黄嘌呤氧化酶抑制剂_超氧阴离子清除剂双靶点高通量筛选模型的建立_谢涛
黄嘌呤氧化酶抑制剂_超氧阴离子清除剂双靶点高通量筛选模型的建立_谢涛
黄嘌呤氧化酶抑制剂/超氧阴离子清除剂双靶点高通量筛选模型的建立谢涛†, 秦至臻†, 周睿, 赵赢, 杜冠华*(中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 北京市药物靶点研究与新药筛选重点实验室, 北京 100050)摘要: 本文建立了适用于同时筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂和超氧阴离子清除剂的双靶点高通量复合筛选模型。
在黄嘌呤氧化酶超氧阴离子生成体系中,加入WST-1作为超氧阴离子生成量的探针,以反应体系中标识性产物尿酸为黄嘌呤氧化酶活性指示剂, 采用SpectraMax M5酶标测试仪, 同时检测两种指示剂的浓度变化, 通过对反应体系中的影响因素进行优化建立双靶点HTS筛选模型, 并利用阳性药物对该模型进行评价。
在反应体系中, 反应终体积50 μL, 黄嘌呤氧化酶4 mU·mL−1、黄嘌呤250 μmol·L−1、WST-1浓度为100 μmol·L−1, 黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选模型的Z'-因子为0.5374, S/N为47.5199; 超氧阴离子清除剂筛选模型的Z'-因子为0.5074, S/N为5.3889。
结果表明, 本文建立的黄嘌呤氧化酶抑制剂/氧自由基清除剂高通量筛选模型具有稳定性好、成本较低和重复性高等特点, 可以广泛应用于药物筛选。
关键词: 高通量筛选方法; 黄嘌呤氧化酶; 超氧阴离子清除剂; 抗氧化; 药物评价中图分类号: R965 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2015) 04-0447-06 Establishment of double targets of high throughput screening model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengersXIE Tao†, QIN Zhi-zhen†, ZHOU Rui, ZHAO Ying, DU Guan-hua*(Beijing Key Laboratory of Drug Targets Identification and Drug Screening, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China)Abstract: A double targets of high throughput screening model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengers was established. In the reaction system of xanthine oxidase, WST-1 works as the probe for the ultra oxygen anion generation, and product uric acid works as xanthine oxidase activity indicator. By using SpectraMax M5 continuous spectrum enzyme sign reflectoscope reflector, the changes of these indicators’ concentration were observed and the influence factors of this reaction system to establish the high throughput screening model were studied. And the model is confirmed by positive drugs. In the reaction system, the final volume of reaction system is 50 μL and the concentrations of xanthine oxidase is 4 mU·mL−1, xanthine 250 μmol·L−1 and WST-1 100 μmol·L−1, separately. The Z'-factor of model for xanthine oxidase inhibitors is 0.5374, S/N is 47.5199; the Z'-factor of model for superoxide anion scavengers is 0.5074, S/N is 5.3889. This model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengers has more common characteristics of the good stability, the fewer reagent types and quantity, the good repeatability, and so on. And it can be widely applied in high-throughput screening research.Key words: high throughput screening method; xanthine oxidase; superoxide anion scavenger; antioxidant;drug evaluation收稿日期: 2014-10-20; 修回日期: 2014-12-22.基金项目: 重大新药创制科技重大专项 (2012ZX09101); 国际合作项目 (2012DFH30070).†并列第一作者.*通讯作者 Tel / Fax: 86-10-63165184, E-mail: dugh@痛风是目前常见严重的代谢性疾病, 以高尿酸血症为特征并通过尿酸在关节处形成晶体, 引起与自由基损伤相关的组织损伤, 危害患者运动功能并引起巨大痛苦。
