第十二章 生化分离技术与应用-习题

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生化分离技术 考试复习题库(含详细答案)

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《生化分离》考试复习题库一、选择题1.下列不是超临界萃取工艺的方法是()。

A 等温法B 等压法C 吸附法D 交换法2.影响絮凝效果的因素有很多,但不包括()。

A 絮凝剂的浓度B 溶液pH值C 溶液含氧量D 搅拌速度和时间3.葡聚糖凝胶色谱属于排阻色谱,在化合物分离中,先被洗脱下来的为()。

A 杂质B 小分子化合物C 大分子化合物D 两者同时下来4.当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时,蛋白质溶解度()。

A 增大B 减小C 先增大,后减小D 先减小,后增大5.下列不能提高发酵液过滤效率的措施是()。

A 增大滤过面积B 降低料液温度C 加压或减压D 加入助滤剂6.下列方法中,哪项不属于改善发酵液过滤特性的方法A 调节等电点B 降低温度C 添加表面活性物质D 添加助滤剂7.助滤剂应具有以下性质()A 颗粒均匀、柔软、可压缩B 颗粒均匀、坚硬、不可压缩C 粒度分布广、坚硬、不可压缩D 颗粒均匀、可压缩、易变形8.在发酵液中除去杂蛋白质的方法,不包括()A 沉淀法B 变性法C 吸附法D 萃取法9.下列关于速率区带离心法说法不正确的是()A 样品可被分离成一系列的样品组分区带B 离心前需于离心管内先装入正密度梯度介质C 离心时间越长越好D 一般应用在物质大小相异而密度相同的情况10.助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒,它能使滤饼疏松,滤速增大。

以下不属于助滤剂的是()A 氯化钙B 纤维素C 炭粒D 硅藻土11.细胞破碎的方法可分为机械法和非机械法两大类,下列不属于机械法的是()A 加入金属螯合剂B 高压匀浆法C 超声破碎法D 珠磨法12.萃取操作是利用原料液中各组分()的差异实现分离的操作。

A 溶剂中的溶解度B 沸点C 挥发度D 密度13.两相溶剂萃取法的原理为:A 根据物质在两相溶剂中的分配系数不同B 根据物质的熔点不同C 根据物质的沸点不同D 根据物质的类型不同14.下列溶液不是双水相的是()。

A PEG/葡聚糖B PEG/磷酸盐C PEG/硫酸铵D 磷酸盐/硫酸铵15.在萃取操作中,分离系数越小,组分()分离。

《生化分离工程》思考题与答案

《生化分离工程》思考题与答案

第一章绪论1、何为生化分离技术?其主要研究那些容?生化分离技术是指从动植物组织培养液和微生物发酵液中分离、纯化生物产品的过程中所采用的方法和手段的总称。

2、生化分离的一般步骤包括哪些环节及技术?一般说来,生化分离过程主要包括4个方面:①原料液的预处理和固液分离,常用加热、调PH、凝聚和絮凝等方法;②初步纯化(提取),常用沉淀、吸附、萃取、超滤等单元操作;③高度纯化(精制),常选用色谱分离技术;④成品加工,有浓缩、结晶和干燥等技术。

3、生化分离工程有那些特点,及其重要性?特点:1、目的产物在初始物料(发酵液)中的含量低;2、培养液是多组分的混合物,除少量产物外,还有大量的细胞及碎片、其他代物(几百上千种)、培养基成分、无机盐等;3、生化产物的稳定性低,易变质、易失活、易变性,对温度、pH值、重金属离子、有机溶剂、剪切力、表面力等非常敏感;4、对最终产品的质量要求高重要性:生物技术产品一般存在于一个复杂的多相体系中。

唯有经过分离和纯化等下游加工过程,才能制得符合使用要求的产品。

因此产品的分离纯化是生物技术工业化的必需手段。

在生物产品的开发研究中,分离过程的费用占全部研究费用的50%以上;在产品的成本构成中,分离与纯化部分占总成本的40~80%;精细、药用产品的比例更高达70~90%。

显然开发新的分离和纯化工艺是提高经济效益或减少投资的重要途径。

4、生物技术下游工程与上游工程之间是否有联系?它们之间有联系。

①生物工程作为一个整体,上游工程和下游工程要相互配合,为了利于目的产物的分离与纯化,上游的工艺设计应尽量为下游的分离纯化创造条件,例如,对于发酵工程产品,在加工过程中如果采用液体培养基,不用酵母膏、玉米浆等有色物质为原料,会使下游加工工程更方便、经济;②通常生物技术上游工程与下游工程相耦合。

发酵-分离耦合过程的优点是可以解除终产物的反馈抑制效应,同时简化产物提取过程,缩短生产周期,收到一举数得的效果。

生化分离工程习题库

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17. 在细胞破碎的操作中,下列哪种方法属于液体剪切力导致细胞破碎的方式.( )A. 超声波B.冻结融化C.球磨法D.匀浆法18.花生四烯酸即二十二碳四烯酸是婴幼儿成长必需的不饱和脂肪酸,现已通过发酵表达实现工业化生产。

