。
免疫印迹（Western blot）是一种用于检测特定蛋白质的技术，它通过将待测样品中的蛋白质
分离并转移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白结合，最终通
过显色或发光方法来检测蛋白质的存在和相对丰度。
免疫印迹技术
常用于研究蛋白质的表达和定量分析。
而酶联免疫（ELISA）是一种广泛应用于生物医学和生物化学领
域的实验技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在和浓度。
酶联免
疫的原理是利用酶标记的抗体或配体与待测物质结合，然后通过底
物的反应产生可定量的信号，从而检测样品中目标物质的存在和浓度。
ELISA技术具有高灵敏度和高特异性，常用于临床诊断、药物
筛选、生物学研究等领域。
从技术原理上来看，免疫印迹和酶联免疫都是利用抗体与特定
抗原结合的原理，但在实验步骤、操作流程和应用领域上有所不同。
免疫印迹主要用于研究蛋白质的表达和定量分析，而酶联免疫则更
广泛地应用于临床诊断和生物学研究中。
两种技术在科研和临床实
验室中都具有重要意义，能够帮助科学家和医生更准确地检测和分析样品中的蛋白质，为疾病诊断和药物研发提供重要信息。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物制药等领域。
它通过酶与抗原或抗体的特异性结合来检测样品中特定的蛋白质分子，具有高灵敏度、高特异性和简便易行的特点。
下面将详细介绍酶联免疫吸附法的原理。
首先，酶联免疫吸附法的基本原理是利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合，再通过酶底物的作用来间接或直接检测样品中的特定蛋白质。
整个实验过程可以分为固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步骤。
固相吸附是酶联免疫吸附法的第一步，通常将待检测的抗原或抗体通过物理吸附或共价结合的方式固定在固相载体（如微孔板）上。
这样做的目的是为了使待检测的抗原或抗体能够与酶标记的抗体或抗原发生特异性结合。
特异性结合是酶联免疫吸附法的关键步骤，它是指将酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合。
在这一步骤中，酶标记的抗体或抗原将与待检测的抗原或抗体形成免疫复合物，而非特异性结合则会被洗涤去除。
非特异性结合是指除了特异性结合外，固相载体上还可能存在一些非特异性结合的情况。
为了减少非特异性结合的干扰，需要通过洗涤的方式将非特异性结合的物质去除，以保证后续的酶底物反应的准确性和特异性。
最后，酶底物反应是酶联免疫吸附法的最后一步，当酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体发生特异性结合后，加入酶底物后，酶将催化底物的变化，产生可测量的信号。
通过测定信号的强度或颜色的变化，可以间接或直接检测样品中特定蛋白质的含量或存在情况。
总的来说，酶联免疫吸附法是一种基于酶与抗原或抗体的特异性结合来检测特定蛋白质的技术。
它通过固相吸附、特异性结合、非特异性结合和酶底物反应等步骤，实现对样品中特定蛋白质的高灵敏度、高特异性的检测。
在实际应用中，酶联免疫吸附法已经成为生物医学研究和临床诊断中不可或缺的重要技术手段。
elisa基本原理
elisa基本原理
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。
它的基本原理如下：
1. 固相吸附：首先，在试验板上吸附抗原或抗体。
通常使用多孔板（如96孔板），将要检测的抗原或抗体溶液加入到孔中，然后孔中的溶液经过吸附和固定，使抗原或抗体附着在孔壁上。
2. 样品处理：将待测样品加入到试验板中，与固定的抗原或抗体发生特异性的结合反应。
如果样品中存在目标抗原或抗体，它们将与固定在试验板上的抗体或抗原结合形成复合物。
3. 洗涤：通过洗涤步骤，将未结合的物质洗掉，以去除非特异性的成分，使只有特异性结合的复合物留在孔中。
4. 酶标记：加入酶标记的抗体或抗原，它们与目标抗原或抗体发生特异性的结合。
5. 洗涤：再次进行洗涤步骤，去除未结合的酶标记物。
6. 反应物添加：加入适当的底物，使酶标记物催化反应，产生可测量的信号。
常用的底物是染色剂，其颜色与酶标记物的酶活性成正比。
7. 反应停止：加入反应停止剂，停止底物的反应，防止颜色进一步发展。
8. 信号测量：使用光谱仪或酶标仪等设备测量反应产生的信号强度。
信号强度与目标抗原或抗体的浓度成正比。
通过比较待测样品与已知浓度标准曲线的信号强度，可以确定待测样品中目标抗原或抗体的浓度。
ELISA技术在生物医学研究、诊断和药物开发等领域广泛应用，可以检测多种疾病标志物和生物分子。
酶联免疫技术检测
结果
原理
类型
试剂 准备 对照 标本
1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相 抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与 固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗 涤除去其他未结合物质。 3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物 上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的 酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本 中受检抗原的量相关。 4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有 色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
结合物用的抗原和抗体
类型
制备结合物时所用纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其
试剂 准备 对照 标本
