实验室常用培养基的配制方法.
LB配料
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)IPTG(24 mg/ml)X-Gal (20 mg/ml)LB 培养基■ 组份浓度100 mg/ml Ampicillin■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量5 g Ampicillin 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。
■ 组份浓度24 mg/ml IPTG■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1.2 g IPTG 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。
■ 组份浓度20 mg/ml X-Gal■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1 g X-Gal 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。
3. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。
■ 组份浓度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称量下列试剂,置于1 L 烧杯中。
Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH 值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,4℃保存。
TB 培养基0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/ml Ampicillin■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L 烧杯中。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法在实验室中,培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础,正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同,因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基,并掌握正确的配制方法。
接下来,我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基(LuriaBertani 培养基)LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基,其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基,所需材料如下:胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤:1、称取上述成分,将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水,用玻璃棒搅拌,直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70(通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节)。
5、将培养基分装到锥形瓶中,每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞,用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中,在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基,适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基,需要准备以下材料:牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下:1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水,搅拌溶解。
3、定容至 1L,搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌,方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基(PDA 培养基)PDA 培养基常用于培养真菌,尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基,材料如下:马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程:1、将马铃薯去皮,切成小块,称取 200g,放入锅中,加入约1000ml 去离子水,煮沸 20 30 分钟,直到马铃薯块变软。
培养基制备的方法
培养基制备的方法培养基是微生物学研究和实验室中微生物的生长和繁殖的基础。
培养基的制备主要分为固态培养基和液态培养基两种形式。
下面我将详细介绍培养基的制备方法。
1. 固态培养基制备方法:a. 准备所需材料:琼脂、食物源(如肉汤、蛋白胨等)、矿物质、维生素、葡萄糖等。
b. 称取适量矿物质、维生素和葡萄糖,并添加到蒸馏水中,溶解成浓缩液。
c. 称取适量肉汤或蛋白胨等食物源材料,并加入蒸馏水中,并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合,并加热搅拌,使其完全溶解,并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养皿中,使用自动灌装机进行灌装。
f. 放入高压灭菌锅中,在121高压下灭菌15-20分钟。
取出后冷却至室温。
g. 检查培养基是否凝固,如凝固则放入冰箱中保存。
2. 液态培养基制备方法:a. 准备所需材料:氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、葡萄糖等。
b. 称取适量氯化钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠,并加入蒸馏水中,溶解成浓缩液。
c. 称取适量葡萄糖,并加入蒸馏水中,并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合,并加热搅拌,使其完全溶解,并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养瓶中,并使用自动灌装机进行灌装。
f. 倒入适量培养基后,使用高压灭菌锅进行灭菌。
高压灭菌条件一般为121高压15-20分钟。
g. 取出后冷却至室温,检查液态培养基是否出现浑浊或沉淀物,若有则需要重新制备。
在制备培养基过程中,需要注意以下几个方面:1. 材料选择:根据实验需要,选择适合微生物生长的食物源、矿物质、维生素等材料。
2. 材料溶解:将所需材料称取放入试管或容器中,并加入适量的蒸馏水中进行溶解,加热搅拌加快溶解速度。