其提取过程中通常要采用辛烷萃取,如果增大水相pH,其萃取的分配系数会发生下列哪种变化()A. 增大B. 减小C. 不变D. 不能确定19.红霉素为一弱碱性物质,其提取过程中通常要采用乙酸戊酯萃取,如果增大水相pH,其萃取的分配系数会发生下列哪种变化()A. 增大B. 减小C. 不变D. 不能确定20. 采用由阳离子表面活性剂形成的反胶团溶液萃取蛋白质,理论上下列方法中有利于增大蛋白质的分配系数有()A. 增加无机盐浓度B. 适当调节水相pH大于该蛋白等电点C. 降低无机盐浓度D. 适当调节水相pH小于该蛋白等电点21.下列关于超临界流体说法正确的是()A. 是物质介于气态和液态之间的一种状态B. 超临界流体的溶解性接近液体C. 超临界流体的溶解能力与其密度有关D. 超临界流体的扩散系数大于该物质处于液态时的扩散系数22.采用由AOT形成的反胶团溶液萃取蛋白质,理论上下列方法中有利于增大蛋白质的分配系数有()A. 增加无机盐浓度B. 适当调节水相pH大于该蛋白等电点C. 降低无机盐浓度D. 适当调节水相pH小于该蛋白等电点23.利用PEG/DEX双水相体系萃取蛋白质,下列哪种方法可使蛋白质富集在上相()A. 增加PEG分子量B.减小PEG分子量C. 增加DEX分子量D. 减小DEX分子量24下图所示为双水相相图,线段AB为系线,M和N分别为总浓度不同两个双水相体系,下列说法正确的是()A. 图中M和N所示的双水相体系在分相后两相体积比相等B. 同一种蛋白质在M和N的上相和下相分配系数不同C. M的上下相组成与N的上下相组成一样D. M的上下相组成与N的上下相组成不一样25.有关双水相萃取说法正确的是()A. 系线越长,分配系数越大B. 系线越长,分配系数越小C. 系线越长,上下相差别越大D. 系线越长,上下相差别越小26.关于发酵液的乳化现象,不正确的说法是()A.主要是由于蛋白质引起的B.是W/O型乳浊液C.发酵液中存在表面活性剂D.可以通过离心或在发酵液中加入SDS来降低乳化现象27.采用PEG/Dextran双水相萃取蛋白时,下列方法一定能使蛋白向上相富集的是()A. 增大Dextran分子量B. 增大pHC. 降低PEG浓度D. 加入少量KCl。

生化分离每章练习题

生化分离每章练习题

第一章绪论1.生物分离工程在生物技术中的地位?2、生物分离工程的特点是什么?3、生物分离过程的一般流程?4、不同生物物质分离提取常用的单元操作?5. 生化分离和化工分离的主要区别是什么?6.对于氨基酸类物质通常采用哪些分离纯化方法?并说明理由。

7.对于蛋白质类物质通常采用哪些分离纯化方法?并说明理由。

8.提取与精制技术在现代生物化学工程中占有十分重要的地位,与传统化学化工中的分离过程相比,阐述生物技术产品对提取与精制技术的特殊要求及近几年来发展起来的一些新方法新技术。

第二章.发酵液预处理、细胞破碎及固液分离一、名词解释1. 凝聚和絮凝答:(1)凝聚:在中性盐的作用下,可以使菌体表面双电位层排斥,电位下降(即中和沉淀物质的电荷)。

(2)凝絮:向含菌的料液中加入高分子絮凝剂,可使菌体之间产生架桥作用而产生较大的凝聚颗粒。

2.渗透压冲击法破碎细胞答:是较温和的一种破碎细胞的方法,将细胞放在高渗透压的介质中,达到平衡后介质突然被稀释或者将细胞转入水中或缓冲液中,由于渗透压的突然变化,水迅速进入细胞内,引起细胞壁的破裂。

渗透压冲击法仅对细胞壁较脆弱的或者细胞壁预先用酶处理的或合成受抑制而强度减弱时才是适合的。

3.高压匀浆细胞破碎法答:细胞悬浮液在高压作用下,从阀座与阀之间的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上,细胞受到高速撞击作用后,急剧释放到低压环境中,从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。

此法不适用于团状或丝状真菌、较小的革兰氏阳性菌及含有包含体的基因工程菌。

适用于酵母菌和大多数细菌细胞的破碎。

4.超声波破碎法答:细胞的破碎是由于超声波的空穴作用,从而产生一个极为强烈的冲击波压力,由它引起的粘滞性漩涡在介质的悬浮细胞上造成了剪切应力,促使细胞内液体发生流动,从而使细胞破碎。

适用于多数微生物细胞的破碎。

5.差速离心答:主要采用逐渐提高离心速度的方法分离不同大小细胞器的方法。

二、单项选择题1. 去除高价金属离子Mg2+,加入 ( B) 试剂。

生化分离工程技术复习题

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一、填空题1. 生物产品的分离包括,,和。

2. 发酵液常用的固液分离方法有: 和等。

3. 离心设备从形式上可分为,,等型式。

4. 亲和吸附原理包括,和三步。

5. 多糖基离子交换剂包括和两大类。

6. 工业上常用的超滤装置有,,和。

7. 影响吸附的主要因素有,,,,和。

8. 离子交换树脂由,和组成。

9. 电泳用凝胶制备时,过硫酸铵的作用是;甲叉双丙烯酰胺的作用是;TEMED的作用是;11、超临界流体的特点是与气体有相似的,与液体有相似的;12、离子交换树脂的合成方法有和两大类;13、常用的化学细胞破碎方法有,,,和;14、离子交换分离操作中,常用的洗脱方法有和;15、等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其的不同;17、亲和吸附原理包括,和三步。

二、名词解释1、超临界流体萃取:2、等电点沉淀法:3、盐析沉淀法:4、亲和层析法:5、三相点:三、是非题1、冷冻升华干燥过程是将湿物料在较低的温度下,冻结成固态,然后在高度真空下,将其水分直接升华成气态的干燥过程,该方法不适合处理青霉素、生物酶等热敏性物料。

2、在膜分离过程中,由于浓差极化的形成导致膜表面溶质浓度增大,溶质的通透性降低,故在使用中要尽量减少这种情况出现。

3、层析技术根据使用目的不用可分为制备层析技术及分析层析技术。

4、分子蒸馏是一种非平衡状态下的分离操作,它与常规蒸馏技术的原理是不同的。

5、萃取是利用溶质在两项之间分配系数的不同而使溶质分离的技术,分配系数差别越小萃取效果越好。

6、凝聚和絮凝原理不同,凝聚是在中性盐作用下,由于双电层排斥电位的降低而使胶体体系不稳定的现象。

絮凝是在高分子絮凝剂的作用下,通过架桥作用,使细胞和蛋白质聚集成粗大的絮凝团的过程。

7、细胞破碎就采用一定的方法,在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜,设法使细胞内产物最大程度地释放到液相中,破碎后的细胞浆液经分离后再采用不同的分离手段进一步纯化的方法。

