中药显微鉴别技术讲义3

按剂型不同，分别处理样品，按粉末 制片法装片观察。
1)散剂、胶囊剂 可直接取出粉末（内容物为颗粒状的 应研细）装片，或透化装片。
2) 片剂
可取2~3片，水丸、糊丸、水蜜丸、 锭剂等（有包衣者除去包衣）取数丸或 1~2锭，置于乳钵中研细，取出适量粉末 装片，或透化装片。
3) 蜜丸剂
样品可用两种方法处理： (1)用解剖刀沿蜜丸正中切开，从切面由外至内刮取少许 样品，置载玻片中央，滴加适宜的试液，用玻璃棒搅匀。 按上述粉末制片法装片，或透化装片。 (2)将样品切碎放入容器，加水搅拌洗涤，然后置离心管 中离心、沉淀。也可置超声仪中处理少时，以助样品分散。 如此反复以除尽蜂蜜后，取沉淀或透化后装片。
偏光下的草酸钙晶体与淀粉粒
5、倒置生物学显微镜
6、扫描电子显微镜
扫描电镜 工作原理
扫描电子显微镜（简称扫描电镜）
分辨率高，放大倍率5~100,000，能使物 质的图像呈现显著的表面立体结构特征，样 品制备操作又较简易。在药材鉴定，特别在 同科属种间的表面结构的鉴别比较上，已成 为一种新的手段。 如：扫描电子显微镜用于研究花粉粒、种 皮和果皮的表面纹饰，茎、叶表皮组织的结 构(毛茸、腺体、气孔、角质层、蜡层、分 泌物等) 的细微特征，木类药材的解剖以及 动物体壁、鳞片及毛等的鉴别。
制片的预处理——软化
软化方法可采用放在吸湿器中闷润，或在水中浸 软或煮软。经软化处理的材料，检查软化是否合适， 可用刀片切割材料，若较容易切下薄片，则表示软 化适宜。有些根、根茎、茎及木类药材，质地较坚 实，可将削平的切面浸水中片刻，待表面润湿时取 出，直接切片也能切成较完整的薄片。过于柔软的 样品，可将其浸入70%~95%乙醇中，约20分钟后可 变硬些，再切片。
2) 滑走切片机切片
此法不需要较高的技巧，只要了解掌握 操作方法，短时间内即可学会并切出较 薄的切片，适用于切质地坚实、形状较 大的药材样品，柔软的样品经冷冻处理 亦可切得较薄的切片。
切片前：
应检查切片机是否稳固，并调试刀具。 将切片刀夹持在夹刀器上夹紧，调整刀的角 。 。 度(约0 ~15 )；调整厚度调节器至所需厚度。 把制备好的样品用两块软木夹住或直接放在 切片机的材料固定器上夹紧夹正，使样品露 出软木块或固定器上端0.5cm，调整好样品高 度，使刀刃靠近样品的切面且平行并略高于 刀刃约0.5~1mm。
7.3.2 粉末制片
主要用于粉末状的药材及药材粉末制成 的成方制剂的观察。 4.2.l 药材粉末制备 取干燥药材，磨或 锉成细粉（通常应过80目以上药筛），装瓶， 贴上标签。制备粉末时，注意取样的代表性。 例如：根类药材要切取根头、根中段及根尾 等部位，并全部磨粉，过4号筛，混合均匀， 不得丢弃渣头。干燥时，一般温度不能超过 60℃，避免淀粉粒糊化，有碍观察。
主要用途：
作为动物学、植物 学、昆虫学、组织学、 矿物学、考古学、地质 学和皮肤病学等的研究 和解剖工具。
电脑型连续变倍体视显微镜
SZX-16 研究用
电脑（数码相机）型连续变倍体视显微镜
它观察物体时能产生正立的三维空间像， 立体感强，成像清晰和宽阔，具有较长的工作 距离，，并可根据观察物的特点选用不同的反 射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规 显微镜。 对同一物体可实现连续放大倍率观 看,可能直接电视机或电脑上观察实物图像。
