Biolog 自动微生物鉴定系统
用Biolog微生物自动分析系统鉴定大曲中地衣芽孢杆菌的研究
（ ． 古农业大学生物工程学院， １ 内蒙 呼和浩特 ０ ０ １ ；． １０ ８ ２ 中国食 品发酵工业研究院， 北京 １０ ２ ； ０ ０ ７ ３ ． 新疆大学生命科学与技术学院 ， 乌鲁木齐 ８ ０ ４ ） ３ ０６
摘 要 ： 大曲中分 离到一株 细菌， 从 初步鉴定为地衣 芽孢杆菌 ， 用 Ｂｏｏ 利 ｉ ｇ微生物 自动分析 系统对它做 了进一 ｌ 步的鉴 定， 确定其 为地衣 芽孢杆菌。 关键 词 ：ｉｌｇ 生物 自动分析 系统 ； Ｂｏｏ 微 地衣 芽孢杆 菌； 定 鉴 中图分类号 ： Ｓ ６ ．； Ｓ６ ． ； Ｓ ６ ． Ｔ ２２３ Ｔ ２ １１ Ｔ ２ １ ３ ７ Ｂｏ ｇ微生 物 自动分 析系 统是 美 国 Ｂｏ ｇ 司 从 １８ ｉｏ ｌ ｉｏ 公 ｌ ９９ 年开始推出的一套微生物鉴定 系统 ，发展到现 在已经能鉴定 文献标识码 ： Ｂ Ｉ ． Ｂ Ｇ＋Ｍ＋Ｔ培养基 ．３ ２ Ｕ 制备方法（ 按配制 １Ｏ Ｌ培养 基 ）称取 ５ ｇ Ｕ ０ｒ ａ ： ． Ｓ Ｇ培养基 ７ 和 ９ｍ ９ Ｌ蒸馏水 于容 器中煮沸溶解 ，冷却至 ２ ￣调整 ｐ ５Ｃ Ｈ至 ７３ ０Ｉ １ １Ｃ ． ± ．，２ 下灭菌 １ｍｉ， ｏ ５ ｎ 冷却至 ４ — ０Ｃ， ｌｍ ５ ５ ￣ 加 Ｏ Ｌ已灭 菌的麦芽糖 （ 浓度 ２ ％）混匀倒平板 。 Ｍ， ５ ， 巯基 乙酸钠（ ） Ｔ 应该在富集培养前加入 到培养基上 ， 易 不 过早加入 ， 具体方法如下 ： ８ 取 滴巯基乙酸钠（ ． ｍ ） Ｏ２ Ｌ 加入 到 ４ ３ Ｌ无菌水中 ， ｍ 将棉 签浸入到溶液 中蘸湿 ， 出棉签 ， 取 在平板 直径 方向划条线 ， 与线 条垂直方 向来 回划线 ， 再 均匀涂布 ， 将 平板 转动 ９ 。后 ， ｏ 均匀涂 布 ， 直到巯基 乙酸钠溶液均 匀涂布
Biolog使用手册1
Biolog使用手册目录1 启动................ (4)1.1 系统需要................ . (4)1.2 安装软件和数据库 (4)1.3 软件配置................ (4)2 系统介绍................ .. (5)2.1 原理................ (5)2.2 鉴定程序................ . (5)2.3 使用简单的软件 (5)2.4软件背后的数学 (5)2.5 鉴定微生物和管理数据 (6)3 进入系统................ (7)3.1 限制性进入模式....................... (7)3.2 创建使用者列表 (7)3.3 使用记录................ . (7)3.4 改变进入模式 (7)4 准备样品................ (8)4.1 分离一个纯培养物 (8)4.2 革兰氏染色 (8)4.3 Wet Prep................ (8)4.4 定义好氧菌特征 (8)4.5 定义厌氧菌特征 (8)4.6 定义丝状真菌和酵母菌特征 (9)4.7 培养................ (9)4.8 准备接种物................ (9)4.9 革兰氏阳性产芽孢杆菌的处理 (9)4.10 丝状真菌的处理 (9)4.11 接种鉴定板................ (9)4.12 培养鉴定板................ .. (9)4.13 厌氧鉴定板的处理 (10)4.14 丝状真菌的准备 (10)4.15 GN，GP，AN的准备 (10)5 读结果................ (11)5.1 登录................ . (11)5.2 选择人工，读数仪或文件输入模式 (11)5.3 选择打印方法................ (11)5.4 人工读结果................ (11)5.5 用读数仪读结果 (11)5.6 从文件读结果 (11)5.7 设置一个工作表 (11)5.8 设置保存文件................ (11)5.9 使用工作表来读多个平板 (11)5.10 人工调整域值 (11)5.11 选择数据库................ (12)5.12 退出................ .. (12)6 结果解释................ (13)6.1 读结果................ . (13)6.2 评估鉴定结果的准确性 (13)6.3 解释不好的鉴定结果的可能原因.. (13)6.4 种的比较................ . (14)6.5 查找并评估种的信息 (14)6.6 使用真菌的宏观和微观图片 (15)6.7 查看更多的种................ (15)6.8 评估原始OD值 (15)7 数据管理和编辑数据库 (16)7.1 文件备份................ . (16)7.2 文件合并................ . (16)7.3 文件浏览和编辑 (16)7.4 自定义数据文件 (16)7.5 输入/输出ASCII数据 (17)7.6 输出为ACCESS (17)7.7 群落分析 (17)8 技术注解 (19)8.1 材料列表 (19)8.2 培养基和接种液准备 (19)8.3 特殊用途的微孔板 (22)9 经常问到的问题 (23)10 故障处理 (25)10.1 革兰氏染色 (25)10.2 培养微生物 (25)10.3准备接种物 (26)10.4接种微板 (26)10.5培养微板 (26)10.6 读数仪 (27)11 术语表 (28)12 附录 (30)附录1 微孔板的数据统计.附录2 样品准备的流程表附录3 真菌样品准备的流程表附录4 数据库表及特性附录5 结果打印输出的格式附录6 危险病原菌数据库附录7 产品注册表1 启动1.1 系统需要计算机（Windows95,98,2000或NT, 有光驱和软驱），显示器，鼠标，键盘，读数仪，浊度仪，菌落放大灯，八头电动加液器，系统软件。
