一种新的染色体制片永久封片法
人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析
人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。
由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。
Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。
必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。
2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。
常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。
低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。
低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。
实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。
②用于显带染色时能充分显示带型特点。
低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。
2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。
肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。
2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。
是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。
遗传实验6 动植物细胞永久封片制作
3、实验材料
已制备好的玻片标本； 细胞质染液； 各种浓度的乙醇； 无水乙醇与正丁醇的混合液； 二甲苯; 中型树胶。
4、实验步骤：
取出保存 的冻片 3-5分钟 放入装有50% 3-5分钟 乙醇的染色缸 3-5分钟 再放入70 %乙醇 2/3乙醇 +1/3正丁醇 取出后滴少许 封片胶封片，
0.1% 1分钟 再放入 固绿 95%乙醇
3-5分钟
1/3乙醇 3-5分钟 纯正 3-5分钟 +2/3正丁醇 丁醇 放至完全 干燥即可
作业：交一片你最好的永久封片；叙述实验原理、 目的、材料和实验步骤等以下内容。
1、实验原理：为了使观察到的组织细胞保存生活时的状 态，就必须使细胞逐渐脱去水分，这样既保存了生活 时的状态，也便于长期保存；并且为了使观察时更清 晰，也需要用透明剂对玻片标本进行处理。
实验六 永久封片的制作
1、实验原理：
为了使观察到的组织细胞保存生活时的 状态，就必须使细胞逐渐脱去水分，这 样既保存了生活时的状态，也便于长期 保存；并且为了使观察时更清晰，也需 要透明剂对玻片标本进行处理。
2、实验目的：
(1)学习对动植物组织细胞脱水、复水和 生物染料对细胞的复染法；
(2)学习树脂或树胶对实验玻片标本的永 久封片技术。
2、实验目的：
(1)ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ习对动植物组织细胞脱水、复水和生物染料对细 胞的复染法；
(2)学习树脂或树胶对实验玻片标本的永久封片技术。
3、实验材料
已制备好的玻片标本；细胞质染液；各种浓度的乙醇；无水乙醇 与正丁醇的混合液；二甲苯;中型树胶。
育种技术实验
实验一花粉生命力测定目的在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。
通过实验, 要求学生掌握花粉生命力测定的方法。
药品及用具测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
方法步骤1、方法可分三类: 间接法、直接法、染色法。
2、直接法（1）原理（2）将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上, 并且作好隔离工作, 然后观察其雌花之发育, 如果胚珠能够正常发育成种子, 则说明花粉具有生命力,否则, 就没有生命力。