3. 浓度调整:根据实验需要和微生物的生长条件,调整培养基材料的浓度,以满足微生物生长的要求。
4. 灭菌处理:使用高压灭菌锅进行灭菌处理,达到高温高压杀灭细菌、真菌和病毒的目的。
灭菌是为了减少外界微生物对培养基的污染,保证实验的准确性和可靠性。
实验室平板培养基配方
实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基:
液体:蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g
磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml
盐液甲 5.0ml 蒸馏水: 1000ml
溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制:MgSO
4.7H
2
O 11.5g ,MnSO
4
.4H
2
O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体:在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基:
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g
3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml
固体:在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂
PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基:
液体:酵母粉 10g 蛋白胨 20g
葡糖糖20g 蒸馏水1000ml
固体:在PYD液体培养基中加入2%的琼脂
[备注]灭菌时要将葡萄糖和蛋白胨、酵母粉分开,溶解后单独灭菌,防止三者在高温下发生化学反应。
PH自然121℃灭菌30min
中国农业大学动物科技学院
饲料生物技术实验室
张得龙
2013.10.31。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种,不同的培养基适用于不同类型的微生物,如细菌、真菌或细胞系等。
下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基(Luria-Bertani培养基)LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其配方如下:- Tryptone:10g/L- Yeast extract:5g/L-NaCl:10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至7.0。
用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。
其配方如下:- Peptone:10g/L- Dextrose:40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)DMEM培养基常用于细胞系的培养。
其配方如下:-DMEM粉:每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中,并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。
调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基,适用于检验细菌的营养需求。
其配方如下:-Na2HPO4:6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基(Culture medium)是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基(Luria-Bertani medium)成分:-牛肉提取物:10克-酵母提取物:5克-热可溶性淀粉:10克-氯化钠:10克-水:1升2. NB培养基(Nutrient broth)成分:-牛肉提取物或肉蔻精:8克-酵母提取物:4克-葡萄糖:4克-水:1升3. MacConkey培养基成分:-水解动物蛋白:17克-中和胆盐:1.5克-中性红:0.03克-水:1升4. TSB培养基(Tryptic soy broth)成分:-大豆胨:17克-酵母提取物:3克-水:1升5. BHIA培养基(Brain Heart Infusion Agar)成分:-脑心汤固体:37克-水:1升6.R2A培养基成分:-水解酵母提取物:0.5克-蛋白胨:0.5克-葡萄糖:0.5克-脱脂乳粉:0.5克-黄豆粉:0.5克-高氯酸钠:0.3克-多聚体1466:0.05克-水:1000毫升7.比尔斯氏培养基(BHI培养基)成分:-大豆胨:37克-脑心汤固体:2克-水:1升8. 培养基199(Medium 199)成分:-高锰酸钾:0.015克-硫酸:1.55克-磷酸一氢钠:0.184克-高氯酸钠:8.0克-溴酚蓝:0.4克-d-葡萄糖:5.55克-l-谷氨酸:40.525克-苏打粉:0.84克-水:1升9. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)成分:-苔藓胶原酸:1克-乳糖:1克- 谷氨酸:584mg- 水:1000ml这只是一小部分常见的培养基配方,实际上有很多种不同的培养基,它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总培养基是微生物学研究和实验室工作中常用的一种培养微生物的基础环境,其主要组成包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
下面是一些常用的培养基配方汇总。
1.琼脂培养基琼脂培养基是最常用的固体培养基之一,其主要成分为琼脂、蔗糖、牛肉膏粉和无机盐。
其配方如下:-琼脂:15g-蔗糖:10g-牛肉膏粉:3g-磷酸二氢钾:1g-氯化钠:5g-氯化镁:0.5g-氯化钾:0.2g-高锰酸钾:0.0001g-蛋白胨:3g-酵母提取物:3g- 菜子油:0.5ml- 蒸馏水:1000ml2.肉汤培养基肉汤培养基是一种常用的液体培养基,其主要成分为牛肉膏粉和蛋白胨。
其配方如下:-牛肉膏粉:3g-蛋白胨:5g-葡萄糖:2g-氯化钠:5g-磷酸二氢钾:2g-氯化镁:0.5g- 蒸馏水:1000ml3.紫砂培养基紫砂培养基是一种用于真菌培养的培养基,其主要成分为紫砂和蔗糖。
其配方如下:-紫砂:15g-蔗糖:30g-蛋白胨:2g-磷酸二氢钾:1g-氯化钠:5g-氯化钙:0.1g4.麦芽培养基麦芽培养基是一种用于酵母和酵母菌类培养的培养基,其主要成分为麦芽粉和蔗糖。
其配方如下:-麦芽粉:10g-蔗糖:30g-蛋白胨:5g-氯化钠:5g-氯化钙:0.1g- 蒸馏水:1000ml5.铁蛋白培养基铁蛋白培养基是一种用于菌类和细菌培养的培养基,其主要成分为铁蛋白和蔗糖。
其配方如下:-铁蛋白:10g-蔗糖:10g-蛋白胨:2g-氯化钠:5g-磷酸二氢钾:1g-氯化钙:0.1g这些常用的培养基配方可根据实验需要进行适当调整和改良,以提高微生物的生长和培养效果。
同时,在制备培养基的过程中要注意消毒和无菌操作,以避免试验的污染和杂质的干扰。
