β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明
β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-GA活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4216
β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法：UPLC-MS-4216：50T/24S试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2支2-8℃保存试剂二液体42mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂一：临用前取1支加1.6mL蒸馏水溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；2.标准品：10mg无水葡萄糖。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存2周。
β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
Fucoidanβ-1,3-GA Reducing SugarReducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒 (化学发光免疫分析法)产品技术要求金山川
1.1包装规格：12人份/盒1.2主要组成成分：校准曲线：二维码。
质控范围批特异，详见标签。
2.1外观试剂盒完整无破损，试剂盒内各组分齐全、无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别。
2.2装量试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示量。
2.3溯源性根据GB/T21415规定了校准曲线的溯源过程，溯源至企业工作校准品。
2.4准确度回收率应在80%～120%的范围内。
2.5检出限检出限应不高于40pg/mL。
2.6线性试剂盒在浓度为[50,50000]pg/mL的线性范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。
2.7重复性测定高、低两个浓度水平的样本，测定结果的变异系数CV（％）值应不大于10%。
2.8特异性与浓度分别为50ng/mL的曲霉菌半乳甘露聚糖、念珠菌甘露聚糖、革兰阴性菌脂多糖均无交叉反应，检测结果均应不超过检出限。
2.9批间差用3个不同批号的试剂盒分别检测两个浓度水平的样本，3个批次试剂盒之间的批间变异系数CV（％）应不大于15％。
2.10质控品赋值有效性重复测定试剂盒内质控品各3次，每次测定结果均应在质控品测定值允许的范围内。
2.11质控品批内瓶间差取同一批号10支质控冻干品进行检测，所有瓶内重复性检测结果的变异系数CV（%）值应不大于10%。
2.12稳定性2.12.1效期稳定性试剂盒按要求在2℃～8℃放置，有效期12个月，取效期末的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.4～2.8的要求。
2.12.2质控品复溶稳定性质控品溶解后置2℃～8℃保存14天后，取质控品进行检测，结果应符合2.10、2.11的要求。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。
本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。
为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。
如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。
售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。
指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。
30
小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。
1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复
杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
31
内毒素定量检测
13
侵袭性真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学
真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据）
CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
外
骨折
感染
内
肝脏疾病
休克
大手术术后
41
内毒素定量检测的临床意义
发热原因的快速辅助诊断（< 1小时）； 早期判断革兰阴性菌的感染情况； （Gˉ菌所致）脓毒症、MODS等重症疾患的早期诊断 帮助临床医生快速合理筛选适当的药物(抗生素)； 判断抗感染治疗效果及预后； 肠源性内毒素血症的预判及评估；
评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。
监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖
附1真菌（1-3)—β—D葡聚糖检测标准操作规程1.目的规范真菌(1—3）-β-D葡聚糖检测的操作规程,保证结果准确性。
2.原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1—3)—β—D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。
利用(1—3)—β—D葡聚糖标准品建立β-D—葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的（1—3）- β-D葡聚糖含量.3.试剂真菌（1-3）—β-D葡聚糖检测试剂盒,湛江安度斯生物有限公司。