（3）步骤第一步: 将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上, 并作好隔离。
隔1--3天采集已授过粉的柱头, 固定于开水或F.A.A液中。
第二步：染色剂的配置:配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。
A．染色镜检3、花柱固定在开水中, 并于水中煮烂, 而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。
镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织.4、间接法（1）原理（2）借人为创造的特定条件使花粉萌发, 鉴定花粉生命力。
（3）硼酸液培养法配置10、50PPM的硼酸溶液。
用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖, 放入恒温箱内培养。
5、取出小瓶充分摇动均匀, 用吸管吸一滴于载玻片凹槽内, 迅速盖上盖玻片固定花粉粒, 然后至于显微镜下观察。
6、观察2-----4个载玻片, 每凹面随机观察5个视野计算发芽率。
7、染色法过氧化物酶测定法（1）原理（2）这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法, 在活的花粉内过氧化氢酶存在, 它可以促进过氧化物放氧分解, 这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化, 在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂, 但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色, 如果花粉是活的, 那么这个反应很快, 则花粉都被染成红色或玫瑰红色, 如果花粉是死的, 则这一反应迟迟不能进行, 花粉也就保持原色。
第一章染色体制片方法
➢ 8-羟基喹啉（8-hydroxyquinoline），多用 0.002mol/L水溶液。适宜中、小染色体，离 体处理好。优点在于显示缢痕清晰，缺点在 于中期分裂相不如其他的多，但总体优于其 他药物。
➢ α-溴萘（α-Bromonaphthalene ）,饱和液 现配最好，适于禾本科及水生植物，活体处 理。100ml加2滴即可。
2.染色体形态比较完整：染色体各组 成成分—长臂、短臂、着丝点、随体、 染色体单体的显示都比较清楚，有利 于染色体的测量与分析。
3.方法简单，不需特殊设备，不需压 片，揭盖片等程序，且Giemsa染色 后，不用树胶封片，可在显微镜下直 接观察，方便，长期保存不褪色。
2.4 制片过程中的问题及可能原因
原因：
为预处理不足的明显标志。即预处理 液未能阻止纺锤丝的形成和活动，使 细胞分裂过程能顺利进行到底。这主 要是预处理液变质或处理时间太短所 致。
（5）染色体发生粘连或聚集成团而 不分散。
原因：
a.预处理液浓度太高或温度太高。
b.固定时间太短。
c.软化或酶解时间太长，染色体过度 膨胀。
（6）细胞核或染色体完全解体，而 只能看见细胞壁或细胞核与染色体 只见染色成淡、残缺不全的轮廓， 有时可见到细胞核碎裂成大小不等 的碎块。
➢ 放线菌酮（cycloheximide）,适宜早中期染 色体供核型分析和G-带研究。20-50ppm， 小+α-溴萘，100ml对二氯苯饱 和液加1-2滴α-溴萘，对大、中染色体 作用迅速。可在短时间内明显缩短。
永久制片的实验报告
一、实验目的1. 掌握永久制片的基本原理和方法。
2. 学会使用石蜡切片法制作永久制片。
3. 观察并分析永久制片的结构和特点。
二、实验原理永久制片是指通过特定的方法将生物组织或细胞制成可以长期保存的切片。
石蜡切片法是常用的永久制片方法之一，其原理是利用石蜡的高熔点和低溶解度，将组织固定在石蜡中，从而实现长期保存。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、显微镜、石蜡、酒精、二甲苯、苏木精染液、盐酸酒精溶液、蒸馏水、吸水纸、剪刀、镊子等。
2. 实验仪器：切片机、烤箱、显微镜、显微镜载物台、显微镜显微镜物镜、显微镜目镜等。
四、实验步骤1. 准备材料：取洋葱鳞片叶，用剪刀剪成薄片，放入装有酒精的烧杯中浸泡。