大黄(Rheum officinale Baill)提取液对体外氧自由基清除作用的研究
大黄(Rheum officinale Baill)提取液对体外氧自由基清除作
用的研究
肖华山;傅文庆;赵保路;忻文娟
【期刊名称】《福建师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1993(9)4
【摘要】大黄是一味抗老健身的中药,本文作者用黄嘌呤——黄嘌呤氧化酶体系产生超氧阴离子,用H_2O_2-Fe^(2+)体系产生羟自由基,用过硫酸铵—N,N,N′,N′—四甲基乙二胺体系产生氧自由基,并用化学发光法研究了大黄提取液对氧自由基的清除效应,结果表明,大黄是一种有效的氧自由基清除剂,对前述三种系统发生的氧自由基均有相当强的清除能力,提示大黄可能通过清除氧自由基,抑制脂质过氧化损伤而发挥其抗老健身功效。
【总页数】5页(P68-72)
【关键词】大黄;氧;清除作用;自由基;中草药
【作者】肖华山;傅文庆;赵保路;忻文娟
【作者单位】福建师范大学生物系;中国科学院生物物理研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究 [J], 王昊;刘朝圣;何清湖
2.大黄中蒽醌类成分清除氧自由基作用的研究 [J], 罗志毅;黄新;包国荣
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抗氧化活性药物筛选模型的建立
抗氧化活性药物筛选模型的建立刘衍鹏;刘天强;黄冠军;张小维;肖丹【摘要】The screening model for antioxidant samples were established by using hydrogen peroxide to induce oxidative damage in grass carp liver cells in vitro. Results showed that the optimal concentration of H2O2 was 10 mmol/L and the reaction time with liver cells was two hours. The antioxidant effect of vitamin C and another two drugs at different concentrations were tested by the model. All of the 3 drugs were proved to possess some antioxidant ability.%以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞为研究对象,以过氧化氢刺激肝细胞,建立抗氧化活性药物体外筛选模型.结果显示:过氧化氢的最佳使用浓度为10 mmol/L,对草鱼肝细胞的作用时间为2h.使用建立的模型测定了维生素C和两种药物在不同浓度下的抗氧化作用,结果表明维生素C和两种药物均具有一定的抗氧化能力.【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2011(041)005【总页数】4页(P52-55)【关键词】过氧化氢;草鱼(Ctenopharyngodon idellus);肝细胞;抗氧化;超氧化歧化酶【作者】刘衍鹏;刘天强;黄冠军;张小维;肖丹【作者单位】通威股份有限公司,成都610041;通威股份有限公司,成都610041;通威股份有限公司,成都610041;通威股份有限公司,成都610041;通威股份有限公司,成都610041【正文语种】中文【中图分类】S948在渔业生产、运输等过程中，水质、饲养、环境等因素经常导致鱼类氧化应激损伤。
核桃壳中黄嘌呤氧化酶抑制活性物质的分离鉴定及构效关系的研究
核桃壳中黄嘌呤氧化酶抑制活性物质的分离鉴定及构效关系的研究高尿酸血症是人类常见的代谢疾病,会导致关节和肾脏形成尿酸盐结晶,同时会增加患痛风性关节炎、尿酸肾石病、心血管疾病和高血压等的风险。
黄嘌呤氧化酶是嘌呤代谢的关键酶,该酶可以催化次黄嘌呤转化为黄嘌呤,进而将黄嘌呤转化为尿酸,与高尿酸血症的形成息息相关。
因而服用黄嘌呤氧化酶抑制剂是治疗高尿酸血症的非常有效的方法之一。
但是,目前广泛使用的临床药物别嘌呤醇会导致一系列副作用,例如过敏反应、Steven-Johnson症状和肾脏毒性等,因此治疗高尿酸血症需要更加安全有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂。
文献报道表明植物中的天然活性物质既是潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂,同时又是良好的抗氧化剂。
核桃属于胡桃科胡桃属植物,广泛的分布于世界各地,核桃壳质量约占核桃质量的30%,核桃加工后会产生大量的核桃壳。
本论文研究了核桃壳的提取物的体内降尿酸活性,并期望从中寻找出新型的黄嘌呤氧化酶抑制剂,现将主要研究结果归纳如下:(1)优化了评定样品黄嘌呤氧化酶抑制活性的催化反应条件,将测定酚类物质的黄嘌呤氧化酶抑制活性的高效液相色谱法和分光光度法进行了对比研究。
优化后的催化反应条件为:底物浓度0.24 mM、酶浓度0.01 U/m L、催化反应温度25oC、pH值7.5、催化反应时间30 min和终止反应用HCl溶液(1.0 M)的体积80μL。
两种方法在尿酸的检测浓度范围内都具有较好的线性关系和较高的日内精密度,但高效液相色谱法的检出限和定量限比分光光度法大约低了一个数量级,灵敏度较高。
分光光度法在检测活性较弱的物质或在292 nm处有强吸收的酚类物质的黄嘌呤氧化酶抑制活性时结果会偏高。
