探究酵母菌种群数量变化(必修)

♣ 酵母菌的计数 （3）计数的操作 显微计数：静止5分钟后，先用低倍镜(16×10)找到 计数室所在的位置。然后根据血球计数板 规格，每个计数室选取5个(或4个)中方格 中的菌体进行计数。每个小方格内约有510个菌体为宜。对于压在小方格界线上的 酵母菌应取相邻两边及顶角计数。
♣ 酵母菌的计数 （4）血球计数板的清洗：
♣ 酵母菌的计数 （3）计数的操作
• 稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓， 可不必稀释。 • 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。 • 加样品：在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无 菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴 入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝 隙自行渗入计数室。注意不可有气泡产生。
酵母细胞个数/mL= 所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数 所数的小方格数
例1:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球 计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小 方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个 小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 稀释 后 再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格 中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母 菌总数有 2×108 个。
试管 编号
A
培养液 /mL
10
无菌水 /mL
—
酵母菌母液 /mL
0.1
温度 （℃）
28
B
C
10
—
—
10
0.1
0.1
5
28
时间 次数 第1次 1 2 3 4 5 6 7
第2次
第3次 平均
第3天
第1天
第7天
死亡
第6天
♣ 结果分析 （2）构建数学模型：
酵母菌种群个体数量变化
酵母菌数量／万个〃mL-1
1200 1000 800 600 400 200 0 1 2 3 4 时间／d 5 6 7
实验再探究
♣ 温度、营养物质影响酵母菌的生长吗？某同学按下 表完成了有关实验。
放大后的计数池
16个小格
25个中格
*
25X16 = 400小格
抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100个小格
*
*
*
*
16X25 = 400小格
* *
25个小格
* *
16个中格
每个计数室（大方格）共有400小格，总容积为0.1mm3
♣ 酵母菌的计数 （2）计算： 每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？
例2 检测员将1mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法
检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用 吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸 吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小 格组成，容纳液体的总体积为0．1mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格 内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 5n×105 个／mL。
♣ 讨论：
计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养：
♠培养液配制
无菌 操作 ♠灭菌 ♠接种 ♠培养\定时计数
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡 萄糖20g，1000 mL水），分装到5个 烧杯中（200mL/烧杯） 用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计 数时所用滴管分别灭菌，贴标签。 接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母 液，往每个烧杯中加入。（注意：滴加 量不要太多，避免初始菌数过多。）
♣ 酵母菌的计数 （1）计数工具——血球计数板
实物图 ∆ 血球计数板是一种专门用 于计算较大单细胞微生物 的一种仪器。 ∆ 计数时，常采用样方法。
正面图 侧面图
计数室 滴液处
♣ 酵母菌的计数 （1）计数工具——血球计数板
•每块计数板由H形凹槽分为2个 同样的计数池。 •每个计数池分为9个大方格。
探究:培养液中酵母菌种群数量的动态变化
提出问题
作出假设
设计实验
完成实验
分析结果，得出结论
该探究活动中涉及4个科学方法： （1）数学模型法； （2）抽样检测法； （3）显微观察法； （4）微生物培养法。
关注本实验中的几个关键点：
♣ 酵母菌的计数 ►利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用 的微生物计数法，也叫做显微镜直接计数法。 ►优点：直观、快速。 ►适用于稀释的菌悬液（或孢子悬液），即液体培养 基中菌体的计数。 ►此法计得的是活菌体和死菌体的总和，又称为总菌 计数法。
将烧杯置于28℃的恒温箱中培养、每天相同时间点取样计数(抽样检测)
♣ 结果分析 （1）数据记录
以汤麦式血球计数板的数据记录为例。下表为某一次的 数据记录表，其中，A表示五个中方格的总菌数；B表示 菌液稀释倍数：
各中格的总菌数 A B 二室平 菌数 均数 /ml
1
第一室 第二室
2
3
4
5
♣ 结果分析 （1）数据记录 下表为一周的数据记录表：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用 硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每 个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须 重复洗涤至干净为止。
♣ 注意事项：
• 进行计数前，应先将试管摇匀，目的是使酵母菌在培养液中混 合均匀，以减少计数误差。 • 显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应取相邻两 边及顶角计数。 • 若一个小方格内酵母菌数量过多，难以数清时，则可将培养液 稀释一定倍数后再计数。 • 本实验无对照实验，酵母菌每天的数量变化可形成前后对照。 • 血球计数板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和冲洗的方 法清洗。