Biolog微生物鉴定系统在丝状真菌鉴定碳源同化方面的应用
菌进行分类。 1 1． 1 材料与方法 材料 试验所用 31 株具有较强抗菌和细胞毒活性的
真菌来源于课题组前期分离和初筛活性菌种保藏库。 Biolog 微生物鉴定系统 95 种不同碳源分别为： A111： 氨基半乳糖、 葡（ 萄） 糖胺、 甘露糖胺、 核糖醇、 苦 DLarabinos、 杏素、 树胶醛醣、 树胶醛醣、D阿拉伯糖、 杨梅 苷、 纤维二糖。 B112： αD环式糊精、 β环式糊精、 糊精、 赤藻糖醇、 果 D 半乳糖、 糖、 海藻糖、 半乳糖醛酸、 龙胆二糖、 葡（ 萄） 糖酸、 葡（ 萄） 糖胺、 α葡萄糖。 C112： 葡萄糖磷酸盐、 葡糖醛酰胺、 葡（ 萄） 糖醛酸、 丙三 Laculose、 醇、 糖原质、 纤维醇、 葡（ 萄） 糖酸、 乳糖、 麦芽糖醇、 麦芽糖、 麦芽三糖。 D112： DDD甘露醇、 甘露糖、 松三糖、 纤维素、 α甲基DDD半乳糖苷、 β甲基半乳糖苷、 α甲基配糖物、 β甲基DPalatinose、 DDL配糖物、 阿洛酮糖、 棉白糖、 鼠李糖。 E112： 核糖、 Sedoheptulosan、 DL柳醇、 山梨醇、 山梨糖、 DD水苏 （ 四） 糖、 蔗 糖、 塔 格 糖 （ 一 种 已 酮 糖） 、 海 藻 糖、 Turanose、 D木糖醇、 戊醛糖。 F112： γBromosuccinic acid、 氨基 － 丁酸、 反丁烯二酸、 pDβ羟基丁酸、 γ羟基丁酸、 羟苯基乙酸、 α戊二酸、 乳酸甲 LDL基酉旨、 乳酸、 苹果酸、 苹果酸、 金鸡纳酸。 G112： D糖酸、 癸二酸、 琥珀酰胺酸、 琥珀酸、 琥珀酸甲 NAlaninamide、 LL基酉旨、 乙酸谷氨酸、 丙氨酸、 丙氨酰甘氨 LLL酸、 天冬酰胺酸、 天（ 门） 冬氨酸、 谷氨酸。 H112： 甘氨酰谷氨酸、 LLL鸟氨酸、 苯基丙氨酸、 脯氨 LLL2酸、 焦谷氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 氨基乙醇、 腐胺、 腺 苷、 尿（ 嘧啶核） 苷、 腺苷磷酸盐。 1． 2 方法 接种： 挑少许丝状真菌孢子在 ME 培养基上划 7 d。Biolog 系统浊度计调零： 调 于 25 28 ħ 下培养 5 线，
Biolog微生物鉴定步骤
氧化酶阳性或氧化酶阴性但三糖铁实验为K/K或K/Aw
则该菌株为非肠道菌(GN-NENT)
氧化酶阴性以及三糖铁实验为A/A或K/A
则该菌株为肠道菌(GN-ENT)
如果菌株①需要在巧克力培养基上或需要6.5% CO2培养
②在BUG+B培养基上生长非常差
形成针尖大小的菌落
那么可以认为这些菌是苛生菌(GN-FAS)
非肠道菌 GN-ENT
肠道菌 GN-FAS
苛生菌 GP-COCCUS-ROD杆球菌、GP-COCCUS球菌、GP-ROD杆菌 GP-ROD
（芽孢杆菌） AN
厌氧菌 YT
酵母菌 FF
丝状真菌 扩大培养基 BUG+B BUG+B 巧克力培养基 BUG+B BUG+M+T BUA+B BUY 2%ME 培养温度 30℃ 35-37℃ 35-37℃ 35-37℃ 30℃ 35-37℃ 26℃ 26℃ 培养气体 空气 空气 6.5% CO2 空气或6.5% CO2 空气 无氢气的厌氧环境 空气 空气 接种液类型 GN/GP-IF GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF AN-IF 水 FF-IF 接种浊度/
应把鉴定板拿出冰箱
让鉴定板恢复到常温
因为有些菌种（如Neisseria ）对温度的快速变化很敏感
6. 仔细校正浊度计
接种菌悬液的浊度应在规定的范围内
7. 鉴定板中包含多种对温度和光照敏感的物质
如果个别孔出现棕黑色
说明碳源已经被降解
有时候
在保质期内或超过保质期不长的时间里
BIOLOG微生物自动鉴定仪使用
Biolog微生物自动鉴定仪使用流程及注意事项
A 程序：
1 启动计算机，打开Ml3420，输入用户名及用户密码；
2 启动酶标仪,在Ml3420先进行初始化，并选择输入方式（文件、手动或酶标仪）；3放入鉴定板，输入样品号、鉴定板的类型、培养时间等相关信息；
4 点击“read next”读结果；
5如果要打印实验结果，可直接点击“print”
B 注意事项：
1 酶标仪灯泡的寿命为2000小时，读完结果或较长时间不用时，尽量选择关机；
2 酶标仪要注意防尘，关机后及时盖好防尘罩；
3 进样前先将鉴定板用吸水纸擦干底部，放入时使A1孔对准“A”。
biolog_客户培训
培养环境 培养温度
Air
Air
6.5%CO2
Air/6.5%CO2
Air
ANA
Air
Air
Typically 30℃
Typically 35-37℃
Typically 35-37℃
Typically 35-37℃
Typically 30℃
Typically 35-37℃ 26℃ 26℃
接数 鉴定实例
维护保养
疑难解答
鉴定步骤
分离纯化 平板扩大培养
制备菌悬液
调整浊度 接种培养
获取结果
分离纯化
保证纯种是微生物鉴定的首要条件
分离纯化采用常规微生物操作方法 可以用国产培养基或自己筛选的培养基
鉴定步骤总览
