一菌种与种子扩大培养
发酵工程第五章 种子扩大培养
• ④酶活力高。（因为菌丝体密度大） • ⑤对于固体培养，通常用于固体发酵，由于产物 浓度大，易于分离，可以有效的降低产品分离成 本。
• 缺点：
• （1）生产劳动强度较大，占地面积大，不宜自 动化生产。 • （2）容易污染其他霉菌。 • （2）周期长。 • （3）培养过程中环境条件控制较难。
2、液体培养 • 培养基配制成液体，接种培养。
第五节 种子制备过程举例
一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种
→一级种子培养
→二级种子培养
→发酵
1、斜面 (AS1.299)
培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2
培养条件：32℃，生长18-24小时
培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过 3次
• 种子移种方法 孢子悬浮液采用微孔接种法；摇瓶菌丝 体种子可在火焰接种或差压法；种子罐之 间或发酵罐间接种采用差压法
第四节 影响种子质量的因素
一、种子质量标准
发酵工业生产上常用的种子质量标准，大致有 如下几个方面：
• • • • •
细胞或菌体 生化指标 产物生成量 酶活力 此外，种子应确保无任何杂菌污染
二、影响种子质量的因素
（一）影响孢子质量的因素
（二）影响种子质量的因素
（一）影响孢子质量的因素 培养基
培养条件
培养时间和冷藏时间 种龄 接种量
（二）影响种子质量的因素 培养基
培养条件
种龄 接种量
• 种龄：种龄(seed age)指种子罐中培养的种子开始 移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 • 适宜时间：以菌体处于生命力极为旺盛的对数 生长期，且培养液中菌体量还未达到最高峰时， 较为适宜。 • 接种量：接种量(seed volume)是指移入的种子的 体积和接种后培养液的体积比。 • 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中的繁 殖速度。
菌种与种子扩大培养
菌种与种子扩大培养2008-05-11 15:12:43| 分类：默认分类阅读337 评论0 字号：大中小订阅1.1 微生物工业用菌种1.1.1 发酵工业对生产菌种的要求1)能在易得、价廉的原料制成的培养基上迅速生长，且代谢产物产量高（目标产物的产量尽可能接近理论转化率）。
目标产物最好能分泌到胞外，以降低产物抑制并利于产物分离。
2)发酵条件粗放、易于控制，且所需的酶活性高。
3)菌种生长和发酵速度较快，发酵周期短。
发酵周期短的优点在于感染杂菌的机会减少；提高设备的利用率。
4)根据代谢控制的要求，选择单产高的营养缺陷型突变菌株（微生物菌种缺少或丧失了合成某种或多种必需生长因子的能力）或调节突变菌株或野生菌株。
5)抗杂菌、抗噬菌体能力强。
6)菌种纯粹，遗传性状稳定（不易变异退化），以保证发酵生产和产品质量的稳定性。
菌种退化，生产性能下降是生产中常碰到的问题。
7)菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素等），以保证安全。
使用新菌种时更应注意；应用食品领域更需经严格鉴定，如早期酱油生产采用黄曲霉，现已停止。
1.1.2 工业上常用的微生物微生物的共同特性1)个体小、构造简单；2)容易培养、易于代谢；3)生长旺盛、繁殖迅速；4)适应性强、容易变异；5)分布广泛、种类繁多工业上常用的微生物发酵工业上常用的微生物有细菌、酵母菌、霉菌和放线菌四大类群。
要求复习微生物知识，掌握工业上常用微生物的基本形态。
此处介绍其中具有工业价值的主要微生物。
细菌细菌是自然界中分布最广、数量最多、与人类关系最为密切的一类微生物，也是发酵工业上使用最多的一种单细胞生物。
细菌的一般结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体及内含物几部分；特殊结构是某些细菌所特有的，如荚膜、鞭毛、芽胞等，它们在细菌的分类鉴定中有重要的意义。