相比之下测定黄嘌呤氧化酶抑制活性的高效液相色谱法消除了干扰,并可以在不控温的情况下21 h内检测有效,每个样品检测只需8 min,可用于样品的高通量筛选。
同时高效液相法的日间精密度在0.10-1.50%的范围内,说明该法具有较高的日间精密度。
[资料]超氧阴离子消除试验
![[资料]超氧阴离子消除试验](https://img.taocdn.com/s3/m/55a7e0eb710abb68a98271fe910ef12d2af9a9ec.png)
·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。
·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。
(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。
实际配制500mL。
高压灭菌，室温保存。
PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。
NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。
槐米提取物对黄嘌呤氧化酶活性抑制评价及作用机制研究
安徽农学通报 2024年08期农产品加工·检验检测作者简介 杨长远（1996—），男，贵州天柱人，从事制药工程研究。
收稿日期 2024-01-30槐米提取物对黄嘌呤氧化酶活性抑制评价及作用机制研究杨长远（铜仁学院，贵州铜仁 554300）摘要 为了探究槐米醇提物药效物质对体外黄嘌呤氧化酶（XOD ）活性抑制的作用机制，本研究采用体外XOD 促动力学模型对槐米醇提物及其潜在活性成分芸香叶苷、槲皮素及白桦脂醇进行XOD 活性抑制评价，以分析其天然成分芸香叶苷热-酸性水解作用对XOD 活性抑制的影响。
试验结果表明，槐米提取物A 在药剂浓度100～700 µg/mL ，对体外XOD 活性抑制具有良好作用，其最大抑制率可达36.68%，与对照药剂别嘌呤醇（90 µg/mL ，抑制率61%）相比，抑制率较弱。
槐米中主要化学成分芸香叶苷、槲皮素及白桦脂醇在一定药剂浓度范围内，芸香叶苷抑制率不明显，槲皮素表现出优异的XOD 抑制作用（抑制率61.64%，IC 50值为203.6 µmol/L ），白桦脂醇次之。
在酸性水解作用的条件下，芸香叶苷酸性水解混合物抑制XOD 活性作用较热水解作用混合物较高。
研究认为槐米醇提物对体外XOD 活性抑制的药效物质可能为槲皮素。
关键词 黄嘌呤氧化酶；槐米；芦丁；槲皮素；活性抑制中图分类号 TS201.2；R284.1 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2024）08-0085-06槐米为豆科植物槐的干燥花蕾，采收于夏季，主要分布于河南、山东、山西、陕西和贵州等地。
芦丁为中药饮片槐米的主要评价指标之一，槐米中芦丁成分含量较高，占比约20%～30%[1]，是槐米的主要成分之一[2-3]。
此外，相关研究报道了槐米醇提取物中其他的潜在活性成分，如桦皮醇、槐二醇以及槐花米甲、乙、丙素，槲皮素和槐花皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等[4-8]。
槐米具有丰富的黄酮类成分，其药用价值较高，并具有多种生物活性，有良好的保健作用。
一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法[发明专利]
![一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e38360a9852458fb760b563a.png)
专利名称：一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法专利类型：发明专利
发明人：吴弢,苗雨
申请号：CN202010738858.3
申请日：20200728
公开号：CN111896671A
公开日：
20201106
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法，其步骤：制备供试品溶液后，将供试品溶液点涂于薄层板，和/或用展开剂展开后，挥干溶剂；将上步制得的薄层板浸渍于黄嘌呤氧化酶溶液中，取出薄层板，对薄层板上的黄嘌呤氧化酶进行活化；将上步制得的薄层板依次浸渍于黄嘌呤溶液和NaCO溶液中，每次浸渍后取出薄层板并置于25～40℃的条件下进行反应，完全反应后将薄层板浸渍于显色剂溶液中进行显色反应，显色剂溶液为磷钨酸溶液。
本发明的黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法，操作简单，实验耗费低，不需要复杂的仪器和设备；以色彩图像形式提供结果，形象直观，易于辨认和记忆；专属性强，极具应用前景。
申请人：上海中医药大学
地址：201203 上海市浦东新区蔡伦路1200号
国籍：CN
代理机构：上海唯智赢专利代理事务所(普通合伙)
代理人：吴瑾瑜
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一种黄嘌呤氧化酶抑制剂及其筛选方法和应用[发明专利]
![一种黄嘌呤氧化酶抑制剂及其筛选方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/747980c3534de518964bcf84b9d528ea81c72f94.png)
专利名称：一种黄嘌呤氧化酶抑制剂及其筛选方法和应用专利类型：发明专利
发明人：韩璐,刘新胜,韩葳葳,董占德,高波,李婉南
申请号：CN202110936808.0
申请日：20210816
公开号：CN113456626B
公开日：
20220506
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂及其提取方法和应用，属于医药技术领域。
