疟原虫镜检技术培训手册

目录

第一章疟原虫生活史

一、概述

二、人体内发育

三、蚊体内的发育

第二章疟原虫镜下形态

一、薄血膜中疟原虫形态

二、厚血膜中疟原虫形态

第三章显微镜使用及维护

一、显微镜的构造

二、显微镜使用

三、使用注意事项

四、显微镜的维护保养

第四章血片制作与染色

一、血片制作

二、血膜的染色

第五章疟原虫镜检技术

一、血液

二、血液中各种正常细胞形态

三、薄血膜镜检

四、厚血膜镜检

五、杂质与疟原虫的鉴别

六、疟原虫计数

附录：疟原虫图谱

第一章疟原虫生活史

一、概述

疟原虫是疟疾的病原体。疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。

疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。

二、人体内发育

疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。（一）红细胞外期

按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。成熟肝期裂殖体直径为45～60 m，内含数以万计的肝期裂殖子。肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。

间日疟原虫的红外期裂体增殖较为复杂。目前认为间日疟原虫的子孢子在遗传学上具有两种不同的类型，即速发型子孢子和迟发型子孢子。速发型子孢子侵入肝细胞后，遂开始红外期裂体增殖，释放出肝期裂殖子侵入红细胞，经裂体增殖引起临床发作。迟发型子孢子侵入肝细胞后暂不继续发育，处于休眠状态（休眠体），经过一段休眠期后，再发育成为成熟的红外期裂殖体，释放出肝期裂殖子侵入红细胞引起复发。恶性疟原虫和三日疟原虫无迟发型子孢子，因而恶性疟和三日疟也无复发现象

（二）红细胞内期

红外期裂殖子从肝细胞释放出来进入血液后，一部分被吞噬细胞消灭，一部分在数分钟后侵入红细胞并开始发育，进行裂体增殖，这个时期称为红细胞内期(简称红内期)。

裂殖子进入红细胞后，其细胞质内出现一个较大的空泡，最初为圆形，细胞质少，围绕着空泡，细胞核在虫体的一侧，颇似戒指的宝石，发育成早期滋养体（亦称环状体）。以后逐渐发育，虫体和细胞核都渐渐增大，细胞质增多，并分解血红蛋白产生疟色素，其色泽、形状有种的差别，此时的疟原虫称为晚期滋养体（亦称大滋养体），因其细胞质向外伸出不规则的伪足，能呈阿米巴样运动，也称为阿米巴样体。恶性疟原虫的环状体，在外周血液中经十几个小时的发育，逐渐隐匿在微血管、血窦或其他血流缓慢处，发育成大滋养体及裂殖体，因此在外周血液中很难看到这两个时期。疟原虫由小滋养体发育成大滋养体的时间间日疟约须8-10个小时，恶性疟原虫10余个小时。

大滋养体发育成熟后虫体变圆，胞质内的空泡消失，核开始分裂，逐渐发育成为成熟裂殖体。成熟裂殖体的每个核被一份胞质包绕，核的数量因不同虫种而异，一般为8～32个，称为裂殖子。裂殖体成熟后，被寄生的红细胞破裂，释放出裂殖子。破裂的红细胞碎片、裂殖子和疟色素等进入血液，引起疟疾临床发作。一部分裂殖子被巨噬细胞吞食，一部分裂殖子再侵入正常红细胞，开始新一轮的红内期发育，如此循环往复，称为裂体增殖周期。红内期发育成熟的时间，因不同虫种而异，间日疟原虫和卵形疟原虫为48小时，恶性疟原虫为24~38小时，三日疟原虫为72小时，产生相应的间日发热和三日发热等不同发热周期。

红细胞内的疟原虫经过数次裂体增殖后，部分侵入红细胞的裂殖子不再进行核分裂，而逐渐发育成为雌、雄配子体，或称大、小配子体，这是疟原虫有性生殖的开始。成熟的雌、雄配子体被雌性按蚊吸入后，便在蚊胃内进行有性生殖。

疟原虫的生活史参见图1-1。

三、蚊体内的发育

在按蚊叮吸携带有雌、雄配子体的人血时，红内期疟原虫进入蚊胃，但只有雌、雄配子体能在蚊体内发育和繁殖，其余各期均被消化。雌、雄配子体在蚊体内的发育和繁殖，包括配子生殖和孢子增殖两个期。

（一）配子生殖

在蚊胃内，雌配子体的核经过减数分裂，形成圆形不活动的雌配子。雄配子体的核分裂成4～8个，细胞浆伸出鞭毛状细丝，每1细胞核进入一条鞭毛状细丝内，形成雄配子。雄配子游近雌配子，雌、雄配子结合形成圆形的合子，并进

一步发育成长形能蠕动的动合子。动合子穿过蚊胃壁的上皮细胞，停留于上皮细胞和弹性纤维膜之间，发育成卵囊。此时约为吸血后的第24～72小时。

（二）孢子增殖

在卵囊内核反复分裂，形成许多梭状子孢子。蚊胃壁上的卵囊可有数个到数十个或上百个，一个发育成熟的卵囊内可有1 000到10 000个子孢子。疟原虫在蚊体内发育时间的长短与温度和湿度有关，室温24℃～26℃，相对湿度75％～80％，是蚊体内疟原虫孢子生殖最适宜的条件。气温低于16℃或高于30℃时，发育变慢，并退化变性，直至死亡。成熟子孢子通过卵囊的微孔逸出或卵囊破裂后扩散入血腔，最后聚集于唾腺内。当含子孢子的雌蚊吸血时，子孢子随唾液进入人体，疟原虫开始其在人体内的发育过程。

表1 4种人体疟原虫的生物学特征