超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别
鱼腥草黄酮的提取及对羟自由基的清除能力
（ 上接 第 ５ ８页） ２
参考 文献 ：
［］ １ 中国科学院 中国植物志编辑委员会 ． 中国植物 志 ： 第七十七卷第
一
分册 ［ ． Ｍ］ 北京 ： 出版社 ， ９ ： ８ 科学 １ ９７ ． ９ ６
［］ ２ 江苏新医学 院．中药大词 典 ： 上册 ［ ．上海 ： Ｍ］ 上海科学 技术 出
摘要 ： 采用超声波辅 助法萃取鱼腥草黄酮 ， 对工艺进行优化 ， 并 以期 获得最 佳 的提 取方法 ， 同时对其抗 氧化特性 进行 了研究 。结果表 明， 鱼腥 草黄酮超声波辅助法提取 的最佳工 艺是液 料 比４ Ｌ： ， ５ｍ １ｇ 乙醇浓度 ６ ％ ， ０ 超声 ３ ｉ， ５ｒ ｎ ａ 温度为 ３ ５℃ ， 时鱼腥 草黄酮提取量为 １ ． １ｍ ／ 。鱼腥草黄酮对羟 自由基 有一 定的清除作用。 此 １９ ｇ ｇ 关键词 ： 黄酮 ； 提取 ；羟 自由基
收稿 日 ：０ １ Ｏ — ６ 期 ２１ 一 １ ２ 作者简介 ： 周桃英 （９ １ ） 女 ， 北黄 冈人 ， １７ 一 ， 湖 副教 授， 事新 型食品 从
开发研究工作 。Ｔ ｌ （ ７３） ３ ５ ６ ｅ： ｏ １ ８ ４ ２５；Ｅ—ｍａ ：ｈｕａｙｎ ＠１ ３ ｉ ｚｏｔｏｉｇ ６ ． ｌ
供试 试剂 有芸香苷 （ 中国药 品生物制品检定所生产 ） 乙 ，
醇 、 ａ Ｏ 、 １ Ｎ ， ３ Ｎ Ｏ Ｆ Ｓ ４ 水 杨酸 、 ２ ：等 （ Ｎ Ｎ ：Ａ （ Ｏ ） 、 ａ Ｈ、 ｅ ０ 、 Ｈ０ 均为 市售分析纯） 。供试仪器有 Ｋ ５０ Ｂ型超声波清洗器 （ Ｑ ２０ 昆山 超声仪器 有限公 司生 产 ） ｕ ， Ｖ一１０ ６ Ａ紫外 可见 分光光 度计 （ ｔ 岛津公司生产） Ｒ ５ Ｃ Ｅ本 ， Ｅ ２ Ｓ旋转蒸发仪 （ 上海荣生仪器 厂 生产） Ｓ Ｂ一１循环水式 多用真空泵 （ ，Ｈ １ Ｉ 郑州 长城科工贸有 限
鱼腥草中总黄酮提取工艺考察
2006年2月 云南化工 F eb .2006 第33卷第1期 Y unnan Che m ical T echno logy V o.l 33,N o .1鱼腥草中总黄酮提取工艺考察戴伟锋,杨国荣,周 强,杨亚玲,李宝才(昆明理工大学生物与化学工程学院,云南昆明650224)收稿日期:2005-10-25作者简介:戴伟锋,男,27岁,昆明理工大学生物与化学工程学院讲师,硕士研究生,主要从事天然药物化学及药剂学研究。
摘 要: 研究了鱼腥草中总黄酮的不同提取方法。
并通过正交实验确定了最佳提取工艺条件:水提法,固液比1 40,提取时间45m i n,提取温度90 ,提取次数3次。
关键词: 鱼腥草;总黄酮;提取工艺中图分类号: TQ460 文献标识码: A 文章编号: 1004-275X (2006)01-0011-04Extracti o n of Total F l a vones fro m Houtt uynia cordat a ThunbDA IW ei K -feng,YANG Guo -rong ,ZHOU Q i ang ,YANG Y a -li ng ,LI Bao -ca i(S chool ofB i ol ogical and C he m ical Engi n eeri ng ,Kunm i ng U n i vers it y of Sci en ce and T echnol ogy ,Kunm i ng 650224,C h i na)Abstract : Differen t extraction m ethod of t otal fl avon es fro m H ou tt uyn i a cordat a w as i nvesti gated and opti m al cond-i ti on w as chosen by orthogonal experi m ent .Res u lt sho w ed t hat rati o of s oli d to li qu i d 1:40,extracted at 90oC for 40m in and repeated 3ti m es w as t he opti m al techn iqu e cond ition .K ey w ords :H outtuyn i a cordata ;t otal flavones ;extracti on p rocess黄酮类化合物广泛存在于天然产物中,大多具有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管疾病等生理活性[1]。
鱼腥草叶总黄酮含量的测定及鉴别
关键词 ： 鱼腥草叶 ； 黄酮 ； 分光光度 法； 鉴别
ＤＥＴＥＲＭ Ｉ ＮＡＴ１ ＡＮＤ ＤＥＮＴＩ ＣＡＴ１ ０Ｎ Ｉ ＦＩ ０ ＯＦ Ｆ 』 ＩＡＶＯＮ０Ｉ Ｌ ＤＳＩ ＥＡＶＥＳ ＯＦ ０ 了 ｙ／ ＣＯＲＤＡ Ａ Ｈ ＵＮＢ ’ ｖ Ｔ Ｔ
维普资讯
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食品研究与开 发
检 分 测析
鱼腥草叶总黄酮含量的测定及鉴别
叶春 ， 徐丽娟 ， 杨根勤， 阳从先
（ 贵州大学生命科学学 院， 贵州 贵 阳 ５０ ２ ） ５０ ５
来， 国内外对鱼腥草 的开发利用大 多用它制成注射 针
剂 ， 中 的主要成分 是鱼 腥草 素 ， 其 而对 黄酮 的研究 很
南部各省区 ， 目前在云南 、 贵州 、 四川等地栽培较多 闭 ， 资源极丰富 ［ 鱼腥草是传统的药食植物［ 现被 国家卫 ４ １ 。 ５ １ ， 生部正式确定 为“： 以芦 丁为标样 ， 选择 测定波长为 ５ ２１１用分光光度 法测定鱼腥草 叶总黄酮含量 ， ０ ２， １ １ 结果表 明 ： 芦丁浓度在
８１ ｇｍ 一 ８７ ｇ Ｌ范 围内， 光度 和浓度 呈 良好 的线性关 系（ ０９ ９８ ， ．２Ｉ ／ Ｌ ４ ． Ｉ ／ ｘ ２ｘ ｍ 吸 Ｒ＝ ． ）测定 的平均 回收 率为 ９ ． ９ ９ ４％， 密 精 度试验 Ｒ Ｄ ０４ Ｓ ：． ９％， 重现性试验 Ｒ Ｄ ２ ７ Ｓ ＝ ． ％。该方法精 密度 高， ０ 结果稳定可靠。 此外用纸色谱和显 色反 应对鱼腥草
