丙氨酸氨基转移酶(ALT)性能验证报告模板
血清谷丙转氨酶实验报告
血清谷丙转氨酶实验报告血清谷丙转氨酶实验报告血清谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，简称ALT）是一种存在于肝脏细胞中的酶类物质，它在肝脏功能评估中起着非常重要的作用。
通过检测血液中的ALT水平，可以帮助医生判断肝脏是否受损或存在疾病。
一、实验目的本次实验的目的是通过测量血清中ALT的含量，了解被检测对象的肝脏功能是否正常。
通过对实验结果的分析，可以初步判断是否存在肝脏疾病，并为进一步的诊断和治疗提供参考依据。
二、实验方法1. 实验前准备：准备好实验所需的血清样本、试剂和仪器设备，确保实验环境清洁卫生。
2. 采集血清样本：选择合适的部位，用无菌针头采集被检测对象的静脉血液。
注意遵守无菌操作规范，避免外界污染。
3. 血清分离：将采集到的血液样本放置于离心管中，以适当的转速离心一段时间，使血液分离成血清和红细胞。
4. ALT检测：将分离得到的血清样本转移至ALT检测仪器中，按照仪器操作说明进行操作。
仪器会自动测量ALT的含量，并显示结果。
三、实验结果根据实验测得的结果，ALT的含量可以分为正常范围和异常范围。
正常范围通常是男性10-40 U/L，女性7-35 U/L。
如果实验结果显示ALT的含量超出正常范围，可能意味着肝脏受损或存在疾病。
四、结果分析1. ALT升高的原因：ALT升高可能是由于肝脏炎症、肝细胞坏死、肝损伤等原因导致。
常见的疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化等都会引起ALT的升高。
2. ALT降低的原因：ALT降低可能是由于肝脏功能减退或肝细胞受损导致。
例如，肝功能衰竭、肝癌等情况下，ALT的含量通常会降低。
五、临床意义ALT作为肝脏功能的指标之一，对于肝脏疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。
通过检测ALT的含量，可以帮助医生判断肝脏是否受损，并及时采取相应的治疗措施。
六、实验注意事项1. 实验操作要规范：在实验过程中，要严格遵守无菌操作规范，避免外界污染。
同时，仪器操作要按照说明书进行，确保结果准确可靠。
谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的了解谷丙转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义，学习谷丙转氨酶活性测定的原理和方法。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于肝脏、心脏等组织中。
它催化丙氨酸与α-酮戊二酸在氨基转移过程中相互转化，生成谷氨酸和丙酮酸。
在正常情况下，血清中的ALT含量较低。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
因此，血清ALT活性的测定在临床诊断中具有重要意义。
本实验采用比色法测定血清ALT活性，通过观察反应体系中丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-P）的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 血清样本- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- α-酮戊二酸- 丙氨酸- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸二氢钠（NaH2PO4）- 0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）- 0.1mol/L盐酸（HCl）- 标准曲线样品2. 仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管- 试管四、实验步骤1. 标准曲线的制作：- 配制不同浓度的标准曲线样品，分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。
- 将标准曲线样品置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：- 将血清样本按照一定比例加入反应体系中，加入2，4-DNPH和底物，混匀。
- 将反应体系置于恒温水浴锅中，反应一定时间。
- 反应结束后，加入0.1mol/L氢氧化钠终止反应。
- 将终止后的反应体系置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.998，表明本实验采用的方法具有良好的线性。
2. 血清ALT活性的测定：实验结果显示，本实验测定的血清ALT活性为XX单位/L。
血清丙氨酸实验报告
一、实验目的1. 了解血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）在肝脏代谢过程中的作用。
2. 掌握血清ALT活性测定的原理和方法。
3. 学会运用分光光度法测定血清ALT活性。
4. 分析血清ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