2. 固定：将浸泡好的洋葱鳞片叶取出，用镊子夹住，放入装有石蜡的烧杯中，浸泡一段时间，使洋葱鳞片叶固定在石蜡中。
3. 制片：将固定好的洋葱鳞片叶取出，用镊子夹住，放在切片机上，进行切片。
切片厚度为5-10微米。
4. 清洗：将切片放入盐酸酒精溶液中浸泡，去除多余的石蜡。
5. 染色：将清洗好的切片放入苏木精染液中染色，染色时间为5-10分钟。
6. 水洗：将染色好的切片取出，放入蒸馏水中清洗，去除多余的染液。
7. 脱水：将清洗好的切片依次放入50%、70%、90%、100%的酒精溶液中脱水。
8. 透明：将脱水后的切片放入二甲苯中透明，使切片透明。
9. 装片：将透明好的切片用吸水纸吸去多余二甲苯，放入显微镜载物台上，用显微镜观察。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞片叶的细胞结构，包括细胞壁、细胞质、细胞核等。
2. 细胞壁呈不规则的长方形，细胞质为半透明状，细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央。
3. 制成的永久制片具有以下特点：切片厚度均匀，细胞结构清晰，染色均匀，透明度好。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了永久制片的基本原理和方法，学会了使用石蜡切片法制作永久制片。
实验过程中，我们观察到洋葱鳞片叶的细胞结构，了解了细胞壁、细胞质、细胞核等部分的特点。
第一章染色体制片方法
郭启高
染色体是细胞核中由DNA、蛋白质和少 量RNA组成的易被碱性染料着色的一种丝 状或杆状物。也是遗传物质的载体。它可 被苏木精、蕃红、结晶紫、吉姆萨、醋酸 洋红、地衣红和孚尔根染液等染色。染色 体为细胞中最重要的遗传结构。对染色体 的结构与功能的研究一直是细胞学、遗传 学中的重大课题。
在去壁低渗法中，既要使细胞壁完全被消 化，又要使染色体完好无损，掌握好酶解条 件，使之恰倒好处，便成为该步骤的技术难 点，为此，应注意如下几点：
（1）酶液浓度应控制在2.5%-5%，根 尖2.5%，幼叶、幼芽5%。
（2）酶解时间应视材料老嫩、大小和 种类而作变动，一般以3小时为基准。
（3）温度要恒定，通常用25-27℃ 。
1910年摩尔根研究果蝇的染色体以来，染色体研究 进入了鼎盛时期。
染色体的制作方法和技术始终是一大难关。在 E．B．Wilson的巨著((The Cell)的1947年版本中， H．de Winiwarter于1912和1921两次定的人的 二 倍 体 染 色 体 数 是 4 7 和 4 8 ， T．S．PainLer 于 1921和1922定的数目，单倍体是24，二倍体是48。
注意：
（1）染色时间据材料而变，材料大或硬，延长至1小 时或更长。但不能太长，因HCL过度处理反而使染 色体着色困难。
（2）若染色太深，用45%乙酸压片，可达到适当分 色的效果。
（3）无论用1%乙酸地衣红或45%乙酸压片，之前均 不宜在酒精灯上加热，否则将褪色。
ห้องสมุดไป่ตู้（4）若压片之后，反差不好，细胞质着色太深，则 可在酒精灯上微热以适度褪色，增加反差。
➢ 放线菌酮（cycloheximide）,适宜早中期染 色体供核型分析和G-带研究。20-50ppm， 小染色体用低浓度，大染色体用高浓度
染色体技术之制片技术的原理
三、比较：
植物染色体标本的制备最常用的方法是压片法， 但压片法的不足是由于细胞堆积致使染色体很难彻 底分散开。 而去壁低渗火焰干燥法则有效地克服了压片法 中存在的染色体分散不开，平展不开等不足，现已 广泛用于核型分析，染色体显带
原理：
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物的根 尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有 较大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是 有规律的进行。 各种生物染色体在数目和形态上是相对恒定的，并随科属 种的不同而具有一定的特征。 人们若需了解某一物种的染色体数目，最有效的方法就是 观察有丝分裂的中期，这样可以得到较为准确的结果。
二、去壁低渗干燥火焰法
原理：