GN 好氧菌
微生物
厌氧菌 GP 酵母菌 霉菌
Oxi +
30℃
9、许多Microlog1和Microlog2的用户用自己的酶标仪读数，是否可 行？读出的数据如何处理？ 答：用其它酶标仪读出的数据也是吸光度值，但必须通过一定的算 法转换。 也可根据A1孔的读数直接判断阴性或阳性。一般来说吸光度值 小于0.2则判断为阴性，大于0.2则判断为阳性，这是一种粗略的判 断方法，如需准确判断，应采用陈列图方法，确定边界值，将干扰 的反应排除，才能得到较佳的结果。 10、有些用户单独购买微孔鉴定板用于研究，对获得的数据如何进行分析？ 答：一般这类用户多用鉴定板做微生物群落分析和营养特性研究，其 接种的菌悬液甚至是混合菌液，如有BIOLOG的软件，可采用Cluster 分析功能模块，对不同试验的结果进行比较。也可用PCA软件(主要化 合物分析)或CLPP软件对数据进行分析，这两种软件由其它公司提供， 可以在网上找到，但需支付一定费用。
临床医学检验：临床检验仪器真题
临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。
2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。
正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。
（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。
（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。
用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。
可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。
（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。
此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。
3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。
4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。
biolog微生物鉴定和pm表型
微生物鉴定和PM表型一、微生物鉴定的重要性微生物是生物学中一个重要的研究领域，研究微生物对人类、环境和生物系统的影响对于防治疾病、改良土壤和促进生物工艺过程至关重要。
微生物鉴定是确定微生物组成和特性的过程，可以帮助我们了解微生物在不同环境中的生长状况和活动特性，为后续的研究和应用提供科学依据。
二、微生物鉴定的方法1. 传统方法传统的微生物鉴定方法包括形态学、生理生化特性、培养特性等，这些方法需要在实验室中进行大量的培养和观察工作，费时费力，且有一定局限性。
2. 分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，PCR、基因测序等技术的应用使得微生物鉴定变得更加准确和高效，通过对微生物的基因序列进行分析可以方便地确定微生物的种属和亲缘关系。
三、PM表型的重要性1. PM表型是指通过观察微生物的生长、形态和代谢特性来进行鉴定和分类，可以直观地了解微生物在不同环境中的适应能力和生存状态。
2. PM表型可以为微生物的分类和鉴定提供重要的参考信息，是评价微生物功能和应用潜力的重要依据。
四、微生物鉴定和PM表型在疾病防治中的应用1. 对致病微生物的鉴定和PM表型分析可以帮助医学工作者了解病原微生物的生长特性和耐药性，有助于选择合适的抗生素和治疗方法，提高治疗效果。
2. 对微生物在环境中的生存和传播特性进行鉴定和PM表型分析可以帮助预防疾病的传播，保护公共卫生。
五、微生物鉴定和PM表型在环境研究中的应用1. 通过对土壤、水体和空气中微生物的鉴定和PM表型分析可以了解微生物在不同环境中的分布和生态角色，为环境保护和生物资源开发提供科学依据。
2. 对微生物的鉴定和PM表型分析可以帮助监测环境中的微生物污染和变化，预警环境风险，保护生态系统的稳定。
六、微生物鉴定和PM表型在工业生产中的应用1. 对发酵微生物的鉴定和PM表型分析可以帮助提高生产过程的稳定性和效率，优化生产工艺，降低成本。
2. 对工业污水中微生物的鉴定和PM表型分析可以帮助处理污水，降低环境污染。
临床医学检验技师初级(师)微生物学及检验(抗菌药物敏感试验细菌耐药性检测、微生物自动化检测)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）微生物学及检验（抗菌药物敏感试验细菌耐药性检测、微生物自动化检测）-试卷1(总分：60.00，做题时间：90分钟)一、 B1型题(总题数：1，分数：4.00)A．头孢他啶B．青霉素C．亚胺培南D．头孢曲松E．氨曲南（分数：4.00）(1).对产AmpC酶菌株临床治疗有效的药物是（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：解析：产AmpC酶菌株对青霉素类、三代头孢菌素、氨曲南及含酶抑制剂复合制剂耐药。
(2).一般情况下ESBLs不能水解的抗生素是（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：解析：ESBLs可以水解青霉素类、头孢菌素类及氨曲南。