发酵工业上常用的细菌大多是杆菌，如枯草芽孢杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌、乳酸杆菌、梭状芽孢杆菌大肠杆菌等。
菌种保藏及种子扩大培养
2. 菌种性能的改变
(1) 菌种的外在特征改变
异核现象导致微生物群体发 生变异
自发突变导致菌种遗传性 能改变
回复突变 降低(衰；2退代) 菌谢菌株能种的力特降的点低生：；个发理体酵状或周况群期体延改特长变征；发抗生不变良化环；境生能产力能降力低。
2020/5/28
3 . 防止菌种衰退的措施
2020/5/28
Байду номын сангаас
一、 种子扩大培养阶段
A： 实验室种子的制备： e.g 产黄青霉菌(P.chrysogonum)
原始菌种
斜面试管
250ml 茄子瓶（大米或小米） 25 ~28°C ，4~14天
成熟
（在真空下抽去水分，使水分含量在10%以下，于4 °C冰箱保存）
2020/5/28
e.g. （ Glutamic acid-producer ）
2020/5/28
复壮的措施
• 通过分离达到复壮 在琼脂平板划线、涂布或与琼脂培养基混 合培养再分离，达到—菌落纯 采用单细胞或单孢子分离法达到—细胞纯
• 通过寄主体达到复壮 将菌株接种到寄主细胞进行繁殖达到复壮 。
•202淘0/5/2汰8 已衰退的个体达到复壮
三、菌种保藏（strain preservation）
保藏应注意的问题：
菌体状态：休眠体
基质：营养贫乏
操作过程：不应对细胞造成伤害
2020/5/28
国内外菌种保藏机构
• 中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM ）
1979年成立，下设6个菌种保藏管理中心 CCGMC 普通微生物菌种保藏管理中心 ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心 CICC 工业微生物菌种保藏管理中心 CMCC 医学微生物菌种保藏管理中心 CACC 抗菌素菌种保藏管理中心 CVCC 2020/5/28 兽医微生物菌种保藏管理中心
种子扩大培养 认识种子扩大培养
4.1 种子扩大培养的目的及要求
种子扩大培养的目的及要求
概述 种子扩大培养：又称种子制备工序，是指将保存在沙土管、冷冻干燥管
中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种 子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 这些纯种培养物称为种子。
种子扩大培养的目的及要求
种子扩大培养的目的及要求
种子必须满足以下条件：
条件一
菌种细胞的生长活 力强，移种至发酵罐后能 迅速生长，缩短迟缓期
条件二
生理状态稳定，以便 获得稳定的菌体生长过程
五个
条件五
无杂菌污染，以保证 整个发酵过程正常进行 Nhomakorabea条件
稳定的生产能力
条件四
保持稳定的生产能力，使最终产
物的生物合成量持续稳定高产
条件三
菌体总量及浓度
种子扩大培养的意义 ① 为发酵生产提供充足的代谢旺盛、生命力强的种子 ② 有效地缩短发酵生产周期
种子扩大培养的目的及要求
目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左 右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。因此，种子扩大培 养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够的 种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。
适宜，可以保证在大发 酵罐中有适当的接种量
生物工业菌种与种子的扩大培养
II. 划线分离法
斜线法 曲线法 方格法 放射法 四格法
产品鉴定及筛选
从两个角度出发：产物角度、形态角度 I. 从产物角度出发
也就是在培养时以产物的形成来有目的的设计 培养基。 例：醛肟水解酶的筛选
在培养基中加入0.05%的Z-PAOx，每隔2-3天移去 一半培养物，补充新鲜培养基，不断分析样品。
第二节 工业微生物菌种的选育与改良
一、工业微生物菌种的选育
4. 诱变育种 正突变 对生产有利的突变称为正突变。