四、简答题1、请结合图示简述凝胶排阻色谱(分子筛)的分离原理。

生化分离题库

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⽣化分离题库绪论1.为什么说⽣物分离过程往往成本⾼?答:①在粗产物中,被提取物浓度通常很低;②需处理的物料往往是成分⽐较复杂的多相体系;③对于⽣物制品往往要求纯度⾼、⽆⾊、结晶以及能长期保存等因此,使得⽣物分离过程往往成本很⾼。

2.以发酵液为例,简述⽣化分离的⼀般⼯艺过程?3.选择下游加⼯⼯艺的原则:①是胞内产物还是胞外产物;②原料中产物和主要杂质的浓度;③产物和主要杂质的物理化学性质及其性能差异;④产品⽤途及质量标准;⑤产品的市场价格,涉及能源、辅助材料的消耗⽔平;⑥污染物的排放量及处理⽅式4.产品提取的⼯艺步骤为何越少越好?为何要重复提取?因为下游分离技术步骤越多,提取收率越低,⽐如整个下游过程包括 6 步操作,每步回收率⾼达 95%,经过 6 步操作之后,总收率也只有 73.5%,因此尽量减少分离提取的操作步骤,有利于提⾼产物总收率。

重复提取的⽬的是为了提⾼产物的总收率。

如⼀步等电结晶提取⾕氨酸的收率为78%,结晶母液如果进⾏重复提取,⼆次重复提取收率也为 75%,则总收率为 78%+(1-78%)× 75%=94.5%。

第⼆章过滤1.什么是助滤剂?在固液分离操作过程中,如何选择助滤剂?助滤剂是⼀种具有特殊性能的细粉或纤维;它能使某些难以过滤的物料变得容易过滤。

助滤剂的选择要点:①粒度选择:根据料液中的颗粒和率出液的澄清度来确定。

当粒度⼀定时,过滤速率与澄清度成反⽐,过滤速率⼩,澄清度好,故颗粒较⼩时,应采⽤细的助滤剂。

②根据过滤介质和过滤情况选择助滤剂的品种:如使⽤粗⽬滤⽹时易泄露,可加⼊⽯棉粉或纤维素,可有效防⽌泄露;③⽤量选择:间歇操作时助滤剂预涂层的最⼩厚度是 2mm;在连续操作时根据所需过滤速率来确定。

2.为什么要进⾏发酵液的预处理?改变发酵液的物理性质,提⾼从悬浮液中分离固形物的速率,提⾼固液分离的效率;尽可能使产物转⼊便于后处理的某⼀相中去除发酵液中部分杂质,有利于后续各步操作3.发酵液的预处理技术⽅法物理性质的改善:加热(降低黏度,去除杂蛋⽩,调节悬浮液的PH值);凝聚与絮凝(增⼤粒度);加助滤剂(改善过滤)。

生化分离分析技术与原理智慧树知到答案章节测试2023年中山大学

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第一章测试1.动物细胞膜较脆弱极易破损,在组织绞碎或提取时就破坏了。

()A:对B:错答案:A2.用高浓度盐溶液的蛋白质抽提物上层析柱时,可以不将盐除去()A:错B:对答案:A3.对具有等电点的两性电解质物质,抽提液的pH值应在等电点附近的稳定范围内()A:错B:对答案:A4.在抽提液中加入巯基乙酸盐(1-5mmo1/L)等还原剂可以防止巯基发生氧化作用,或者延缓某些酶活性的丧失()A:对B:错答案:A5.蛋白质和多价阳离子(如Zn2+和Cu2+等)能结合形成复合物,使蛋白质在有机溶剂中的溶解度降低。

这对在高浓度溶剂中才能沉淀的蛋白质特别有益。

()A:错B:对答案:B6.新的透析袋用蒸馏水洗净,无漏洞时,即可使用。

用过的透析袋一般不能重复使用()A:错B:对答案:A7.二甲基亚砜或二甲基甲酰胺能使溶液的极性大大降低()A:错B:对答案:B8.冰冻的抽提液在真空状态下,可由固体直接变为气体,有效成分不会破坏()A:错B:对答案:B9.对于含有较多脂肪的动物脏器进行脱脂处理时,可以采用快速加热约50 ℃、快速冷却的方法,使熔化的油滴冷却后凝聚成油块而被除去。

()A:错B:对答案:B10.抽提动物细胞中有效蛋白质成分时,在配制的试剂中加1-3mmo1/L EDTA(金属离子络合剂)的作用主要是防止巯基与金属离子产生沉淀复合物。

()A:错B:对答案:B11.极稀的悬浮液一般采用浊度法测定目标物质含量,比如细菌生长的浓度可以用此法测定,其原理是测定悬浮液在不被吸收的波长下的消光值。

()A:对B:错答案:A12.测定目标蛋白在某材料中的含量时,与吸收光谱法相比,荧光法的主要优点是精确性、重复性和灵敏度好。

()A:对B:错答案:A13.葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,采用电化学法用NaCl溶液滴定该酸的含量,可求出葡萄糖氧化酶的活力。

()A:错B:对答案:A第二章测试1.脱盐透析时应选用适当的透析液,一般选用()。

《生化分离工程》思考题及习题

《生化分离工程》思考题及习题

《生化分离工程》思考题及习题第一章绪论1、何为生化分离工程bioseparation engineering/下游加工过程, biotechnology?其主要研究那些内容?2、生化分离技术依据的分离原理有哪些?3、生化分离工程有那些特点?其包括那几种主要分离方法?4、何为传质分离过程?5、简述生化分离工程的发展趋势。

