酶联免疫技术

类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法
----物理化学法
1、如液相色谱(HPLC) 、气相色谱(GLC) 、质谱 (MS) 、薄层色谱法(TLC) 等，可用于鉴定和 定量。 2、优点：分离度好、专属性强，常常可以同时测 定几种药物。 3、缺点：需要专门仪器和熟练技术的分析人员， 而且需要复杂的样品前处理和高纯度的化学试 剂。由于样本前处理设备多、测定操作烦琐和 费用高，在基层实验室推广和使用受到限制。 因而检测大批样本较为困难。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 -----生物芯片法
1、生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成 或微量点样等方法，将大量抗原等有序地固化于 支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙 膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然 后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过 特定的仪器，比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄 影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、 并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子 的数量. 2、主要特点是高通量、微型化和自动化 ，因涉及 技术和仪器问题，目前还不能普及应用．
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
类型
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备
试剂 准备 对照 标本
特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可 检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。
结果
原理
ELISA的类型
一、双抗体夹心法：测抗原 （成正比） 双抗原夹心法：测抗体（成正比） 二、间接法：检测抗体常用的方法。 （成正比） 三、竞争法：测抗体 （成反比） 竞争法：测抗原 （成反比） 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的位点，因 此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。 其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相 抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶 标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等 ELISA测定多用此法。
结果
原理
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点
类型
试剂 准备 对照 标本
之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
结果
原理
1.1.3
最适比例
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
结果
原理
1.1 抗原抗体反应
1.1.1 可逆性
类型
试剂 准备 对照 标本
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为：
Ag+Ab→Ag· Ab
抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示： K=[Ag· Ab]／[Ag][Ab] ,Ag· Ab的解离程度与K值有关。高亲 和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常 适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗体均 能保持原有的结构和活性。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 -----酶联免疫测定法
1、将抗原与抗体反应ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ酶化学反应结合到一起的
类型
试剂 准备 对照 标本
测定技术，近年来已研发出多种ELISA检测试 剂盒用于检测动物组织中的药物残留。 2、具有灵敏度高、快速、特异性强的特点，所需 仪器化程度低和样本前处理相对简单，特别适 于现场监控和大量样本筛查。 3、现用于兽药残留检测的试剂盒，如国外德国 R-Biopharm，国内深圳绿诗源、北京望尔等。
结果
原理
酶免疫测定类型
类型
试剂 准备 对照 标本
酶免疫组化 酶免疫技术 酶免疫测定 非均相酶免疫测定 固相酶免疫测定 液相酶免疫测定 均相酶免疫测定
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫 吸附剂测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简 称ELISA。
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
酶 抗原
方法一:直接竞争法(包抗体)
酶标记抗原 样本/标 品(抗原)
类型
试剂 准备 对照 标本
1.将抗体包被在固相载体上。 2.加入样品和酶标记抗原, 两 者竞争板上的抗体. 3.酶催化底物并显色。
抗体
方法: 反应步骤少,操作简单; 特异性不如间接竞争法.
结果
固相载体
ELISA 知识简介
深圳市宝安康生物技术有限公司
原理
酶联免疫技术（ELISA)
深圳市宝安康生物技术有限公司 技术中心 www.baksz.com
类型
试剂 准备 对照 标本
结果
原理
常用的检测方法 ------微生物法
1、仅适于抗生素总残留的检测，目前在牛 奶的抗生素检测中占据一定市场． 2、优点：为成本较低、检测速度较快; 3、缺点：不能区分具体的抗生素药物，灵 敏度和特异性相对较低．
结果
原理
1. 2. 3.
ELISA的原理 ELISA的类型 试剂准备：免疫吸附剂
类型
试剂 准备 对照 标本
结合物
酶底物的准备
4.
5.
对照设定
标本的采取和保存
结果
6.
结果判断
原理
1.
ELISA的原理
类型
试剂 准备 对照 标本
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。基础:抗 原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，加入酶反应的 底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 ---利用抗原抗体的特异性反应作为识别手段，用酶催化底 物等方法作为显示系统，用微孔板等材料作为载体和分 离系统的一种生物学检测方法。 ---结合物与相应的抗原（抗体）反应后，结合的酶仍能催 化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量待测物的含 量。
原理
酶 抗抗 体
酶标记 抗抗体
方法二:间接竞争法(包被抗原)
1.将抗原包被在固相载体上。 2.加入样本和抗体后，若样本中 含有抗原，则将和板上抗原竞争结 合加入的抗体。 3.再加入酶标记抗抗体，则结合 为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。 4.酶催化底物并显色