二、 A1型题(总题数：28，分数：56.00)1.NCCLS／CLSI药物敏感性试验中规定的药物分类，“C”组代表的药物是（分数：2.00）A.针对医院感染的药物B.仅用于治疗泌尿道感染的药物C.常见首选药敏试验药物D.替代性药物√E.仅用于研究的药物解析：解析：本题主要考查NCCLS／CLSI药物敏感性试验为何将药物分组。
A组主要是常见首选药敏试验药物。
B组包含一些临床上重要的，特别是针对医院内感染的药物。
C组为替代性或补充性抗微生物药物。
U组仅用于治疗泌尿道感染的药物。
2.下列关于K—B纸片扩散法操作的描述，错误的是（分数：2.00）A.各纸片中心距离不＜24mmB.纸片距平板内缘不应＞15mm √C.直径90mm的平皿可贴6张纸片D.纸片贴牢后避免移动E.培养16～18小时后读结果解析：解析：本题要点为纸片扩散法，其药物纸片各中心应相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm，35℃培养16～18小时后阅读结果。
3.培养基的pH过低时，其抑菌圈可扩大的是（分数：2.00）A.米诺环素√B.庆大霉素C.红霉素E.头孢菌素解析：解析：本题要点为纸片扩散法的培养基要求，其pH值为7．2～7．4，过高或过低的pH值会影响药物效能。
Biolog微生物鉴定系统参数(Gen III Mi croStation)
Biolog微生物鉴定系统（Gen III MicroStation）鉴定原理：＊1.以碳源利用及化学物质敏感性检测为原理，用于鉴定的反应数量95种。
技术参数：一、软件部分：＊1．数据库容量大于2650种。
其中Gen III数据库1327种（革兰氏阴性好氧菌568种，革兰氏阳性好氧菌759种），厌氧菌361种，酵母菌267种，丝状真菌708种。
＊2．可鉴定包括临床、工业、农业及环境中常见的青霉、曲霉、刺盘孢霉、镰刀霉、木霉、枝孢霉、穗霉等708多种丝状真菌。
并与传统的真菌形态学鉴定相结合，提供1005张精美的宏观和显微图片供用户参考比对。
＊3．可鉴定常见的假单胞菌(57种)、伯克霍尔德菌、黄单孢菌属、果胶杆菌属、食酸菌属、根瘤菌属等数百种植物致病菌。
＊4．数据库包括食品工业应用领域70多种乳酸菌、30多种双歧杆菌及各类常见的食品微生物必检的致病菌数据库，包括沙门氏菌、李斯特菌、大肠杆菌(含阪崎肠杆菌)、葡萄球菌、弯曲菌、假单胞菌、弧菌、梭菌、志贺氏菌、猪链球菌等。
* 5.可鉴定24种分枝杆菌(Mycobacterium)＊6.好氧细菌使用Gen III鉴定板，无需进行革兰氏染色、氧化酶和三糖铁等预测试工作，直接将培养好的纯种配制菌悬液后定量接种至鉴定板即可。
7．可生成用户自定义数据库。
＊8．具有进行微生物群落分析和生态研究。
9．鉴定时间：细菌4－24小时，酵母24－72小时，霉菌3－7天。
10．数据安全性通过美国FDA的21CFR PART11认证。
二、硬件部分1．读数仪：美国原产双波长读数仪，常用滤光片490nm,590nm和750nm，最大可容纳6个滤光片。
2．浊度计：OD值和透光率双刻度指针式显示，电池供电。
3．八通道连续加液器：Ovation电动八通道连续加液器，加液量范围25-1250uL,精确度±3.5%（125uL），准确度0.8%(125uL)。
标准配置：主机标配含读数仪、浊度计、八通道加液器、Microlog 3基础软件和Retrospect数据管理软件和数据处理工作站。
Biolog微生物鉴定系统鉴定步骤
Biolog微生物鉴定步骤一检测原理Biolog微生物鉴定系统测试的是微生物在鉴定板中利用或氧化化和物的能力。
测试会产生特征性的紫色孔模式，组成代谢指纹。
所有必需的营养物质和生化试剂都预先加进96孔板中，四唑紫是一种氧化还原染料，指示碳源的利用情况。
.鉴定步骤非常简单，纯化分离到的菌株经扩大培养，再制成接种液加到鉴定板中。
在培养过程中，一些孔中的化学物质能被氧化并将显色物质成紫色，对照孔（A-1）和阴性孔仍然为无色。
鉴定板在相应的培养条件下培养4-6小时或16-24小时即可形成代谢模式。
系统软件自动和数据库对比，如果能找到合适的匹配，就可以得出一个鉴定结果。
二所需器材和消耗品：培养基、接种液、巯基乙酸钠、长棉签、接种棒、储液槽、八道移液器、移液器头、浊度仪、浊度标准品、控温培养箱和相应的鉴定板。
其中接种液自行配制，接种棒、储液槽可选用国产品牌代替。
三鉴定步骤：第一步：在用户自己的培养基上纯化菌株，如果菌株为冻干或冷冻样品，需要传代培养2-3代，让菌株恢复活力。
对纯化好的菌株做革兰氏染色，确定菌株是革兰氏阴性还是阳性。
观察菌落外部形态或用显微镜观察菌株形态，确定是酵母还是丝状真菌，是球菌还是杆菌。
如果是革兰氏阴性菌，还需要最终确认是肠道菌、非肠道菌或苛生菌。
方法是，氧化酶阳性或氧化酶阴性但三糖铁实验为K/K或K/A w，则该菌株为非肠道菌(GN-NENT)，氧化酶阴性以及三糖铁实验为A/A或K/A，则该菌株为肠道菌(GN-ENT)。
如果菌株①需要在巧克力培养基上或需要6.5% CO2培养，②在BUG+B培养基上生长非常差，形成针尖大小的菌落，那么可以认为这些菌是苛生菌(GN-FAS)。
大多数苛生菌都是从哺乳动物的呼吸道里分离出来的，如Actinobacillus, Alysiella, Brucella, Capnocytophaga, CDC Group DF-3, CDC Group EF-4, Eikenella, Haemophilus, Kingella, Moraxella, Neisseria, Simonsiella, Suttonella,和Taylorella。
Biolog微生物自动分析系统在乳杆菌鉴定中的应用
１５ ３ 菌 悬液制 备 ．．
在超 净工作 台中 ， 无菌 棉 使用