突变方向 负突变 造成菌株衰退及生产质量下降 的突变称为负突变。
菌株发生正突变的概率低。 诱变育种的关键： ①以合适的诱变剂处理大量而均匀分散的微生物细
胞悬浮液，使个别存活的个体中DNA碱基变异频 率大幅提高；
(b) 预处理：1g土样溶于99ml去离子水中，振荡均匀， 过滤，得菌悬液
(c) 增殖培养： 经80℃，30分钟预处理
第二节 工业微生物菌种的选育与改良
一、工业微生物菌种的选育
实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 自然选育过程： (d) 分离纯化：固体分离培养基采用CMC为唯一碳源
，pH 10.5条件下涂布培养3-4天 (e)鉴定筛选：选择有凹陷圈的菌落，而且越大越
诱变
2. 诱变机理 这种变化包括：DNA链的断裂，DNA分子内和分子 间的交联形成嘧啶二聚体。
诱变
3. 诱变仪器 265nm的紫外光，对应于功率为15W的紫外灯
4. 诱变操作 (1) 将10ml菌悬液放在直径为9cm的培养皿中，液 层厚度约为2mm，启动磁力搅拌器；
(2) 使用15W的紫外灯管，照射距离为30cm左右， 照射时间以几秒至数十分钟为宜，具芽孢的菌株 需处理10min左右。
第四节种子扩大培养一种子扩大培养的任务工业生产规模的
适宜时间：以菌体处于生命力极为旺盛的对数生长期（exponential phase），且培养液中菌体量还未达到最高峰时，较为适宜。
嗜碱性芽孢杆菌（Bacillus alkalophilus)生产碱性蛋白酶（alkaline proteinase/protease） ，培养１２小时接种，酶活最高。
一般相对湿度40~45%时孢子数量最多，孢子颜色均匀，质量较好。
培养时间和冷藏时间对种子和孢子形成都有影响。
如土霉素菌种孢子斜面培养四天左右，即于4℃冰箱保存，发现冷 藏7~8天菌体自溶，而培养五天以后冷藏，20天未发现自溶。
链霉素生产菌，斜面孢子在6 ℃冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一 个月降低8%。
二. 种子扩大培养(制备)阶段
实验室种子的制备： 生产车间种子制备:
A 实验室种子的制备：
e.g 产黄青霉菌(P.chrysogonum)
原始菌种 斜面试管 获得孢子
250ml 茄子瓶（大米或小米） 25 ~28 ℃ ，4~14天
成熟（在真空下抽去水分，使水分含量在10%以下
，于4 ℃冰箱保存）。
体培养基的摇瓶中，于摇床上培养，获得菌丝体，作为种子。
不产孢子的细菌，如生产谷氨酸的棒状杆菌 （Corynebacterium）、短杆菌（Brevibacterium），生产上一般 采用斜面营养细胞进行扩培，再转入液体摇瓶培养，获得细胞 悬液再接种。
e.g. Glutamic acid-producer：（谷氨酸生产菌） 原始菌种（出发菌种） 固体试管斜面（32 °C ，18~24小时）
而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率［产物／ml·h］。
实验室种子扩大培养一般流程
实验室种子扩大培养一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!实验室种子扩大培养是指将保藏的菌种经过转接、活化后，再经过摇瓶、种子罐等逐级扩大培养，最终获得一定数量和质量的纯种培养物的过程。
第二章 菌种与种子扩大培养
3.同步培养
(1)温度 最适生长温度有利于细菌生长与分裂，不适 宜温度如低温不利于细菌生长与分裂。通过适 宜与不适宜温度的交替处理之后，通过培养可 获得同步细胞。
3.增殖培养
收集到的样品，如含所需菌种较多，可直接 进行分离。 如果样品含所需菌种很少，就要设法增加该 菌的数量，进行增殖(富集)培养。 所谓增殖培养就是给混合菌群提供一些有利 于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条 件以促使所需菌株大量繁殖，从而有利于分 离它们。
增殖培养（培养基）
例如：筛选纤维素酶产生菌时，以纤维素作为唯一碳
挑选出
2、菌种的纯化选优
