HPLC法测定黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量

HPLC法测定黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量

发表时间：2009-05-25T12:22:30.293Z 来源：《中小企业管理与科技》2009年4月上旬刊供稿作者：龙朝津[导读] 建立黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量测定方法。

摘要：目的：建立黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC），以C18柱为色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）为流动相；柱温40℃；检测波长为345nm测定。结果：盐酸巴马汀在24.74μg/ml～98.96μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为99.50%，RSD%为0.64%（n=9）。结论：HPLC法快速、准确、重现性好，能用于黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量测定。

关键词：盐酸巴马汀黄藤素栓 HPLC法含量测定

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪（SPD-10AVP型可见—紫外检测器；SPD-10ATVP溶剂输送泵），日本岛津制造所。紫外可见分光光度计（UV-2550），日本岛津制造所。试药：盐酸巴马汀对照品（中国药品生物制品检定所提供）；黄藤素栓、黄藤素阴性栓（公司制备）；乙腈为色谱纯；水为去离子水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件以C18柱（迪马；250mm×4.6mm；5μm）为色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）为流动相；柱温40℃；检测波长为345nm；流速1.0ml/min。理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于5000。

2.2 测定法取样品切碎，取1.5g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量，置温水浴中使溶解，放置至室温，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入色谱仪，记录色谱图；取盐酸巴马汀对照品12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

2.3 检测波长的选择取盐酸巴马汀对照品适量，用水溶解并稀释制成1ml中约含10μg的溶液，在190～600nm范围内进行紫外扫描。结果在225nm、273nm、342nm与421nm的波长处有最大吸收。从溶剂背景吸收、方法灵敏度和系统稳定性综合考虑，确定吸收值较大且无溶剂背景干扰的345nm作为检测波长。

2.4 专属性试验照2.2项下方法制备供试品溶液和对照品溶液。取黄藤素阴性栓切碎，称取1.5g，照供试品溶液制备方法制备，作为阴性溶液。在2.1项下色谱条件测定，结果盐酸巴马汀对照品主峰保留时间和供试品主峰保留时间基本一致，阴性溶液在主峰处没有吸收峰，不干扰盐酸巴马汀含量测定，专属性良好。

2.5 线性试验称取盐酸巴马汀对照品12.37mg，置25ml量瓶中，加水溶解，摇匀，作为对照品储备液。精密量取该溶液0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml和2.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取该系列溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度C（μg/ml）为横坐标，峰面积A为纵坐标，作回归方程：A=19810.863C+20234.757，r=0.9999（n=5）。表明盐酸巴马汀对照品溶液在24.74μg/ml～98.96μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系。

2.6 回收率试验取黄藤素（盐酸巴马汀含量按98.35%计）40mg、50mg、60mg，精密称定，按100%处方比例称取辅料，置100ml量瓶中，加水适量，置温水浴中使溶解，放置至室温，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。每一浓度平行制备三份，编号，作为供试品溶液。取2.5项下对照品储备液，精密量取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液。精密量取各溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。测定结果见表1。结果表明黄藤素回收率的平均值为99.50%，RSD%为0.64%，本法测定含量的回收率良好。

2.7 重复性试验取同批号黄藤素栓，照2.2项下方法平行制备六份供试品溶液，测定含量。结果含量测定平均值为99.67%，RSD%为0.68%，表明本法测定含量的重复性良好。

2.8 中间精密度试验由不同的实验员、在不同时间、不同的液相色谱仪上测定同一批号黄藤素栓含量。结果样品含量测定平均值为99.00%，RSD%为1.14%，表明本法测定含量的中间精密度良好。

2.9 稳定性试验照2.2项下方法制备供试品溶液，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时测定。结果供试品溶液在8小时内峰面积的RSD%为0.58%，供试品溶液稳定性良好。

2.10 样品含量测定取3个批号样品照2.2项下方法测定含量。结果见表2。

3 讨论

黄藤素栓为卫生部药品标准WS-346(X-289)-94所收载的品种，对真菌有抑制作用，尤其是对白色念珠菌、石膏样毛菌、裴氏着色菌作用较强。用于念珠菌性外阴阴道炎。原标准中，黄藤素栓的含量测定采用重量法，此法繁琐、费时（需静置过夜），不便于生产中半成品及成品质量控制。为提高工作效率，方便工艺研究与生产，我们建立了高效液相色谱法测定黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量。参考文献：

[1]中华人民共和国药典2005年版（一部）[S].北京：化学工业出版社.2005：215.