二、实验原理血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）是一种存在于肝脏细胞内的酶，主要催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
当肝脏受到损伤时，ALT会大量释放到血液中，因此，血清ALT活性的测定对肝脏疾病的诊断具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性。
在实验中，ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，该化合物在碱性条件下呈现棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 血清样本：取适量血清样本，置于冰浴中保存。
2. 试剂：丙氨酸、α-酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠等。
3. 仪器：分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：分别配制不同浓度的丙酮酸溶液，加入2，4-二硝基苯肼和氢氧化钠，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：取血清样本，加入丙氨酸、α-酮戊二酸、磷酸盐缓冲液和2，4-二硝基苯肼，混匀后置于37℃水浴中反应一段时间。
反应结束后，加入氢氧化钠终止反应，测定其在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算ALT的活性。
3. 结果记录与分析：记录实验数据，计算ALT的活性，分析ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
五、实验结果1. 标准曲线的制作：绘制标准曲线，得到线性回归方程为y=0.0058x-0.0035，R²=0.998。
2. 血清ALT活性的测定：测定血清样本的ALT活性为540 U/L。
3. 结果分析：根据文献报道，ALT活性在正常范围内为0-40 U/L。
本实验中血清样本的ALT活性为540 U/L，明显高于正常范围，提示可能存在肝脏疾病。
转氨酶检测实验报告
一、实验目的了解转氨酶在生物体内的作用，掌握转氨酶活力的测定原理和方法，并通过实验验证转氨酶活力在不同生理和病理状态下的变化。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（ALT）是其中一种重要的转氨酶，主要存在于肝细胞内，对肝脏的代谢和解毒功能至关重要。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高，因此ALT检测是临床诊断肝功能的重要指标。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT活力。
三、实验材料与仪器1. 仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液器、微量滴定板等。
2. 试剂：ALT测定试剂盒、NADH标准品、2,4-二硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼溶液、磷酸盐缓冲液、丙酮酸标准品、丙酮酸溶液等。
3. 样品：血清样品。
四、实验方法1. 标准曲线的制作（1）配制丙酮酸标准溶液：将丙酮酸标准品用磷酸盐缓冲液溶解，配制成0.1 mmol/L的标准溶液。
（2）测定丙酮酸标准溶液的吸光度：取丙酮酸标准溶液0.1 mL，加入2 mL 2,4-二硝基苯肼溶液，混匀，置于37℃水浴锅中反应30 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）绘制标准曲线：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活力的测定（1）配制反应体系：取血清样品0.1 mL，加入1 mL磷酸盐缓冲液、0.5 mL NADH溶液、0.2 mL丙酮酸溶液，混匀。
（2）测定血清ALT活力：将反应体系置于37℃水浴锅中反应10 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）计算ALT活力：根据标准曲线，计算血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作通过绘制标准曲线，得出丙酮酸浓度为0.1 mmol/L时，吸光度为0.8。
2. 血清ALT活力的测定（1）正常血清ALT活力：本实验中，正常血清ALT活力为25 U/L。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定-精品文档
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman） 分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。，要求各S管和U管进行双管平行操
丙氨酸转氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解丙氨酸转氨酶（ALT）在生物体内的重要作用。