签从 在 Ｂ Ａ十 Ｕ Ｂ平板 表 面蘸 取 菌体 ， 入厌 氧 菌接 转 种液试 管 内 ， 翻转厌氧 菌接种液试 管 ， 菌体扩散 到 令 厌氧 菌接种液 中 ， 并插 入 浊度计 读 数 ， 若读 数 ＞（ ７ ６ ４） ， － ％ 则继续 加 人 菌体 ， １ 若读 数 ＜（ ７±１ ％ ， ６ ） 则 加入厌 氧 菌 接 种 液 ， 至 浊 度 计 读 数 达 到 （ ７± 直 ６
１％。 ）
１２ ＭＲ ． Ｓ培 养基
蛋 白胨 １ ， ０ｇ 葡萄糖 ２ ， ０ｇ 酵母浸 膏 ５ｇ 乙酸钠 ， ５ｇ 柠檬 酸 氢 二 铵 ２ ｇ 牛 肉膏 １ ， ｗ ｅ ， ， ０ ｇ Ｔ ｅｎ一８ ０１
ｌ ｈ ｍ ｏｕ ） 为 乳 杆 菌 属 细 菌 ， 常 见 的 益 生 ｕ ｒａ ｎ ｓ 均 ｓ ｓ 是
１ ３ Ｂ Ａ＋Ｂ培养基 ． Ｕ
菌， 其种 的分类学 地位 是 随着 分 类学 技 术 的发 展 而
变迁 的 。
按制备 １ ０ Ｌ培养基计 ， ０ｍ ０ 称取 ５ ． Ｂ Ａ培 １７ｇ Ｕ 养基 ，５ Ｌ纯 净 水 、 ９０ｍ 蒸馏 水 或去 离 子水 置 于容 器
倒 平板 。
１ ４ 仪器设 备 ．
出的商品化 微生物 自动鉴定 系 统 ， 系统 主 要是 根 该 据 细菌对 ９ ５种碳 源 的利 用情况 及其 数据 库内信 息 ， 经计 算机分 析 比较 ， 现对待测 菌的鉴定 ， 实 已成 为国 际上细菌分 类鉴定 的常用技术手 段 一 。本 实验 采 用 Ｂｏ ｇ ｉ ｏ 微生物 自动分 析 系统 对 已知 干酪 乳 杆 菌 、 ｌ 类 干酪乳杆 菌类＝ 酪 亚种及 鼠李糖乳杆 菌进行 复物 自动分析系统 ， ３种乳杆菌 进行鉴定分析 。结果表 明 ：ｉ ｏ ｌ 对 Ｂｏ ｇ微生物 自动分析系统可 ｌ
BIOLOG在啤酒有害菌及酵母鉴定中的应用
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( 用 于 酵 母 菌 的鉴 定 )
一
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接种 液
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Ⅲ AN
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一
Ⅲ
、 、
每 类微 生 物 筛 选 9 5 种 不 同碳 源 配 合 四 唑 类 显 色物 质 ( 如 T r c T V ) 固 定 于 9 6 孔 板 上 ( A 1 孔 为 阴性 对 照 ) 接种 菌 悬 液 后 培 养 定 时 间 通 过 检 测 微 生 物 细 胞 利 用 不 同碳 源 进 行 新 陈代 谢 过 程
颐 贝 隆 电 子 科 技
( 北
京 )
有 限 公 司
忿 啕 ∥
[摘
要]
任河 山
钟俊 辉
065201
华 润 雪 花啤 酒 【 国 1 有 限 公 司 技 术 中 心 中
本 文 详 细 介 绍 了 B I O L OG 微 生 物 鉴 定 系 统 为 正 确 运 用 该 方 法 开 展 啤 酒 有 害 菌 和
猪源粪肠球菌的BIOLOG系统鉴定及其生物学特性_薛青红(1)
进行。
培养特性及生化特性试验 抑菌性试验
按参考文献 [ 7]
的方法进行。 液体培养抑菌试验 : 取大肠杆 菌培养物 0. 05 m L 滴加于 10 g/ L 葡萄糖营养液中 培养 3 h, 再 次 滴 加 0. 05 mL 粪 肠 球 菌 培 养 物 ( No 1) ; 取粪肠球菌培养物 0. 05 mL 滴加于 10 g / L 葡萄糖营养液中培养 3 h, 再次滴加 0. 05 mL 大肠 杆菌培养物 ( No2) ; 取粪肠球菌培养物 0. 05 mL 滴
BIOLOG system identification and biological characteristics of an Enterococcus f aecalis strain from swine
利用BIOLOG系统对不同种类细菌鉴定的研究
２ ０ ，２ ９ ：１ ３ ／ 昕 波 ， ０ ８４ （ ） ３ ～ ３ 杜 等
中国 兽 药 杂志
・ ｌ・ ３
利用 Ｂ Ｏ Ｏ Ｉ Ｌ Ｇ系统 对 不 同种类 细 菌鉴 定 的研究
杜昕波 ， 耘 ， 赵 李伟杰 ， 凯， 敏 ， 媛 康 陈 张
ｏｏ ｙ ａ ａｙ ｉ ｙ ｔｍ ｏ ｉ ｅ ｔ ｙ ｔａ ｎ ｆＥｓ ｈ ｒ ｈａ ｏ ｉ ｓｒ ｉ ｓ ｆ Ｐａ ｔｕ ｅｌ ｌｏ ｉ ａ， ｓｒ ｉｓ ｏ ｌｇ ｎ ｌ ｓｓ ｓ ｓｅ ｔ ｄ ｎ ｉ １ ｓｒ ｉ ｓ ｏ ｃ ｅｉ ｉ ｃ ｌ，１ ｆ ３ ｃ ５ ｔａｎ ｏ ｓｅ ｒ ｌ ｍｕ ｔｃｄ ７ ｔａｎ ｆ ａ
ｍ ｅｈ ｄ ｔ ｏ ｓ，ｔ ｅ ＢＩ ＯＧ ｙ ｔｍ ｓ ｅｆｃｅ ｔａ ｄ ｃ ｎ ｅ ｉｎ ． ｈ ＯＬ ｓ ｓｅ ｉ ｆ ｉ ｎ ｎ ｏ ｖ ｎｅ ｔ ｉ
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｓ：ｂａ ｔ ｒａ ｉ ｅ ｉ ｃ ｔ ｎ； ＯＬ ｄ ｃｅ ｄ ｎｔ ａｉ ＢＩ ＯＧ ｕｏ ｔ ｃｏ ｉｌｇ ｎ ｌｓｓｓ ｓｅ ； ｏ ｖ ｎｉ ｎ ｌｍｅｈ ｄ ｉ ｉ ｆ ｏ ａ ｔｍａ ｉ ｍｉｒ ｂ ｏｏ ｙ ａ ａｙ ｉ ｙ ｔｍ ｃ ｎ ｅ ｔ ａ ｔ ｏ ｓ ｃ ｏ