他杂蛋白的干扰。最好用层析纯化的抗体，这样全部酶结 合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应， 实验结果本底浅淡。在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总 的要求是抗原必须是高纯度的。
结果
封闭
原理
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质
类型
试剂 准备 对照 标本
溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填
这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附
。
常用封闭剂：0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1% 明胶;脱脂奶粉,比较价廉，可以高浓度使用（5%）。 所有的ELISA固相均需封闭？
2.2.4 竞争法测抗体
原理
类型
试剂 准备 对照 标本
酶联免疫吸附筛查法
酶联免疫吸附筛查法酶联免疫吸附筛查法（Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）是一种常用的实验室技术，用于检测和定量分析体内特定抗原或抗体的存在。
该技术结合了酶学和免疫学的原理，通过酶与抗原或抗体的特异性结合反应，将抗原或抗体检测的结果转化为颜色或荧光信号，从而实现对目标物的快速、准确的筛查。
ELISA技术的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合反应。
首先，将待测的抗原或抗体溶液加入到特定的酶标板孔中，使其与酶标抗体预先固定在孔中的抗原或抗体发生结合。
然后，经过一系列的洗涤步骤，去除未结合的物质。
接下来，加入含有特异性抗体的酶标抗体溶液，使其与孔中已结合的抗原或抗体形成抗原-抗体复合物。
再次进行洗涤步骤，去除未结合的酶标抗体。
最后，加入酶底物，酶与酶底物反应产生可测量的色素或荧光信号。
通过测量反应产生的信号的强度，可以定量地测定样品中抗原或抗体的浓度。
ELISA技术在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域得到了广泛的应用。
在医学诊断中，ELISA常用于检测和筛查疾病标志物，如病毒抗体、癌症抗原、药物残留物等。
在生物学研究中，ELISA可用于检测和定量分析细胞因子、激素、生长因子等生物活性物质。
在药物开发中，ELISA可用于药物代谢和药物动力学研究，评估药物的药效和药物浓度。
ELISA技术的优点之一是其高灵敏度和高特异性。
由于ELISA采用双抗体夹心法，即在特定抗原或抗体的两侧分别固定特异性抗体，从而增加了目标物与抗体的结合机会，提高了检测的灵敏度。
此外，ELISA可以同时检测多个样品，节省了时间和成本。
此外，ELISA的结果可以通过颜色或荧光信号的定量测量，使结果更加可靠和准确。
然而，ELISA技术也存在一些限制。
首先，ELISA对样品的处理和操作要求较高，操作流程较为繁琐，需要严格控制实验条件。
其次，ELISA对抗体的选择非常重要，需要具有高亲和力和高特异性的抗体，以确保准确的检测结果。
酶联免疫吸附的原理和应用
酶联免疫吸附的原理和应用引言酶联免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验技术，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发领域。
本文将介绍酶联免疫吸附的原理和应用。
原理酶联免疫吸附的原理基于酶标记抗体的特性以及抗原-抗体相互作用的特点。
其基本步骤如下：1.抗体的固定：将抗体固定在固相载体上，例如微孔板表面。
这可以通过物理吸附、共价结合或磁珠结合等方式实现。
2.抗原的结合：待测物中的抗原与固相上固定的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
这个步骤通常需要一定的时间和温度条件。
3.酶标记抗体的结合：将酶标记的二抗或二抗与固相上的抗原结合。
4.底物的添加：加入合适的底物，例如底物是酶底物，它在酶的作用下会发生可观测的染色反应。
染色反应的强度与待测物中抗原的浓度成正比。
5.信号检测：使用合适的装置（如酶标仪）测量染色反应的强度。
根据反应的强度来定量或定性待测物中的抗原。
应用酶联免疫吸附在生物医学研究、临床诊断和药物研发领域具有广泛的应用，包括以下几个方面：生物医学研究•蛋白质定量：酶联免疫吸附用于测定蛋白质的浓度，比如检测新药的剂量效应。
•蛋白质相互作用研究：通过将一种蛋白质固定在微孔板上，用来检测其他蛋白质与其之间的相互作用。
•病原体检测：酶联免疫吸附可以用来检测病原体，如细菌、病毒等。
•细胞因子测定：测定细胞因子的浓度，用于研究细胞内的信号传导等生理过程。
临床诊断•疾病标志物检测：酶联免疫吸附广泛应用于检测疾病标志物，例如癌症标志物、心肌损伤标志物等。
•传染病检测：用于检测传染性疾病的诊断，如艾滋病、流感等。
•自身免疫性疾病诊断：酶联免疫吸附可用于自身免疫性疾病的早期诊断，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
药物研发•药物代谢酶研究：酶联免疫吸附可用于药物代谢酶的研究，如肝脏中的细胞色素P450等酶。
•药物浓度测定：通过酶联免疫吸附可测定药物在体内的浓度，用于药物吸收、分布、代谢和排泄等研究。
酶联免疫法方法学确认
酶联免疫法方法学确认酶联免疫法（ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的免疫分析技术。
它通过特异性抗体与抗原结合，然后利用酶标记的二抗与一抗结合，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量测定目标物质的含量。
为了确保ELISA方法的准确性、可靠性和可重复性，需要进行方法学确认。
方法学确认主要包括以下几个方面：1. 线性范围：确定ELISA方法的检测范围，即标准曲线的最低和最高浓度。
通常要求线性范围至少覆盖待测样品中目标物质的最低和最高浓度。
2. 精确度：评估ELISA方法的测量结果与真实值之间的一致性。
可以通过重复测量同一浓度的标准品或质控品，计算均值、标准差和变异系数等指标来评价精确度。
3. 准确度：评估ELISA方法测量结果与已知真实值之间的符合程度。