试剂盒包装规格:20人份/盒。
复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。
若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用.不能反复冻融试剂溶液.4.检测设备: LKM动态试管检测仪。
5.实验用具：250 μl无热原吸头、20—200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂）.6.标本采集及送检要求6.1标本采集要求6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。
6.2标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。
若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
7.实验操作7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热,一段时间后发出哔的一声,试管仪温度达到37℃，待用;7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1~2 ml，以400 g离心10分钟；7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃试管恒温仪中加热10分钟；7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出,使其降至室温即可，即为1：10稀释的样品供试溶液；7.5取β—G试剂1支,开启；7.6取β-G试剂复溶液1支,开启后用移液器取0。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
注：＊原发性者可无宿主因素，△肺组织、胸液、血液真菌培养阳性（除外肺孢子菌）
15
（1,3） - β- D-葡聚糖检测
16
真菌细胞膜、壁结构
mannoproteins
β1,3 b1,6 葡聚糖 磷脂 双分 子层
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质 麦角固 醇
羊毛固醇C－14去甲基化酶 14位还原和7－8位异构酶 17 角鲨烯环氧化酶
30
小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。 1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复 杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
31
内毒素定量检测
23
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。 指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。 评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。 监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
危重病人的存活期延长
延长了真菌感染 的 高 危 期
使此类患者业已增加 的人数进一步扩大
严重真菌感染迅速上升势头
是日益严重的威胁！
5
真菌感染的危险因素：
微生物检验实验室G试验标准操作规程
微生物检验实验室G试验标准操作规程1．目的规范G试验标准操作规程。
1.操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
2.用途：4．原理真菌（1，3）-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝固酶原等，发生凝固蛋白原转变的级联反应从而引起吸光度的变化，根据检测气吸光度的变化从而对真菌（1，3）-β-D葡聚糖浓度进行定量，试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素机表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性脂多糖有特异性屏蔽作用。
5．样本要求5.1血清的制备：用一次性无热源真空采血管采静脉血4ml，进行3000rpm/min离心10-15min分得血清2小时内检测。
5.2血清保存：标本需冷藏于2-8℃下不超过24小时避免反复冻融。
产品如果需要运输，则应该冷藏运输。
5.3标本前处理：取上述血清0.1ml，加入0.9ml样品处理液中，混匀后70℃孵育10min，取出后立刻放入冷却槽中冷去5min，即为待测血清样品。
6．操作步骤：取待测血清0.2ml直接加入酶反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9*65mm标准无热源平底试管中，然后再加入0.1ml反应主剂溶液，混匀后，插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后检测系统自动计算出待测血清中真菌（1，3）-β-D葡聚糖含量。
注：每批试剂盒由厂家提供参考标准曲线。
定标使用真菌（1，3）-β-D 葡聚糖纯品，纯度>98%。
7.结果判断结果解释：参考值：正常血清真菌（1，3）-β-D葡聚糖值<60pg/ml。
60pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）：60-100pg/ml之间，为观察期，应连续检测。
100pg/ml以上，怀疑为深部真菌将感染，建议临床结症状治疗。
8.注意事项8.1、只能检测（1，3）-β-D葡聚糖含量，不能区分真菌种属，不能检测接合菌和隐球菌。
8.2、实验操作应在无菌无热源的环境下，避免微生物细菌污染8.3、无菌无热源的采血管（建议采用BD血清管），保证试验数据的准确。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