微生物容易发生变异和染菌。 一般丝状菌的野生菌株多数为异核体。 生产菌在不断移代过程中，菌丝间接触、吻合后，易 产生异核体、部分结合子、杂合二倍体及自然产生突 变株等。 以上会造成细胞内遗传物质的异质化，使遗传性状不 稳定。 如果一个菌种遗传背景复杂，既不稳定，用诱变剂处 理后的变株中，负变率将增加。 特别对诱变史长的菌株，采用强烈诱变剂处理，效果 很差，发酵单位反而变得更低。
③生长圈法
通常用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌. 工具菌是一些相对应的营养缺陷型菌株。 将待检菌涂布于含高浓度的工具菌并缺少所需营养物 的平板上进行培养，若某菌株能合成平板所需的营养 物，在该菌株的菌落周围便会形成一个混浊的生长圈。 如：嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合 倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围出现生 长圈的菌落为嘌呤产生菌。 同样，只要是筛选微生物所需营养物的产生菌，都可 采用营养缺陷型作为工具菌通过生长圈法筛选。
基因工 程
生产用菌种
发酵工程中对菌种扩大培养的方法
发酵工程中对菌种扩大培养的方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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生物工业菌种与种子的扩大培养
生物工业菌种与种子的扩大培养第四章生物工业菌种与种子的扩大培养第一节工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏一、微生物菌种的复苏⒈菌种衰退的原因菌种复苏的原因存有两个方面：一就是菌种中草药欠妥；二就是菌种生长的条件建议没获得满足用户，或是碰到有利的条件，或是丧失某些须要的条件。
此外除了经微生物单单的新菌株出现回复突变，从而失去代莱特征等情况。
菌种连续传代是菌种发生衰退的直接原因。
由于连续传代使菌种经常处于旺盛的生长状态，且每次传代时营养和环境等培养条件都是在不断地变化，与处于休眠状态的菌种相比，细胞的自发突变率要高得多。
因此，菌株经过连续传代后，含突变基因的个体在数量上逐渐占优势，退化现象就逐渐显露出来。
⒉菌种性能的发生改变⑴菌种遗传特性的改变从菌种遗传机理这一微观角度来看，菌种遗传特性的改变主要有如下三个原因。
①异核现象引致微生物群体出现变异。
②自发突变导致菌种遗传特性改变。
③变异所产生的变种或杂交重组所构成的杂种往往不平衡，难出现回复突变或产生分后离子，以致在菌种这一群体中构成具备相同基因型（亦称遗传型）的个体。
⑵菌种生理状况的改变⒊避免菌种复苏的措施⑴菌种的分离⑵菌种的套袋狭义的复壮指的是菌种已经发生衰退后，再通过纯种分离和性能测定等方法，从衰退的群体中找出尚未衰退的少数个体，以达到恢复该菌种原有典型性状的一种措施。
而广义的复壮应该是一种积极的措施，即在菌种的生产性能尚未衰退前就经常有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作，使菌种的生产性能逐步提高，所以，这实际上是一种利用自发突变(正突变)从生产中不断进行选种的工作。
⑶提供更多较好的环境条件⑷用优良的保藏方法⑸定期提纯菌种二、菌种的复壮⑴纯种拆分⑵通过递主体展开套袋⑶出局已复苏的个体三、菌种的保藏⒈菌种中草药的原理⒉菌种保藏方法⑴斜面低温中草药法⑵液体石蜡销毁中草药法⑶液态曲中草药法⑷砂土管中草药法⑸冷冻干燥法⑹液氮超低温中草药法⒊菌种保藏的注意事项⑴菌种在中草药前所处的状态⑵菌种中草药所用的基质⑶操作过程对细胞结构的侵害第二节工业微生物菌种的选育自然育种包含从自然界拆分赢得菌株和根据菌种的自发性变异展开甄选而赢得菌种。
微生物工程菌种和种子扩大培养
微生物工业用菌种 种子扩大培养 影响种子质量的主要因素
第一节 微生物工业用菌种
一、微生物的特性
有些微生物能在厌氧的条件下生长 有些微生物能够利用简单的有机物和无机物满足自身
的生长 有些微生物能进行复杂的代谢 有些微生物能利用较复杂的化合物 有些微生物能在极端的环境下生长
对于产孢子的微生物 ➢ 获得一定数量和质量的孢子
菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种 子，但操作繁琐。