植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体 那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去 掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。 去壁低渗干燥火焰法是：先用纤维素酶和果胶酶去除细胞 壁，得到原生质体，再将细胞进行低渗处理，即把细胞置于 低渗液（低浓度的kcl或蒸馏水）中，使细胞充分吸胀,染色 体分散，平展地铺在载玻片上，再用火焰干燥让染色体紧贴 在载玻片上。
植物染色体制片方法的改进
植物染色体制片方法的改进作者：肖春林来源：《新疆农垦科技》 2016年第3期肖春林（兵团第六师农业科学研究所，新疆五家渠831300）收稿日期：２０16—01—11摘要：以普通小麦（2n=6x=42）为材料，对其种子进行发根，取其根尖分生区进行酶解法染色体制片。
对比常规压片和去壁低渗火焰干燥法制片技术，酶解法制片技术易获得更好的分裂相，分布更加均匀的染色体片，更有利于后期的原位杂交进行信号标记实验。
关键词：小麦；根尖分生区；染色体制片植物染色体制片技术是植物细胞遗传学、染色体工程、植物细胞生物学、植物细胞分类学和物种生物学等众多学科的基本实验技术[1]。
对于染色体形态、结构、遗传行为及细胞变异等遗传学现象的分析，可以大大提高作物育种工作的效率和质量。
因此，改善并提高染色体制片技术显得尤为重要。
目前常用的染色体制片技术有2种，即普通压片技术和去壁低渗火焰干燥技术。
前者虽然操作简单实用，但是需要制片者取材时间适宜，压片力量适中，对操作者的熟练程度要求较高；且处理一些细胞壁坚硬、难以软化的材料时，也不易获得良好的制片[2-3]。
后者相比前者，需要的制片经验较少，且制片效果较好，但操作过程涉及酒精灯，需要火焰干燥和盖玻片压片，对染色体造成部分影响。
酶解法在两者技术的基础上，对部分实验操作进行了改善，不仅可以得到分散良好的有丝分裂中期分裂相，而且还缩短了酶解的时间,提高了制片的效率，从而获得更好的染色体制片，为细胞学观察及相关的原位杂交（GISH）实验做准备。
1材料与方法1.1材料来源市场购买的普通小麦种子。
1.2材料制备1.2.1冷处理将普通小麦种子置于装有湿润滤纸的培养皿内，小麦腹沟朝下贴在滤纸上，于4℃冰箱冷处理24h。
1.2.2发根、剪根冷处理的种子放入25℃培养箱中培养24h以上，待根尖长至2~3cm时剪下。
1.2.3预处理湿润根尖装于2mLEP管中，笑气处理2h左右。
1.2.4固定、保存预处理的根尖用90%冰醋酸浸泡3~5min后转入70%酒精中，4℃冰箱保存。
染色体制片方法
|首页|课程申报书|教学大纲|授课教案|参考书目|网络课程|习题|教学录像|发表论文|资源库|(六)植物细胞有丝分裂一、实验目的(1) 学习和掌握植物根尖细胞压片技术。
(2) 观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。
二、实验原理有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内的染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样。
从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关，支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。
高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。
通过对根尖的固定、染色和压片，可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体，看到染色体的变化特点和染色体的形态特征，进行染色体计数。
为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冷冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，同时还可以使染色体缩短，易于分散，便于观察研究。
另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层，并使细胞软化，便于细胞彼此分开，有利于压片和染色。
三、实验材料小麦( Triticum Spp ．) 、玉米( Zea mays ) 、大蒜( Aillumsativum ) 、洋葱(Aillum cepa ) 、蚕豆(Vicia faba ) 等。