6、亲和技术目前已衍生出那些子代分离技术?7、生化反应与生化分离耦合技术有那些特点?8、为何在生物技术领域中往往出现“丰产不丰收”的现象?9、生物产品与普通化工产品分离过程有何不同?10、设计生物产品的分离工艺应考虑哪些因素?11、初步纯化与高度纯化分离效果有何不同?12、如何除去蛋白质溶液中的热原质?13、生物分离为何主张采用集成化技术?14、若每一步纯化产物得率为90%,共6步纯化得到符合要求产品,其总收率是多少?第二章预处理与固-液分离法1、发酵液预处理的目的是什么?主要有那几种方法?2、何谓絮凝?何谓凝聚?各自作用机理是什么?3、絮凝剂可分为那三种?有那些因素影响絮凝过程?4、在生化工业中常用的过滤方式那两种?各自有何特点?5、离心分离分那两大类?各自有何特点及用途?常用离心法有那几种?6、何谓密度梯度离心?其工作原理是什么?7、如何使用助滤剂?8、错流微滤与传统过滤相比有何优点?第三章细胞破碎法1、细菌细胞壁与真菌(酵母)细胞壁在组成上有何区别?2、细胞破碎主要有那几种方法?3、机械法细胞破碎方法非机械破碎方法相比有何特点?4、何谓脂溶破碎法?其原理是什么?包括那几种?5、酶法细胞破碎常用那几种酶类?6、包涵体是如何产生的?如何使重组蛋白复性?7、如何测定细胞破碎程度?第四章沉淀法1.理解概念:盐溶,盐析2.常用的沉淀法有哪几种?3.生产中常用的盐析剂有哪些?其选择依据是什么?4.何谓分步盐析沉淀?5.有机沉淀法与盐析沉淀法相比有何优缺点?第五章溶剂萃取法1、何谓溶剂萃取?其分配定律的适用条件是什么?2、在溶剂萃取过程中pH值是如何影响弱电解质的提取?3、何谓乳化液?乳化液稳定的条件是什么?常用去乳化方法有那些?4、在发酵工业中,去乳化有何实际意义?5、理解概念:HLB,分配系数,分离因子,介电常数,带溶剂6、生物物质的萃取与传统的萃取相比有哪些不同点?7、pH 对弱电解质的萃取效率有何影响?8、发酵液乳化现象是如何产生的?对分离纯化产生何影响? 如何有效消除乳化现象?9、什么叫超临界流体?10、为何在临界区附近,稍微改变流体的压力和温度,都会引起流体密度的大副变化?11、要提高超临界流体萃取的效率,可以考虑哪些方面?12、名词解释:胶束/反胶束13、影响反胶束萃取蛋白质的因素有哪些?第六章双水相萃取1、何谓双水相萃取?2、双水相体系可分为那几类?目前常用的体系有那两种?3、为什么说双水相萃取适用于生物活性大分子物质分离?4、影响双水相萃取的因素有那些?当电解质存在,PH是如何影响双水相萃取的?5、用双水相萃取细胞破碎(匀浆)液时,一般是把目标产物分布在上相,而细胞碎片、杂蛋白等杂质分布在下相,为什么?6、何谓双水相亲和萃取?第七章膜分离法1、何谓膜分离?主要有那几种膜分离方法?2、膜在结构上可分为那几种?膜材料主要用什么?3、膜组件在形式上有那几种?各自有何优缺点?4、为何说非对称性膜的发明为膜分离走向工业化奠定了基础?5、简述微滤、超滤膜、反渗透膜在膜材料、结构、性能及其应用等方面的异同点6、膜分离的表征参数有那些?何谓膜截留分子量?7、何谓浓差极化现象?它是如何影响膜分离的?减少浓差极化现象的措施?8、膜的清洗及保存方法有那几种?9、膜分离设备按膜组件形式可分为几种?相比较的优缺点?10、反渗透与超滤在分离机理上有何区别?11、超滤、反渗透膜分离主要有那些方面应用?12、比较膜分离技术与亲和层析技术的特点13、亲和剂由哪几部分组成?14、简述亲和膜分离的过程?15、液膜由哪几部分组成?各自的功能是什么?17、影响液膜稳定性的因素有哪些?第八章吸附法1、吸附作用机理是什么?2、吸附法有几种?各自有何特点?3、大孔网状聚合物吸附与活性炭吸附剂相比有何优缺点?4、影响吸附过程的因素有那些?5、何谓穿透曲线?6、膨胀床吸附的特点是什么?第九章离子交换法1、何谓离子交换法?一般可分为那几种?2、离子交换树脂的结构、组成?按活性基团不同可分为那几大类?3、离子交换树脂的命名法则是什么?4、离子交换树脂有那些理化性能指标?5、何谓真密度、湿真密度?6、大孔径离子交换树脂有那些特点?7、pH值是如何影响离子交换分离的?8、普通型离子交换树脂为何不能用来分离提取蛋白质分子?9、各类离子交换树脂的洗涤、再生条件是什么?10、软水、去离子水的制备工艺路线?11、对生物大分子物质,离子交换剂是如何选择的?12、理解概念:交换容量,工作交换容量,膨胀度,湿真密度,交联度13、为何阴树脂交换容量用动态法测定而阳树脂用静态法测定?第十章色层分离1、何谓色层分离法?可分为那几大类?2、何谓保留值、分配容量K、分离度?3、色层图中分离度有那几种表示方法?4、层析剂有那几种?各自有何特点?5、何谓亲和色层分离法?亲和力的本质是什么?亲和色层中常用的亲和关系有那几种?6、何谓疏水作用层析?其最大的特点是什么?7、柱层析法与固定床吸附法有何异同点?8、苯硼酸亲和介质用于分离哪些目标物?原理是什么?9、凝胶层析分离机理是什么?10、亲和层析的机理是什么?11、配基偶联后残留电荷对分离有何影响?如何消除?12、小分子配基为何需插入手臂?13、何谓色层分离法?可分为那几大类?14、简述柱层析系统的工艺流程。