可以通过将标准品或质控品与参考方法进行比较，计算回收率和偏差等指标来评价准确度。
4. 灵敏度：评估ELISA方法对低浓度目标物质的检测能力。
可以通过测量不同浓度的标准品，计算检出限和定量限等指标来评价灵敏度。
5. 特异性：评估ELISA方法对目标物质的识别能力，以及与其他类似物质的区分能力。
可以通过交叉反应试验和干扰试验等方法来评价特异性。
6. 精密度：评估ELISA方法在不同实验条件下的稳定性和重复性。
可以通过重复测量同一浓度的标准品或质控品，计算日内和日间变异系数等指标来评价精密度。
7. 试剂盒性能评估：对购买的商业试剂盒进行性能评估，包括线性范围、精确度、准确度、灵敏度、特异性和精密度等方面。
8. 质量控制：建立合适的质控体系，包括选择适当的质控品、确定质控规则和频率、监测系统误差等，以确保ELISA方法的稳定性和可靠性。
通过对ELISA方法进行严格的方法学确认，可以确保其在实际应用中的准确性、可靠性和可重复性，为生物医学研究和临床诊断提供有力支持。
酶联免疫技术名词解释
酶联免疫技术名词解释
酶联免疫技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫分析方法，通过将抗原或抗体与酶标记的抗体或抗原结合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
当酶标记的抗原-抗体复合物与固相载体上的抗原或抗体结合时，形成酶标记的抗原-抗体-酶复合物。
通过加入底物，酶催化底物生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度值，可以确定抗原或抗体的浓度。
该技术具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，被广泛应用于医学、生物科学、食品安全等领域。
在医学领域，酶联免疫技术可用于检测血清、尿液、组织等样本中的抗原、抗体和激素等生物活性物质；在食品安全领域，酶联免疫技术可用于检测食品中的农药残留、兽药残留和微生物等有害物质。
需要注意的是，酶联免疫技术也存在一些局限性，如操作繁琐、需要使用昂贵的试剂和仪器设备等。
因此，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的检测方法。
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附试验ELISA一种酶联免疫技术。
用于检测包被于固相板孔中的待测抗原（或抗体）。
即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。
酶联免疫吸附试验（以下简称ELISA）:是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。
因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。
目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。
1•辣根过氧化物酶（HRP）过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最咼，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%）,分子量约40000,约由300个氨基酸组成，等电点为pH3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH5左右。
此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。
酶联免疫吸附试验(双抗夹心法)原理
酶联免疫吸附试验（ELISA），又称酶联免疫吸附测定法，是目前广泛用于生物化学和免疫学领域的一种重要实验方法。
该技术结合了免疫学和生物化学的原理，能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，对临床诊断、生物医学研究以及生物制药等领域有着广泛的应用。
在本文中，我们将深入探讨酶联免疫吸附试验的原理、方法和应用。
一、酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验的原理主要是利用酶标记抗体、抗原和底物的相互作用来检测特定物质的存在。
在双抗夹心法中，试验基本步骤如下：1. 用待测抗原溶液在固相酶标记抗体包被的微孔板上，充分接触和结合。
2. 经洗涤后，底物溶液被加入，并与酶标记抗体包被的复合物结合。
3. 底物受酶催化分解后，生成有色产物，通过比色法测定其光密度，间接测定抗原的含量。
在实验过程中，我们不能忽视的是标本处理、试剂选用、仪器操作等一系列实验细节，这些都对实验结果的准确性和重复性有着重要的影响。
二、酶联免疫吸附试验的方法不同类型的酶联免疫吸附试验方法包括间接法、夹心法、竞争法和直接法等。
在这次我们重点讨论的是双抗夹心法。
该方法通过将待测抗原与固相酶标记抗体和液相抗体结合，从而提高了对待测抗原的灵敏度和特异性。
这种方法在免疫学研究、传染病诊断和药物检测等方面具有重要的应用价值。
除了双抗夹心法，间接法通过检测待测抗体也是常用的酶联免疫吸附试验方法。
在实验设计中，根据不同的研究目的和样本特性，我们可以选择不同的方法来进行实验设计和操作。
三、酶联免疫吸附试验的应用酶联免疫吸附试验在临床诊断、疫苗研制、传染病监测、生物药品开发等领域有着广泛的应用。
它能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，为疾病诊断和药物研发提供了重要的技术支持。
在临床诊断中，酶联免疫吸附试验被广泛应用于传染病的早期诊断和鉴定。
HIV抗体检测、甲型肝炎抗原检测等都是通过酶联免疫吸附试验来完成的。
酶联免疫吸附试验还被应用于药物和疫苗的开发和监控过程中，能够全面地评价新药和疫苗的免疫原性和保护效果。
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和数量。
其原理基于抗原-抗体的特异性结合作用以及酶的催化作用。
酶联免疫吸附试验的原理：酶联免疫吸附试验主要利用酶作为标记物，将待检测的抗原或抗体与其特异性抗体或抗原结合，再用酶标记抗体或抗原与待检测物结合，形成酶-抗原-抗体或酶-抗体-抗原复合物。