四、实验器具和药品1 ．器具冰箱，恒温箱，显微镜，水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等。
2 ．药品无水酒精、95 ％酒精、70 ％酒精、45 ％酒精、0.5 ％醋酸洋红、0.5 ％苏木精液、4 ％铁明矾液、苯酚，亚硫酸、二甲苯、秋水仙素、对二氯苯、8- 羟基喹啉、α－溴萘、lmol/L 盐酸、25 ％纤维素酶和 2.5 ％果胶酶混合液、加拿大树胶等。
实验3、植物染色体标本制备及核型分析---辅助资料
实验3、植物染色体标本制备及核型分析目前，国内外常用的植物染色体制片技术可以分为两种，即压片技术和去壁低渗技术。
Belling(1921)提出植物染色体压片技术后，压片已成为植物染色体研究中最广泛应用的常规技术；但是由于植物细胞有坚实的细胞壁，染色体很难象动物染色体那样平整地贴在载玻片上，Omura 和Kurata(1978)把植物原生质体技术应用到水稻染色体研究之中，用纤维素酶、果胶酶和0.075mol.L-1氯化钾处理取得了一定的进展，陈瑞阳等人（1979、1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗技术，并在多种植物上得到广泛应用，成为当今植物染色体研究中的重要方法。
压片技术和去壁低渗技术在取材和预处理要求及其操作都是相同的，即两者的材料基础条件是相同的，但它们所采用的染色体分散方法是不同的。
压片法是以人工外加机械压力使染色体分散，而去壁低渗法是用酶分解细胞壁，低渗液使细胞膜吸胀、水表面张力使染色体分开。
两种技术各有其优缺点，前者操作快速简便、省材省时，后者染色体易于展开、且真实不变形，尤其是对成熟细胞多的植物组织，如芽、愈伤组织等材料有独到效果，本实验主要介绍去壁低渗染色体制片技术。
一、实验目的1、掌握植物根尖、茎尖及叶片去壁低渗染色体制片技术，通过3周开放性实验教学，进行植物染色体制片技能训练；2、掌握植物染色体显微照象技术及组型分析技术，通过大量的制片观察，能获得图象清晰、完整、高度分散的染色体典型制片；通过显微摄影，获得某植物染色体自然核型图，并能用国内外通用的植物核型分析标准，确定该植物染色体模型图、核式公式及类型；3、掌握植物有丝分裂制片技术，通过大量的制片观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末期的染色体图象，并对其典型制片照像，收集核型分析及有丝分裂过程观察的染色体制片素材；4、结合实验，对某一新资源植物进行染色体组型分析，获得该物种染色体组型公式、类型、核型图及核型模式图。
永久制片观察实验报告
永久制片观察实验报告本实验旨在研究永久制片的制备方法和性能，并通过实际观察观察到制片过程中的变化和效果，以便更好地理解永久制片的特性。
实验原理：永久制片是在化学原理基础上制造的一种材料，其主要原料是氧化铝。
其制备过程主要包括溶解、悬浮、浸渍、烘干和固化等步骤。
实验步骤：1. 首先准备好氧化铝和溶液。
将一定量的氧化铝加入适量的水中，搅拌均匀。
然后将溶液加热至沸腾，保持溶液的温度在40-50摄氏度之间。
2. 将制作好的溶液倒入一个容器中，然后将待制片的基片放入溶液中，保持一段时间，使其能够充分浸渍溶液中。
3. 取出基片，将其表面的溶液悬浮物用水冲洗掉，然后放在通风良好的地方进行自然干燥。
4. 干燥后将基片放入烘箱中，以一定温度和时间进行烘干。
烘干后，基片会变得更加坚硬，使其能够更好地承受后续固化过程中的压力。
5. 固化是制作永久制片的最后一步。
将烘干后的基片放入高温下，使其固化。
在这个过程中，化学反应会进一步加强基片的硬度和耐腐蚀性。
实验结果：通过以上制片过程，我观察到一系列的变化和效果。
首先，在制备溶液的过程中，氧化铝均匀地溶解在水中，形成了均匀的溶液。
然后，在浸渍基片的过程中，基片表面逐渐被氧化铝溶液覆盖，形成了一层均匀的涂层。
在烘干的过程中，观察到基片表面的涂层逐渐变得干燥，并且增加了一些硬度。
最后，在固化的过程中，经过高温处理后，观察到涂层变得非常坚硬和耐腐蚀。
实验结论：通过永久制片的制备实验，我得出了一些结论。
首先，永久制片的制备方法较为简单，只需要一些基本的操作技巧和器材即可。
其次，制备过程中的每个步骤都起到了关键作用，对最终制片的质量和性能有着重要影响。
最后，永久制片具有较好的耐腐蚀性和硬度，可应用于各种材料的表面处理和保护。