Ａｂ ｔａｃ ： ｔｌｆａ ｏ ｏｄ ｏ ｔｎ ｎ ｔｅ ｌａ ｅ ｆＨｏ ｔｕ ｎａ ｃ ｒ ａａ Ｔｈ ｎ ．ｗａ ｅ ｅｍｉ ｅ ｙ Ｓ ｅ ｔ ｐ ｏ ｓｒ ｔ Ｔｏａ ｖ ｎ ｉ ｓｃ ｎ ｅ ｔｉ ｈ ｅ ｖ ｓｏ ｕ ｔｙ ｉ ｏｄ ｔ ｕ ｂ ｌ ｓｄ ｔｒ ｎ ｄ ｂ ｐ ｃｒ ｈ — ｏ
超声波辅助提取鱼腥草总黄酮的工艺研究
1
1∶5
60
15
40
2
1∶10
70
30
50
3
1∶15
80
45
60
2 结果与分析 2.1 因素试验结果 2.1.1 料液比对鱼腥草总黄酮提取的影响
根据图 1 可知，当料液比为 1∶5 至 1∶10 时，提取所获的总黄酮得率逐渐增大，当料液比为 1： 10 时总黄酮得率最大，随后慢慢降低，故正交试验设计中选取提取料液比为 1∶5 ~ 1∶15.
根据图 4 可知，当提取温度在 40℃ ~ 50℃时，提取所获的总黄酮得率逐渐增大，当提取温度 达 50℃时，这时总黄酮得率最大，50℃后总黄酮得率逐渐降低 . 故正交试验设计中选取提取时间 为 40℃ ~ 60℃.
图 4 提取温度不同对总黄酮提取的影响 2.2验结果的基础上设计正交试验方案，选取各因素中鱼腥草总黄酮得率较高 3 个 水平进行正交试验，正交实验结果见表 2.
根据图 3 可知，当超声提取时间为 15 ~ 30 min 时，提取所获的总黄酮得率逐渐增大，当超声 提取时间达 30 ~ 45 min 时，总黄酮得率没有变化，这时得率最大，45 min 后总黄酮得率逐渐降低，
·31·
故正交试验设计中选取提取时间为 15 ~ 45 min.
图 3 提取时间不同对总黄酮提取的影响 2.1.4 提取温度对鱼腥草总黄酮提取的影响
C 提取时间/min 1（15） 2（30） 3（45） 3 1 2 2 3 1 2.010 1.990 2.130 0.140
D 提取温度/℃ 1（40） 2（50） 3（60） 2 3 1 3 1 2 2.010 2.057 2.063 0.053
总黄酮得率/% 1.87 1.92 2.03 2.13 2.24 2.13 2.12 2.03 1.92
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。
鱼腥草总黄酮的提取工艺研究
２０ ０７年 ６月第 ９卷第 ２期
Ｊｎ ． ０ ７，Ｖｏ． ｕ ｅ２０ １９， Ｎｏ ２ ．
Ｊ ｕ ａ ｆＨｕ ｅ ｏｌｇ ｆ ＣＭ ｏ ｒｌ ｏ ｂ ｉ ｌ ｅｏ Ｔ ｎ Ｃ ｅ
湖北 中医学院学报
・２ ・ ９
鱼腥 草总黄酮 的提取 工艺研 究
ｎ ｈ ｏ ｔ ｎ ｖ ｎ ｉ ｓａｅ ｄ ｔｃｅ ａ ｄ ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｆ ａ ｏ ｏｄ ｒ ｅｅ ｔ ． Ｒｅ ｕｔ ：Ｔ ｅ ｕｔ ｓ ｎ ｃｅ ｔ ｃｉ ｇ ｍ ｔ ｏ ｘ ｒ ｃ ｔｅ ｆ ｖ ｎ ｉｓｆｏ Ｈ ｕ ｔｙ ｉ ｏ － ｏｆ ｌ ｄ ｓ ｓ ｈ ｒ ｏ ｉ ｘｒ ｔ ｅ ｄ ｔ ｅ ｔａ ｔ ｈ ａ ｏ ｏｄ ｍ ｏ ｔ ｎ ａＣ ｒ ｌ ｌ ａ ａ ｎ ｈ ｏ ｌ ｒ ｕ
但同时也是厚朴 的主要毒性成分幢。ｊ 。本研究结果表明，树龄增
长 ，生物碱含量下降 ，“ 发汗”又使之进一步降低 。从生物碱 的
Ｋ ｙ ｗｏ ｄ ：Ｆ ａ ｏ ｎ ｉ ｓ ｅ ｒ ｓ ｌｖ ｕ ｏ ｄ ，Ｈｏ ｔ ｙ ｉ ｏ ｄ ｔ ｈ ｎ ｕ ｔ ｎ ａ Ｃ ｒ ａａ Ｔ ｕ ｂ，Ｅ ｔ ｃｉ ｇ ｔ ｈ ｉｕ ，Ｕ ｔ ｏ ｉ ｘ ａ ｔ ｇ ｕ ｘ ａ ｔ ｃ ｎｑ ｅ ｌ ａ ｎ ｃ ｅ ｔ ｃｉ ｒ ｎ ｅ ｒ ｓ ｒ ｎ
ｆ ｍ ｏ ｔ ｙ ｉ ｒ ａａ Ｔｈ ｎ ｒ Ｏ Ｈ ｕｔ ｎａ Ｃｏ ｄ ｔ ｕ ｂ ｕ
ＱｎｈａＣ ｅ ， ｕ ｙ ｇ ｉ ｉｇ ｈｎ Ｙ ｎｉ ｎ ｎＬ
（ ｈ ｉ ｏｙＤ ｐｒ ｅｔ ｆ ｈｏｉｇＣ ｌｇ ， ｈｏｉｇ Ｇ ａｇｏｇ ５６ ６ ） Ｔ ｅＢｏ ｇ ｅａｔ ｎ ａｑｎ ｏ ｅｅ Ｚ ａｑｎ ， ｕｎｄｎ ， ２０ １ ｌ ｍ ｏＺ ｌ
黄酮提取方法 (2)
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、2、1 微波提取法微波提取就是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点就是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。
2、2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,就是目前比较新的方法。
原理就是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。
2、3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术就是利用超临界流体处于临界温度与临界压力以上,兼有气体与液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度与溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度与选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大规模的生产。
鱼腥草总黄酮超声-微波辅助提取及其抗氧化活性
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ
鱼 腥 草 总 黄 酮 超 声 ．微 波 辅 助 提 取 及 其 抗 氧化 活 性
展 俊 岭 ，皇甫 阳鑫 ，高子 怡 ， 赵 二劳
忻州师范学院化学系 ，山西忻州 ０３４０００
Ｄ ｏｌ １０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１０００．２５６１．２０１８．１０．０２６
鱼腥 草 （Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂ）又 名 侧 耳 根 、蕺 菜 等 ，为蕺 菜 属 多 年 生 草 本 植 物 ，始 载 于 《名 医别录 》，是我 国传统 中药之一 【卜 。鱼腥
收 稿 日期 ２０１８－０３．１８；修 回 日期 创 新创 业训 练 计 划 项 目 （Ｎｏ．２０１８１０１２４００１）； 山西 省 高 等 学 校 大 学 生创 新创 业训 练计 划 项 目 （Ｎｏ