实验室常用培养基
.常用培养基的制备(1)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基培养真菌最常用的培养基,成分如下:去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15-20g 水1000 ml配制方法:将马铃薯洗净去皮,称取200 g,切成小块(不必大小)放入锅中,加水1000ml,煮沸半小时,稍冷后用双层纱布过滤,在滤液中加蔗糖20g,加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性,用于培养真菌,可以不必调pH。
如配制固体培养基,在加蔗糖前先加15-20g 琼胶加热熔化,最后加入蔗糖,混匀并加水补是至1000ml,趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管(15×150mm)分装量如下:一般用作斜面培养的每试管装培养基3-5ml,用作平面培养的每试管约10ml,加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性(pH7.0左右)。
(2)牛肉汁蛋白胨培养基(NA)是培养细菌最常用的培养基,又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下:酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖(或葡萄糖)l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法:称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用,在其余水中加入琼脂,加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀,然后加水补足到1000 ml,用NaOH或HCL调整至pH7.0,趁热分装,加棉花塞后灭菌。
(3)玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片,洗净后剪成1㎝2左右的小块,放在250ml的三角瓶中,盛放量一般为三角瓶的1/3,然后加少量的水以保持湿润,加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
(4)查氏(Czapek)培养基查氏培养基是一种组合培养基,其成分如下:NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0.5g KCl 0.5gFeSO4 0.01g 蔗糖30g水1000ml(5)灭菌水的配制蒸馏水(或自来水)经过灭菌处理即成灭菌水,是实验室用量最大的必备品之一,常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
生物实验室常用培养基和溶液配制
#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)#组份浓度:1MTris-HCl 配制量:1L配制方法:1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl 调节pH值至所需值。
pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0 HCl 42ml4.加水将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度:100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量:1L 配制方法:1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
#1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度:1.5MTris-HCl 配制量:1L配制方法:1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#3M醋酸钠(pH5.2)#组份浓度:3M醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
#Tris-HCl平衡苯酚#配制方法:1.使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度24 mg/mL IPTG配制量50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。
LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Y east Extract(酵母提取物),1%(W/V)NaCl配制量1 L配制方法3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后,4℃保存。
组份浓度配制量1L配制方法 1.配制磷酸盐缓;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后,高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时,;加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种,包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。
下面以常用的LB培养基和M9培养基为例,介绍它们的配制方法。
1. LB培养基(Luria-Bertani agar)LB培养基是一种通用培养基,适用于许多不同类型的细菌。
它由三种主要成分组成:蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下:-蛋白胨:10克-酵母提取物:5克-NaCl:10克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水,搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。
2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基,常用于细菌的生长和培养。
它的配方相对简单,由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下:-Na2HPO4:6克-KH2PO4:3克-NaCl:0.5克-NH4Cl:1克-葡萄糖:0.4克-维生素B1:0.1克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水,搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1,搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。
以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。