2. 掌握ALT活力的测定原理和方法。
3. 分析ALT活力与肝脏疾病之间的关系。
二、实验原理丙氨酸转氨酶（ALT）是一种在生物体内广泛存在的氨基转移酶，其主要功能是催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
ALT在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中具有重要作用。
当肝脏、心肌等组织发生损伤或坏死时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，以丙酮酸为底物，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样本- 丙酮酸- NADH氧化酶- 2,6-二氯酚靛酚- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 1mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 移液器- 实时荧光分光光度计2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 精密电子天平- 恒温水浴锅- 紫外可见分光光度计四、实验方法1. 样本处理：将血清样本离心，取上清液备用。
2. 标准曲线绘制：以丙酮酸浓度为横坐标，NADH的生成量为纵坐标，绘制标准曲线。
3. ALT活力测定：将血清样本、丙酮酸、NADH氧化酶、磷酸盐缓冲液等按照实验步骤混合，在实时荧光分光光度计上测定NADH的生成量。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为y = 0.0126x - 0.0018，相关系数R² = 0.9989。
2. ALT活力测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，得到ALT活力为x = 0.015 mol/L。
3. 数据分析：根据ALT活力与肝脏疾病之间的关系，当ALT活力超过正常值时，提示肝脏可能存在炎症、损伤等疾病。
六、实验结论通过本实验，我们成功测定了血清中ALT的活力，并分析了ALT活力与肝脏疾病之间的关系。
alt测定实验报告
alt测定实验报告本文将介绍一个名为“alt测定”，也叫“alanine aminotransferase测定”的实验。
这项实验通常在医学和生命科学领域中使用，是检测人体血液中肝脏功能的一种方法。
实验步骤首先，需要收集被测试者的血液样本。
可以使用长针或针头手术刀获得血液样本。
然后，将样本放入试管中，并放到离心机上进行离心。
这将分离血细胞和血浆，以便更准确地检测血液中的alt含量。
接下来，在一个反应管中加入4毫升的双乳酸盐缓冲液（pH7.4），然后加入100微升的血浆样本。
将血液和缓冲液混合均匀。
然后，加入2.5毫升的L-丙氨酸酐试剂，以激活样本中的alt。
将试管放到恒温器中，在37℃下孵化10分钟。
在孵化过程中，alt将与L-丙氨酸酐反应，形成谷氨酸和丙酮酸。
接下来，需要立即添加5毫升的5％的三氯乙酸溶液，停止反应过程，并加入10毫升的钼酸试剂A和钼酸试剂B混合物。
这将导致混合物颜色变化，从浅黄色变为深蓝色。
这反应是比色反应，颜色的深浅程度代表血液中alt的浓度。
最后，可以使用分光光度计读取混合物的吸光度值，以测量血液中alt的浓度。
该值通常以每升国际单位（IU/L）表示。
结果解读正常人血液中的alt值通常在5-40 IU/L之间。
如果测试结果高于正常范围，则可能表明肝脏功能异常，例如肝炎、肝硬化或肝细胞癌等。
但需要注意的是，如果被测试者有其他身体问题，如心肌炎或肌肉损伤，也可能导致alt水平升高，因此应该结合其他检查结果，确定是否存在肝脏损伤。
实验注意事项在进行alt测定实验时，需要注意以下几点：1.收集样本后，应立即进行处理，以防止血液成分的变化。
2.正确添加试剂，混合均匀，以确保反应可靠。
3.避免把其他物质如汽油、清洗剂、酒精等与实验中使用的试剂混合，因为这样会影响测试结果的准确性。
结论alt测定是一种简单但有用的实验，可以用来评估肝脏功能是否正常。
如果测试结果显示alt浓度高于正常水平，则可能意味着需要进行其他的检查，以确定疾病的具体原因。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)的实验室检测
5． 标准品法可避免检测受环境因素等 引起的系统误差，标准品的准确配置和加 样直接决定实验结果的准确。 出现大量负值（会导致漏检），阳性过多 基本上都是由于标准品配置和加样不准确。
（二） 复检——丙氨酸转移酶系数法 1. 设备 1.1 340 RT酶标仪。 2. 试剂 2.1 中生丙氨酸转移酶检测试剂（干粉） 2.2 ALT标准品：110U、88U、22U。 3. 程序设置 3.1读板程序：震荡20秒，60秒、120秒、180秒、 240秒、300秒340nm读板五次。 3.2 以标本△OD值乘以系数计算标本ALT值。
5.2.2 说明：K设为设定的接近K真的系数。 U设为已知的ALT标准品酶含量在K=K设时 测定的酶含量；∆OD为340nm波长测定反 应系统每单位时间OD值变化率； U设=K设×∆OD ∆OD= U设/K设 公式2 5.2.3同一酶含量的标本在同一反应系统中 ∆OD不变，将公式2代入公式1，得： K真= U真×K设/ U设
