第十二章 植物组织培养室的构建及培养基、植物材料消毒液详解

•陈列于操作室（接种室）中
•类型：垂直式和水平式
•作用：无菌操作
5、pH计
•陈列于制备室中
•作用：测定培养基及酶液的pH值
6、显微镜 •陈列于观察室中 •类型：
倒置显微镜
普通显微镜
原生质体观察
染色体和叶片气孔观察
荧光显微镜
解剖显微镜
细胞活力观察
立体观察
7、天平
•陈列于制备室中
•作用：称取大量元素、微量元素、酶制剂
4、储存室（区）
•存放配制后的培养基 •或未用完的培养基
5、灭菌室
即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料 器皿和其他物品消毒灭菌的地方
6、操作室
•也称接种室，是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等 的场所。主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管 苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程 序。 •接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽 可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时 的空气扰动。
1.无机营养成分：
1、无机营养成分
1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 （C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca） 氮：由硝酸盐和铵盐提供 铵盐过高会引发玻璃化苗
2) 微量元素：指小于 0.5mmol ／ L 的元素。（ Fe ， Cu， Zn，B， Mo， Mn等）
微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。 Fe由螯合物的形式提供:Na2.EDTA
二、仪器和设备 1、烘箱 •陈列于洗涤室 •作用：干燥洗后的器皿 高温干热灭菌 测定培养物的干重 气浴
2、冰箱
•陈列于制备室中
•作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液
激素、酶制剂。
3、灭菌锅
•陈列于灭菌室中
•类型：普通医用消毒锅
大的高压灭菌锅
•作用：培养基、水和各种器皿的消毒
4、超净工作台
3、组织培养的环境条件有哪些？
培养基的成分 培养基的制备
培养基的选择
培养基的制备是组培的核心工作，外植 体之所以能沿着不同的组培途径生长、分化、 成苗都取决于选用不同成分的培养基来调节控 制的。
培养基的成分
无机营养成分
百度文库
其它添加物
有机营养成分
培养基组成
固化剂
植物生长调节剂
无机营养成分+有机营养成分=基本培养基
无机盐供应不足时，植物会出现缺素症状。
＊当某些营养元素的供应不足时，愈伤组织所表现出 来的症状如下：
氮：某些组织表现出一种花色素苷的颜色；不能形成导管； 氮，钾或磷：细胞过度生长，形成层组织减退； 硫：非常明显的褪绿； 铁：细胞分裂停止； 硼：细胞分裂停滞，细胞伸长；
锰或钼：影响细胞伸长。
不同营养条件对植物组织培养的影响-MS Salts
三、玻璃器皿及用具 1、玻璃器皿 培养用的：试管、三角瓶、培养皿等
显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片、培养皿等
2、微孔过滤器（细胞过滤器）
•灭菌用：如激素 •一般用石棉滤膜
3、细胞计数器
统计培养细胞的用具
4、接种用具 如镊子、剪刀、解剖刀、接种针等
思考题
1、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？
No MS salts
No sign of regeneration from explant at all.
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots （1/10）MS
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of explant. No roots or callus. (2MS)
2、有机营养成分
碳源：最常用的是蔗糖，提供碳源；维持培养基渗透压。
葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。
麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。 蔗糖使用浓度在 2%—3%，常用 3%，即配制一升培养基称取 因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。
第二章
植物组织培养实验室的构建 及植物组织培养基
植物组织培养实验室的构建
主要内容： 一、植物组织培养实验室设计 二、仪器和设备
三、玻璃器皿和用具
四、培养条件
一、实验室设计
标准组织培养室包括
洗涤室（区）
制备室（区）
灭菌室（区） 储放室（区） 操作室（区） 培养室（区）
观察室（区）
药品室（区）
１、洗涤室（区）
Growth medium is optimised for regeneration of plantlets
The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface
7、培养室
•培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室 的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。 其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高 为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。
培养室：
植物组织培养材料移到田间前， 先移到驯化室进行炼苗，带生根成活后， 再移到田间苗圃。
玻璃器皿和塑料器皿
１、洗 包括用自来水、洗液、洗涤剂
清洗
２、干 包括自然晾干和烘箱干燥
2、药品室
存放常用的化学试剂
无机盐类、有机物、生长调节剂等
3、制备室
完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、 培养基分装等。 主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容器）、 冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配 制用玻璃仪器. •培养基的配制 •生理生化测定
主要有 VBl ( 盐酸硫胺素 ) 、 VB6 ( 盐酸吡哆醇 ) 、
Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、有时还使用VH(生物素)、
30g蔗糖，有时可用2.5%，但在胚培养时采用4%-15%的高浓度，
维生素：维生素(vitamin) 这类化合物在植物细胞里主要是以各
种 辅酶 的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的
促进作用。 虽然大多数的植物细胞在培养中都能合成所必需的维生 素，但在数量上，还明显不足，通常需加入一至数种维生素， 以便获得最良好的生长。