现代生化技术习题及答案

现代生化技术习题及答案

第一章生物大分子的提取与沉淀分离技术一、名词解释1.生化技术:是在生物化学及其相关学科应用的各种技术。

主要是指生物体内物质及其代谢产物,特别是生物大分子的分离、检测、制备与改造技术。

2.提取(萃取):是在一定的条件下,用一定的溶剂处理样品,使欲分离的物质充分释放到溶剂中的过程。

又称“抽提”或“萃取”。

3..沉淀分离技术:是通过改变某些条件或加入某种物质,使溶液中某种溶质的溶解度降低,从而从溶液中沉淀析出的技术。

4.盐溶:低盐浓度下蛋白质的溶解度随着盐浓度的升高而增加的现象。

5.盐析作用:盐浓度升高到一定程度后,蛋白质的溶解度随着盐浓度的升高而降低,结果使蛋白质沉淀析出,这种现象即为盐析作用。

6.等电点沉淀法:是利用蛋白质在pI时溶解度最低,以及不同的蛋白质有不同的pI这一特性,对蛋白质进行分离纯化的方法。

7.有机溶剂沉淀法:利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度不同而使蛋白质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。

二、填空1. 现代生化技术的显著特点:是以三高所著称,即:高技术、高投入、及高利润。

2. 生物大分子主要包括:蛋白质、酶、核酸、多糖和脂类,它们是生物体内存在的具有特殊生物学功能的高分子化合物。

3. 生化分离技术主要有沉淀分离技术分离、层析分离技术分离、电泳分离技术分离和超离心分离技术分离技术。

4. 蛋白质和酶的种类繁多,在提取时应根据其存在的部位、分子结构及溶解性质的不同选择不同的提取方法。

5. 影响提取的因素主要有溶剂、溶解度、温度、pH 和浓度差等。

6. 水溶液法提取酶和蛋白质时,要注意控制好盐浓度、温度、pH值等因素。

7. 沉淀分离技术包括盐析沉淀、等电点沉淀和有机溶剂沉淀等技术。

8. 在分段盐析中,在一定的pH和温度条件下,改变离子强度称为Ks分段盐析,而在一定的盐和离子强度条件下,改变温度或pH值称为β分段盐析。

9. 实验室进行蛋白质盐析沉淀时应用最多、最广的盐是硫酸铵。

10. 在核蛋白提取时,应选用0.14mol/L的氯化钠溶液提取核糖核蛋白,而选用1mol/L的氯化钠溶液提取脱氧核糖核蛋白。

第十二章 生化实验技术

第十二章    生化实验技术

第十二章生化实验技术一、选择题1、某蛋白质pI为7.5,在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳,其泳动方向为()。

A、向负极移动B、向正极移动C、不运动D、同时向正极和负极移动2、进行酶活力测定时()。

A、底物浓度必须极大于酶浓度B、酶浓度必须极大于底物浓度C、酶能提高反应的平衡点D、与底物浓度无关3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高,是因为具有下列()效应。

A、浓缩效应B、电荷效应C、分子筛效应D、粘度效应4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于()。

A、亲和层析B、吸附层析C、离子交换层析D、分配层析5、SDS-PAGE分离蛋白质的基础是()。

A、分子量B、荷/质比C、带负电荷的侧链D、带正电荷的侧链6、寡聚蛋白的亚基的相对分子质量可以通过()方法测定。

A、SDS-PAGEB、SDS-PAGE与凝胶过滤结合C、凝胶过滤D、SDS-PAGE与等电聚焦结合7、将抗体固定在层析柱的载体上,使抗原从流经此柱的蛋白样品中分离出来,这种技术属于()。

A、吸附层析B、离子交换层析C、亲和层析D、凝胶过滤8、将RNA转移到硝基纤维素膜上的技术叫()。

A、Southern印迹B、Northern印迹C、Western印迹D、Eastern印迹9、在酶的分离纯化中最理想的实验结果是()。

A、纯化倍数高,回收率高B、蛋白回收率高C、回收率小但纯化倍数高D、比活力最大10、酶的分离提纯过程中,不正确的操作是()。

A、需在低温下进行,一般在0~5℃之间B、酶制剂制成干粉后可保存于4℃冰箱中C、需经常使用巯基乙醇以防止酶蛋白二硫键发生还原D、提纯时间尽量短二、是非题(在题后括号内打√或×)1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中,向阳极移动,而在大于等电点的pH溶液中,将向阴极移动。

2、酶的比活力可表示酶纯度。

3、提纯酶时,只需求其总活力,就可以知其纯度是否提高了。

4、疏水氨基酸多的蛋白质不溶于水。

5、凝胶过滤和SDS-PAGE测得的蛋白质的相对分子质量是真实相对分子质量。

生化分离技术复习题及答案

生化分离技术复习题及答案

离心技术1、什么是离心技术?这种技术主要应用于哪些方面?离心技术是分子生物学和生物化学研究中不可缺少的一种技术。

它是利用物质沉降系数、密度、浮力等方面的差别,用强大的离心力场将其分离、浓缩、纯化和鉴定的技术。

离心技术既可以是制备性的也可以是分析性的。

处理的样品可多可少(几千L至0.2mL以下),应用范围十分广泛。

这项技术应用很广,诸如分离出化学反应后的沉淀物,天然的生物大分子、无机物、有机物,在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。

2、离心机的种类有哪些?主要性能如何?根据性能,离心机分为三种类型,即低速离心机(转速在2000~6000r/min之间,最大RCF可达6000g)、高速离心机(转速在18000~25000r/min之间,最大RCF 可达60 000g)、超速离心机(转速在40 000~100 000r/min之间,最大RCF可达803 000g)。

超速离心机按性能又分为分析型、制备型和分析制备型三类。

3、超速离心机主要由哪四个部分构成?分析性离心机构造的特点是什么?超速离心机主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。

分析性离心机使用了特殊设计的转头和光学检测系统,以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。

从而确定其物理性质。

分析性超速离心机的转头是椭圆形的,以避免应力集中于孔处。

此转头通过一个有柔性的轴联接到一个高速的驱动装置上,转头在一个冷冻的和真空的腔中旋转,转头上有2~6个装离心杯的小室,离心杯是扇形石英的,可以上下透光,离心机中装有一个光学系统,在整个离心期间都能通过紫外吸收或折射率的变化监测离心杯中沉降着的物质,在预定的期间可以拍摄沉降物质的照片,在分析离心杯中物质沉降情况时,在重颗粒和轻颗粒之间形成的界面就像一个折射的透镜,结果在检测系统的照像底板上产生了一个“峰”,由于沉降不断进行,界面向前推进,因此峰也移动,从峰移动的速度可以计算出样品颗粒的沉降速度。