ALT是献血法规定的血液检验项目之一。 参考值范围为5~40U/L。 ALT催化下列反应： α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 L-谷氨酸+丙 酮酸
ALT的生理变异较小，性别、年龄、进食、 适度运动对酶活性无明显影响。病毒性肝 炎时随不同病期和严重程度而异，常明显 升高，可达10~100倍正常上限。肝硬化、 急性心肌梗死、心肌炎、肌肉损伤、肌肉 萎缩等均可升高。
也只有在此基础上建立起来的测定方法才是可靠的准确酶反应是随着温度升高而升高的但测定酶是都需要酶和底物在一定温度下作用一段时间过高的温度可能使酶失活
丙氨酸氨基转移酶（Hale Waihona Puke LT）的 实验室检测基础知识
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
什么是改良赖氏法？
卡门法
赖氏法
丙酮酸+α-酮戊二酸 谷氨酸+丙氨酸 丙酮酸→NAD++乳酸 在紫外分光光度法中，NADH在 340nm波长处的吸光度降低值与ALT 活性成正比。 卡门氏酶单位：1ml血清（反应溶液 总量为3ml）在340nm波长下，用内 径喂1.0cm的比色皿，在25摄氏度， 1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸脱氢 酶催化下，使NADH+H+变成NAD+， 光密度下降0.001为一个转氨酶活性 单位。
临床意种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
23--丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测项目的测量不确定度评定报告
丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测项目的测量不确定度评定报告1 目的以中国合格评定国家认可委员会（CNAS）提供的《测量不确定度要求的实施指南》为基础，根据ISO 15189：2007上海兰卫程序文件《测量不确定度评定程序》，对本实验室丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测项目的测量不确定度进行评估。
2 职责2.1技术负责人负责检验项目的测量不确定度的批准，质量负责人负责测量不确定度的指导及审核。
2.2组长负责组织本组工作人员一起进行测量不确定度的实验。
2.3 组长负责将项目测量不确定度的原始数据分析整理，如符合要求，形成报告。
3 材料和方法3.1仪器 ROCHE MODULAR P8003.2 试剂丙氨酸氨基转移酶（ALT），生产厂家瑞士ROCHE公司，R1试剂批号635177，R2试剂批号635177；病理值质控品PPU（批号:154120）；定标品ROCHEc.a.f.s（批号:159109）3.3 建立实验方法结合实验室自身条件，根据程序文件《测量不确定度评定程序》。
采用测量不确定度计算的第二种方式即：U=(批内变异的平方+批间变异的平方+系统的不确定度的平方+其它原因的不确定度的平方)的平方根；以及扩展不确定度的计算(对于95%的置信水平，k=2) ：U=(批内变异的平方+批间变异的平方+系统的不确定度的平方+其它原因的不确定度的平方)的平方根×2，评估丙氨酸氨基转移酶（ALT）测量不确定度。
3.4 识别并量化不确定度来源A 类标准不确定度：用统计方法评定出的不确定度，其评价方法称为A 类评定。
B 类标准不确定度：用非统计方法评定出的不确定度，其评价方法称为B 评定。
不确定度来源一般包括取样、储存条件、仪器的影响、试剂的影响、化学反应定量关系、测量条件、样本基质的影响、计算影响、空白修正、操作人员的影响、随机影响等。
就我室具体情况而定，取样、储存条件的不确定度不发生在实验室内，故暂不做考虑；批内变异、批间变异为A 类不确定度评估；连续测量ROCHE 病理值质控品（PPU ）20次，对于病理值质控品（PPU ）给定靶值作比较，计算百分差值（dri%），公式一所示：％靶值实验室结果－靶值％）＝百分差值（100d ri 及百分差值均值（drn%）百分差值标准差（SD ）从而计算出CV 偏移,公式二所示：百分差值（百分差值均值）＋）％（偏移＝22SD 2d CV rn ，将CV 偏移做为仪器的影响、试剂的影响、化学反应定量关系、测量条件、计算影响、空白修正、操作人员的影响、随机影响等归为测定期间仪器灵敏度的变化（漂移）也归为A 类不确定度评估；本室采用的ROCHE测量不确定度评定流程图病理值质控品（PPU ）为血清基质，制造商在对质控品赋值时已经考虑了基质效应问题，因此不再考虑此物质的不确定度。
丙谷转氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解丙谷转氨酶（ALT）在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。
2. 掌握丙谷转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据的分析能力。
二、实验原理丙谷转氨酶（ALT）是一种催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间氨基转移的酶。
