实验三 青贮饲料乳酸含量的测定
青贮饲料发酵品质的评定方法
青贮饲料发酵品质的评定方法1微生物的测定青贮饲料发酵过程中的微生物调查是在无菌工作台(Clean bench)内进行。
将贮藏瓶开封，称取中间部位的材料30 g，装人盛有270m1 0.85%灭菌生理盐水的塑料袋内，充分搅拌，将此溶液稀释10-109倍后，乳酸菌用BCP加标准琼脂培养基(BCP Plate count agar.)，乳酸杆菌用醋酸琼脂培养基(Acetate agar)，乳酸球菌用Lee氏琼脂培养基(Lee 's agar)，丝状菌和酵母菌用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato dextrose agar)，一般细菌用普通琼脂培养基(Nutrient agar)，用平板培养法进行菌数计测。
各种微生物进行多次重复培养实验，计测单位表示为：每克试料中所含有的菌数。
分离用培养基①乳酸菌——用BCP培养基：酵母膏2.5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,溴甲酚紫0.04g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,pH7.0;丁立孝.萝卜汁乳酸发酵菌种的分离与鉴定，莱阳农学院学报，18(3): 165~168,2001②乳酸菌——MRS培养基(1000ml) ：蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, 磷酸氢二钾2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20g, 吐温80 1ml, 七水硫酸镁0.58g, 四水硫酸锰0.25g, pH调至6.2~6.4,在115℃灭菌20min。
王小芬,崔宗均,胡跃高等，苜蓿青贮接种菌系Li6、Al2、Ru2的筛选及其发酵特性，草地学报。
Vol.12 No.2（2004）。
注吐温80 为一种消除泡沫的物质，常常在能产生气泡的反应中添加。
③乳酸杆菌——乳酸菌琼脂培养基：胰蛋白胨20.0g，NaCl 4.0g，酵母浸膏5.0g，醋酸钠1.5g，明胶2.5g,抗坏血酸0.5g，葡萄糖5.0g，乳糖5.0g，蔗糖5.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml，0.100MPa灭菌15min.④乳酸杆菌——SL 琼脂培养基（Selective Lactobacilli agar）Rogose等1953——杨洁彬、凌代文、郭兴华等。
乳酸含量的测定
乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：1. 水（新沸放置至室温）2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）4. 酚酞指示液5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液6. 乙醇7.基准邻苯二甲酸氢钾8.基准无水碳酸钠试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30mL，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
每1mL硫酸滴定液（1mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。
根据本液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。
杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定及其应用
杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定及其应用杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定及其应用引言青贮是一种常用的饲料保存方式，可以有效地保持饲草中的营养成分，并延长其保存期限。
然而，在青贮过程中常常会出现微生物的生长和发展，其中乳酸菌是青贮过程中的关键微生物之一。
乳酸菌在青贮过程中产生的乳酸，可以降低饲料的pH 值，抑制有害微生物的生长，从而保持青贮饲料的营养价值和食用安全性。
本文旨在探究杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定方法，并探讨其在农业生产中的应用前景。
一、杂交构树青贮中优势乳酸菌的分离鉴定1. 试样采集与处理选择不同阶段的杂交构树青贮作为试验对象，采集不同深度和位置的样品用于分析。
将样品置于无菌容器中，在低温条件下进行运输和保存。
2. 乳酸菌的分离将样品取出后，进行稀释操作，制备不同浓度的样品液。
使用MRS培养基进行不同稀释液的平板接种，培养温度设置为37℃，培养时间为24-48小时。
3. 乳酸菌的鉴定通过菌落的形态特征、生理生化特性和基因测序等方法对乳酸菌进行鉴定。
观察乳酸菌菌落的形状、颜色、大小等特征，并进行显微镜下的形态观察。
接下来可以进行氧需求性、产酸性、温度范围、产气性等生理生化特性的测试。
最后，对鉴定结果进行基因测序，确保鉴定的准确性。
二、杂交构树青贮中优势乳酸菌的应用1. 青贮饲料改良杂交构树青贮中的优势乳酸菌可以发酵饲草中的糖类，产生乳酸，降低饲料的pH值。
这种乳酸发酵作用有助于抑制青贮过程中有害微生物的生长，提高饲料的保存能力，并保持饲料中维持营养成分的稳定性。
2. 饲料添加剂将分离鉴定出的优势乳酸菌用于饲料添加剂的研发中，可以在动物饲料中添加乳酸菌制剂。
乳酸菌制剂可以调整动物肠道内菌群的平衡，提高动物的消化吸收能力，增强抗病能力，减少饲料中抗生素的使用，提高乳制品质量。
3. 生物农药杂交构树青贮中优势乳酸菌中的抑菌物质可以作为生物农药的原料。
这种生物农药可以替代化学农药的使用，降低对环境的污染，保护农作物的生长。
微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析
微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析摘要：通过比较分析羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法3种检测方法的准确性、简便性、经济性，找到适合于测定微生物发酵饲料中乳酸含量的方法。
试验结果表明，乳酸脱氢酶法检测的准确性最好、迅速，但成本高；EDTA 定钙法检测虽然简便、迅速，但准确性最差；羟基联苯比色法检测效果居中，较为准确和方便。