生化分离工程知到章节答案智慧树2023年陕西理工大学

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生化分离工程知到章节测试答案智慧树2023年最新陕西理工大学第一章测试1.英国的工业革命所进行的时间是()。

参考答案:18世纪60年代到19世纪上半期2.制约情绪的因素主要有()。

参考答案:外部事件;认知过程;生理状态3.判断(2分)不溶物的去除分为过滤、离心和萃取三部分。

()参考答案:对4.生物分离的四个步骤按顺序是不溶物的去除、产物分离、精制、纯化。

()参考答案:错5.结晶和离心属于扩散分离。

()参考答案:错6.生物分离在整个生物技术中处于上游。

()参考答案:错7.速度分离是根据均相体系中溶质在外力下的移动速度差异实现分离。

()参考答案:对8.干燥属于纯化技术。

()参考答案:错9.非均相体系的分离属于机械分离。

()参考答案:对10.减少分离操作步骤,可促进提取收率提高。

()参考答案:对11.下列哪个不属于产物粗分离的单元()。

参考答案:离心12.下列( )可以提高总回收率。

参考答案:减少操作步骤第二章测试1.助滤剂是一种可压缩的多孔微粒。

()参考答案:错2.通过加入某些反应剂是发酵液进行预处理的方法之一。

()参考答案:对3.珠磨法中适当地增加研磨剂的装量可提高细胞破碎率。

()参考答案:错4.高级醇能被细胞壁中的类脂吸收,使胞壁膜溶胀,导致细胞破碎。

()参考答案:错5.过滤的透过推动力是()。

参考答案:压力差6.差速区带离心的密度梯度中最大密度()待分离的目标产物的密度。

参考答案:小于7.构成细胞壁的肽聚糖是一种()的多聚物,由N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰胞壁酸和短肽聚合而成的多层网状结构。

参考答案:难溶性8.高压匀浆法破碎细胞,不适用于()参考答案:青霉9.适合小量细胞破碎的方法是()参考答案:超声破碎法10.丝状(团状)真菌适合采用()破碎。

参考答案:珠磨法第三章测试1.蛋白质变性,一级、二级、三级结构都被破坏。

()参考答案:错2.蛋白质类的生物大分子在盐析过程中,最好在高温下进行,因为温度高会增加其溶解度。

第十二章 生化分离技术与应用-习题

第十二章 生化分离技术与应用-习题

第十二章生化分离技术和应用一、选择题⒈下列哪种方法可用于测定蛋白质的分子量()A、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法;B、280/260nm紫外吸收比值;C、凯氏定氮法;D、荧光分光光度法;E、Folin酚试剂法⒉氨基酸和蛋白质共有的理化性质为()A、胶体性质;B、两性性质;C、沉淀性质;D、变性性质;E、双缩脲性质⒊蛋白质溶液的稳定因素为()A、蛋白质溶液为真溶液;B、蛋白质在溶液中做布朗运动;C、蛋白质分子表面带有水化膜和同性电荷;D、蛋白质溶液的黏度大;E、以上都不对⒋关于蛋白质在等电点时的特性描述,哪项是错误的?()A、导电性最小;B、溶解度最小;C、黏度减小;D、电泳迁移率最小;E、以上都不对⒌今有①、②、③、④、四种蛋白质的混合液,等电点分别为:5.0、8.6、6.8和9.2 ,在pH8.6的条件下进行电泳分离,四种蛋白质电泳区带自正极的排列顺序为:()A、①、③、②、④;B、①、②、③、④;C、④、②、③、①;D、③、②、①、④;E、②、④、③、①;⒍盐析沉淀蛋白质的原理为()A、中和电荷,破坏水化膜;B、与蛋白质结合成不溶性盐;C、次级键断裂,蛋白质构象改变;D、调节蛋白质溶液的等电点;E、以上都不是⒎关于下列多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述,哪个是错的?()A、在pH12时,在电场中向阳极移动;B、在pH3时,在电场中向阴极移动;C、在pH5时,在电场中向阴极移动;D、在pH11时,在电场中向阴极移动;E、该肽的等电点大约在pH8⒏用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键()A、双缩脲反应;B、凯氏定氮;C、紫外吸收;D、茚三酮;E、奈氏试剂⒐蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵,要确定硫酸铵是否从透析袋中除净,你选用下列哪一种试剂检查()A、茚三酮试剂;B、奈氏试剂;C、双缩脲试剂;D、Folin-酚试剂;E、斐林试剂⒑将抗体固定在层析柱的载体上,使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来,这种技术属于()A、吸附层析;B、离子交换层析;C、分配层析;D、亲和层析;E、凝胶过滤⒒若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽,在下列哪个pH值条件下电泳最合适()A、pH2以下;B、pH2-4;C、pH7-9;D、pH10-12;E、pH12以上;⒓进行疏水层析时,以下哪种条件比较合适?()A、在有机溶剂存在时上柱,低盐溶液洗脱;B、在有机溶剂存在时上柱,高盐溶液洗脱;C、在低盐条件下上柱,高盐溶液洗脱;D、在高盐条件下上柱,按低盐、水和有剂溶剂顺序洗脱;E、低盐缓冲液上柱,低盐洗脱⒔对一个富含His残基的蛋白质,在使用离子交换层析时应优先考虑()A、严格控制蛋白质上样液的浓度;B、严格控制盐浓度;C、严格控制NaCl的浓度;D、严格控制洗脱液的pH值;E、严格控制洗脱液的体积⒕定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是()A、交换层析;B、亲合层析;C、分配层析;D、薄层层析二、判断是非⒈用凝胶过滤法分离蛋白质时,总是分子质量大的蛋白质首先被洗脱下来。

生化分离技术考试题目.doc

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第一章1.1何谓生化分离技术的集成化概念?请举例加以说明。