当然,实验室中还有很多其他种类的培养基,它们的配制方法也各有不同,需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。
在培养基配制过程中,应当注意严格按照配方比例配制,保持清洁卫生,避免污染,并注意高压灭菌的操作安全。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同,因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基(Nutrient Agar)营养琼脂培养基是一种通用的培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基(Nutrient Broth)营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,高压灭菌,分装,即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基(MacConkey Agar)大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基,用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为:蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基(Sabouraud Dextrose Agar)Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为:脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基(Vogel-Johnson Agar)VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属(如克雷伯菌)的培养基。
其配方为:葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸,冷却至55-60°C,加入胆盐酯高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
培养基的配制方法
培养基的配制方法培养基的配制方法是在实验室中作为微生物培养的基础,可以提供适当的营养物质和环境条件来促进微生物的生长和繁殖。
正确的配制培养基是进行微生物实验和研究的关键步骤之一。
下面将详细介绍培养基的配制方法。
1. 准备配制培养基所需的原料和仪器:- 食品级蛋白胨粉或胨蛋白水解物:提供微生物所需的氨基酸和营养物质。
- 食品级琼脂:用于凝固培养基。
- 蔗糖或葡萄糖:提供微生物的碳源。
- 盐:提供微生物生长所需的必需离子,如钠、钾、镁等。
- pH试纸或pH计:用于调节培养基的酸碱度。
- 常温和高温灭菌器:用于灭菌培养基。
- 烧杯、容器、磁力搅拌器和称量仪器:用于容器和搅拌培养基。
2. 测量和称量:- 根据所需的培养基成分和浓度,测量所需的蛋白胨量、琼脂量、蔗糖或葡萄糖量以及盐的量。
- 将测量好的原料放入烧杯中。
3. 加入适量的水:- 加入适量的去离子水或纯净水,将配方溶解。
4. 调节酸碱度:- 使用pH试纸或pH计来检测培养基的酸碱度。
- 如果需要调节酸碱度,则可以使用盐酸或氢氧化钠等脆性酸碱溶液加入培养基中以达到目标pH值。
5. 搅拌混合:- 将培养基溶液放入磁力搅拌器中。
- 开启搅拌器并搅拌溶液直到完全混合。
6. 灭菌:- 将配制好的培养基倒入适当容器中,如烧杯或琼脂培养皿。
- 对于常见的液体培养基,使用常温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌20-30分钟。
- 对于琼脂培养基,使用高温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌15-20分钟。
7. 倒盖和保存:- 等待培养基凝固后,盖上并标记培养基的名称、配方和配制日期。
- 将培养基保存在冰箱中或冷藏库中,在4摄氏度下保存。
总结一下,培养基的配制方法包括准备原料和仪器,测量和称量原料,加入适量的水,调节酸碱度,搅拌混合,灭菌和保存。
注意对于不同的微生物,培养基的配方可能会有所不同,需要根据具体的实验目的和需求进行调整。
正确配制培养基对于获得准确的微生物培养结果至关重要。
常用培养基的制备
常用培养基的制备常用培养基是生物科学中必不可少的工具,它们可以提供一系列必要的营养物质和条件,使微生物、植物和动物细胞可以繁殖和生长。
在实验室中,我们通常需要制备一些常用培养基,以满足我们的实验需求。
本文将分步骤介绍如何制备常用培养基。
第一步:准备培养基成分首先,需要准备所需的培养基成分,例如碳源、氮源、维生素、无机盐、生长因子等。
其中,常用的碳源包括葡萄糖、蔗糖等;常用的氮源包括氨、硝酸盐、尿素等;常用的无机盐包括磷酸盐、铁、钙、钾、镁等。
这些成分的用量和配比可以根据需要进行调整。
第二步:加入水将准备好的培养基成分加入适量的水中,待成分溶解后,用玻璃棒或磁力搅拌子充分搅拌,让混合物均匀混合。
注意,加水时要注意水质的纯净度,保证培养基的质量。
第三步:调节pH值根据需要,调节溶液的pH值。
常用的调节剂包括酸和碱,例如盐酸、氢氧化钠等。
将调节剂滴加到溶液中,并用pH计测定溶液的pH值,适当调整pH值,直到达到所需的值。
第四步:灭菌将制备好的培养基装入适当容量的烧瓶或培养皿中,密封好,进行高温高压灭菌。
高温高压灭菌能够有效地杀死培养基中的细菌、真菌等微生物,防止污染,保证培养基的质量。
通常,高温高压灭菌需要在121℃下进行30分钟左右。
第五步:贮存将高温高压灭菌后的培养基放置在恒温箱中,控制在4℃下保存。
也可以将其按瓶、罐装装起来,进行冻存,保存期可达1年以上。
总之,制备常用培养基是生物学研究中的基本技能,熟练掌握制备方法,能够保证实验的结果准确可靠。
当然,不同的实验需要不同的培养基,在制备前需要进行充分的查询和准备,确保使用的培养基能够达到实验的要求。
实验室常用培养基的配制
2×YT 培养基
配 制 量: 配制方法:
配方:
1.6% (W/V) Tryptone 1% (W/V) Yeast 0.5% (W/V) NaCl pH=7.0
1L
1. 称取 16g Tryptone、10g Yeast、5g NaCl 置于 1L 烧杯中
2. 加入 700ml D-H2O,充分溶解 3. 用 5N 的 NaOH 调 pH 至 7.0,定容到
1L 4. 高温高压灭菌,4℃保存
无抗 LB 固体培 养基
配 制 量: 配制方法:
配方:
1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast 1%(W/V) NaCl 1.5%(W/V) Agar pH=7.0
250ml
1. 按 LB 液体培养基相同组分的量加入 Tryptone、Yeast 和 NaCl
1L
1. 称取 20g Tryptone、5g Yeast、0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中
2. 加入 700ml D-H2O,充分溶解 3. 用 5N 的 NaOH 调 pH 至 7.0 4. 定容到 1L,高温高压灭菌, 5. 冷却至室温,无菌条件下,吸入 5ml