本发明提供的黄嘌呤氧化酶抑制剂，包括泽兰色原烯、枯醇和1,5,8‑对薄荷三烯中的至少两种。
本发明提供的XO抑制剂能够与XO的活性中心形成Pi‑烷基以及Pi‑Pi共轭双键，泽兰色原烯和枯醇能够与XO 的活性中心形成范德华力，在上述分子间作用力存在的情况下，XO抑制剂被插入XO的疏水间隙中以占据其催化活性中心，从而阻碍了底物的进入并导致其失去原有的功能，具有抑制尿酸产生的作用，说明，泽兰色原烯、枯醇和1,5,8‑对薄荷三烯具有抑制XO的功能。
为从天然产物中筛选XO抑制剂制备治疗XO介导的疾病的药物提供了新思路。
申请人：吉林大学
地址：130012 吉林省长春市前进大街2699号
国籍：CN
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大血藤中黄嘌呤氧化酶抑制剂虚拟筛选
现代农业科技2021年第10期食品科学摘要利用分子对接软件将大血藤中198种已知成分的化合物分子作为配体分别与Glu803对接,并进行虚拟筛选打分,做出一致性评价。
结果表明,芦丁、苦杏仁苷和芒果苷与Glu803对接活性较高,说明大血藤中的芦丁、苦杏仁苷和芒果苷可以用作黄嘌呤氧化酶抑制剂。
关键词大血藤;分子对接;虚拟筛选;芦丁;苦杏仁苷;芒果苷中图分类号R914文献标识码A 文章编号1007-5739(2021)10-0204-03DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2021.10.083开放科学(资源服务)标识码(OSID ):大血藤中黄嘌呤氧化酶抑制剂虚拟筛选卢忠英(铜仁学院材料与化学工程学院,贵州铜仁554300)黄嘌呤氧化酶是体内核酸代谢中一种重要的酶。
它不仅可催化次黄嘌呤生成黄嘌呤,还可催化黄嘌呤氧化产生尿酸,而尿酸过多会导致代谢紊乱和排泄异常,继而引发一系列病症,即痛风。
因此,根据痛风形成机制分析可以得出治疗痛风的3个途径,即抑制尿酸形成、促进尿酸分解和促进尿酸排泄。
其中,抑制尿酸形成是治疗痛风的关键方法之一,即使用黄嘌呤氧化酶抑制剂抑制尿酸过多产生,从而达到治疗痛风的目的。
临床上常使用且被认为相对安全的黄嘌呤氧化酶抑制剂是别嘌呤醇和非布索坦,但是别嘌呤醇会导致腹泻、胃痛、皮疹、头痛、头晕和嗜睡,非布索坦具有引起肝转氨酶水平升高、胃肠道紊乱和皮疹的副作用。
因此,寻找新的黄嘌呤氧化酶抑制剂显得尤为重要。
天然药用植物蕴含多种药用成分,其毒副作用相对较小,是研究者寻找黄嘌呤氧化酶抑制剂药源的主要方向之一。
研究表明,羽藻、鼠尾藻、红旱莲、银杏叶、牛膝草、薰衣草、甘草、银杏叶、虎杖、白芍、卷柏、丹参、赤芍、大黄等的提取物在一定浓度范围内对黄嘌呤氧化酶都有一定的抑制效果[1-3]。
但需要明确其中是何种化学物质对黄嘌呤氧化酶起了作用,需要进一步分离提纯、试验筛选,验证其抑制效果。
黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选体系的建立
高尿酸血症肾损害动物模型建立及
Ｃｏｃｋｔａｉｌ（美国Ｓｉｇｍａ．Ａｌｄｒｉｃｈ）的细胞裂解液（０．１％ ＳＤＳ，Ｏ．５％脱氧胆酸钠，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００，１５０ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ，２０ １ ｍｍｏｌ／Ｌ ｍｍｏ］／Ｌ Ｔｒｉｓ，ｐＨ ７．５，５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ，
ＰＭＳＦ）裂解组织后低温离心取上清，
ＢＣＡ法测定蛋白浓度。取４０斗ｇ蛋白，１０％ＳＤＳ． ＰＡＧＥ电泳，半干法转至ＰＶＤＦ膜。一抗为ＥＧＦＲ（美
Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ ｕｒｉｃ ａｃｉｄ
ｗｅｉｇｈｅｄ ２００—２２０ ｇ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ
ｉｎｔｏ ２ ｇｒｏｕｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ（凡＝９），ｔｈｅ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｇｒｏｕｐ∞＝９）．ＵＡＮ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｏｒａｌ
氧嗪酸钾１５００ ｍｇ／蜡、水化，０．０１ ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸缓冲液高压修复８ ｍｉｎ，正常山羊血 清封闭３０ ｍｉｎ，仅一ＳＭＡ鼠多克隆抗体（美国Ｓｉｇｍａ— Ａｌｄｒｉｃｈ，１：２００）４℃过夜，生物素标记山羊抗鼠 ＩｇＧ ３７０Ｃ孵育６０ ｍｉｎ，ＤＡＢ显色，苏木素复染，封 片，显微镜观察并拍片。 ７．统计学分析：应用ＳＰＳＳｌ７．０统计软件进行 统计学处理，所有数据采用瑟±ｓ表示，组问比较采 用单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。
ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，ＵＡＮ）对人类健康的影响亦 日益凸显［１－２１。模拟高尿酸血症肾损害患者的病
理生理状况，建立优质的高尿酸血症肾损害的动 物模型，探求ＵＡＮ的发生机制，寻求启动ＵＡＮ病 理机制的关键致病靶点，对ＵＡＮ的防治具有重要 意义。我们新近报道，基因或药物方式阻断表皮 生长因子受体（ＥＧＦＲ）活化可阻断单侧输尿管结 扎（ＵＵＯ）诱导的肾间质纤维化进展ｐ】，但ＥＧＦＲ活 化在高尿酸血症肾损害机制中的作用未见报道， 本研究通过建立ＵＡＮ动物模型，探讨高尿酸血症 肾损害的发生机制。
β-内酰胺酶抑制剂高通量筛选模型的建立