近年来 随着仪 器分 析技术 的不断进 步 ， 种商 各 品化 的 自动化分 析鉴定 系统相 继 成功建 立 ， 上述 鉴 定 系统 的推 广 应 用 大大 降低 了人 为 因素 在 细菌 鉴 定过 程 中 的影 响 。本 试 验 所 用 的 Ｂ Ｏ Ｏ Ｉ Ｌ Ｇ微 生 物 自动分析 系统是美 国 Ｂｏ ｇ公 司从 １８ ｉｏ ｌ ９ ９年 开始 推 出的一套微 生物鉴 定 系统 ， 系统 主要 根 据细 菌 该 对糖 、 、 、 、 和 大分子 聚合 物等 ９ 醇 酸 醋 胺 ５种碳 源
Biolog 自动微生物鉴定仪
葡萄孢霉 5
独创的算法分析模型，用可 能 性 （ PROB） 、 相 似 性 （SIM） 和 距 离 （DIS） 三 个 参数来判定鉴定结果，综合 考虑了结果与标准数据库的 匹配及分离程度，更加真实 地反应了鉴定结果的好坏。
Retrospect数 据 管 理 软 件 模 块，用户可对数据文件进行 备份、筛选、合并、浏览、 生成聚类图、自定义数据 库、编辑及输入或输出。
用于厌氧菌的鉴定 用于酵母菌的鉴定 用于丝状真菌的鉴定 用于微生物特性和群落分析研究（31种碳源） 用于微生物代谢研究（不含碳源） 用于革兰氏阴性产芽孢或分生孢子的微生物代谢研究 用于革兰氏阳性产芽孢或分生孢子的微生物代谢研究
常规消耗品
培养基 鉴定板 接种液 通用消耗品
8
BUG、BUA、BUY GEN III MicroPlate、AN、YT、FF GEN III - IF A 、AN-IF、FF-IF 试管架、吸嘴、加样槽、移液管、棉签、接种棒
Biolog丝 状 真 菌 数 据 库(FF）,可 自 动 鉴 定 包 括 临 床 、 工 业 、 农 业 及 环 境 中 常 见 青 霉 (153种)、 曲 霉(89种)、 刺 盘 孢 霉(18种)、 镰 刀 霉(79种)、 木 霉 及 其 它 种 等708种 丝 状 真 菌。为与传统的真菌形态学鉴定相结合，Biolog提供近1000多张精美的宏观和显微图片 供用户参考比对，以获得更为精确的结果。
GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
强大的数据库
Bi o l o g微 生 物 鉴 定 系 统 拥 有 目 前 世 界 上 最 大 的 数 据 库 ， 可 鉴 定 包 括 细 菌 、 酵 母 和 丝 状 真 菌 总 计 超 过2 6 5 0种 微 生 物 ， 几 乎 涵 盖 了 所 有 常 见 的 人 类 、 动 物 、 植 物 病 原 菌 以 及 食 品和环境微生物。
Biolog FF 微生物鉴定微孔板使用手册
材和人员污染，安全操作请参考相应的规则指引。建议在二级生物安全柜内操作，每次用MicroStation读 数仪读取数据的时候，建议更换鉴定板盖，减少污染读数仪的危险。 8. 鉴定板中包含多种对温度和光照敏感的物质，如果个别孔出现棕黑色，说明碳源已经被降解。有时候， 在保质期内或超过保质期不长的时间里，个别孔会出现黄色或粉红色，这是正常的。 9. Biolog是基于测试活菌的代谢特性。一些菌即使在很短的时间里遭受温度、pH值和渗透压的压力也会丧失 代谢活性。所以为了获得良好的鉴定结果必须确保菌种为活菌，操作要小心。 10. 为了延长鉴定板的保质期限，应在2-8℃的条件下避光保存，鉴定板的过期时间打印在EXP.后面。
如果读数后得到了鉴定结果，当数据库中有相应的宏观或微观图片时，需要将所鉴定菌株的图片和鉴定 结果中排在第1位的结果进行对比，如果对比不上，依次和第2、第3位的结果进行对比。
如果在第4天读数没有鉴定结果，需要将所鉴定菌株的图片和鉴定结果中排在前3位的结果进行对比。 鉴定未知菌株时，对应正确的数据库非常重要。如果分离的菌株来自空气样品，应该和空气库（Air）对 比；同样，如果菌株来自食品样品，应该和食品（Food）库对比。 真菌库中还包含以属划分的库，当所鉴定菌株已经鉴定到属的水平时，可以选择对应的库，以属划分的
Biolog FF 微生物鉴定板使用手册
用途
FF鉴定板提供了标准化的95种反应用于鉴定一大类真菌，包括丝状真菌和部分酵母。Biolog的MicroStation 软件根据FF鉴定板的代谢模式对该种微生物进行鉴定。在琼脂斜面上存放过久或转化次数过多，可能会导致 菌株表型退化，丧失特异的生化反应特征。
Biolog微生物自动分析系统_细菌鉴定操作规程的研究_程池
Biolog 微生物自动分析系统———细菌鉴定操作规程的研究程 池 杨 梅 李金霞 姚 粟 胡海蓉(中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中心,北京,100027)摘 要 Biolog 微生物自动分析系统是美国Biolog 公司研制开发的新型自动化快速微生物鉴定系统,以细菌对微平板上95种碳源的利用情况为基础从而进行微生物鉴定。
目前我国已经累计引进100余台,但使用率较低。
文中在总结实践经验的基础上,参阅最新Biolog 系统操作手册4.2版和国家微生物资源平台技术规程的统一格式,研究制定了细菌鉴定的操作规程,以规范系统使用,获得准确鉴定结果,尽快提高我国B iolog 系统的应用水平。
关键词 Biolog 微生物自动分析系统,细菌鉴定,操作规程第一作者:学士,教授级高级工程师。
收稿日期:2006-04-12 随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应用,微生物菌种鉴定逐渐由传统的形态学观察和人工生理生化实验鉴定发展进入了基于仪器自动化分析的鉴定系统阶段。
近20年来,一系列商品化自动鉴定系统相继推出并在应用中取得理想效果,如V ITEK 系统、M IDI 系统、Biolog 系统、SENS ITITRE 系统、AU TOSCEPTOR 系统以及M ICROSCAN 系统等[1],其中细胞脂肪酸分析的M IDI 系统、碳源利用分析的Biolog 系统与DNA 序列分析的16s rRNA 基因进化发育系统已经成为目前国际上细菌多相分类鉴定常用的技术手段[2～4]。