最后通过酶反应产生的色素变化或发光信号，来间接或直接定量分析待检测物的含量。
酶联免疫吸附试验的基本步骤：1.固相抗原或抗体的吸附：在反应板的孔中吸附抗原或抗体。
一般采用多孔吸附板作为载体，将抗原或抗体溶液加入孔中，经过一段时间的孵育后，以使抗原或抗体与孔板表面结合。
2.无特异性位点的封闭：将未被吸附的非特异性蛋白质如牛血清蛋白（BSA）添加到孔中，对未被特异性抗原或抗体吸附的区域进行封闭，防止非特异性结合的发生。
3.加入标记物：加入被标记的抗体或抗原，使其与孔中的特异性抗原或抗体发生特异性结合。
常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。
4.洗涤：用缓冲液洗涤孔中多余的未结合抗体或抗原，降低非特异性背景。
5.底物反应：加入适当的酶底物，酶底物与酶结合发生催化反应，使底物产生颜色或发光等可检测的反应产物。
6.反应终止：加入终止剂，停止底物的反应，防止颜色或发光信号进一步变化。
7.读取结果：使用酶标仪或光度计测定标记物的颜色或发光强度，根据标准曲线计算出待检测物的浓度。
总体来说，酶联免疫吸附试验通过特异性抗原-抗体结合和酶催化反应，可以间接或直接测定体内特定抗原或抗体的含量，具有灵敏度高、特异性强和操作简便等优点，因此在医学诊断、病毒学研究和生物学实验等领域得到广泛应用。
elisa酶联免疫吸附试验简答题
elisa酶联免疫吸附试验简答题Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用于生物医学研究和诊断的实验技术。
它是通过利用抗原和抗体的特异性结合来检测和测量目标物质的方法。
Elisa技术基本上是将目标物质与特异性抗体结合，然后用酶标记的二抗检测结合物质，最后通过酶底物的反应生成可测量的信号。
Elisa可以分为直接elisa、间接elisa、竞争elisa和夹心elisa等不同类型。
不同类型的Elisa方法在操作步骤和原理上有所差异，但基本原理是一样的。
在实验操作中，首先需要选择适合的抗体，包括特异性抗原抗体和酶标记的二抗。
特异性抗原抗体是用来特异性地结合目标物质的抗体，而酶标记的二抗则是用来检测特异性抗原抗体的结合情况。
常用的酶标记剂包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。
选择合适的抗体和酶标记剂对于Elisa的灵敏度和特异性非常关键。
Elisa的操作步骤通常包括以下几个关键步骤：1.试样处理：将待检测的样品加入试管中，可以根据需要进行预处理，如离心、稀释等。
2.固定抗原：将特异性抗原加入试管中，与试样中的目标物质结合。
3.洗涤：通过洗涤，去除未结合的物质，减少非特异性的结合。
4.加入特异性抗原抗体：将与目标物质特异性结合的抗体加入试管中，与固定抗原结合。
5.洗涤：再次洗涤，去除未结合的抗体。
6.加入酶标记的二抗：加入酶标记的二抗，它结合到特异性抗原抗体上。
7.洗涤：再次洗涤，去除未结合的二抗。
8.加入底物：加入适当的酶底物，在酶的作用下产生染色反应。
9.反应停止：通过加入适当的反应停止剂，停止酶底物的反应。
10.测量：使用相关仪器测量反应产物的信号强度，通常可以通过光密度或荧光信号来测量。
通过测量信号的强度，可以确定样品中目标物质的含量。
Elisa具有灵敏度高、特异性强的优点，并且可以同时对多个样品进行测量，是一种非常常用的实验方法。
Elisa技术在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相 化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标 记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越 多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单， 纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新 型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测 更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗 原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体 的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原 理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定 在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除 未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记 的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催 化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应 用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一 种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得 了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来 越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通 过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。
酶联免疫(ELISA)技术
ELISA技术ELISA是一种免疫测定。
免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。
在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
一、抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。
抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。
在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。
能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等。
小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。
例如某些激素、药物等。
抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。
一个抗原分子可带有不同的决定簇，例如中可带有等决定簇。
二、抗体1．抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。
Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。
与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。
Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。
Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。
五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。
IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。
图1 IgG的结构见图①木瓜酶裂解部位；②胃蛋白酶裂解部位图2 重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序: 因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。
两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合，是抗体专一性结合抗原的结构基础。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。
每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。
另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个Fab双体，称F（ab'）2，能和两个相同的抗原结合；另一片段类似Fc，随后被分解成小分子多肽，无生物活性IgM是由五个单体组成的五聚体，含10个重链和10个轻链，具有10个抗原结合价，由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价。
elisa综述
酶联免疫法（Elisa）ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。
在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
一、ELISA的基本应用方法方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
(简称洗涤，下同)。
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
酶联免疫吸附试验名词解释
酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量测量体液或组织中特定抗原或抗体的存在。
以下是对ELISA的各个部分和步骤的解释：酶联（Enzyme-Linked）：ELISA利用酶的特性将目标分子（抗原或抗体）与检测信号相关联。
常用的酶有辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）和碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）。
这些酶可以催化底物的反应，产生可定量测量的光学信号。
免疫（Immuno）：ELISA利用抗原和抗体之间的特异性免疫反应。
在ELISA中，试验板的表面被覆盖或固定上特定抗原或抗体，以捕获待测样本中的目标分子。
吸附（Sorbent）：试验板表面上固定的抗原或抗体能够吸附或结合待测样本中的特定抗体或抗原。
这种特异性结合是ELISA测量的基础。
试验步骤：ELISA通常包括以下步骤：捕获：将特定抗原或抗体固定在试验板表面，使其能够与待测样本中的目标分子结合。
样本加入：待测样本（例如血清、尿液或细胞上清）被加入试验板孔中，与固定的抗原或抗体发生特异性结合。
洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合的物质，以减少背景信号。
探针加入：添加与目标分子特异性结合的酶标记抗体或抗原，与待测样本中的目标分子进一步结合。
洗涤：再次进行洗涤步骤以去除非特异性结合的物质。
底物加入：加入适当的底物，允许酶催化反应，生成可测量的光学信号。
读数：通过光度计或荧光检测器测量底物反应产生的光学信号强度，从而确定目标分子的存在和数量。
ELISA在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域广泛应用。
它可以用于检测病原体感染、抗体水平测定、药物浓度测定等多种应用。
ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简便和可扩展性的优点。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
深圳市宝安康生物技术有限公司
原理
酶联免疫技术（ELISA)
深圳市宝安康生物技术有限公司 技术中心
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 ------微生物法
1、仅适于抗生素总残留的检测，目前在牛 奶的抗生素检测中占据一定市场． 2、优点：为成本较低、检测速度较快; 3、缺点：不能区分具体的抗生素药物，灵 敏度和特异性相对较低．
结果
原理
1. 2. 3.