２００ 彤 ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ５０ ｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍ ｅ ４０ ｍ ｉｎ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ｐｏｗ ｅｒ ２６０ ａｎｄ ｍ ｉｃｒｏｗ ａｖｅ ｔｉｍｅ ４０ Ｓ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆ ｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗ ａｓ ５．６５％ ｗｈｉｃｈ ｗ ａｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍ ｏｄｅ１ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ．ｍ ｉｃｒｏｗａｖｅ．ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ／－／． ｒｂａ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｆ Ｈ Ｐｒｂａ ｈａｄ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｏｓｅ．ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ＤＰＰＨ ·ａｎｄ ·ＯＨ．ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｗ ｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＢＨＴ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍ ｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｆ ｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈ ．Ｈ ｅｒｂａ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｋ ｅｙｗ ｏｒｄｓ Ｈ０ｕｔｔｕｙｎｉａｅ Ｈｅｒｂａ； ｔｏｔａｌ ｆ ｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ．ｍ ｉｃｒｏｗａｖｅ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄ； ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
微波辅助提取鱼腥草叶总黄酮的工艺研究
微波辅助提取鱼腥草叶总黄酮的工艺研究近年来，鱼腥草叶总黄酮作为一种天然的药用成分备受关注。
然而，传统的提取方法存在着一些问题，如提取效率低、操作繁琐等。
因此，本研究旨在探究一种新的提取方法——微波辅助提取法，以提高鱼腥草叶总黄酮的提取效率。
实验材料与方法1. 实验材料鱼腥草叶，乙醇，乙酸，水2. 实验方法2.1 预处理将鱼腥草叶晒干，研磨成粉末，筛选出粒径在40目以下的颗粒。
2.2 提取将预处理后的鱼腥草叶粉末加入微波提取仪中，加入适量的乙醇、乙酸和水混合液，进行微波辅助提取。
提取条件为：微波功率500W，提取时间10min，提取温度60℃。
2.3 纯化将提取液过滤，去除杂质，然后使用旋转蒸发仪蒸发至干燥，得到鱼腥草叶总黄酮。
2.4 检测使用高效液相色谱仪检测鱼腥草叶总黄酮的含量。
结果与分析实验结果表明，微波辅助提取法在提取鱼腥草叶总黄酮方面具有较高的效率。
在本实验中，提取温度为60℃时，提取效率最高，为17.8%。
而在传统的超声波提取法中，提取效率仅为9.6%。
因此，微波辅助提取法比传统的超声波提取法更为有效。
此外，本实验还研究了微波功率、提取时间等因素对提取效率的影响。
实验结果表明，微波功率对提取效率的影响较小，但提取时间对提取效率具有较大的影响。
在本实验中，提取时间为10min时，提取效率最高，为17.8%。
结论本实验研究了微波辅助提取法对鱼腥草叶总黄酮的提取效率的影响。
实验结果表明，微波辅助提取法比传统的超声波提取法更为有效。
此外，微波功率对提取效率的影响较小，但提取时间对提取效率具有较大的影响。
在本实验中，提取温度为60℃时，提取效率最高，为17.8%。
因此，微波辅助提取法可以作为一种新的提取方法，用于提高鱼腥草叶总黄酮的提取效率。
鱼腥草(论文)
超声提取鱼腥草总黄酮的检测研究07412 毕萌20072702摘要:目的:为充分利用鱼腥草植物资源，探讨鱼腥草总黄酮的提取及鉴别方法。
方法:采用超声波乙醇浸提法从鱼腥草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光度法测定含量。
结果:测样品中总黄酮的含量。
结论:最佳提取条件为乙醇浓度50%，超声时间35min，料液比1:20。
关键词:超声波提取；鱼腥草；总黄酮；检测The research of Total Flavanone from Houttuynia CordataThunb．by Ultrasonic WaveAbstract: 0bjective In order to make use of the resources of Houttuynia cordata Thunb．，theextraction identification of total flavanone of Houttuynia cordata Thunb．was pproached．Methods 11he flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Houttuyaia cordata Thunb．with ultrasonic wave and ethanol extraction ．Using speetrophotometry to extract and check the flava- none of Houttuynia corclata Thunb．．Results：we can get the content of the total flavanone of bhouttuynia cordata Thunb．．Conclusion: The best condition is extracted is alcohol thickness 50%, surpass sound time 35 mins , feed liquid to 1:20.Key words: Ultrasonic wave Extraction; ttouttuynia cordata Thunb．;Detection鱼腥草为三白草科蕺菜(Houttuynia Cordata Thunb)之全草。
鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定
鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定摘要:以乙醇为溶剂,采用索氏回流法提取鱼腥草全草中的黄酮｡优化了索氏回流法的提取温度､乙醇体积分数､提取时间､固液比等提取条件;索氏回流法的最佳提取条件为提取温度100℃､乙醇体积分数80%､提取时间 4 h､固液比1∶30(m/V,g∶mL,下同),在此条件下,黄酮提取率为12.59%｡采用硝酸铝比色法测定鱼腥草全草中的黄酮含量,结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 4);相对标准差RSD为0.21%,加样平均回收率为99.10%,表明该方法重复性良好,结果稳定可靠｡关键词:鱼腥草全草;黄酮;索氏提取法;紫外分光Content Determination of Flavonoid in Whole Plants of Houttuynia cordata Abstract:Taking the whole plant of Houttuynia cordata Thunb. as the raw material, ethanol as solvent extraction, Soxhlet extraction method was used to extract flavonoid. The elements such as extraction temperature, ethanol concentration, extraction time, solid-liquid ratio which affected the yield of flavonoid from whole plants of H. cordata were investigated by orthogonal experiment. Content of flavonoid was determined by Al(NO3)3 colorimetry.The results showed that absorption had good linear relationship with rutin concentration at the range of 48.75~377.31μg/mL(R2=0.999 4). RSD was 0.21%, indicating good repetitiveness. The average recovery rate was 99.10%, it showed that the method was stable and reliable. The optimal conditions were as follows: extraction temperature at 100℃,ethanol concentration of 80%, extraction time 3 h, solid-liquid ratio 1∶30. The yield was 12.59% under these conditions.Key words: Houttuynia cordata Thunb whole plant; flavonoids; soxhlet extraction method; spectrophotometry鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为三白草科一年生草本植物,始载于《名医别录》,自古以来供食药两用[1],现被国家卫生部正式确定为“既是食品,又是药品”,极具开发价值[2-4]｡紫赤色,易于种植,肥地能蔓生,多生长在湿地山谷阴处｡黄酮类化合物(Flavonoids)是经植物光合作用产生的一大类化合物[5,6],它广泛存在于药用植物､水果和蔬菜中,特别是高等植物的花､叶､根中较多[7]｡黄酮具有广泛的生理活性,如抗氧化､抗癌､防治心脑血管疾病､防治糖尿病､抗菌､抗病毒､抗过敏､祛痰､平喘､抑制消化道疾病､保肝等作用｡植物体内的黄酮的提取主要采用溶剂法､微波法､超声波提取法和超临界流体萃取法等｡科研工作者对黄酮的提取做了大量的工作[8-14]｡黄酮类化合物的提取主要采用热水浸提法,由于黄酮类化p1材料与方法1.1材料与试剂供试材料:鱼腥草全草(于2010年4月中旬采于湖南省永州市零陵区),自然风干备用｡供试试剂:芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);无水乙醇､硝酸铝､亚硝酸钠､氢氧化钠等均为国产分析纯｡1.2仪器UV-752紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司),AL104电子天平(Mettler Toledo仪器公司),DF-101S集热恒温磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司),索式提取器｡1.3鱼腥草中黄酮提取条件的优化取风干后的鱼腥草全草,切碎,放入去离子水中浸泡0.5 h,沸水中煮沸5 min,用清水漂洗数次,洗至沥液接近无色为止,沥干,置烘箱(70℃左右)中烘干,碾碎成粉末状｡准确称取4.0 g经预处理的鱼腥草全草,置于索式提取器的回流管中｡在磁力搅拌器下,以乙醇为溶剂,选择不同提取温度､提取时间､乙醇浓度和固液比为参试因子,以总黄酮的提取量为衡量指标,采用L9(34)正交试验设计表布置试验,以确定鱼腥草中黄酮最佳提取工艺,各因素水平如表1｡所得提取液经过滤,即得到黄酮浸提液｡抽滤,得到黄酮滤液及滤渣｡将滤渣注入到相同体积的､已预冷的甲醇溶液中,静置,得到甲醇-黄酮混合物｡