➢ 获得一定数量和质量的菌丝体 便于操作，但需要更仔细的控制。
2、培养基选择的原则
培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基 应该是有利于孢子的生长。
在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小， 因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较 精细。
二、 工业化菌种的要求
能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成 产物
有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的 可操作性要强
遗传性能要相对稳定
不易感染它种微生物或噬菌体
产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病 菌无关）
生产特性要符合工艺要求
三、已工业化产品生产菌的介绍
2、诱变育种
用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变进行的筛选， 称为诱变育种
诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂
物理在：紫外，快中子
{ 诱变剂
化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍
Hale Waihona Puke （1）、诱变剂的作用原理（略）
（2）、诱变剂处理过程中几个有关的问题
化学诱变剂使用过程的安全性
压硝酸：0.07MNa2HPO4 亚硝基胍：1MNaOH
物理方法：加热、膜过滤等，表2-2 （P31） 但主要是通过培养的方法
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奥尔兰醋杆菌 啤酒、醋酸
氧化醋杆菌 酒类
巴氏醋杆菌 醋酸、山梨糖
恶臭醋杆菌 醋、山梨糖、二羟基丙酮
弱氧化醋杆菌 5-酮基葡糖酸、丙酮酸、山梨糖
拟胶醋杆菌 丙酮酸、山梨糖、纤维素
大肠杆菌
赖氨酸、苏氨酸、精氨酸、色氨酸、酪 氨酸、
天冬氨酸、高丝氨酸、谷氨酸脱羧酶、 酰胺酶、
天冬酰氨酶、丙酮酸、酮戊二酸，腺苷 酸、大肠菌素
简便
沙土保藏法 冷冻干燥法
干燥、无营养 产孢子微生物
1~10年
干燥、无氧、低 温、有保护剂
各大类
5~15年以上
简便有效 设备
划线培养后的细菌菌落
酿酒酵母
霉菌孢子
国内外菌种保藏机构：
菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、
菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、 不乱以及便于研究、交换和使用的目的。
一菌种与种子扩大培养
从微生物分类学的角度，分为：
细菌类：
短杆菌：氨基酸发酵（谷氨酸）
枯草芽孢杆菌：淀粉酶（BF7658）、碱性蛋白
酶等
地衣芽孢杆菌：耐高温α-淀粉酶)
苏云金芽孢杆菌：BT生物农药
梭状芽孢杆菌：丙酮、丁酸等发酵
酵母菌：
啤酒酵母：酿酒酵母、辅酶类物质的发酵
酒精酵母：酒精
汉逊酵母：食品工业，用于乙酸乙酯的发酵
属名 诺卡氏菌属 拟无枝酸菌属 分枝杆菌属
工业常用的微生物：放线菌
种名 珊瑚色诺卡氏菌 小球诺卡氏菌 鼠白诺卡氏菌 暗色诺卡氏菌 石蜡诺卡氏菌 嗜石油诺卡氏菌 东方诺卡氏菌 地中海拟无枝酸菌 黄色分枝杆菌 甲烷分枝扦菌 石蜡分枝杆菌
耻垢分技杆菌 结核分核杆菌
用
途
正烷烃→2，2-二甲基粘康酸
正烷烃→谷氨酸
（3）常用的菌种保藏方法： 斜面低温保藏法、甘油低温保藏法、砂土保藏法、麸
皮保藏法、冷冻干燥法、液氮超低温冻结法等。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价
冰箱保藏法 （斜面）
低温
各大类
3~6月
简便
液氮超低温保藏 法
超低温
各类
长期
液氮
甘油低温封藏法 低温、缺氧
各大类
1年以上
特点：固态基质做载体，发酵结束后将培养基及 菌体挤压出来，载体可反复使用，如脲烷泡沫 塑料块。
