三点测交

2010.10
08生物科学四班：白秀英、康慧 王超、田劲
测交后代表现 sn w m +++ +w+ sn + w sn + + +wm sn w + ++m
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观察数
重组发生在
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m
P：
sn3 sn3
w
×
+
+
+
♀
m
F1： F1：
（♂）
w
× + 测交） （测交）
w m
+
♀
sn3
+
Байду номын сангаас
m
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（♂）
m
sn3
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+
+
+
+
+
+
m m +
+
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sn3 w + +
m m +
+
sn3 sn3 +
+
w + w
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（二）试剂 ： • 乙醚,乙醇,酵母粉,丙酸,玉米粉,绵白糖,琼脂条 乙醚,乙醇,酵母粉,丙酸,玉米粉,绵白糖,
• （三）器材： 器材： • 恒温培养箱,高压灭菌锅,显微镜,架盘天平,培养 恒温培养箱,高压灭菌锅,显微镜,架盘天平, 棉花塞,麻醉瓶,滤纸片, 瓶,棉花塞,麻醉瓶,滤纸片,牛皮纸
遗传学实验— 遗传学实验 三点测交
雌
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雄
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一、实验目的
• • • • • • 1、掌握三点测交的原理及方法 2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法 3、了解绘制遗传学图的原理和方法 4、了解果蝇的生活 5、掌握果蝇的麻醉及观察方 6、通过实验学习掌握果蝇性别的鉴定方
二、实验试剂和器材
（一）材料： 材料： • 野生型果蝇（+++）： 红眼、长翅、直刚毛 野生型果蝇 +++）： 红眼、长翅、 型果蝇（ • 三隐性果蝇（wmsn3）：白眼、小翅、焦刚毛 三隐性果蝇 果蝇（ ）：白眼 小翅、 白眼、 • 这三个基因都位于X染色体上 这三个基因都位于X染色体上
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三、实验原理
• 连锁交换定律：处在同一染色体上的两个或两个以上基因 连锁交换定律： 遗传时，联合在一起的频率大于重新组合的频率。 遗传时，联合在一起的频率大于重新组合的频率。重组类 型的产生是由于配子形成过程中， 型的产生是由于配子形成过程中，同源染色体的非姊妹染 色单体间发生了局部交换的结果。 色单体间发生了局部交换的结果。 • 三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因 三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交， 子杂种（F1），再使F1与三隐性基因纯合体测交， ），再使F1与三隐性基因纯合体测交 子杂种（F1），再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对 测交后（Ft）代表现型及其数目的分析， 测交后（Ft）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连 锁基因之间的交换值， 锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体 上的顺序和距离 顺序和距离。 上的顺序和距离。 • 通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即 通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置， 相当于进行三次两点测验， 相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生 的双交换
–把观察到的果蝇性状种类和数量分别填入下表 内.根 把观察到的果蝇性状种类和数量分别填入下表 据遗传学统计分析方法, 据遗传学统计分析方法,分别计算本实验中的二个单交 换率和一个双交换率.依据计算和分析结果, 换率和一个双交换率.依据计算和分析结果,确定出这 三个基因彼此间的直线连锁关系及其基因间的图距, 三个基因彼此间的直线连锁关系及其基因间的图距,并 会出三个基因的连锁图谱.另外, 会出三个基因的连锁图谱.另外,分析一下两个单交换 之间是否存在干涉现象. 之间是否存在干涉现象 • 下表为果蝇三点测交试验性状观察结果统计表
• 注意：（1）要求每组至少统计250只果蝇。 要求每组至少统计250只果蝇。 250只果蝇
• •
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（2）做正交只需统计雄性个体。 做正交只需统计雄性个体。 统计过的果蝇放入酒精瓶中， （3）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死 。
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五、实验观察结果的统计与计算分析： 实验观察结果的统计与计算分析：
• 7、加深理解遗传学基因连锁与互换定律的本质
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果蝇的直刚毛和卷刚毛
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果蝇的白眼与红眼
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果蝇的长翅与小翅
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+
m m +
+
sn3 + sn3
+
w m w +
+
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sn3 w
+ +
+ + + +
+ + + +
+ + + +
sn3 w
四、实验内容
1、选处女蝇：每组正、反交各1瓶，在8-12h内收集处女蝇5选处女蝇：每组正、反交各1 12h内收集处女蝇5 内收集处女蝇 6只，可提前2-3天收集。 可提前2 天收集。 2、杂交：将处女蝇、雄蝇各5-6只，麻醉、转移到新的杂交 杂交：将处女蝇、雄蝇各5 麻醉、 瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。 瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好 标签，注明杂交组合、日期、姓名， 25℃培养 培养； 标签，注明杂交组合、日期、姓名，于25℃培养； • 3、释放亲本 7d后，处死杂交亲本（一定要干净） 7d后 处死杂交亲本（一定要干净） • 4、观察F1：再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察2—3天， 观察F1：再过4 F1 F1成蝇出现，连续观察2 3 成蝇出现 或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。 F1表型 或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。
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• 4、 F1互交：选取5-10对F1果蝇，转入一新培养瓶（不需 F1互交：选取5 10对F1果蝇，转入一新培养瓶（ 互交 果蝇 处女蝇，正交和反交F1不能混），贴好标签， 25℃培养 F1不能混），贴好标签 培养。 处女蝇，正交和反交F1不能混），贴好标签，于25℃培养。 • 5、释放亲本： 7d后，杀死F1代亲本果蝇。 释放亲本： 7d后 杀死F1代亲本果蝇。 F1代亲本果蝇 • 6、观察F2： 再过4-5d，F2成蝇出现，开始观察眼色，翅 观察F2 F2： 再过4 5d，F2成蝇出现 开始观察眼色， 成蝇出现， 形及刚毛形态，同时记录F2 F2各种性状果蝇的数目 形及刚毛形态，同时记录F2各种性状果蝇的数目 ，连续 统计7 8d。 统计7-8d。