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ０ ｂ ｉ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ — ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ｐ ｕ ｔ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｆ ｏ ｒ １ ３ － ｌ ａ ｃ ｔ ａ ｍａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ ｄ ｅ ｄ
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ｌ ０ ２
中 国抗 生 素 杂 志 ２ ０ １ ３ 年２ 月 第３ ８ 卷第２ 期
文 章编 号 ： １ ０ ０ １ － ８ ６ ８ ９ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ １ ０ ２ — ０ ４
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内酰胺酶抑制剂 高通量筛选模型 的建立
中草药中天然黄嘌呤氧化酶抑制剂的虚拟筛选
中草药中天然黄嘌呤氧化酶抑制剂的虚拟筛选尚随锦;高宇;王凤雪;许利嘉;刘海波;潘艳丽【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2022(24)2【摘要】目的:采用药效团及文献挖掘技术,筛选中草药中天然黄嘌呤氧化酶抑制剂(xanthine oxidase inhibitor,XOI),并研究其分布情况。
方法:采用基于药效团的虚拟筛选和数据挖掘技术,在23 033个中药天然产物中筛选潜在的XOI。
通过吸收、分布、代谢和排泄性质及药效团初步筛选具有潜在黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)抑制活性的化合物;使用分子对接技术进一步筛选XOI并选取打分较高的化合物,分析作用机制;采用数据挖掘方法分析潜在XOI化合物在中草药中的分布规律。
结果:通过HypoGen方法构建了XOI药效团模型,筛选得到165个潜在活性化合物。
通过分子对接技术进一步筛选,得到化合物102个,结果显示这些化合物主要是萜类,分布在见霜黄、慈竹、佩兰等中草药中,这些中草药以菊科药用植物为主,药味以辛、苦为主,药性多寒、温,多归于肝、肺经。
选取排名前5的化合物进行作用模式分析,结果显示其与受体XO有较强的亲和作用,有进一步实验验证的价值。
结论:在菊科植物及其亲缘关系比较接近的药用植物当中,可能发现潜在的天然XOI化合物,为探索新型XOI先导化合物提供参考。
【总页数】9页(P249-257)【作者】尚随锦;高宇;王凤雪;许利嘉;刘海波;潘艳丽【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所;中国中医科学院中医药信息研究所【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.基于中草药数据库细菌群体感应抑制剂的虚拟筛选2.茵连痛风颗粒中黄嘌呤氧化酶抑制剂的虚拟筛选3.茵连痛风颗粒中黄嘌呤氧化酶抑制剂的虚拟筛选4.大血藤中黄嘌呤氧化酶抑制剂虚拟筛选因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
车前子中黄嘌呤氧化酶抑制剂成分的电化学生物传感筛选研究
Screening of xanthine oxidase inhibitors from Plantaginis Semen using electrochemical biosensor metZENG Jin-xiang 1**，REN Gang，ZHANG Li2， ZHU Ji-xiao1，WANG Xiao-yun1，LIANG Jian1，XIE Xiong-xiong1，ZOU Hong2
（1．The Research Center of Chinese Medicine Resource and National Medicine of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China；2．Jiangxi Hanhe Biotechnology Co.Ltd.，Nanchang 330004，China）
Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis
药物分析杂志
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药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2017,37(7)
method was applied to screen xanthine oxidase inhibitors from 23 compounds isolated from Plantaginis Semen． This method is based on the electrocatalytic signals of xanthine oxidase toward oxidation of xanthine using cyclic voltammetry．And the enzyme inhibition kinetic characteristics were also investigated．