实验改进：在实验过程中，我观察到了一些潜在的改进点。
首先，溶液的浓度和温度对制片的性能有一定影响，可以尝试调整这些参数，以优化制片结果。
其次，烘干和固化的温度和时间也可以有所调整，以获得更理想的制片效果。
高中生物 实验一植物细胞有丝分裂染色体制片及观察
四、实验用具及药品
1．用具：显微镜、水浴锅、剪刀、镊子、 刀片、载玻片、盖玻片、酒精灯等。
2．药品：无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、 饱 和 对 二 氯 苯 水 溶 液 、 0.1% 秋 水 仙 素 、 0.1N盐酸。
五、实验步骤
Hale Waihona Puke 材 固定解离染色压片 镜检
酸解: 酶解
六、制作永久玻片
冷冻脱片封片法 酒精一叔丁醇脱水封片法 酒精—二甲苯脱片封片法
七、作业及思考题
1.根据你的实验情况总结出制备好一张优 良的细胞分裂标本应注意哪些问题？
2.常用染料的特点如何？ 3.绘制2～3个有丝分裂典型时期简图。
有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、 后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根 尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的 取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可 获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的 装片。以进行有丝分裂和染色体动态的观察。
三、实验材料
洋葱（Allium cepa）及蚕豆（Vicia faba） 等
实验一 植物细胞有丝分裂染色 体制片及观察
一、实验目的
学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体 压片技术；观察有丝分裂过程中染色体的 形态特征和动态变化。
二、实验原理
有丝分裂是植物体细胞增殖的主要方式。在有丝 分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并 能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细 胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状 的发育和遗传的稳定性。
染色体片子保存制度
染色体片子保存制度一、存储条件染色体片子的存储环境需要满足以下条件：1. 温度：应保持在18-24°C之间，以确保染色体的稳定性。
2. 湿度：相对湿度应保持在40%-60%之间，以防止片子受潮和干燥。
3. 光照：避光保存，以避免紫外线对染色体的损害。
二、存储容器染色体片子应存放在专用的存储容器中，以保护片子免受物理损害和污染。
存储容器应满足以下条件：1. 材质：应采用高强度、耐腐蚀、防紫外线的材料，如聚乙烯或玻璃。
2. 规格：应根据染色体片子的尺寸和数量选择适当的容器，以确保足够的空间和空气流通。
3. 标签：每个容器应贴有标签，标明存储的染色体片子的编号、种类、数量等信息。
三、存储时间染色体片子的存储时间应根据其种类和使用需求而定。
一般情况下，长期保存的染色体片子应每五年进行一次复检，以确保其质量和稳定性。
如发现片子出现异常或老化迹象，应及时处理并更新。
四、定期检查为确保染色体片子的质量和安全性，应定期进行以下检查：1. 检查频率：至少每五年进行一次全面检查。
2. 检查内容：检查染色体片子的质量、稳定性、安全性等方面。
3. 检查方法：采用专业的检测仪器和检测方法，如光谱分析、显微镜检查等。
五、备份与复制为确保染色体片子的可靠性和永久性保存，应进行备份和复制。
以下是备份和复制的相关信息：1. 需求分析：根据染色体片子的重要性和使用需求，确定备份和复制的必要性。
2. 备份策略：制定合理的备份策略，包括备份时间、备份位置、备份方式等。
3. 备份介质：可选择硬盘、光盘、云存储等可靠的存储介质进行备份和复制。
六、清理与废弃染色体片子的清理和废弃应按照以下步骤进行：1. 垃圾分类：根据染色体片子的状况将其分为可回收和不可回收垃圾。
2. 清理周期：根据实际情况确定清理周期，一般可设定为一年或两年。
3. 废弃流程：对于无法再利用的染色体片子，应进行安全废弃，如通过专业的废弃公司进行处理。