Biolog 微生物自动分析系统是美国Biolog 公司从1989年开始推出的一套微生物鉴定系统,最早进入商品化应用的是革兰氏阴性好氧细菌鉴定数据库(GN ),其后陆续推出革兰氏阳性好氧细菌(GP )、酵母菌(YT )、厌氧细菌(AN )和丝状真菌(FF )鉴定数据库。
Biolog 系统6.01版数据库共包括1973种微生物,其中细菌234个属,1226个种,与其他鉴定系统相比,其微生物种类的数据量较大,适合于环境、食品、工业、临床和动植物病原菌的鉴定分析。
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应用领域
BIOLOG 微生物鉴定系统能鉴定超过 2650 种常见的好氧细菌、厌氧菌、酵母和 丝状真菌等微生物，几乎覆盖了所有重要的与人类、动物、植物相关的微生 物，特别是以鉴定环境微生物见长，被广泛应用于各种与微生物相关的领域， 包括林业、农业、环境生态、从事微生物研究的大学和科研院所、菌种保藏中 心、白酒啤酒行业、食品行业、临床与疾控中心、环保、检验检疫机构及质检 部门等均成为 BIOLOG微生物鉴定系统的用户。现在，美国半数以上的州立实 验 室和 国家 疾控 中心 （ CDC）都 在使 用 BIOLOG公司 的产 品， 十 几年 来， BIOLOG 公司在全球六十多个国家和地区共销售了 3000 多套微生物鉴定系统。 进入中国几年来，在中国的用户已经达到近300个，具体分布在以下领域：
好氧细菌鉴定更加简单：不需革兰氏染色，无需做氧化酶、三糖铁和过氧化物酶实 验，一个细胞浓度，一块板，一个培养温度，无需附加试验
可鉴定一些传统鉴定方法不易鉴定的重要的革兰氏阳性好氧菌，如芽孢菌114种。
可鉴定分枝杆菌24种(mycobacterium)
可鉴定革兰氏阴性好氧放线杆菌15种，革兰氏阳性好氧放线菌8种，厌氧放线菌14种。
［美国BIOLOG］
自动微生物鉴定系统
GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统 MicroLog-M 手动微生物鉴定系统
GEN III OmniLog ID /GEN III OmniLog Plus ID全自动微生物鉴定系统
中国总代理
美国 BIOLOG 公司致力于微生物鉴定领域新技术新产品的开发、生产和销售， 是 全 球 高 新 技 术 百 强 之 一 ， 其 独 创 的 碳 源 利 用 方 法 已 获 美 国 FDA认 可 。 BIOLOG 鉴定系统可鉴定包括细菌、酵母和真菌在内超过 2650 种微生物，用于 各领域的微生物实验室对微生物进行鉴定； BIOLOG的智能软件和独特设计的 基于表型测定的微孔板特别适用于生态功能多样性研究领域；用于政府检验机 构、科研院所等研究单位及工业生产领域进行微生物鉴定、微生物代谢研究、 微生物群落分析及新产品开发与质量控制。
葡萄孢霉 5
独创的算法分析模型，用可 能 性 （ PROB） 、 相 似 性 （SIM） 和 距 离 （DIS） 三 个 参数来判定鉴定结果，综合 考虑了结果与标准数据库的 匹配及分离程度，更加真实 地反应了鉴定结果的好坏。
Retrospect数 据 管 理 软 件 模 块，用户可对数据文件进行 备份、筛选、合并、浏览、 生成聚类图、自定义数据 库、编辑及输入或输出。
Biolog数据库包含大量与食品工业生产和研发领域相关的菌种数据库，如与发酵乳制 品相关的70多种乳酸菌、30多种双歧杆菌；与白酒行业相关的大量霉菌数据库及酵母 菌数据库。
对 于 生 态 研 究 领 域 ， 提 供 经 优 化 的E C O板 ，E C O板 含3 1种 碳 源( 3组 平 行)， 可 接 纯 种 或 混合菌悬液(如土壤中分离的混合菌群)，常用于微生物生态、微生物功能多样性研究。
设定用户使用权限，保证数 据安全，系统安全性已通过 FDA的21CFR认证。
GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
操作简单
鉴 定 板 分 类 简 单 ， 仅4种 鉴 定 板 ， 对 操 作 人 员 的 专 业 水 平 要 求 不 高 。 系 统 升 级 到GEN I I I后 鉴 定 过 程 更 加 简 单 ， 对 好 氧 细 菌 菌 株 无 需 繁 琐 的 预 分 析 ， 鉴 定 过 程 只 需 做 一 些 最 常规的工作如划线接种、配制菌悬液即可。鉴定霉菌无需任何真菌鉴定经验。
B i o l o g在 食 品 、 化 妆 品 和 医 药 工 业 领 域 提 供 大 量 的 常 见 致 病 菌 数 据 库 ， 包 括 沙 门 氏 菌 (15种)、李斯特菌(7种)、大肠杆菌（8种，含阪崎肠杆菌和E.coli O157:H7）、葡萄球菌 (41种 好 氧，2种厌氧)、弯曲菌、假单孢菌(57种)、弧菌(23种)、梭菌(60种)、志贺 氏 菌 (4种)、耶尔森氏菌（11种）链球菌(61种，含猪链球菌)等，用于食品、药品及化妆品行 业用于致病微生物鉴定、工业应用微生物研究、质量控制及产品研发等。
对于需要自定义碳源的客户，Biolog还提供了MT2板，MT2板不含碳源，但含有一些其 它的基础营养物质及显色物质，客户可以自己添加不同种类或不同浓度的碳源，用于 微生物研究领域。
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GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