Results：Seven compounds of luteolin，acteoside，chrysoderol，1H-indolo-3-carbaldehyde，eriodictyol，4-（3，4-dihydroxyphenyl）-3-buten2-one，and bis（2-ethyth-exyl）-benzene-1，2-dicarboxylate exhibit xanthine oxidase inhibited activities via competetive effects，the IC50 of luteolin，acteoside and chrysoderol were 4.6 μg·mL-1，7.7 μg·mL-1 and 53.0 μg·mL-1，and the Ki was 4.3 μg·mL-1，10.1 μg·mL-1，90.2 μg·mL-1，respectively.The maximum inhibition rate of1H-indolo-3-carbaldehyde，eriodictyol，4-（3，4-dihydroxyphenyl）-3-buten-2-one，and bis （2-ethythexyl）-benzene-1，2-dicarboxylate was 30.2%，22.7%，21.5% and 10.3%，the Ki was 68.2 μg· mL-1，73.0 μg·mL-1，136.4 μg·mL-1 and 141.7 μg·mL-1．1H-indolo-3-carbalde-hyde，eriodictyol，4-（3， 4-dihydroxyphenyl）-3-buten-2-one，and bis（2-ethythexyl）-benz-ene-1，2-dicarboxylate were discovered as xanthine oxidase inhibitors for the first time．Conclusion：The inhibitors from Plantaginis Semen obtaining multiple different compounds have good and prospect．The electrochemical biosensing method is selective，sensitive，rapid and convenient，it is hoped to be one of the most promising methods in the field of xanthine oxidase inhibitors research. Keywords：Plantaginis Semen；electrochemical biosensor method；gout；xanthine develop oxidase inhibitor； luteolin；acteoside；chrysoderol；indolo-carbaldehyde；eriodictyol；dihydroxyphenyl-buten-one；bis（ethythexyl）-benzene-dicarboxylate
动力学分光光度法测定中药对超氧阴离子自由基的清除率
动力学分光光度法测定中药对超氧阴离子自由基的清除率田益玲;陈冠华;崔同
【期刊名称】《光谱学与光谱分析》
【年(卷),期】2005(025)004
【摘要】建立了一种利用动力学分光光度法测定中药对超氧阴离子自由基清除率的新方法. 研究表明:当波长为520 nm、黄嘌呤氧化酶浓度为4×10-3 μg·mL-1, 反应时间在2～7 min时, 可得到最佳测定条件. 在该条件下测得的抗坏血酸对超氧阴离子自由基的清除率与文献报道值一致. 方法用于中药厚朴和杜仲的测定, 它们对超氧阴离子自由基的IC50分别为7.580和323.800 mg·L-1.
【总页数】3页(P617-619)
【作者】田益玲;陈冠华;崔同
【作者单位】河北农业大学食品科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学生命科学学院,河北,保定,071001;河北农业大学食品科技学院,河北,保定,071001
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
【相关文献】
1.几种中药对超氧阴离子自由基清除率影响的研究 [J], 梁丹;黎卫冲;黄秋岸;覃冬菊;覃玉君;龙奇军;张树球
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5.分光光度法测定中药对羟自由基的清除率 [J], 方光荣;刘洁;刘丽虹;宋功武因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄嘌呤氧化酶靶向小分子抑制剂的虚拟筛选
黄嘌呤氧化酶靶向小分子抑制剂的虚拟筛选
陈明雪;温泽宇;宋佳;史丽颖
【期刊名称】《天津师范大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2024(44)2
【摘要】为了挖掘生物活性高、靶点明确的新型抗痛风药物先导化合物,以黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)为靶标虚拟筛选小分子抑制剂.从PDB数据库下载XOD蛋白晶体结构,经Schrodinger 2018中的“Protein prepara-tion wizard”模块预处理,基于XOD活性口袋与小分子配体作用方式特征构建了3个药效团,对FDA数据库和Chemdiv数据库进行分子对接筛选.结果发现:以非布索坦与XOD 对接分数-35.790 kJ/mol为阈值,筛选得到低于该分数的化合物共206个.通过类药五原则以及ADMET分析,发现有8个化合物具有较好的成药性.将此8个化合物进行结合自由能计算,其中氟芬那酸、罗索沙星、化合物6(CAS:400076-03-1,苯并吡唑类化合物)和化合物7(CAS:866050-17-1,酞嗪类化合物)与阳性对照组非布索坦的作用方式相似,能与黄嘌呤氧化酶形成稳定性较强的复合物,可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂.