7.2.8 硝铬酸试液 此液为常用的“植物 组织解离液”。各检品的解离浸泡时间，按 材料的质地不同而异。 7.2.9 α-萘酚试液 此液可使菊糖染成紫 红色，并很快溶解。 3.1l 氯化锌碘试液 此液用于检查木质化 与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝 色或紫色。
7.3 显微标本的制作
7.3.1 横切制片或纵切制片 7.3.1.1 药材的预处理 将应观察的部位、切 成适当大小的块或段，一般以宽lcm、长3cm为宜， 切面削平整。质地软硬适中的样品可直接进行切 片；质地坚硬的则需先使其软化后再切片。

在偏光显微镜下，药材的鉴别要素在色彩上 表现出一定的变化，可作为大多数植物、动物、 矿物类药材的显微鉴别 依据之一。如植物的 淀粉在偏光显微镜下呈现黑十字现象，不同类型 的淀粉其黑十字形象不同（图2）；草酸钙结晶 类型多样，在偏光显微镜下呈不同的多彩颜色 （图2）；石细胞在植物体内广泛分布，其细胞 壁在偏光显微镜下呈亮黄色或亮橙黄色；纤维、 导管在偏光显微镜下则呈强弱不同的色彩；动物 的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈现出 不同的偏光特性；矿物类物质多具有偏光特性。
3 试液——染色剂
7.2.4 苏丹Ⅲ试液 此液可使木栓化、角质化细胞 壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。 7.2.5 钌红试液（临用新制）此液可使粘液染成红 色。 7.2.6 间苯三酚试液 此液与浓盐酸合用，可使木 化细胞壁染成红色或紫红色。 7.2.7 碘试液（临用现配。应置棕色瓶内保存）此 液可使淀粉染成蓝色或紫色；蛋白质或糊粉粒染成棕 色或黄棕色。
切片时
用右手握夹刀器柄，往操作者方向迅速拉动， 切下的切片附着于刀的表面上，用毛笔蘸水把切 片取下放于盛水的培养皿中。将刀推回原处，转 动厚度推进器，用毛笔蘸水润湿材料切面及刀刃， 再拉刀柄，往返推拉，可得到许多厚度均匀完整 的切片。若切片不成功，应检查切片刀是否太钝， 则应磨刀或换锋锐的切片刀，若切得太薄而破碎， 则逐渐增加厚度至能切得完整的薄片为度。注意： 夹持在材料固定器上的样品切面接近于固定器上 端时，必须注意防止切片刀刃碰撞固定器而损毁 切片刀。
7.2.2 粉末制片
用解剖针挑取样品粉末少许，置载玻片的中 央，加适宜的试液1滴，用针搅匀(如为酸或碱 时应用细玻棒代替针)，待液体渗入粉末后，用 左手食指与拇指夹持盖玻片的边缘，使其左侧 与药液层左侧接触，再用右手持小镊子或解剖 针托住盖玻片的右侧，轻轻下放，则液体逐渐 扩延充满盖玻片下方。如液体未充满盖玻片， 应从空隙相对边缘滴加液体，以防产生气泡； 若液体过多，用滤纸片吸去溢出的液体，最后 在载玻片的左端贴上标签或书写上标记。
小 孢 子 囊 及 小 孢 子 微 形 态 差 异
十 三 种 卷 柏 大 孢 子 微 形 态 差 异
使用显微镜的注意事项
合理制片，盖玻片上不得有试液残留，避免污染 物镜及载物台，损伤镜头。 转动物镜转换器，由低到高逐级变换、选用合适 放大倍数的物镜观察。 使用40倍物镜时，可用细螺旋调节焦距，禁止用 粗螺旋调节；也不得移动载玻片。 根据观察物象，选择偏光条件确认特征。 用毕，应将最小物镜与通光孔相对，关闭光源， 罩好，收置起来。 显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭。
1) 徒手切片法切片