在生物体内，ALT参与氨基酸的合成与分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程。
ALT在肝细胞内活性较高，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
因此，血清ALT活性测定在临床诊断中具有重要意义。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，通过监测ALT催化反应过程中NADH的生成量来计算ALT活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清、ALT标准品、丙氨酸、α-酮戊二酸、NADH、2,4-二硝基苯肼、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、蒸馏水等。
2. 仪器：分光光度计、移液器、恒温水浴锅、试管等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制：将不同浓度的ALT标准品分别加入反应体系中，在特定波长下测定吸光度，以ALT浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 样品测定：将血清样品加入反应体系中，在特定波长下测定吸光度，从标准曲线上查得ALT浓度。
3. 结果计算：根据样品中ALT浓度，计算ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，得出线性方程。
2. 样品测定：将血清样品加入反应体系中，测定吸光度，从标准曲线上查得ALT浓度。
3. 结果计算：根据样品中ALT浓度，计算ALT活力。
六、讨论1. 本实验采用连续监测法测定ALT活力，该方法灵敏度高、准确度高，适用于临床检测。
2. 实验结果表明，ALT活力在正常范围内，说明肝功能正常。
3. 通过本实验，掌握了ALT活力测定的原理和方法，提高了实验操作技能。
七、结论1. 丙谷转氨酶（ALT）在生物体内具有重要的代谢作用，其活性测定在临床诊断中具有重要意义。
2. 本实验采用连续监测法测定ALT活力，结果准确可靠。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本：血清
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标准曲线的绘制（改良赖氏法）
❖ 取干净试管5支标明管号，按下表所示操作。
加入物（ml）
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
二硝基苯肼溶液，氢氧化钠溶液（0.4mol/ L），丙酮酸标准液
（2.0mmol/L ）
连续监测法用试剂盒。
试剂1：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，NADH（0.2mmol/L）， LDH （＞1350U/L）；
试剂2：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，α-酮戊二酸 （50mmol/L），L-丙氨酸（400mmol/L）。
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致，不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼均为呈色物
质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015，如超出次范围，应检查试剂及
仪器等方面的问题。
6、当血清标本酶活力超过150卡门氏单连续监测法）
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+NADH
ALT 丙酮酸+L-谷氨酸
LD L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。
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主要试剂、材料与仪器
改良赖氏法试剂：0.1mol/ L磷酸盐缓冲液、基质缓冲液、2,4-
实验六 血清ALT活性测定1
4．加入2,4-二硝基苯肼溶液后需充分 ．加入 二硝基苯肼溶液后需充分 振荡混匀，否则会影响重复性； 振荡混匀，否则会影响重复性；加氢氧化 钠溶液方法要一致 方法要一致， 钠溶液方法要一致，不同方法也会导致吸 光度读数的差异。 光度读数的差异。 5．基质缓冲液和 2,4-二硝基苯肼溶液 ． 二硝基苯肼溶液 配制必须准确， 配制必须准确，每次测定时空白管吸光度 上下波动不应超过0.015，如超出此范围应 上下波动不应超过 ， 检查试剂及仪器等方面的问题。 检查试剂及仪器等方面的问题。
二、ALT催化的化学反应: ALT催化的化学反应 催化的化学反应:
反应式
大多数氨基酸可参与转氨基作用， 大多数氨基酸可参与转氨基作用，但赖 氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。 氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。