已灭菌的 500mM KCl 和 5ml 的已灭菌 的 2M MgCl2,加入 20ml 的已灭菌 1M 葡萄糖 6. 4℃保存
250ml
1. 按 LB 液体培养基相同组分的量加入 Tryptone、Yeast 和 NaCl
2. 加入 3.75g Agar,定容 250ml 3. 高温高压灭菌,冷却至 60 度左右,加
入抗生素(无菌操作),混匀 4. 铺皿 5. 4℃保存
4
卡那青霉素 Kan
配 制 量: 配制方法:
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础,它们提供了养分和条件,促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种,以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦-鲍德尔培养基(Luria-Bertani agar)配方:成分:1.蛋白胨:10克2.酵母提取物:5克3.食盐:10克4.琼脂:15克5.蒸馏水:1000毫升6.高氯酸钠(0.1M):2毫升(pH7.2)制备方法:1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中,加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀,再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基(Nutrient agar)配方:成分:1.蛋白胨:5克2.细胞色素:1克3.维生素B1:0.1克4.卵黄:10克5.食盐:5克6.琼脂:15克7.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长,但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基(MacConkey agar)配方:成分:1.蛋白胨:17克2.硼砂:1.5克3.细胞色素:2.5克4.氯化钠:5克5.水合甲基红:0.03克6.钴绿:0.015克7.红绿二色砂:0.15克8.琼脂:13.5克9.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文,供参考使用。
在制备培养基时,需要注意消毒操作,以防止污染。
另外,不同微生物对培养基的要求也有所不同,可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
实验室常用培养基
实验用培养基配制 >1 .牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)牛肉膏3g ,蛋白胨10g ,NaCl 5g ,水1000mL ,pH7.4 ~7.62. 高氏1 号培养基( 用于放线菌培养)可溶性淀粉20g ,KNO 3 1g ,NaCl 0.5g ,K 2 HPO 4- · 3H 2 O 0.5g ,MgSO4 · 7H 2 O 0.5g, ,FeSO4 · 7H 2 O 0.01g ,水1000mL ,pH7.4 ~7.6 。
配制时注意,可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3 .马丁氏(Martin )培养基(用于从土壤中分离真菌)K 2 HPO 4 1g ,MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g ,蛋白胨5g ,葡萄糖10g ,1/3000 孟加拉红水溶液100mL, 水900mL ,自然pH ,121 ℃湿热灭菌30min 。
待培养基融化后冷却55 ~60 ℃时加入链霉素( 链霉素含量为30 μ g/mL).4. 马铃薯培养基(PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯( 去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖) 20g, 水1000mL配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖.5. 察氏培养基( 蔗糖硝酸钠培养基)( 用于霉菌培养)蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 · 7H2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ~7.26. Hayflik 培养基( 用于支原体培养)牛心消化液( 或浸出液)1000mL, 蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8 ~8.0,分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊是极毒的药品, 需特别注意安全操作.7 .麦氏(McCLary) 培养基( 醋酸钠培养基)葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ,酵母膏0.25g ,醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ,蒸馏水l00mL 。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基种类繁多,每一种培养基的配方也各有不同。
下面将介绍几种常见的培养基的配制方法。
1. Luria-Bertani (LB) 培养基:LB培养基通常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其主要成分包括蛋白胨、酵母浸膏和食盐。
下面是LB培养基的配制方法:-将10克蛋白胨、10克酵母浸膏和10克食盐加入到1升蒸馏水中。
-用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
2.孟德尔培养基:孟德尔培养基常用于植物细胞培养。
其主要成分包括盐类、碳源和维生素。
下面是孟德尔培养基的配制方法:-将所需的盐类(例如硫酸镁、硝酸钾)按照指定比例称量,并加入到1升蒸馏水中。
-添加适量的碳源(例如葡萄糖或蔗糖)以提供能量。
-加入维生素溶液,通常可以购买到已配制好的维生素混合液。
-搅拌溶解后,用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
3.YPD培养基:YPD培养基可以用于酵母菌的培养。
其主要成分包括酵母提取物、葡萄糖和酵母浸膏。
下面是YPD培养基的配制方法:-将10克酵母提取物、20克葡萄糖和20克酵母浸膏加入到1升蒸馏水中。
-使用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
4. Brain Heart Infusion (BHI) 培养基:BHI培养基可以用于细菌和真菌的培养。
其主要成分包括脑提取物、心脏提取物、肉浸膏和葡萄糖。
-将37克BHI粉末加入到1升蒸馏水中。
-使用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
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Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPOa
配制量1.L
配制方法1.配制磷酸盐缓;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解2.31 g KH2PC4和l2.54 g K2HPO4于90ml的去离子水中,搅
拌溶解 后,加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌2.称取下列试剂,置于l L烧杯中。
在90ml的去离子水中溶解1.86 g KCl后,定容至100ml。
2.配制2M MgCl2溶液。
在90ml去离子水中溶解19g MgCl2后,定容至100ml,高温高
4.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
5.量取10m1250mM KCl溶液,加入到烧杯中。
6.滴加5N NaOH溶液(约0.2 m1),调节pH值至7.0。
配制方法1.称取下列试剂,置于l L烧杯中。
Trypt one
16 g
Yeast Extract
10 g
NaCl
5 g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴力卩5N NaOH,调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1Lo
5.咼温咼压火菌后,4C保存。
①bxbroth
组份浓度2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,o
7.加入去离子水将培养基定容至l L0
8.高温高压灭菌后,4C保存。
9. 使用前加入5ml灭菌的2M MgCl2溶液。
2%(W/V)
Trypt one
0.5%(W/V)
Yeast Extract
0.05%(W/V)
NaCl
2.5 mM
KCl
10 mM
MgCl2
20 mM
Glucose
配制量100mL
2.称取下列试剂,置于I L烧杯中。
Tryptone
12 g
Yeast Extract
24 g
Glycerol
4 ml
3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至I L后,咼温咼压火菌。
5.待溶液冷却至60C以下时,加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。
6.均匀混合后4C保存。
3.滴加5N NaOH(约0.2 mL)。调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定谷至1Lo
5.咼温咼压火菌后,冷却至室温。
6.加入1ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。
7.4°C保存。
TO拉差甘
IB培养基
1.2%(W/V)
Trypt one
2.4%(W/V)
Yeast Extract
配制方法1.配制IMGlucose溶液。
将18gGlucose溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml。用0.22何滤膜过滤除菌。
2.向I 00ml SOB培养基中加入除菌的1MGlucose溶液2ml,均匀 混合。
3.4C保存。
28T培养基
组份浓度1.6%(WV)Tryptone,1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCI配制量1 L
Trypt one
12 g
Yeast Extract
24 g
Glycerol
4 m
3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至1L后,咼温咼压火菌。
5.待溶液冷却至60C以下时,;加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。
6.4C保存。
TB/Amp培养基
组份浓度
1.2%(W/V)
IPTG(异丙基-B-D-硫代半乳糖苷)(24mg/ml)
组份浓度24mg/mL IPTG
配制量50mL
配制方法1.称1.2 g IPTG置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml
3.用0 22m过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1ml,份)后,-20E保存。
X-Gal(20mg/ml)
LB/Amp培养基
组份浓度
0.5%(W/V)
Yeast Extract
1%(W/V)
NaCl
0.1 mg/ml
Ampicilli n
配制量1L
配制方法1•称取下列试剂,置于I L烧杯中
Trypt one
10 g
Yeast Extract
5 g
NaCl
10 g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
组份浓度20mg/ml X-Gal
配制量50ml
配制方法1.称量I g X-Gal置于50ml离心管中。
2.加入40ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50ml
3.小份分装(1ml/份)后,-20C避光保存。
I D拉差甘
LB培养基
组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物),
五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin(氨卡青霉素)(100mg/ml)
组份浓度100mg/mห้องสมุดไป่ตู้ Ampicillin
配制量50ml
配制方法1.称量5g Ampicillin置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml
3.用0.22 m过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1ml/份)后,-20T保存。
Trypt one
2.4%(W/V)
Yeast Extract
0.4%(V/V)
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPO4
0.1 mg/ml
Ampicilli n
1L
1•配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌。
1%(W/V)NaCI
配制量1L
配制方法1.称取下列试剂,置于l L烧杯中。
Trypt one
10 g
Yeast Extract
5 g
NaCl
10 g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1Lo
5咼温咼压火菌后,4。C保存。
5%(W/V)MgSO47H2O
配制量1 L
配制方法1.称取下列试剂,置于l L烧杯中。
Trypt one
20 g
Yeast Extract
5 g
MgSO47H2O
5 g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加1N KOH。调节pH值至7.5o
4.加去离子水将培养基定容至1Lo