将所得黄酮滤液和甲醇-黄酮混合物进行抽滤,打散滤饼,用95%乙醇溶液洗涤,再抽滤,再打散滤饼,最后用无水乙醇洗涤脱水,得到黄酮提取液｡1.4鱼腥草中黄酮含量的测定1.4.1溶液的制备标准品溶液:取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50 mg,精密称定,置于50 mL容量瓶中,加60%乙醇适量,水浴上微热,使溶解,放冷后用60%乙醇稀释至刻度,摇匀｡样品溶液:准确称取干燥鱼腥草叶粉末4 g,加入120 mL 80%的乙醇溶液,在100℃下回流提取3 h,冷却､过滤,共提取3次,合并滤液并定容至200 mL,得测定用样液｡1 mol/L NaOH溶液:准确称取4.000 0 g NaOH固体,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡NaNO2溶液(1∶20):准确称取5.000 0 g NaNO2,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡Al(NO3)3溶液(1∶10):准确称取10.000 0 g Al(NO3)3,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡1.4.2标准曲线的绘制吸取标准品溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0及5.0 mL,分别置于50 mL容量瓶中,各加60%乙醇使其成为5.0 mL｡加入NaNO2溶液(1∶20)0.5 mL,摇匀,放置6 min后;加Al(NO3)3溶液(1∶10)1.5 mL,摇匀,放置6 min;加1.0 mol/L NaOH试液4.0 mL,去离子水稀释至刻度,摇匀,放置15 min｡在510 nm波长下测定各溶液的吸光度｡以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线｡1.4.3样品稳定性试验制备样品溶液,吸取2.0 mL显色剂,比色溶液显色后,每隔5 min测定其吸光度,共测定2 h｡1.4.4重复性试验分别量取5.0 mL样品溶液5份,测定其吸光度,计算平均值,标准差及相对标准差｡1.4.5加样回收率试验准确吸取芦丁标准溶液0.10､0.15､0.20 mL各两份分别于6个25 mL容量瓶中,各加入1.00 mL稀释至一定浓度的测定用样品样液,测定其吸光度,通过标准曲线计算样品中黄酮含量,测定回收率｡1.4.6黄酮提取率的计算1)黄酮提取率计算公式为:黄酮提取率(%)=[C×V×10×10-6/m]×100式中,C——从标准曲线查得的黄酮浓度(μg/mL);V——提取的浓缩液体积(mL);m——样品质量(g);10-6——将μg/mL换算的系数｡2)黄酮含量计算公式为:黄酮含量=C×V×10×10-6式中,C——从标准曲线查得的黄酮浓度(μg/mL);V——提取的浓缩液体积(mL);10-6——将μg/mL换算的系数｡2结果与分析2.1正交试验结果由L9(34)正交试验结果(表2)可知,各单因素对于鱼腥草全草中黄酮提取率的影响次序为A>B>D>C,即提取温度>乙醇体积分数>固液比>提取时间｡因此在该试验条件下,以乙醇为溶剂采用索式回流的方法提取黄酮的最佳条件是:提取温度100℃,乙醇体积分数80%,提取时间4 h,固液比1∶30｡按此条件进行6次验证试验,黄酮的平均提取率为12.59%｡2.2黄酮含量测定方法的确定2.1.1标准曲线的绘制测定溶液的吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线｡结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为A=0.972 4C+0.011 1,R2=0.999 4(图1)｡2.1.2稳定性试验样品溶液在显色后15~45 min内,吸光度变化小于5%｡此后随着时间的延长,吸光度下降明显,说明该试验显色是稳定的,样品测定应在显色后15~45 min内完成｡2.1.3重复性试验重复性试验结果表明,该测定方法的相对标准差是0.21%,说明该方法的重复性良好｡2.1.4加样回收率试验准确吸取芦丁标准溶液0.10､0.15､0.20 mL各两份分别于6个25 mL容量瓶中, 各加入1.00 mL稀释至一定浓度的测定用样液,测定回收率｡结果见表3｡从结果中得出加样平均回收率为99.10%｡表明该试验方法测定结果稳定可靠｡3小结与讨论同传统提取方法相比,索式回流方法是利用溶剂的回流和虹吸原理｡随着提取温度升高,回流不断的发生,这样大大地缩短了提取时间｡以乙醇为溶剂采用索式回流对液固物质中所需成分进行连续提取,溶剂能反复利用,这样就节约了大量的溶剂｡随着提取时间的缩短,溶剂也相应地减少,萃取出来的样品也相应地提高｡正交试验结果表明,以乙醇为溶剂采用索式回流提取黄酮的最佳工艺条件为:提取温度为100℃,乙醇体积分数为80%,提取时间为4 h,固液比为1∶30｡上述条件下所得黄酮平均提取率为12.59%｡药用植物中黄酮的定量检测常用高效液相色谱法和分光光度法｡对于黄酮单体的定量检测常采用前者,而对于总黄酮的测定,考虑到方法的快速､简便和可行性等,多采用硝酸铝分光光度法｡该试验中,笔者参照相关文献[18]芦丁提取条件,采用硝酸铝比色法[19]在波长510 nm处测定样品溶液的吸光度｡结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 4);其相对标准差为0.21%,重复性良好;加样平均回收率为99.10%,表明该方法测定结果稳定可靠｡因此,该试验设定的技术参数和方法适用于鱼腥草全草中黄酮的定量分析｡黄酮含量的测定结果表明,鱼腥草全草中含有丰富的黄酮类化合物,且其资源丰富,药理作用广泛,有着良好的开发应用前景｡通过黄酮的提取率和黄酮含量的测定可知,改进的工艺优于常规工艺｡参考文献:[1] 廖德胜,王敬勉.鱼腥草黄酮的制备及其应用研究[J].中国食品添加剂,2002(2):81-83.[2] 吴佩颖,徐莲英,陶建生.鱼腥草的研究进展[J].上海中医药杂志,2006,40(3):62-64.[3] 魏秀俭,郭彦,时明芝,等.绿色食药明球——鱼腥草[J].中国食物与营养,2006(1):56-57.[4] 胡凤莲,倪细炉,刘文哲. 鱼腥草中总黄酮和槲皮素含量的动态变化[J]. 安徽农业科学,2008,36(10):4128-4130.