丙氨酸 +α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸 + 谷氨酸
三、ALT的分布: ALT的分布 的分布:
主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等， 主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等，血 清中的含量很低。 清中的含量很低。 病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。 ALT含量升高 病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。
2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃ 20min； 各管加 2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃水浴 20min； NaOH溶液 溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min 10min。 各管加 0.4 mol/L NaOH溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min。
波长505 nm处比色 处比色， 蒸馏水调零点 读取各管吸光度； 调零点， 波长50； 各管读数均减去0号管吸光度 吸光度， 各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性 单位作图即成标准曲线。 单位作图即成标准曲线。
AU-5831生化分析性能验证报告
性能验证报告单位名称：AAAAA医院科室名称：检验科实验室：生化组仪器名称：贝克曼库尔特全自动生化分析仪型号规格：AU-5831仪器编号：SH027验证人员：审核人：批准人：验证日期：2012年11月26日—2012年12月12日AAAAA医院检验科性能验证报告目录碱性磷酸酶（ALP）方法学验证 (2)丙氨酸氨基转移酶（ALT）方法学验证 (9)载脂蛋白A1(apo AⅠ)方法学验证 (16)载脂蛋白B（apoB）方法学验证 (24)天冬氨酸氨基转移酶（AST）方法学验证 (31)总胆固醇（TC）方法学验证 (38)肌酸激酶（CK）方法学验证 (45)γ-谷氨酰基转移酶（GGT）方法学验证 (52)乳酸脱氢酶（LDH）方法学验证 (59)总胆红素（T-Bil）方法学验证 (66)甘油三酯（TG）方法学验证 (73)尿酸（UA）方法学验证 (80)白蛋白（Alb）方法学验证 (87)尿素（Urea）方法学验证 (96)肌酐（Cr）方法学验证 (105)葡萄糖（Glu）方法学验证 (114)总蛋白(TP)方法学验证 (123)碱性磷酸酶（ALP）方法学验证一．检测系统信息：项目：碱性磷酸酶(ALP)仪器名称：贝克曼库尔特全自动生化分析仪仪器型号: AU5831试剂及厂商：北京中生北控生物科技股份有限公司检测方法：速率法二．验证的相关参数：需验证参数厂商参数验证结果分析灵敏度(lower detectionlimit) 浓度为230U/L的ALP所引起的吸光度变化率（△A/min）应在0.020-0.090的范围内沿用厂商参数分析测量范围（AMR）1-1200U/L 已验证临床报告范围（CRR）1-16800U/L 根据厂家相关参数换算而来参考值区间(Expected values) 26-150U/L 已验证最大允许误差。
三．验证过程：1．精密度（Precision）：1．1 批内精密度：●目的：考察方法的随机误差●标本来源：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，正常水平标本来源条码号：12061910922，12112810099，12112810107，12112810053 。
实验1 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶
实验1 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶【实验目的】掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的原理和校准曲线的绘制。
熟悉丙氨酸氨基转移酶测定的临床应用。
了解固定时间法测定酶活性的特点与应用。
【原理】丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ，EC 2·6·1·2）催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸间的氨基移换反应，生成α-丙酮酸和L-谷氨酸。
经30min 反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的两种α-酮酸生成相应的2,4-二硝基苯腙（丙酮酸苯腙和α-酮戊二酸苯腙）。
在碱性条件下，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500nm~520nm 处差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍。