七、使用记录为了更好地跟踪和管理染色体片子的使用情况，应建立使用记录制度，记录内容包括以下方面：1. 使用时间：记录染色体片子的使用时间，包括开始时间和结束时间。
实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术一、实验原理:植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。
二、实验目的:植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。
三、材料的制备:黑麦根尖(2n=14根尖材料的制备:1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。
2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。
目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致;(2调节工作时间。
再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。
3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理:1. 方法:(化学和物理两种(1 化学方法:(适合所有生物a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品;b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释,对禾本科植物的随体表现很清楚;C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水,100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟;(以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5hd. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀性,只能处理1~1.5h。
(2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。
预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。
五、固定:卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸;卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸;固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。
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酒精，而染色体的压片则一般在醋酸等的水溶
液中进行， 在永久封片之前， 为了保证染色体制 片的质量，需对制片进行脱水和透明等过程的 处理， 这不仅手续繁杂， 而且在这一过程中还会 进一步引起细胞材料的脱落，如果处理不当会 造成细胞材料变形而影响分析。为了解决这一 矛盾， 笔者通过多次的实验和摸索， 总结出了一
胶液贮藏于 ０ ℃ 的低温下 。 －４
永久封片之前必须将盖玻片从 载玻片 上 揭下 来， 这不仅需要一定的超低温制冷条件（ 冷冻揭
片 ）而且在 揭片过程 中会损失一定数 目的细胞 ，
分裂相；（） ２ 由于加拿大树脂或 Ｅｐｒ ｕａ ｌ胶等 ａ
均只溶于如二甲苯等有机溶剂中，不溶于水或
封片步骤： 将认为满意的染色体制片置 于桌面并在载玻片的一端 （ ） Ａ 垫上一根火柴棍 或类似粗细的木条， 使制片稍带倾斜度（－８ ５ 度 角）然后将配制好的胶液沿盖玻片一端的边缘 ， 滴上 １ 滴（ －２ 如图 １ 所示）当胶液基本渗透人 。
注意事项Biblioteka 性的阿拉伯胶 （ ｕ ａ ｂ ， ｃ ｓ ｅａ Ｇ ｍ ａｉ Ａ ａｉ ｅ ｇｌ ｒ ｃ ｃ ａ ｎ
（． Ｗｉｄ）和保护剂在一定的浓度 下 均匀 Ｌ） ｌ ． ｌ 地渗透到染色体制片中， 待胶液干结后， 载玻 盖、
片紧密粘合而达永久封片之 目的。该封片过程 既不需要将盖片从载片上揭下 ，也不需一系列