⑷两步法液体深层培养：在酶制剂和氨基酸生产 中应用较多。
特点：控制菌体生长条件与产酶条件区分开来， 如先菌体生长，再改变条件产酶。
三、影响种子质量的主要因素
1.培养基
主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。
选用原则：组分简单，来源丰富，价格便宜，取材方 便等。
对于种子用的培养基，摇瓶与种子罐用的培养基不 相同，摇瓶要求培养基用的原材料精细，碳源浓度较低 而且是用微生物较易利用的碳源；对于种子罐用培养基， 要求使用接近大生产用的原材料，氮源浓度较高，有利 于菌体的增殖。例如：HASS（高温淀粉酶）
二、工业微生物的培养类型
⑴静置培养法（厌气性发酵）；少，如酒精发酵 ⑵通气培养法（好气性发酵）；主要，如抗生素等
通气培养法作为种子扩大培养的具体方法：
①液体培养法：三角瓶摇床震荡或回转式培养； ②表面法培养：液体表层，菌体生长于表面；
③固态法培养：固体培养基表面生长
大规模工业生产的培养方法及特点：
菌种保藏机构：
中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL）
工业微生物 / 农业微生物 /
四、菌种选育
（1）目的：改善菌种的特性，使提高产量，改进质量，
丙氨酸、蛋白酶、3-羟基丁酮、 甾族化合物转化
鲁氏毛霉
淀粉酶、蛋白酶、丙二酸、乳酸、 丙酮酸
多刺毛霉 甾族化合物转化
三、生产菌种的保藏与选育
㈠菌种保藏
（1）目的：
①存活，不丢失，不污染； ②防止优良性状丢失； ③随时为生产、科研提供优良菌种。
（2）基本原理：根据菌种的生理生化特点，人工地创造 条件，使菌种的代谢活动处于不活泼状态。
假丝酵母：scp生产，石油发酵
霉菌：
黑曲霉：柠檬酸工业、酿酒业、
酶制剂工业（糖化酶）
黄曲霉：酱油生产(3042)，面酱
青霉菌：青霉素的生产
红曲霉：红曲制造，用于南方红曲酒
（女儿红）的生产；使用红色色
素的生产；豆腐乳的生产等
赤霉菌：赤霉素的生产，是一种植物生
长激素
工业常用的微生物：细菌
属名
种名
铜绿假单孢菌
利福霉素
单细胞蛋白
正丁烷→葡萄糖、糖醛酸
单细胞蛋白
万古霉素
利福霉素
石油发酵
正构烷烃→赖氨酸
属名 毛霉属
工业常用的微生物：霉菌
种名 卷枝毛雹 爪哇毛霉 东北毛霉 高大毛霉
用
途
脂肪
蛋白酶、果胶酶、甾族化合物转化
丙酮酸
草酸、丁二酸、脂肪、甾族化合物转化
微小毛霉丙氨酸、凝乳酶、蛋来自酶、 甾族化合物转化总状毛霉
⑴固体培养（曲法培养）
①浅盘固体培养 ②深层固体培养 特点：酶活力高，但劳动强度大，曲层需翻动。
⑵液体培养
①浅盘液体培养：已不用，占地面积大 ②液体深层培养：几乎所有的好气培养都采用
特点：培养条件易控制，如温度，pH等，但易染菌， 要求无菌。
⑶载体培养：
吸收了固态的曲法培养与液态培 养的优点，是近年新发展的一种培养方法。
短小假单孢菌
萤光假单孢菌 假单孢菌
属 甲烷假单孢菌
麦氏假单孢菌
卵假单孢菌
臭味假单孢菌
用途 谷氨酸、水杨酸、丙酮酸、蛋
白酶 赖氨酸
天冬氨酸、葡糖酸、2-酮基葡 糖酸、
甲烷、丙烷→粘性糖类 2-酮古洛糖酸
葡糖酸、天冬氨酸 瓜氨酸
醋杆菌属
埃希氏菌 属
纹膜醋杆菌 醋酸、丙酸、丁酸、葡糖酸、山梨醇
黑色醋杆菌 2，5-二酮基葡糖酸
①尽可能满足其营养条件、培养条件，避免有害因素 影响；
②尽量减少传代次数； ③采用幼龄菌种；
4.菌种复壮方法
①分离复壮（稀释平板法、平板划线法等）； ②若单菌落分离不行，可改变培养条件，或两者结合 进行复壮； ③诱变因素处理，再进行单菌落分离；
第二节 种子扩大培养
一、种子扩大培养的任务
1.任务：每次发酵罐的投料，要提供相当数量代谢旺盛 的种子。根据菌种生长速度快慢来决定扩大培养的级数； 2、三级发酵（50吨发酵罐）： 斜面—一级摇床—二级种子罐—三级种子罐—发酵罐
降低成本，改革工艺，方便管理及综合利用等。
（2）方法：A、自然选育；B、抗噬菌体菌株选育；C、
诱变育种；D、代谢控制育种；E、基因重组育种；
五、防止菌株衰退的措施
1、菌种退化：多次传代，发酵力、繁殖力下降； 发酵产物得率低。 2、衰退的可能原因
①菌种保藏不妥；
②培养要求未得到满足；
3.防止菌种衰退的方法