1)利用已有的和新近开发的生化分离技术,将T 游过程屮的有关单元进行有效组合(集成);2)或把 两种以上的分离技术合成为一种更有效的分离技术,达到提高产品收率、降低过程能耗和增加生产 效益的目标;例子⑴多种分离、纯化技术相结合,包拈新、老技术的和互渗透与融合,形成所谓融 合技术;⑵生化分离技术(下游技术)与发酵工艺(上游技术)相结合或称耦合,形成系统工程;1.2说明生化分离的主要步骤并指出胞内产物和胞外产物的分离纯化流程不同之处①材料及处理来源丰富,含量相对较高,杂质尽可能少②A 的物的提取将目的物从材料中以溶解 状态释放出来,方法与存在部位及状态有关③分离纯化核心操作,须据目的物的理化性质,生物 性质及具体条件定④浓缩,结品,干燥⑤保存整个过程应有快速灵敏准确的分析方法来衡量效果 (收率、纯度)(胞内外的区别就是在于破壁)2.1简要说明常用细胞破碎的主要方法、原理、特点、适用范围及细胞破碎今后的发展方向。

① 胞捣碎法,原理:机械运动产生剪切力适用于动植物组织② 高速匀浆法,破碎程度较上法好,且机械剪切力对生物大分子的破坏较小,处理量大。

原理:利 用高压使细胞悬浮液通过针型阀,由于突然的减压和高速冲击撞击环使细胞破碎。

适用于:较柔软、 易分散的组织细胞。

③研磨法和珠磨法适用于微生物与植物细胞④挤压瓶适用于细菌(G-) ⑤超声破碎⑦物理法(反复冻融动物材料、渗透压冲击细胞壁脆弱的微生物、急冷骤热(细菌病毒 等热不敏感的物质))⑧干燥法(热空气干燥法适用于酵母,真空干燥法适用于细菌,冷冻干燥法 适用于不稳定的酶)⑨化学法,1、溶剂处理法丙酮、氯仿、甲苯等脂溶性溶剂可溶解胞膜上脂 质化合物,使细胞结构破坏。

2、表面活性剂法添加如十二烷基磺酸钠、去氧胆酸钠等,通过破坏 细胞膜而破碎细胞,释放目的物。

此法常需与其它方法结合应用⑱酶解法,1.自溶法,将欲破碎 细胞在一定条件(pH 、T )下保温一定时间,通过细胞本身存在的酶系的作用,将细胞破坏,使胞内物质释放。

题库名称:生物分离技术(精简版)

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题库名称:生化分离技术一、名词解释2.凝聚:在电解质作用下,破坏细胞菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态,使胶体粒子聚集的过程。

3.分配系数:在一定温度、压力下,溶质分子分布在两个互不相溶的溶剂里,达到平衡后,它在两相的浓度为一常数叫分配系数。

6.絮凝:指在某些高分子絮凝剂存在下,在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程7.过滤:是在某一支撑物上放过滤介质,注入含固体颗粒的溶液,使液体通过,固体颗粒留下,是固液分离的常用方法之一。

8.萃取过程:利用在两个互不相溶的液相中各种组分(包括目的产物)溶解度的不同,从而达到分离的目的10.反渗析:当外加压力大于渗透压时,水将从溶液一侧向纯水一侧移动,此种渗透称之为反渗透。

11.离心沉降:利用悬浮液或乳浊液中密度不同的组分在离心力场中迅速沉降分层,实现固液分离12.离心过滤:使悬浮液在离心力场作用下产生的离心力压力,作用在过滤介质上,使液体通过过滤介质成为滤液,而固体颗粒被截留在过滤介质表面,从而实现固液分离,是离心与过滤单元操作的集成,分离效率更高13.离子交换:利用离子交换树脂作为吸附剂,将溶液中的待分离组分,依据其电荷差异,依靠库仑力吸附在树脂上,然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来,达到分离的目的。

19.等电点沉淀:调节体系pH值,使两性电解质的溶解度下降,析出的操作称为等电点沉淀。

20.膜分离:利用膜的选择性(孔径大小),以膜的两侧存在的能量差作为推动力,由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。

22.超临界流体:超临界流体是状态超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。

24.反渗透:在只有溶剂能通过的渗透膜的两侧,形成大于渗透压的压力差,就可以使溶剂发生倒流,使溶液达到浓缩的效果,这种操作成为反渗透。

28.反胶团:两性表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的,内含微小水滴的,空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。