[5] 陈业高.植物化学成分[M].北京:化学工业出版社,2004.[6] 张睿,徐雅琴,时阳.黄酮类化合物提取工艺研究[J].食品与机械,2003(1):21-28.[7] 刘玉芬,夏海涛,杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮含量[J].食品科学,2005,26(9):418-422.[8] 胡敏,张艳红,胡艳.银杏黄酮甙的水浸提方法研究[J].食品与发酵工业,1997,24(4):31-34.[9] 丁利君,吴振辉,蔡创海,等. 菊花中黄酮类物质提取方法的研究[J].食品工业科技,2002,23(2):20-22.[10] 王兰珍,马希汉,王妹清,等.元宝枫叶总黄酮提取方法研究[J].西北林学院学报,1997,12(4):64-67.[11] 范志刚,麦军利,杨莉斌,等.微波技术对雪莲中黄酮浸出量影响的研究[J].中国民族医药杂志,2000,6(1):43-44.[12] 何熹,韩宁. 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鱼腥草中总黄酮提取工艺的研究进展
0前言鱼腥草，原名蕺菜，又名折耳根、菹菜、紫背鱼腥草，在分类学上属双子叶植物三白操科草本植物。
茎呈扁圆柱形，扭曲，长20~30cm，直径0.2~0.3cm;表面呈棕黄色，具有纵棱数条，质脆，易折断。
叶互生，叶片卷折，皱缩展开后呈心形，下表面呈灰绿色或灰棕色；叶柄细长，搓碎有腥臭味，味微涩、辛，微寒，是一种很好的天然保健食品原料具有清热解毒，利尿消肿等功效。
鱼腥草中的有效成分[1]是其挥发性物质，主要成分是黄酮,大部分是以糖苷形式存在的苷类,主要是芦丁、槲皮甙、异槲皮苷、瑞诺苷、金丝桃甙等槲皮素和以槲皮素为甙元的黄酮类化合物。
药理研究表明黄酮类化合物具有抗肿瘤[2]，抗氧化[3]，抗抑郁[4]，抑制细菌[5]等药理作用，在食品、药品、保健品等领域有着广泛的应用。
随着近年来人们生活水平的不断提高，对食品、药品、保健品等的需求随之增加，对黄酮类化合物的研究受到越来越多的关注。
本文综述了鱼腥草中总黄酮提取工艺的研究进展，旨在为鱼腥草中总黄酮的开发提供理论依据。
1提取方法1.1溶剂提取法溶剂提取法是比较传统的提取法，在国内的鱼腥草中总黄酮提取过程中用的采用最多的为溶剂提取法。
由于渗透作用，溶剂又不断进入药王文权，张雨佳，刘毅，刘军海(陕西理工大学化学与环境科学学院，汉中723000)摘要：鱼腥草在我国分布广泛，总黄酮是其主要的活性成分。
综述了鱼腥草中总黄酮提取工艺的研究进展，讨论了各种提取工艺的优缺点以及目前的研究热点，重点探讨了各种提取工艺的今后的发展趋势。
通过比较一些提取方法的优缺点，目的在于为以后相关研究提供便利。
同时，简述了黄酮类化合物在饲料中的一些应用。
关键词：鱼腥草；总黄酮；提取方法；饲料添加剂中图分类号：S816.7文献标识码：A文章编号：1008-6137（2019）06-0005-04材组织细胞中，多次往返，直到细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，再加入新溶剂，可把有效成分溶出。
梵净山野生鱼腥草叶总黄酮含量的测定研究
3. 测定
用紫外可见分光光度计 在特定波长下测定滤液 的吸光度，根据标准曲 线计算总黄酮的含量。
4. 标准曲线绘 制
配置不同浓度的标准品 溶液，在相同条件下测 定吸光度，绘制吸光度 与浓度的标准曲线。
5. 数据记录与 分析
记录实验数据，包括各 样品的吸光度、浓度等 ，根据标准曲线计算总 黄酮含量，进行数据分 析。
梵净山野生鱼腥草叶作为鱼腥草的一种，其总黄 酮含量及活性成分的研究尚不完善。
研究目的与内容
目的：通过对梵净山野生鱼腥草叶总黄酮含量的测定， 探究其黄酮类化合物的种类和含量，为进一步开发利用 该植物资源提供科学依据。 采集梵净山野生鱼腥草叶样品
测定不同批次梵净山野生鱼腥草叶的总黄酮含量
研究内容 建立测定总黄酮含量的方法 分析总黄酮含量与生态环境、生长季节等因素的关系
提取条件的优化
通过单因素实验和正交实验，确定了最佳的提取条件为乙醇浓度 60%，超声波功率60W，提取时间30分钟。
提取率的计算
通过计算总黄酮的提取率，发现实验方法的提取效果良好，提取 率较高。
总黄酮含量的测定结果分析
含量测定的方法
实验采用了紫外可见分光光度法进行总黄酮含量的 测定。
标准曲线的绘制
《梵净山野生鱼腥草叶总黄 酮含量的测定研究》
2023-10-30
目 录
• 引言 • 文献综述 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 结论与展望 • 参考文献
01
引言
研究背景与意义
鱼腥草是一种常见的草药，广泛应用于中医临床 ，具有清热解毒、利尿消肿等功效。
鱼腥草中含有丰富的黄酮类化合物，具有抗氧化 、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
03
实验材料与方法
鱼腥草黄酮类成分最佳提取工艺实验
等。将超声波提取与传统水提法及乙获得较优的提取工艺， 为指导生产提供理论依据 。
1
1． 1
材料与仪器
材料 鱼腥草、 芦丁标准品 （ 上海融禾医药科技有限公司， 批
2
实验方法
用自来水洗去中药材鱼腥草中泥土等杂质， 再用蒸馏水
号： 110120 ） 、 无水乙醇（ 天津市恒兴化学试剂制造有限公司， 分析纯） 、 石油醚（ 天津市化学试剂三厂， 分析纯） 、 氢氧化钠 溶液（ 天津东丽区天大化学试剂厂， 分析纯） 、 硝酸铝溶液 （ 天津市恒兴化学试剂制造有限公司， 分析纯） 、 醋酸铅溶液 （ 天津市恒兴化学试剂制造有限公司， 分析纯） 、 氯化铁溶液 （ 天津市化学试剂三厂， 分析纯） 、 碳酸钠溶液（ 天津市化学 试剂三厂， 分析纯） 、 亚硝酸钠溶液（ 天津市恒兴化学试剂制 造有限公司， 分析纯） 、 蒸馏水等。 1． 2 仪器 3200S （ 常 州 市 天 之 平 仪 器 设 备 有 限 公 电子天 平 EL1 （ 北京中兴伟业仪器有限公司） 、 司） 、 万用电炉 DL分析天 超声波振荡提取器、 平（ 常州市天之平仪器设备有限公司） 、
2012 年 9 月 1 日 第 9 期 No． 9 1 Sep． 2012
中
医
学
报
第 27 卷 Vol． 27
总第 172 期 Serial No． 172
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