【总页数】8页(P42-49)
【作者】陈明雪;温泽宇;宋佳;史丽颖
【作者单位】大连大学生命健康学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q554;R91
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黄嘌呤氧化酶抑制剂/超氧阴离子清除剂双靶点高通量筛选模型的建立谢涛†, 秦至臻†, 周睿, 赵赢, 杜冠华*(中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 北京市药物靶点研究与新药筛选重点实验室, 北京 100050)摘要: 本文建立了适用于同时筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂和超氧阴离子清除剂的双靶点高通量复合筛选模型。
在黄嘌呤氧化酶超氧阴离子生成体系中,加入WST-1作为超氧阴离子生成量的探针,以反应体系中标识性产物尿酸为黄嘌呤氧化酶活性指示剂, 采用SpectraMax M5酶标测试仪, 同时检测两种指示剂的浓度变化, 通过对反应体系中的影响因素进行优化建立双靶点HTS筛选模型, 并利用阳性药物对该模型进行评价。
在反应体系中, 反应终体积50 μL, 黄嘌呤氧化酶4 mU·mL−1、黄嘌呤250 μmol·L−1、WST-1浓度为100 μmol·L−1, 黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选模型的Z'-因子为0.5374, S/N为47.5199; 超氧阴离子清除剂筛选模型的Z'-因子为0.5074, S/N为5.3889。
结果表明, 本文建立的黄嘌呤氧化酶抑制剂/氧自由基清除剂高通量筛选模型具有稳定性好、成本较低和重复性高等特点, 可以广泛应用于药物筛选。
关键词: 高通量筛选方法; 黄嘌呤氧化酶; 超氧阴离子清除剂; 抗氧化; 药物评价中图分类号: R965 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2015) 04-0447-06 Establishment of double targets of high throughput screening model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengersXIE Tao†, QIN Zhi-zhen†, ZHOU Rui, ZHAO Ying, DU Guan-hua*(Beijing Key Laboratory of Drug Targets Identification and Drug Screening, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China)Abstract: A double targets of high throughput screening model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengers was established. In the reaction system of xanthine oxidase, WST-1 works as the probe for the ultra oxygen anion generation, and product uric acid works as xanthine oxidase activity indicator. By using SpectraMax M5 continuous spectrum enzyme sign reflectoscope reflector, the changes of these indicators’ concentration were observed and the influence factors of this reaction system to establish the high throughput screening model were studied. And the model is confirmed by positive drugs. In the reaction system, the final volume of reaction system is 50 μL and the concentrations of xanthine oxidase is 4 mU·mL−1, xanthine 250 μmol·L−1 and WST-1 100 μmol·L−1, separately. The Z'-factor of model for xanthine oxidase inhibitors is 0.5374, S/N is 47.5199; the Z'-factor of model for superoxide anion scavengers is 0.5074, S/N is 5.3889. This model for xanthine oxidase inhibitors and superoxide anion scavengers has more common characteristics of the good stability, the fewer reagent types and quantity, the good repeatability, and so on. And it can be widely applied in high-throughput screening research.Key words: high throughput screening method; xanthine oxidase; superoxide anion scavenger; antioxidant;drug evaluation收稿日期: 2014-10-20; 修回日期: 2014-12-22.