2、准备样品： 称取样品 10g(或 10ml)加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加人一定体积的蒸馏水稀释，静置 20min，200r/min 振荡 30min，然后四层纱布过滤，滤液 3000r/min 离心 10min，上清液加 入 50ml 容量瓶中，补水定容，即为纤维素酶提取液，用于样品 CES 活力的检测。如样品酶 活力较高，应稀释至合适浓度再次检测。
产品组成：
名称 纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法) 试剂(A):Glu 标准(1mg/ml) 试剂(B):CESAssaybuffer 试剂(C):CMCSolution 试剂(D):DNS 试剂 使用说明书 有效期
规格 100T 10ml 50ml 100ml 100ml
保存条件 4℃ 4℃ RT RT
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介： 纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，Cellulase 简称 CES)是降解纤维素生成葡萄糖的一 组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β -葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。在分解纤 维素时起生物催化作用，是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)检测原理是用羧甲基纤维素钠盐(CMC)作底物，经纤维素 酶水解后生成还原糖(葡萄糖)，还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸 (DNS)被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程 度呈正比，在 540nm 处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度，即可求得还原糖的含量， 进而求得纤维素酶活的大小。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
葡聚糖内-1,3-β-葡糖酶
葡聚糖内-1,3-β-葡糖酶葡聚糖是一种多糖，由许多β-葡萄糖分子组合而成。
这种多糖在自然界广泛分布，包括植物、真菌、细菌和动物中。
葡聚糖在这些生物中具有多种重要功能，如提供结构支持、膜层保护、细胞间信号传递和免疫应答等。
葡聚糖内-1,3-β-葡糖酶（PG）是一种能够降解葡聚糖的酶类。
它可以催化葡聚糖的水解反应，将其分解成低聚糖和单糖。
目前，许多真菌中的PG已被分离和鉴定，其中以酵母菌的PG最为广泛研究。
PG对于细胞生长和分化、细胞壁合成和重组、藻类和真菌的招募、植物抵御病原菌的作用等有重要影响。
PG的生物学功能也被广泛研究和应用于医药和农业领域。
近年来，PG的研究是一个非常热门的课题。
研究人员通过分子生物学和基因工程技术得到了大量的PG基因序列。
同时，PG的表达也受到广泛关注，特别是在微生物发酵、细胞壁结构和医药领域。
在微生物发酵中，PG可以通过控制其基因表达来产生大量低聚糖和单糖。
这些产物对某些工业生产和食品添加剂有广泛的应用，比如说肉制品和面包。
在真菌和植物内，PG对于细胞壁合成和重组起着重要作用。
在细胞壁合成中，PG可以加速和协调细胞壁的合成。
在细胞壁重组中，PG的表达可以加快细胞壁的降解和合成，使细胞获得更好的结构和保护。
在医药领域，PG被广泛研究，用于治疗某些疾病。
例如，PG可以作为免疫调节剂，增强宿主对病原菌的抵御能力。
它也可以用作抗肿瘤药物，破坏肿瘤细胞壁，促进细胞凋亡。
总之，PG在生物界中是起着重要作用的酶类。
它拥有丰富的生物学功能和广泛的应用价值。
我们期待在未来的研究中能够更深入地了解PG的作用机制，扩大它的应用范围，并进一步应用于医药和农业领域。
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖（也称为1,3-β-D-葡聚糖或胞外多糖）是一种可溶性聚糖，常用于农业、食品和医药工业。
测定β-1,3-葡聚糖的含量可以通过以下方法之一实现：
1. 紫外可见光谱测定：将葡聚糖溶液经稀酸或酶处理后，通过
测定其在特定波长下的吸收光强度来确定其浓度。
这种方法对于测定
高浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为简便。
2. 蒸发法：将葡聚糖溶液加热至葡聚糖变为糊状物，并将其继
续加热蒸发至干燥。
然后称量得到的干燥物的质量，通过质量差来计
算葡聚糖的含量。
这种方法对于测定低浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为适用。
3. 原子吸收光谱法：通过将葡聚糖溶解后，在特定条件下使用
原子吸收光谱仪测定其特定金属离子沉淀物的质量，从而计算出含量。
这种方法对于含有特定金属离子的葡聚糖样品测定较为准确。
真菌葡聚糖检测试剂盒(动态显色法)操作说明20161222
真菌葡聚糖检测试剂盒（动态显色法）简要操作说明一、试剂与耗材1. 试剂（1）鲎试剂：冻干粉；（2）细菌内毒素检查用水；（3）处理液a；（4）处理液b；（5）缓冲液；（6）葡聚糖标准品。
2. 耗材（1）微板板条；（2）大、小吸头；（3）试管。
二、操作规程1. 配制葡聚糖标准品用细菌内毒素检查用水溶解一瓶葡聚糖标准品，使之成为10000pg/ml的溶液。
置于旋涡混匀器上混匀至少10秒钟以上。
然后分别配制浓度梯度分别为2000/1000/500/250/100/50/25pg/ml的葡聚糖标准品溶液。
2. 配制处理液（1）处理液a和处理液b按1:1比例配制。
先取处理液a加入试管中，再加入处理液b；（2）用封口膜封住管口，存放于2-8°C，配成的处理液必须在30分钟内使用完。
注意：根据样本数按照每个样本/测试需40ul的量进行配制，现配现用。
3. 用血清处理液处理血清样品（1）吸取10ul标准品或样品于微板孔中；（2）各微板孔中分别加入40ul配制好的处理液；（3）放入酶标仪，于37C孵育10分钟。