鱼腥草黄酮类成分最佳提取工艺实验研究
Empirical Study of the Best Extraction Technology for Flavonoid in Houttuynia Cordata 高天曙 Gao Tianshu1 ， 焦凡 Jiao Fan2 ， 姚静静 Yao Jingjing2 ， 李书纳 Li Shuna2
鱼腥草总黄酮的提取及其方法对比
功能产品的开发 ， 并取得 了可喜 的成绩 ． 黄酮类 化合 物具有 降血糖 、 降血脂 、 抗菌 消炎 、 抗氧化衰 老、 消除提 内 自由基 等药理作 用乜 ． 鱼腥 草 中黄 酮类化合 物 的 提取未见报道 ， 研究其总黄酮含量 ， 为进一 步开发利用鱼腥草资源提供 科学依据 ． 可
型医用超声波清洗机 （ 昆山超声仪器有限公司） Ｄ 、 Ｆ一１１ ０Ｂ集热恒 温磁力 搅拌器 （ 江乐清 市乐成 电器厂 ）Ｔ Ｚ 一ＷＳ 浙 、Ｄ ５ Ｄ多 管架 自动平衡离心机 （ 长沙湘仪离心机仪器有限公 司） 索式提取器 、 、 回流装置 等 ．
２ 实验 方 法
２ １黄酮类化合物的提取 ．
的黄酮 ， 结果表 明： 索式提 取法为鱼腥 草总黄 酮的最佳提取 方 法， 鱼腥 草不 同部 位的 总黄酮含 量 由高到低 依 次为叶、 全草、
茎、 ． 根
关键词 ： 鱼腥草 ； 黄酮 ； 提取 ； 同部位 不 中图分类号 ：９ ９３ Ｑ ３ Ｒ ６ ．； ５９ ． 文献标识码 ： Ｂ
溶液 １０ｍ ， ． Ｌ 混匀 ， 放置 ６ｍｎ加 ５ ｉ， ％的硝酸铝溶液 １０ｍ ， ． Ｌ 混匀 ， 放置 ６ｍｎ加 １ｍ ｌ ｉ， ｏ／ Ｌ的氢 氧化 钠溶液 １ Ｌ 再加水 至刻 ０ｍ ，
度， 摇匀 ， 放置 １ ｉ， ５ｍ ｎ用分光光度法在 ＝５ ０ｎ １ ｌ 测定 吸光度 ， 最小二 乘法作 线性 回归 ， ｎ处 用 可得芦 丁浓度 （ ） 吸光度 ｙ与 （ 的关系 曲线 的回归方程式 ． ）
１ 材 料 和 设 备
１１ 料 ．材
芦 丁对照 品（ 中国药检所提供） 乙醇 、 ． 硝酸铝 、 亚硝酸钠 、 氧化钠 等试剂均 为分析 纯 ． 氢 鱼腥草采 于怀化 市杨村鱼 腥草
梵净山野生鱼腥草叶总黄酮含量的测定
03
实验结果与分析
标准曲线的绘制
选取5个不同浓度（0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、 0.8mg/mL、1.6mg/mL）的标准品溶液，分别加入5mL的 亚硝酸钠溶液（5%）和10mL的硝酸铝溶液（1%），摇匀后 静置10分钟。再加入40mL的氢氧化钠溶液（4%），摇匀后 用分光光度计在510nm处测定吸光度。
标准曲线绘制
分别吸取芦丁标准品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0mL，加入1.0mL亚硝 酸钠溶液，摇匀后加入 1.0mL硝酸铝溶液和 1.0mL氢氧化钠溶液，摇 匀后静置10分钟，在波长 510nm处测定吸光度。以 吸光度为纵坐标，浓度为
总黄酮含量测定
吸取样品溶液1.0mL，按 照标准曲线绘制方法测定 吸光度，根据标准曲线计 算总黄酮含量。
梵净山野生鱼腥草叶
试剂
无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、双氧水、芦丁标准品
实验方法
01
样品处理
将鱼腥草叶清洗干净，烘 干后粉碎成粉末。
02
03
04
05
标准品溶液制备
精密称取芦丁标准品，加 入无水乙醇溶解，制备成 标准品溶液。
样品溶液制备
将鱼腥草叶粉末加入无水 乙醇，加热回流提取，过 滤后得到样品溶液。
以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到标准 曲线方程为：y=0.012x+0.002，R²=0.999。
样品溶液的制备
• 准确称取干燥的梵净山野生鱼腥草叶粉末0.5g，置于50mL的具塞三角瓶中，加入20mL的甲醇，超声提取30分钟，取出后过滤并收集滤液 。将滤渣用少量甲醇洗涤，再次过滤并收集滤液。合并两次滤液，并用甲醇定容至50mL。
THANK YOU
黄酮提取方法
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、2.1 微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。
2.2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
2.3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
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超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别作者：黄锁义，万承俊，邹永芳，李容【关键词】超声波提取；,,鱼腥草；,,总黄酮；,,鉴别摘要：目的为充分利用鱼腥草植物资源，探讨鱼腥草总黄酮的提取及鉴别方法。
方法采用超声波乙醇浸提法从鱼腥草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。
结果测得样品中总黄酮的含量C=6.48%，回收率为102.4%，其纯度和产率均较高。
结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取鱼腥草黄酮类物质的有效途径。