基金项目: 重大新药创制科技重大专项 (2012ZX09101); 国际合作项目 (2012DFH30070).†并列第一作者.*通讯作者 Tel / Fax: 86-10-63165184, E-mail: dugh@痛风是目前常见严重的代谢性疾病, 以高尿酸血症为特征并通过尿酸在关节处形成晶体, 引起与自由基损伤相关的组织损伤, 危害患者运动功能并引起巨大痛苦。
黄嘌呤氧化酶 (xanthine oxidase, XO)[1]是一种黄素蛋白酶, 存在于多种生物体中, 可催化次黄嘌呤和黄嘌呤生成尿酸, 在此过程中伴随着超氧阴离子的产生[2]。
当体内XO活性过高, 引起尿酸生成过多, 将导致高尿酸血症, 进而引发痛风[3, 4]。
黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇通过抑制体内XO的活性而减少尿酸生成, 对高尿酸血症和痛风产生良好的防治效果[5]。
近年又发现, 黄嘌呤氧化酶抑制剂对缺血再灌注损伤[6]、内皮损伤[7]和心功能衰竭[8]具有明显的保护作用, 有可能成为治疗心血管系统疾病尤其是心衰的药物。
虽然XO抑制剂具有现实和潜在价值, 但临床应用的该类药物品种极少, 而且别嘌醇作为嘌呤类似物, 对人体正常嘌呤代谢也会产生不良影响[9], 限制了其应用, 因此发现和寻找具有新结构的XO抑制剂具有重要的现实意义。
在正常状态下, O2・－自由基作为新陈代谢的活性中间体, 在生物体中保持相对稳定的动态平衡。
细胞自身具有一定的O2・－清除能力。
细胞色素c[10]、超氧化物歧化酶等可以将其转化为无害物质。
当细胞受到外界刺激或发生病变时会产生过量的O2・－引起氧化应激, 引起多种生理病变[11]。
在痛风患者体内, 次黄嘌呤和黄嘌呤经黄嘌呤氧化酶作用被氧化成尿酸过程中会产生大量的超氧阴离子[12], 继而引起氧化和抗氧化体系失衡, 故痛风患者发生心脑血管疾病的可能性也大为提高[13]。
因此, 异常状况下O2・－的清除对于维持正常的生理活动具有重要意义。
近年来, 陆续报道了关于评价黄嘌呤氧化酶抑制剂活性和超氧阴离子清除活性的方法。
黄嘌呤氧化酶抑制剂活性的测定可以通过定量测定酶的反应产物尿酸以及超氧阴离子的含量。
尿酸的含量可以通过分光光度法[14]或液相色谱法[15]的方法来定量。
超氧阴离子可通过化学发光方法[16]或光谱法进行定量。
电子自旋共振法也可用于检测和量化超氧阴离子[17]。
这些方法有时也被用来评估超氧阴离子清除活性化合物。
然而, 上述方法不能同时测定化合物的黄嘌呤氧化酶抑制活性和超氧化物清除活性, 且一些方法容易得到假阳性和阴性结果。
刘书等[18]利用UHPLC- TQ-MS方法实现了黄嘌呤氧化酶抑制剂活性和超氧阴离子清除活性的同时检测, 这种方法虽然灵敏, 但操作较复杂, 且成本较高, 不能满足快速大量的高通量筛选的要求。
本研究利用自动加样器和384微孔板, 通过酶标仪检测紫外与可见光吸收, 可以实现化合物黄嘌呤氧化酶抑制活性和超氧阴离子清除活性的双重评价。
材料与方法试剂丹酚酸A (salvianolic acid A, SAA), 中国医学科学院药物研究所新药筛选中心自制, 批号20101109; 黄嘌呤 (xanthine, Xan), 批号95490, 购自Fluka公司; WST-1, 生产批号EQ756, 购自日本Dojindo Laboratory公司; 焦磷酸钠, 批号L590L06, 购自Amethyst Chemicals公司; 别嘌呤醇 (allopurinol, Allo), 批号A8003, 购自北京华迈科生物技术有限责任公司; 黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XO), 批号SLBB1570V, 购自美国Sigma Aldrich公司; EDTA, 生产批号20120412, 购自国药集团化学试剂有限公司。
仪器SpectraMax M5连续光谱酶标测试仪 (MD 公司); Corning 384孔紫外板 (Corning Incorporated公司); Mini Sharkeer (MH-1, Kylin-Bell Lab Instruments 公司); Purelab Plus型超级应用型超纯水器(美国PALL公司)。
试剂配制0.1 mol·L−1焦磷酸钠缓冲液 (Buffer) 用双蒸水配制0.1 mol·L−1焦磷酸钠溶液, 含0.3 mmol·L−1 EDTA, 超声溶解, 调pH 8.3, 现用现配。
WST-1工作液双蒸水配制WST-1储备液 (6.51 g·L−1), 避光4℃保存; 取WST-1储备液288 μL+Buffer 6912 μL混匀, 避光, 现用现配。