金头曲霉
桔灰青霉， 用于鉴定的反应数量多达95种，鉴定 结果特异性强、分离度大、扩充空间 巨大。 软件能够对颜色及浊度进行自动补 偿，可排除由视觉判断引起的主观差 异；双波长检测，可排除干扰反应。 好氧细菌鉴定结果判断采用真正的动 力学数据库（Kinetic database），与传 统的终点数据库（End-point database） 相比，其获得正确结果的可能性更 大、抗干扰能力更强。
微孔板种类和用途
20-24Hr 24-72Hr 72Hr或以上
订货号 1030
微孔板种类 GEN III 鉴定板
用途 用于革兰氏阴性和阳性好氧菌的鉴定
1007 1005 1006 1506 1013 1511 1514
AN鉴定板 YT鉴定板 FF鉴定板 ECO板 MT2板 SF-N2板 SF-P2板
MicroLog-M 手动微生物鉴定系统
MicroLog-M 手动微生物鉴定系统
MicroLog-M 系统适用于低检测量、低成本要求的用户。 MicroLog-M 与Microstation的差别在与前者不能连读数 仪，不能进行一切与读数仪设置相关的操作，只能兼容 细菌数据库 GEN III Database进行细菌鉴定；不能安装 丝状真菌数据库（ FF） 和酵母数据库（ YT）， 无法对真 菌 进 行 鉴 定 。 另 外 ， MicroLog-M其 它 功 能 与 microstation一致，包括限制非限制模式、工作单、调整 域值、对数据管理、编辑、复制，如选配数据管理软 件，也可以自定义数据库，生成用户数据库等。
B i o l o g在 植 物 病 原 菌 鉴 定 方 面 ， 可 鉴 定 常 见 的 假 单 孢 菌 （P se u do m o n a s，5 7种 ） 、 伯 克 霍 尔 德 菌 （ Burkholderia 19种 ） 、 黄 单 孢 菌 属 （ Xanthomonas 13种 ） 、 果 胶 杆 菌 属 （Pedtobacterium）、食酸菌属（Acidovorax 7种）、根瘤菌属（Rhizobium）、欧文氏 解淀粉菌及等数百种植物致病细菌及数百种的植物病原真菌，特别适合各出入境检验 检疫局植物检疫室、农业大学、植物研究所及相关机构进行植物病原菌检测、病理分 析和研究用。
GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
强大的数据库
Bi o l o g微 生 物 鉴 定 系 统 拥 有 目 前 世 界 上 最 大 的 数 据 库 ， 可 鉴 定 包 括 细 菌 、 酵 母 和 丝 状 真 菌 总 计 超 过2 6 5 0种 微 生 物 ， 几 乎 涵 盖 了 所 有 常 见 的 人 类 、 动 物 、 植 物 病 原 菌 以 及 食 品和环境微生物。
维护简单
整个系统只有读数仪的灯泡为易耗品（寿命为2000小时），维护工作只需要注意在不 用读数仪时尽量选择关闭及盖好防尘罩即可
微生物群落分析和生态研究功能
微孔鉴定板可用来分析单个纯种微生物或混合微生物菌群(如土壤微生物)对碳源的利用 情况，从而可以定性地研究微生物的代谢特征，如果再结合Gen5分析软件或主成份分 析 软 件(如S P S S )就 可 以 进 行E L I S A和 动 力 学 分 析 研 究 。 另 外B i o l o g针 对 研 究 领 域 还 设 计 了4种专门用于群落分析和生态研究的微孔板，便于用户进行更针对性的研究。
第二步： 按要求配制一定浊度(细胞浓度)的菌 悬液。
第三步： 将菌悬液接种至微孔鉴定板 （Microplate），培养一定时间。
第四步： 将培养后的鉴定板放入读数仪中读 数，软件自动给出鉴定结果。
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GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
可鉴定的微生物种类与所耗时间
订货号 22730D
比较不同样品碳源代谢的差异 比较同一样品对不同碳源代谢的差异 比较不同样品对同一碳源代谢的差异
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GEN III MicroStation 自动微生物鉴定系统
鉴定步骤
鉴定初始首先按常规微生物操作方法分离出纯种。鉴定步骤如下：
第一步： 用Biolog专用培养基或客户自己的培 养基将纯种扩大培养1-2代。
用于厌氧菌的鉴定 用于酵母菌的鉴定 用于丝状真菌的鉴定 用于微生物特性和群落分析研究（31种碳源） 用于微生物代谢研究（不含碳源） 用于革兰氏阴性产芽孢或分生孢子的微生物代谢研究 用于革兰氏阳性产芽孢或分生孢子的微生物代谢研究
常规消耗品
培养基 鉴定板 接种液 通用消耗品
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BUG、BUA、BUY GEN III MicroPlate、AN、YT、FF GEN III - IF A 、AN-IF、FF-IF 试管架、吸嘴、加样槽、移液管、棉签、接种棒
Biolog丝 状 真 菌 数 据 库(FF）,可 自 动 鉴 定 包 括 临 床 、 工 业 、 农 业 及 环 境 中 常 见 青 霉 (153种)、 曲 霉(89种)、 刺 盘 孢 霉(18种)、 镰 刀 霉(79种)、 木 霉 及 其 它 种 等708种 丝 状 真 菌。为与传统的真菌形态学鉴定相结合，Biolog提供近1000多张精美的宏观和显微图片 供用户参考比对，以获得更为精确的结果。
高校、研究所 化妆品 兽医微生物 生物控制 石油化工