据此可以计算出丙酮酸的生成量。
谷氨酸丙酮酸酮戊二酸丙氨酸-+-−−→−-+-L L ALT αα二硝基苯腙，二硝基苯肼，酮酸碱性条件-−−−→−-+-4242α（红棕色，λ=505nm ）【试剂与器材】1．0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液 称取KH 2PO 4 13.61g ，溶解于蒸馏水中，加水至1 000ml ，4℃保存。
2．0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 称取Na 2HPO 414.22g ，溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml ，4℃保存。
3．0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 取0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液420ml 和0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液80ml ，混匀，即为pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
4．基质缓冲液（200mmol/L 丙氨酸/2.0mmol/L α-酮戊二酸） 精确称取DL-丙氨酸1.79g ，α-酮戊二酸29.2mg ，溶于0.1mol/L 磷酸盐缓冲液约50ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100ml ，4℃～6℃保存，该溶液可稳定2周。
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丙氨酸氨基转移酶（ALT）性能验证报告
二. 检测系统信息
三．验证内容
1．精密度
1.1 重复性精密度
1.1.1目的：验证所选方法的最佳精密度是否与检测系统声明要求所一致。
1.1.2方法：选择2个不同浓度水平的高低值标本（至少包含1各医学决定水平浓度，近可能接近声明试验的浓度），在单个分析批内按规定的操作方法在不失控的前提下各做20次重复测定。
计算均值（X）、标准差（S）、变异系数（CV%）。
1.1.3样本来源：新鲜混合血清。
1.1.4验证结果：见表1
1.1.5验证结论：CV%小于5.0，重复性精密度满足临床应用要求。
1.2中间精密度
1.2.1目的：验证所选方法的随机误差是否与检测系统声明要求所一致。
1.2.2方法：选择室内质控作为测量中间精密度的样本。
分20日，1日2个批次，每1批次2个浓度样本各重复测定2次；个别项目亦可分5日，1日2个批次，每1批次2个浓度样本各重复测定8次，在不失控的前提下利用每个浓度获得的40个数据计算均值（X）、实验室标准差（S）、实验室变异系数（CV%）。
1.2.5验证结论：CV%小于6.7，中间精密度满足临床应用要求。
2．正确度
2.1目的：通过检测数据与赋值材料数据的对比，得到实验室检测数据的偏倚，从而验证试验结果的正确性。
2.2方法：参加卫生部或上海市临床检验中心组织的室间质评，或者分析已赋值的参考材料，或检测结果与同行间的比较。
本实验室以参加室间质评的项目已回报结果作为评价指标。
与通过15189使用相同系统的实验室进行结果比对。
2.3数据来源：最近一次（2016年9月）参加的上海市临检中心的室间质评评估活动，判定标准为80%结果偏倚≤1/2Tea即比对试验正确度符合要求。
2.4验证结果：见表3
2.5验证结论：结果符合率为100%，正确度满足临床应用要求。
3．线性范围
3.1目的：在确定某项目检测上限的同时验证其声明检测上下限是否成线性关系，从而保证该浓度范围内检测结果的准确。
3.2方法：选取厂家声明线性范围内的高、中、低值3份临床标本，按4L、3L+H、2L+2H、1L+3H、4H的原则配制5个浓度样本，各检测2次。
对结果做线性回归分析，计算回归方程y=bx+a，以R2 0.95或r>0.975作为判断标准。
3.3样本来源：混合血清
3.4线性验证结果：见表4
表4
3.5验证结论：声明线性范围符合临床检测技术要求。
4．临床可报告范围：
4.1目的：分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数。
从而确保线性范围外样本报告
的准确性。
4.2方法：选取接近线性范围上1/3区域的高值样本（必要时可使用高值质控样本代替），用适当稀释液对样本进行一定倍数稀释。
每个稀释样本重复测定2次，计算稀释后实测浓度与理论浓度的相对偏差。
以测定浓度与理论浓度的偏差（%）小于20%的最大稀释倍数作为可稀释最大倍数，方法线性范围的上限与可稀释最大倍数的乘积为该方法可报告范围的高限。
4.3样本来源：临床检测标本或质控样本
4.4检测结果：见表5
表5
5．生物参考区间
5.1目的：验证本项目声明生物参考区间是否适应本室实际临床检测标本。
5.2方法：收集20例健康人血清标本及时检测，要求其年龄、性别等均匀分布。
对参考范围进行验证，只允许2例超过所验证的声明参考范围，否则建立适用本实验室的参考范围。
5.3验证结果：见表6、7
5.4验证结论：声明生物参考区间适用于本实验室临床检测需求。