方［ １ １ １ 的基础上加以改良而成：
一些重要的染色体制片进 行永 久 封片，不 仅 为 实验 结果保 存了必要的细胞学证据，而且 也为特殊细胞学现象的重新观察和研究提供了 可能性。传统染色体制片的封片剂主要有加拿
蒸馏水１ 毫升； ０ ０ 冰醋酸１毫升； 拉伯 ０ ４ 阿
胶 １．克； １ ５ 水合氯醛 １０ 浓甘油 ８ ０ 克； 毫升。 封片胶配制方法： 冰醋酸稀释于蒸馏水 中然后将阿拉伯胶加人该醋酸溶液在室温下溶
种新的染色体制片永久 封片法。该方法用水溶
换至载玻片的另一端 （） 然后再沿盖片 另一 Ｂ， 端的边缘滴 １ －２滴胶液，待胶液渗人盖、 载玻 片之间以后平置制片， 存放于干燥 、 冷凉、 黑暗 的条件下。３ 天之后， －５ 待刻片胶完全干结后 便可用于分析和摄影。实验表明经该方法封片 后的染色体制片透明程度好，染色体分裂图象 清晰 （ 见图 ２ ， ）与封片前效果基本一致。
图 １ 封片胶液的使 用
片时要求玻片清洁，玻片在使用前最好浸泡于
酒精 中， 现用现擦。
然简便、 经济、 易行，但应该说明该方法也存在 着不足。通过笔者反复的试验和观 察 之 后 发 现，经该方法封片一年以＿的有些染色体制片 ＿ 七 有颜色褪减的现象。因此，该法还 需 进 一 步
图 ２ 用该方法进行永久 剖片后的植物有丝分裂中期（ ） Ａ 和减数 分裂中期一Ｉ ） （ Ｂ
１由于该封片胶是以稀醋酸为溶剂，该方 ．
法特别 实用于醋酸压片法的染色体制片。 ２ 由于该封片法没有揭去盖玻片 的 过 程 ， ． 所以在制片过程 中应尽量避免气泡存 留 于 盖、 载玻片之间 ，否则封片 以后气泡很难排除。制
Ｌ Ｂ ｏｏｇ Ａ ｅ Ｍｅｈ ｄ Ｍａ ｉｇ ｒ ｎ ｎ ａ ｒｎ ： ｗ ｔｏ ｏ ａ Ｎ ｆ ｋ ｎ Ｐ ｍａ ｅｔ ｅ Ｃ ｒｍｏ ｏ ｅ ｅ ａａｉｎ ｈ ｏ ｓ ｍ Ｐ ｐ ｒｔ ｒ ｏ 本文于 １８ 年 ８月 ２ ９９ ４日收到．
Ｕｎ ｎ ｄ ｗｉ Ｌｔ ．
工１ Ａｅｏｏｌ ， Ｊ ａｄ ． Ｂｎｋ ： ５． ： ］ ｌ ｐｕｉ Ｃ ． Ｅ Ｓ ｅｅｅ １ ２ Ｉ ｘ ｓ ． ｎ ． ９ ｎ
新
书
预
告
由江三多等专家编著的《 遗传与精神疾病》 一书， 已由科学出版社出版。全书约 ２ 万字， ５ 估价 １．元， １ ９ 邮购每本另加 １务 的邮费。汇款请寄北京东黄城根北街１号科学出版社刘安同志收， ０ ６ 注 明所购书名和册数。如通过银行汇款， 请汇至：中国工商银行北京东四分理处， 帐号４ １２－５ ， ６２０ ８ 科学出版社收， 注明所购书名和册数即可。
遗 卫ＥＥ ＩＡ （ｅｉ ） （） ３一； １９ 竺匕 ＲＤＴ Ｓ ｉ ｇ １ １： ９ ０ １ Ｂｊ ｎ ３ ９
实验技术 与方法
一种 染 体制 久封 法 新的 色 片永 片
卢 宝 荣
（ 四川农业大学小麦研究所， 江堰市，１８０ 都 ６１３）
细胞的有丝分裂和减数分裂制片是植物细
胞学和细胞遗传学研究不 可缺少的技术。对 于
染色体 图象
完 善。 参 考 文 献
Ｌｂｒｔ ｙ ｎａ ｆ Ｉｔ ｄｃｏ Ｍ ｃ ｇ． ｔ ａｏａ ｒ Ｍａｕｌ ｒ ｒ ｕｔ ｎ ｙｌ ｙ Ｂ － ｏ ｏ ｎｏ ｉ ｏ ｕ
ｇｓ Ｐ ｂ． ． Ｍｉｎａ ｏｉ Ｍｉｎ ｅｓ ｕ ｌ Ｃ ， ｎ ｅｐｌ ， ｎ ． ｏ ｓ
Ｌ ］ Ｄ ｒｎｔ ， Ｄ ａｄ ． ＬＣｕ： ６． Ｔ ｅ ２ ａｌ ｇ ｎ Ｃ ． Ｌ Ｆ ａｏｒ １ ０ Ｉ： ｉ ｏ ． ｎ ． ９ ｎ ｈ Ｈ ｎｌ ｇ Ｃ ｒ ｏｏ ｓ Ｌ ｎｏ， ｏｇ Ａｌ ＆ ａｄｉ ｏ ｈｏ ｓ ． ｄｎ Ｇ ｒｅ ｅ ｎ ｆ ｍ ｍｅ ｏ ｅ ｌｎ
的脱水、 透明过程， 这样节省了大量的时间，并 且经济、简单易行。同时使用该方法也没有细 胞分裂相损失的忧虑。 封片胶配方； 该封片胶在 Ｈｏｅ 配 ｙｒ氏
３在实验中发现，经醋酸地衣红染色的材 ． 料用该方法封片之后染色体有褪色的现象，如 需长期保留制片，此法最好不用于醋酸地衣红 染色的细胞压片材料。 利用该方法对染色体制片进行永久封片虽
解 ２ ４小时 ， 当阿拉伯胶完全溶解 后，加人水合
大树脂 （ａａａ ｓ ） Ｅｐｒｌ Ｃｎｄ ｂｌ ｍ ， ａ 胶和 Ｄ Ｘ ａａ ｕ ａ Ｐ
胶等『。 用这些制剂对染 色体制片进行永久封 幻 片均有以下不足之处：（）在染色体制片 进行 １
氯醛在室温下继续溶解 ２ 小时， ４ 然后再加人浓 甘油，充分搅拌后在棉纱中过滤胶液。制成的