一手持刀片，另一手拇指和食指夹持样品， 中指托着样品的底部，使样品略高出食、拇二指； 肘关节应固定，使样品的切面保持水平，刀口向 内并使刀刃自前向后切削，即可得薄切片。 操作时，材料的切面和刀刃须经常加水或50% 乙醇保持湿润，防止切片粘在刀片上。切好的切 片用毛笔蘸水轻轻从刀片上推入盛有水或50％乙 醇的培养皿中。

7、常用制片法 ——永久片制作技术
药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴 定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久 切片)，因制成的石蜡切片外形较完整，厚薄 均匀，且可制得连续切片，观察时方便，又能 长期保存。但由于制片技术较复杂，费时太多， 不适用于日常检验。
常用制片法 ——临时制片技术
徒手切片或滑走切片法： 表面装片：为观察叶类、花类及全草类药材的叶 片、花冠、萼片、苞片等的表皮组织及其附属物 的特征。 解离组织装片：可清楚地观察比较坚硬的细胞组 织，如导管、纤维、石细胞等的形态。 花粉粒与孢子制片法：观察花粉粒、孢子等的形 态特征或构造，需用花粉粒与孢子制片法制片。 磨片法：观察矿物药或较坚硬的动物类药材如珍 珠、石决明及动物骨骼，可采用磨片法制片。
7.3.3 显微化学分析
丁香切片滴加3%氢氧化钠的氯化钠饱 和液，油室内有针状丁香酚钠结晶析出； 北柴胡横切片加无水乙醇-浓硫酸1：1液， 木栓层、栓内层和皮层显黄绿色至蓝绿色。
Байду номын сангаас 7.3.4 微量升华法
利用药材所含成分有升华现象，置显 微镜下观察结晶形状、色泽。如大黄，可 见菱状针状或羽状结晶。
7.3.5 成方制剂粉末装片
注意：
加热温度不能过高，以防水合氯醛试液沸腾， 使组织内带入气泡；加热时应将载玻片不断移 动，以免受热不匀而炸裂。透化后放冷，加甘 油乙醇试液l~2滴后加封盖片，贴上标签。冬日 室温较低时，透化后不待放冷即滴加甘油乙醇 液，以防水合氯醛结晶析出而妨碍观察。水合 氯醛试液能使已收缩的细胞膨胀，便于清楚地 观察组织构造；可溶解淀粉粒、蛋白质、叶绿 体、树脂、挥发油等，对草酸钙结晶无作用， 为观察草酸钙结晶的良好试剂。如需观察菊糖 等一些多糖物质则加水合氯醛试液不加热。
7.1 仪器和用具
仪器
生物学显微镜（最好具有2.5×或4×物镜头及偏光装 置）、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像 处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超 声仪等。
用具
放大镜、刀片、镊子、剪刀、解剖针 载玻片、盖玻片
7.1 仪器和用具
吸湿器（即玻璃干燥器改装成底部放入蒸馏水 加微量苯酚防霉，上部瓷板上置药材样品，利用 潮气润湿药材样品） 培养皿或小烧杯、酒精灯、试管，试管架、滴 管、玻璃棒、乳钵、绸布、滤纸、火柴等。
** 含挥发性成分的制剂
7.3.1.3 装片
选取薄而平整的切片置载玻片上，根 据所要观察的内容要求，滴加适宜的试 液1~2滴，盖好盖玻片，即可在显微镜下 观察。为防止较大的切片弯卷，可选取 理想的切片，用两张载玻片夹住，浸于 水中放置4小时使材料压平，放入95%乙 醇中固定，甘油装片观察。
透化
在载玻片上放有切片处滴加1~2滴水合 氯醛试液，置载玻片于酒精灯上方微微加 热，至边缘起小泡即停止加热，可继续补 充试液再加热，以不烧干为度，直至切片 透化完全为止。