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第十二章生化分离技术和应用
一、选择题
⒈下列哪种方法可用于测定蛋白质的分子量()
A、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法;
B、280/260nm紫外吸收比值;
C、凯氏定氮法;
D、荧光分光
光度法;E、Folin酚试剂法
⒉氨基酸和蛋白质共有的理化性质为()
A、胶体性质;
B、两性性质;
C、沉淀性质;
D、变性性质;
E、双缩脲性质
⒊蛋白质溶液的稳定因素为()
A、蛋白质溶液为真溶液;
B、蛋白质在溶液中做布朗运动;
C、蛋白质分子表面带有水化膜和
同性电荷;D、蛋白质溶液的黏度大;E、以上都不对
⒋关于蛋白质在等电点时的特性描述,哪项是错误的?()
A、导电性最小;
B、溶解度最小;
C、黏度减小;
D、电泳迁移率最小;
E、以上都不对
⒌今有①、②、③、④、四种蛋白质的混合液,等电点分别为:5.0、8.6、6.8和9.2 ,在pH8.6的
条件下进行电泳分离,四种蛋白质电泳区带自正极的排列顺序为:()
A、①、③、②、④;
B、①、②、③、④;
C、④、②、③、①;
D、③、②、①、④;
E、②、
④、③、①;
⒍盐析沉淀蛋白质的原理为()
A、中和电荷,破坏水化膜;
B、与蛋白质结合成不溶性盐;
C、次级键断裂,蛋白质构象改变;
D、调节蛋白质溶液的等电点;
E、以上都不是
⒎关于下列多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述,哪个是错的?()
A、在pH12时,在电场中向阳极移动;
B、在pH3时,在电场中向阴极移动;
C、在pH5时,
在电场中向阴极移动;D、在pH11时,在电场中向阴极移动;E、该肽的等电点大约在pH8
⒏用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键()
A、双缩脲反应;
B、凯氏定氮;
C、紫外吸收;
D、茚三酮;
E、奈氏试剂
⒐蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵,要确定硫酸铵是否从透析袋中除净,你选用
下列哪一种试剂检查()
A、茚三酮试剂;
B、奈氏试剂;
C、双缩脲试剂;
D、Folin-酚试剂;
E、斐林试剂
⒑将抗体固定在层析柱的载体上,使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来,这种技术属于()
A、吸附层析;
B、离子交换层析;
C、分配层析;
D、亲和层析;
E、凝胶过滤
⒒若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽,在下列哪个pH值条件下电泳最合适()
A、pH2以下;
B、pH2-4;
C、pH7-9;
D、pH10-12;
E、pH12以上;
⒓进行疏水层析时,以下哪种条件比较合适?()
A、在有机溶剂存在时上柱,低盐溶液洗脱;
B、在有机溶剂存在时上柱,高盐溶液洗脱;
C、
在低盐条件下上柱,高盐溶液洗脱;D、在高盐条件下上柱,按低盐、水和有剂溶剂顺序洗脱;
E、低盐缓冲液上柱,低盐洗脱
⒔对一个富含His残基的蛋白质,在使用离子交换层析时应优先考虑()
A、严格控制蛋白质上样液的浓度;
B、严格控制盐浓度;
C、严格控制NaCl的浓度;
D、严格
控制洗脱液的pH值;E、严格控制洗脱液的体积
⒕定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是()
A、交换层析;
B、亲合层析;
C、分配层析;
D、薄层层析
二、判断是非
⒈用凝胶过滤法分离蛋白质时,总是分子质量大的蛋白质首先被洗脱下来。

⒉盐析法可使蛋白质沉淀,但不引起变性,所以盐析法常用于蛋白质的分离和纯化。

⒊测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺(SDS)-聚丙烯酰胺凝
胶电泳。

⒋等电点不是蛋白质的特征参数。

⒌蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。

⒍逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理。

⒎某蛋白质在pH6时向阳极移动,则其等电点小于6。

⒏蛋白质带电荷为0的pH值为蛋白质的等电点。

三、填空题
⒈蛋白质是稳定的亲水胶体,其稳定因素是和。

⒉有一种蛋白质,说明此蛋白质含有个
电泳均显示一条带,说明蛋
⒊这是因为蛋白质分子中的、和三
⒋当蛋白质溶液中盐离子低时,可增加蛋白质的溶解度,这种现象称;当溶液中盐离子强
⒌DEAE-
⒍pH值和
离子强度的缓冲液,才能将此蛋白质洗脱下来。

⒎测定蛋白质浓度的方法主要有、、和。

⒏利用蛋白质不能通过半透膜的特性,使它和其它小分子物质分开的方法有和。

⒐利用分配层析的原理进行氨基酸分析,常用的方法有、、和。

⒑实验室常用的测定蛋白质相对分子量的方法有、和等。

四、名词解释
⒈蛋白质等电点;⒉凝胶过滤;⒊分配层析;⒋离子交换层析;⒌疏水层析;⒍亲和层析;
⒎聚丙烯酰胺凝胶电泳;⒏双向电泳;⒐蛋白质组
五、问答题
⒈根据给定的条件,回答问题:
⑴一个Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合液在pH3.9时进行纸电泳,指出哪种氨基酸
向阳极移动?哪种氨基酸向阴极移动?
⑵带相同电荷的氨基酸如Gly和Leu在纸电泳时常常稍能分开,解释其原因?
⑶假如有一个Ala、Val、Glu、Lys和Thr的混合液,在pH6.0进行电泳,然后用茚三酮显色,画出
电泳后氨基酸的分布图。

⒉以正丁醇:乙酸:水体系为溶剂(pH4.5),对下列氨基酸进行纸层析分离,指出下列各组中氨基
酸的相对移动速度:⑴Ile、Lys;⑵Phe、Ser;⑶Ala、Val、Leu;⑷Pro、Val;⑸Glu、Asp;
⑹Tyr、Ala、Ser、His
⒊用阳离子交换树脂分离下列氨基酸对,用pH7.0的缓冲液洗脱时哪种氨基酸先被洗脱下来?
⑴Asp和Lys;⑵Arg和Met;⑶Glu和Val;⑷Gly和Leu;⑸Ser和Ala
⒋分析下列肽段在pH1.9、pH3.0、pH6.5、pH10.0条件下进行纸电泳时的移动方向。

⑴①Lys-Gly-Ala-Gly;②Lys-Gly-Ala-Glu;③His-Gly-Ala-Glu;④Glu-Gly-Ala-Glu;⑤Gln-Gly-Ala-Lys;
⑵上述五肽混合物,在Dowex-1(一种阴离子交换树脂)的离子交换柱上以pH值从10到1.0连续
变化的缓冲系统作洗脱,试分析每种肽洗脱的相对次序。

⒌扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。

⑴在低pH时沉淀;⑵当离子强度从0逐渐增加时,其溶解度开始增加,然后下降,最后出现沉
淀;⑶在一定的离子强度下,达到等电点pH值时,表现为最小的溶解度;⑷加热时沉淀;⑸加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介电常数,而导致溶解度的减小;⑹如果加入一种非极性强的溶剂,使介电常数大大地下降会导致变性。

⒍凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建立在分子大小的基础上,而
且这两种方法均采用交联的多聚物作为支持介质,为什么在凝胶过滤时,相对分子质量小的蛋白质有较长的保留时间,而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时,它有移动得最快?
⒎在一混合液中含有三种蛋白质,其性质如下:蛋白质A相对分子质量20 000D、等电点8.5;蛋
白质B相对分子质量21 000D、等电点5.9;蛋白质C相对分子质量5000D、等电点6.0;设计一个方案分离纯化这三种蛋白质。

⒏常见蛋白质相对分子质量测定方法和原理。

⒐常见蛋白质含量的测定方法。

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