关键词：超声波提取；鱼腥草；总黄酮；鉴别The Extraction and Identification of Total Flavanone from Houttuynia Cordata Thunb. by Ultrasonic WaveAbstract：Objective In order to make use of the resources of Houttuynia cordata Thunb., the extraction identification of total flavanone of Houttuynia cordata Thunb.was approached.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Houttuynia cordata Thunb. with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Houttuynia cordata Thunb. .ResultsThe content of the total flavanone of houttuynia cordata Thunb. was C=6.48% and the rate of recovery was 102.4%.ConclusionThe outcome and the purity of the flavanone are all very high .Thismethod is a purely physical process, and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Houttuynia cordata Thunb..Key words：Ultrasonic wave Extraction; Houttuynia cordata Thunb.; Total flavanone; Identification鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)，又名蕺菜。
别名丑菜，侧耳根，猪鼻孔，臭根草。
列于《名医别录》下品，是味较常见的中草药，广泛分布于长江以南各省，是一种很好的天然保健食品原料［1，2］。
其味辛，性微寒，归肺经，其功能有清热解毒，消痈排脓，利尿通淋，用于肺痈吐脓，痰热喘咳［2］。
现代药理研究表明［3~6］：鱼腥草有抗病毒、抗菌、解热、抗炎镇痛、升白细胞等作用。
近年来鱼腥草有了新的用途,如:用来治疗喘息型肺炎、病毒性心肌炎、小儿呼吸感染等［7，8］。
鱼腥草的主要化学成分有癸酰乙醛（也叫鱼腥草素）、月桂醛、2十烷酮、甲基正壬基酮、癸醛、亚油酸及大量的黄酮类化合物［2~9］。
有文献报道鱼腥草中总黄酮的提取方法有乙醇提取法［2］。
但是，这种方法的提取效率仍然较低。
近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究都已有报道［10，11］，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。
很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［11］。
但超声技术应用于提取鱼腥草中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别。
1 仪器与试剂1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)。
1.2 试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品制品检定所）；广西百色市东风菜市市售新鲜鱼腥草。
2 方法与结果2.1 总黄酮成分提取取市售新鲜鱼腥草，烘干，粉碎。
精密称取鱼腥草粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至仅剩5~7 ml为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定鱼腥草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 定量实验总黄酮的含量测定2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.3 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.1 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测吸光度。
结果见表1。
表1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）根据上表得回归方程：A=2.141×104+14.377C，r=0.999 9。
2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml 容量瓶，按标准曲线的制备操作测定吸光度,A=0.910，根据回归方程：A=2.141×104+14.377C，计算样品中总黄酮的含量C=6.48%。
2.3.4 回收实验精密量取样品液2 ml，加入标准芦丁对照品2 ml（0.1 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为102.4% 。
2.4 定性实验总黄酮的鉴别2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。
在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
2.4.2 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。
用正丁醇:醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。
喷1%氯化铝乙醇溶液。
吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
3 讨论实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为102.4%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。
超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。
在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［12］。
天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［13~18］。
近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。
本文实验结果表明，鱼腥草中含有较为丰富的黄酮。
因此，鱼腥草具有广泛开发和利用价值。
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