4. 配制反应主剂和试验操作规程（1）取鲎试剂冻干粉，每支加入标示量一半的细菌内毒素检查用水，再分别加入标示量一半的缓冲液。
若使用多支鲎试剂，可待每支鲎试剂溶解后，将所有鲎试剂溶液合在一起，备用。
（2）待微板达到孵育时间，上述加样的微板孔中分别加入鲎试剂溶液100ul；（3）上机检测，37℃，405/490nm，每分钟读数一次，运行40分钟。
三数据处理1. 计算0到40分钟内所有的点的OD值的平均变化率（如用户的酶标仪的软件可以做到，用户减去490nm的背景干扰）2. 建立标准曲线：V = aC + b，其中：V为OD值的平均变化率，C为葡聚糖的浓度，a为直线斜率，b 为Y轴截距。
3. 当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：（1）标准曲线的浓度点≥3，标准曲线的相关系数r≥0.980；（2）标准曲线最低点的V值大于阴性对照的V值。
人13βD葡聚糖13βDglucosidase酶联免疫分析ELISA
人1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)酶联免疫分析ELISA试剂盒操作步骤本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)水平。
用纯化的人1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)，再与HRP标记的1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)浓度。
样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)试剂盒说明书
货号：QS2611 规格：50管/24样β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：β-1,3-GA(EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
测定原理：β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存；粗酶液提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
A，第1页，共2页如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A 对照。
每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA活性计算：1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0958x -0.0192；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
血浆真菌葡聚糖检测标准操作规程
血浆真菌葡聚糖检测标准操作规程1. 目的规范使用真菌葡聚糖检测试剂盒（动态浊度法）进行真菌（1,3）-β-D-葡聚糖检测的检验操作程序，保证实验结果的准确性。
2. 适用范围用于人体血浆真菌（1,3）-β-D-葡聚糖定量检测。
3. 责任者经培训合格的微生物实验室检验人员。
4. 适用仪器鲎试验微生物检测仪ELx808IU（全自动酶标仪ELx808）或同等光学检测仪器。
5. 样本要求5.1 标本采集用除葡聚糖肝素钠抗凝真空采血管采集静脉血2ml以上，进行3000rpm离心60s，分离得到富含血小板的血浆样本。
5.2 标本保存和运送样本可立即用于检测。
若不能及时检测，应将血浆转移至无热原试管内，保存于2-8℃待测，保存期为一周；也可保存于-20℃待测，保存期为1个月。
样本应避免反复冻融。
6. 检验方法6.1 仪器设定6.1.1 预热仪器，设置温育温度为37ºC。
6.1.2 设定检测仪器的读板波长为630nm（或厂家提供的其他适用波长），读板时间为120分钟，每1分钟读板一次。
6.2 取0.1ml血浆样本，加入到0.9ml样本处理液中，混匀后70℃保温10分钟，取出后立即放入冰水中冰浴3分钟。
6.3 取处理后的血浆样本混合液0.2 ml加入鲎试剂中，轻轻振摇溶解鲎试剂后移取0.1ml 至反应容器中，放置于检测仪器中检测，反应结束后软件将自动计算出样本真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量。
7. 参考值正常人体血浆中真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量＜10pg/ml。
8. 检验结果解释8.1 样本（1,3）-β-D-葡聚糖含量≥10pg/ml时，表明该样本有（1,3）-β-D-葡聚糖存在，但并不表示该样本一定存在真菌活菌。
8.2 样本（1,3）-β-D-葡聚糖含量＜10pg/ml时，表示该样本（1,3）-β-D-葡聚糖低于参考值。
9. 检验方法的局限性9.1 本试剂盒只能检测真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量，不能区分真菌种属。
β-1,3-葡聚糖酶活性的测定
β-1，3-葡聚糖酶活性的测定在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1，3-葡聚糖酶。
该酶水解昆布多糖，内切β-1，3-葡萄糖苷键，产生还原末端。
可通过测定还原糖表示酶活力。
1.仪器设备恒温水浴、分光光度计、研钵、高速冷冻离心机、透析袋等。
2.操作方法1)试剂配制①铜试剂：称取12g酒石酸钾钠（NaKC4H4O3·4H2O），24g无水碳酸钠，16g碳酸氢钠，分别溶于200ml蒸馏水中后混匀。
另称硫酸铜4g（CuSO4·5H2O）溶于200ml蒸馏水，缓缓加入并搅拌到上述混合液中。
再称取无水硫酸钠180g，溶于其中，置沸水浴20min，冷却后过滤，最后定容至1000ml备用。
此液易出现结晶，应保存在20℃以上。
②砷钼酸试剂：25g钼酸铵[（NH4）6Mo7O24·4H2O]溶于450ml蒸馏水，加入22ml浓H2SO4，充分混匀。
另称取3g砷酸氢二钠（Na2HAsO4·7H2O），溶于25ml蒸馏水后，与上述钼酸铵溶液混合，37℃保温24~48h，贮于棕色瓶备用。
