实验一实验室环境和人体表面的微生物检查

实验2 实验室环境和人体表面的微生物检查

13生物基地刘洋201300140059

一、实验目的

1.证实实验室环境与人体表面存在微生物

2.体会无菌操作的重要性

3.观察不同类群微生物的菌落形态特征

4.掌握生理生化反应培养基的配置原理和一般方法步骤

5.巩固无菌操作技术

二、实验器材

1.肉膏蛋白胨琼脂平板

牛肉膏1.05g、蛋白胨3.5g、NaCl 1.75g、琼脂7g、水350ml、pH 7.0~7.2、121 ℃灭菌20min。

2.溶液和试剂

无菌水

3.仪器和其他用品

灭菌棉签（装在试管内）、试管架、煤气灯或酒精灯、记号笔和废物缸等。

三、实验原理

通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。

四、实验内容及步骤

1.在标签纸上做好标记并贴在培养皿侧面。

2.牛肉膏蛋白胨培养基的制备：

（1）称量：准确称取牛肉膏1.05g、蛋白胨3.5g、NaCl 1.75g放入烧杯中。

（2）熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为350ml），用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积350ml。

（3）调pH：用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节，直至溶液pH达到7.0~7.2。

（4）分装：将其中200ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入4.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入3.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每

支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。

（5）加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。

（6）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌水的试管），同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。

（7）灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，90min高压蒸汽灭菌。

（8）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。

3.倒平板：

点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入15~20ml培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，直至倒够所需数量。

4.微生物的接种：

（1）在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在手心上擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。

（2）在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。

（3）取六个培养皿，在实验室打开皿盖，三个暴露5min，三个暴露10min，之后盖好皿盖，并做好标记。

（4）取棉签在头发上擦拭2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。

5.培养：

将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，从接触空气的两组共六个培养皿中各取出一个置27℃，其余所有置37℃，培养一星期。

6.观察

（1）观察菌落的形态，区分细菌与霉菌

（2）对单个细菌的菌落进行描述，应该对菌落的大小（大、中，小），颜色（白，黄，粉红等），干湿（干、湿），边缘（整齐，不整齐），表面（光滑，粗糙，有无突起等）分别进行阐述并详细记录。

（3）在不同的培养条件下对菌落的数量及种类进行比较,并找出不同培养条件下的相似菌，并对相似菌进行描述。

7.划线分离与菌种的纯化

从第六步观察到的菌落中挑选两个进行划线分离操作。如图所示，先

在平皿上划定区域，然后将接种针在火焰上进行灭菌操作，取含菌种的培

养皿，在火焰上方（注意：不能离火焰太近）打开培养皿盖，先拿接种针

在上盖处划线以降温，然后用接种针轻挑所选菌落一到两下，将平皿盖上

放好，再取刚刚冷却了的干净平皿在1区进行划线接种操作。操作完毕后

对接种针进行灭菌操作，完成后在火焰上方打开平皿盖，将接种针冷却后

从1区引线到2区，再如图所示划线，划完后引线到3区，同上进行划线，划线完毕后盖盖平放，贴好标签后在37℃条件下培养。同以上方法对另一菌落进行接种与培养操作。

五、实验结果

六、实验结果分析

1.通过观察比较各个培养基上的菌落的形态及数目，置于空气中的平板中菌落种类更多样，原因：接触

面大，空气流动性大，微生物种类数目较多。

2.不同的环境下接种的微生物大多形态各异，因此可以说明不同的环境中微生物的种类变化较大。

3.从形态特征看可以知道菌落的特征,来分离菌落。

4.通过比较在空气中放置5分钟后的培养皿在27摄氏度培养和37摄氏度培养两组的培养皿上的菌落数

量，37摄氏度培养皿中的菌落数多于27摄氏度的培养皿中的菌落数，由此可推断出，37摄氏度的环境可能更加适合菌落的生长。

5.通过比较在空气中放置10分钟后和5分钟的培养皿在37摄氏度培养后的菌落数量，可以认为在有菌

条件中暴露时间越久，则染菌的数量越多。

6.通过比较3-2-空气-10’-37℃和3-4-发-37℃，可初步推断头发表面的某些菌来自空气。

七、问题与讨论

思考一：列举2-3类微生物，说明它们在本实验条件下（肉膏蛋白胨琼脂平板，37℃）不能生长。

因为牛肉膏蛋白胨培养基是用来培养细菌的,故不能培养真菌,例如酵母菌。其次实验是在37摄氏度进行，可能有些微生物不适合在此温度下培养。

思考二：比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多？为什么？

菌落类型为手上最多。因为手接触了很多细菌或霉菌，包括空气中的，都可通过手的接触进入培养基。思考三：比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌生长，你认为是什么原因？

洗手前菌落数比洗手后菌落数少，但是菌种数目多。洗手前，多数菌落为霉菌，洗手后，大多数为小型细菌菌落，而且数量较多。猜测原因为，洗手前的平板，霉菌生长可能抑制了细菌生长，因而菌落数较少；洗手后，霉菌被除去，细菌生长不受影响，故细菌菌落较多。

思考四：完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中？你如何体会“微生物既是我们的朋友又是我们的敌人”？

①生产方面：它们在土壤物质转化和促进植物生长有着极为重要的作用，例如根瘤菌，圆褐固氮菌都是将氮元素活化，让植物来利用的微生物。在生物工程方面，用酵母菌酿酒，用乳酸菌制酸奶，用毛霉制腐乳。还可以制造生物杀虫剂，如苏方金杆菌，日本金龟子芽胞杆菌，对人畜无害，是一种比较绿色的杀虫剂。然而，有一些微生物属于动植物细菌和病毒，给农牧业生产带来危害，如烟草花叶病毒，禽流感病毒。

②生活方面：当双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌在肠道内生长、繁殖，将阻止外面的病原体入侵肠道，构筑成一个生物屏障，对人的健康有益。也有一些我们经常听说的微生物对人的健康有害，如结核杆菌会引发结核病，流行感冒病毒会引发感冒等等。