感染性疾病血清标志物质量保证范文

感染性疾病血清学标志物检验质量保证

一、定义

•质量保证( Quality Assurance,QA):为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。

•室内质量控制（Internal Quality Control,IQC):由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。

•室间质量评价（External Quality Assessment, EQA ):为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA 用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力验证（Proficiency testing, PT )。在以前的文献中，EQA 常描述室间质量控制。

•批( Run)：在相同条件下所获得的一组测定。

•均值（Mean）

•标准差（Standard deviation,SD或s)

•变异系数（Coefficient of variation,CV）

•正态分布(Gaussian distribution):当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。

•正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。

二、临床实验室常规检验步骤

（一）标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。

（二）实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、检测、测定的有效性和临床诊疗价值。（三）报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。

（四）质量保证、室内质控和室间质评之间的关系

三、临床免疫检验方法

（一）三大“标记”免疫检验技术:荧光标记、放射性核素标记和酶标

（二）其它标记免疫测定技术：发光物标记、金标、元素标记等

（三）免疫沉淀和免疫凝集试验

四、感染性疾病血清学标志物

肝炎病毒标志物：HBsAg 、抗HCV 等、抗HIV、梅毒抗体、其它抗原、抗体。

五、检验方法

１、ELISA

２、应用酶标原理的自动化分析仪

３、应用其它标记物的自动化分析仪

４、RIA

六、自动化免疫分析仪的基本原理

１、基本上均为固相免疫测定，固相以磁性微粒最为普遍，其次是聚丙烯微孔板条和试管。２、均为标记免疫测定，标记物最常用的是酶（碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），其次是元素，发光标记物等；

３、通常采用发光或荧光测定方式（常使用的酶发光或荧光底物如AMPPD （Dioxetanes), 鲁米诺，4-甲基伞型酮磷酸盐等；

七、酶联免疫吸附试验（ELISA ）

（一）影响ELISA 测定的因素

１、试剂盒的因素

（１）实验操作

（２）影响ELISA 试剂盒质量的因素

Ａ、固相材料:聚苯乙烯塑料

Ｂ、抗原:纯化、合成和基因工程抗原

Ｃ、抗体：多抗、单抗和基因工程抗体

Ｄ、酶结合物：酶免疫测定的核心成份

Ｅ、色原底物：OPD 和TMB

Ｆ、运输贮存

（二）酶免疫测定操作中的注意事项

１、标本的收集、运送和保存

Ａ、标本类型及采集容器

ａ、最常用的标本：血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液。

ｂ、建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。采集容器最好为一次性无菌密闭容器。

Ｂ、标本采集时间及患者准备

ａ、激素和治疗药物：可的松峰值在早晨4～6点之间；生长激素、促黄体激素（LH ）和促卵泡激素（FSH ）均以阵发性方式释放，须在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。

ｂ、感染性病原体抗原、抗体

ｃ、肿瘤标志物

ｄ、特定蛋白

ａ、内源性干扰因素：类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋白浓度等

ｂ、外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融

Ｄ、标本的保存

用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2 -8℃。

２、试剂准备

（１）从冰箱中取出的试剂，待温度与室温平衡后使用；

（２）所用蒸馏水或去离子水应保证质量。

３、加样

（１）加样不可太快，避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。

（２）从滴瓶中滴加试剂，除了要注意滴加角度外，滴加速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。

（３）全自动加样系统的标本“交叉污染”问题

加样器

加样器的类型

（１）单道连续可调式移液器

（２）多通道连续可调式移液器

（３）单道连续移液器

（４）单道移液管配合使用的移液器

P 型移液器的型号和取液范围

（１）型号所用量程范围（μL ）

（２）GILSON eppendorf

（３）P2 0.1 ? 2

（４）P10 0.5 ? 10 0.5 ? 10

（５）P20 2 ? 20 2 ? 20

（６）P100 20 ? 100 10 ? 100

（７）P200 30 ? 200 20 ? 200

（８）P1000 200 ? 1000 100 ? 1000

加样器的使用

吸液的位置

（１）把按钮压至第一停点垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定：（２）P2 和P10 ≤1mm

（３）P20 和P100 2 -3mm

（４）P200 和P1000 2 -4mm

（５）P5000 3 -6mm

（６）P10ML 5 -7mm