ELISA的原理 ELISA的类型 试剂准备：免疫吸附剂
类型
试剂 准备 对照 标本
结合物
酶底物的准备
4.
5.
对照设定
标本的采取和保存
结果
6.
结果判断
原理
1.
ELISA的原理
类型
试剂 准备 对照 标本
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。基础:抗 原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，加入酶反应的 底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 ---利用抗原抗体的特异性反应作为识别手段，用酶催化底 物等方法作为显示系统，用微孔板等材料作为载体和分 离系统的一种生物学检测方法。 ---结合物与相应的抗原（抗体）反应后，结合的酶仍能催 化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量待测物的含 量。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 -----酶联免疫测定法
1、将抗原与抗体反应和酶化学反应结合到一起的
类型
试剂 准备 对照 标本
测定技术，近年来已研发出多种ELISA检测试 剂盒用于检测动物组织中的药物残留。 2、具有灵敏度高、快速、特异性强的特点，所需 仪器化程度低和样本前处理相对简单，特别适 于现场监控和大量样本筛查。 3、现用于兽药残留检测的试剂盒，如国外德国 R-Biopharm，国内深圳绿诗源、北京望尔等。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 -----生物芯片法
1、生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成 或微量点样等方法，将大量抗原等有序地固化于 支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙 膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然 后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过 特定的仪器，比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄 影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、 并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子 的数量. 2、主要特点是高通量、微型化和自动化 ，因涉及 技术和仪器问题，目前还不能普及应用．
结果
原理
酶免疫测定类型
类型
试剂 准备 对照 标本
酶免疫组化 酶免疫技术 酶免疫测定 非均相酶免疫测定 固相酶免疫测定 液相酶免疫测定 均相酶免疫测定
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫 吸附剂测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简 称ELISA。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
酶 抗原
方法一:直接竞争法(包抗体)
酶标记抗原 样本/标 品(抗原)
类型
试剂 准备 对照 标本
1.将抗体包被在固相载体上。 2.加入样品和酶标记抗原, 两 者竞争板上的抗体. 3.酶催化底物并显色。
抗体
方法: 反应步骤少,操作简单; 特异性不如间接竞争法.
结果
固相载体
原理
酶 抗抗 体
酶标记 抗抗体
方法二:间接竞争法(包被抗原)
1.将抗原包被在固相载体上。 2.加入样本和抗体后，若样本中 含有抗原，则将和板上抗原竞争结 合加入的抗体。 3.再加入酶标记抗抗体，则结合 为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。 4.酶催化底物并显色
结果
原理
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点
类型
试剂 准备 对照 标本
之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
结果
原理
1.1.3
最适比例
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法
----物理化学法
1、如液相色谱(HPLC) 、气相色谱(GLC) 、质谱 (MS) 、薄层色谱法(TLC) 等，可用于鉴定和 定量。 2、优点：分离度好、专属性强，常常可以同时测 定几种药物。 3、缺点：需要专门仪器和熟练技术的分析人员， 而且需要复杂的样品前处理和高纯度的化学试 剂。由于样本前处理设备多、测定操作烦琐和 费用高，在基层实验室推广和使用受到限制。 因而检测大批样本较为困难。
结果
原理
1.1 抗原抗体反应
1.1.1 可逆性
类型
试剂 准备 对照 标本
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为：
Ag+Ab→Ag· Ab
抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示： K=[Ag· Ab]／[Ag][Ab] ,Ag· Ab的解离程度与K值有关。高亲 和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常 适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗体均 能保持原有的结构和活性。Leabharlann 类型试剂 准备 对照 标本
结果
原理
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
类型
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备
试剂 准备 对照 标本
特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可 检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。
结果
原理
ELISA的类型
一、双抗体夹心法：测抗原 （成正比） 双抗原夹心法：测抗体（成正比） 二、间接法：检测抗体常用的方法。 （成正比） 三、竞争法：测抗体 （成反比） 竞争法：测抗原 （成反比） 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的位点，因 此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。 其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相 抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶 标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等 ELISA测定多用此法。