2）标准还原糖测定：将500μg/ml的葡萄糖溶液准确稀释至150μg/ml，用此再稀释成数种不同浓度的葡萄糖溶液。
然后取几支干净试管，分别加入不同浓度的葡萄糖溶液0.5ml，并加0.5ml铜试剂，置沸水浴10min后，自来水冷却。
加入0.5ml砷钼酸试剂，混匀，再加入3.5ml蒸馏水，于分光光度计660nm处测定光密度，并作光密度-还原糖浓度标准曲线。
3）酶蛋白的提取和活力测定①酶蛋白的提取：将植物材料加5倍量0.05mol/L的乙酸钠缓冲液（pH5.0），充分研磨，于15000×g 离心15min后，将上清液置透析袋中，用提取液在4℃下透析过夜。
经离心取上清液，放于冰箱备用。
②酶活力的测定：取0.4ml的1mg/ml昆布多糖（Sigma公司，溶于上述乙酸缓冲液），加入0.1 ml酶液，于37℃保温15min，立即加入0.5ml铜试剂，混匀，并于100℃水浴10min，置冷水中冷却，再加入0.5ml砷钼酸试剂，呈现蓝色后加蒸馏水3.5ml，660nm处比色，对照标准曲线求出样品液中的还原糖量。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒(光度法)产品技术要求jinsahnchuan
真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒（光度法）适用范围：与本公司生产的微生物快速动态检测系统配套使用，用于体外定量测定人血清中真菌(1-3)-β-D 葡聚糖的含量。
1.1 产品规格GKT-1M：20人份/盒；GKT-5M：50人份/盒；GKT-10M：50人份/盒；GKT-20M：60人份/盒。
1.2 主要组成成分GKT-1MGKT-5MGKT-10MGKT-20M2.1 外观反应主剂为白色冻干粉末，样品处理液为无色透明液体，反应主剂溶解液为无色透明液体。
2.2装量样品处理液为0.9ml/支；GKT-5M反应主剂溶解液0.6ml/支；GKT-10M反应主剂溶解液为1.2ml/支；GKT-20M反应主剂溶解液为2.4ml/支，其中装量不小于标称值。
2.3 准确性试剂盒对真菌（1-3）-b-D葡聚糖的回收率为75％～125％。
2.4 重复性试剂盒重复检测结果的CV（％）值应不大于10％。
2.5线性在浓度1 pg/ml～625 pg/ml范围内，其线性相关系数的绝对值r≥0.980，在1 pg/ml～93.75 pg/ml范围内，绝对偏差为±14.06pg/ml；在93.75pg/ml～625 pg/ml范围内，相对偏差≤15%。
2.6空白检测限真菌（1-3）-b-D葡聚糖浓度的空白检测限为1pg/ml。
2.7反应特征曲线反应主剂的特征反应曲线应为近似直线的反S形。
2.8原始吸光度酶反应主剂以适当水稀释后，在（270±5）nm波长处应有单一吸收峰。
2.9批间差不同批号的试剂盒检测结果的相对偏差应不大于10％。
2.10稳定性试剂盒2-8℃储存有效期36个月，贮存期末的分析性能应符合2.1～2.8的要求。
2.11特异性浓度为100pg/ml革兰阴性菌脂多糖溶液，对（1-3）-b-D葡聚糖检测结果的交叉反应率不大于2%。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定规范操作1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
4．产品性能指标4.1 灵敏度10pg/ml4.2 精密度批间CV≤10% 。
4.3 准确性回收率75-125%。
4.4 标准曲线相关系数r绝对值≥0.9805．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪，20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集及保存7. 1检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。
7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。
7.3样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。
8．操作程序8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。
8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。
8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明
分光光度法货号：BC0360
规格：50管/24样
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体42mL×1瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。
产品说明：
β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）测定管对照管标准管（葡萄糖溶液）样本或标准液100100100蒸馏水100100
试剂一100
充分混匀，放入37℃水浴60min。
试剂二600600600
充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，540nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。
每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA活性计算：
根据标准管吸光度（x）和浓度（y，mg/ml）建立标准曲线，将ΔA带入公式中计算出样品中产生的还原糖的含量y值（mg/ml）
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/g鲜重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/g鲜重)=(y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y
V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。