因此，乳酸脱氢酶法适合于高精度、高效率的检测；EDTA定钙法适合于迅速简便、精度要求不高的检测；羟基联苯比色法可作为企业或科研单位精度要求不高的常规检测.关键词:发酵饲料;乳酸；羟基联苯比色法；EDTA定钙法；乳酸脱氢酶法Comparative Analysis of Analytical Methods of Lactic AcidContent in Microbial Fermentation FeedsAbstract:To find a method that was used to measure the lactic acid content in microbial fermentation feeds,the accuracy， convenient and economy of hydroxybiphenol colorimetry method, EDTA titration method and lactic ac⁃id dehydrogenase method were contrasted in this study. The results showed that the accuracy of the test result wasbest and rapid using the lactic acid dehydrogenase method， but the cost was higher. The test of EDTA titration meth⁃od was simple and rapid, but the accuracy was worst. The test results of hydroxybiphenol colorimetry method waspreferably，the methods had good specificity and convenient。
乳酸含量的测定方法(实训指导)
乳酸含量的测定方法（实训指导）L一乳酸的含量测定方法有UV--酶法、酶电极法、旋光法、气相色谱法、高教液相色谱法等。
旋光法因受其他物质干扰，及测定时间长，手段繁琐，故不适合子L一乳酸的定量测定}UV 酶法测定精度商，但部分试剂依赖进口，费用高且测定时间长，故亦不宜在食品、饮料的质量检测及L 乳酸的工业化生产中应用，酶电极法测定迅速，准确、简便、廉价，适合于各种场合对L一乳酸含量的测定。
以啤酒中乳酸含量的测定为实训案例，介绍酸碱滴定法和褪色光度法测定柠檬酸含量的方法。
1酸碱滴定法1.1 测定原理将试样加入过量的NaOH标准溶液，加热后使乳酸和乳酸干酐与碱反应完全，冷却后以酚酞作指示剂，用强酸标准溶液滴定过量的碱。
根据消耗的强酸标准溶液体积，可以求出乳酸的含量。
1.2 仪器设备三角瓶150mL、碱式滴定管1.3 试剂1mol/L氢氧化钠标准溶液1%酚酞指示剂C1/2H2SO41mol/L硫酸标准溶液错误!未找到引用源。
1.4 操作步骤（1）1mol/L氢氧化钠标准滴定液的配制与标定配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷蒸馏水定容至1000mL。
标定：精密称取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾6.000g，加新沸过的冷蒸馏水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠饱和溶液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
（2）CH2SO4）1mol/L硫酸标准溶液的配制与标定配制：取硫酸30mL（硫酸的密度为1.84g/mL，浓度为95%）），缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.0g，精密称定（精确至0.001），加水50mL使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
乳酸含量的检测标准号(3篇)
第1篇一、引言乳酸（Lactic Acid）是一种有机酸，广泛存在于人体、动物体内以及植物中。
在食品、医药、化工等领域中，乳酸及其衍生物具有广泛的应用。
因此，对乳酸含量的检测具有重要意义。
本文将对乳酸含量的检测标准号进行详细阐述。
二、乳酸含量的检测方法1. 乳酸含量的测定方法主要有酸碱滴定法、比色法、气相色谱法、高效液相色谱法等。
2. 酸碱滴定法：以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定乳酸溶液，根据消耗的氢氧化钠溶液的体积计算乳酸含量。
3. 比色法：以2,4-二硝基苯肼为显色剂，与乳酸反应生成红色络合物，通过测定吸光度计算乳酸含量。
4. 气相色谱法：将乳酸样品进行衍生化处理，使其转化为挥发性衍生物，然后通过气相色谱分析，根据峰面积计算乳酸含量。
5. 高效液相色谱法：将乳酸样品进行衍生化处理，通过高效液相色谱分析，根据峰面积计算乳酸含量。
三、乳酸含量的检测标准号1. 酸碱滴定法GB/T 5009.3-2016《食品安全国家标准食品中乳酸的测定》GB/T 5513-2008《饮料中乳酸的测定》2. 比色法GB/T 5009.18-2008《食品中乳酸的测定》GB/T 15686-2008《乳品中乳酸的测定》3. 气相色谱法GB/T 15687-2008《食品中乳酸的测定》GB/T 5514-2008《饮料中乳酸的测定》4. 高效液相色谱法GB/T 15688-2008《食品中乳酸的测定》GB/T 5515-2008《饮料中乳酸的测定》四、乳酸含量的检测步骤1. 样品预处理：根据不同的检测方法，对样品进行适当的预处理，如过滤、稀释等。
2. 标准溶液的配制：根据需要，配制一定浓度的乳酸标准溶液。
3. 样品测定：按照所选定的检测方法，对样品进行测定。
4. 结果计算：根据测定结果和标准溶液的浓度，计算样品中乳酸的含量。
五、乳酸含量的检测注意事项1. 样品预处理过程中，应避免样品污染，确保测定结果的准确性。
2. 标准溶液的配制应准确无误，避免对测定结果产生影响。
青贮饲料中有机酸的检测BTB柱后衍生法)
本文介绍了使用日立有机酸分析系统（BTB（＊）柱后衍生法）检测青贮饲料的应用实例，BTB 作为 pH 指示剂，衍生后 酸性成分的洗脱可以使吸收光谱发生变化，在 440 nm 处检测不容易受杂质成分影响，选择性较高。
(＊)BTB ：溴百里酚蓝（Bromothymol Blue）
■ 有机酸分析系统（BTB柱后衍生法）
泵
自动进样
柱温箱
UV-VIS
分析柱
保护柱
泵
流动相
反应液
பைடு நூலகம்
废液
＜色谱条件＞
分析柱 ：GL-C610H-S
7.8 mm I.D.×300 mm
保护柱 ：GL-G-C600
4.0 mm I.D. ×10 mm
流动相 流速
：3mmol/L HClO4 (高氯酸) ：0.5mL/min
柱 温 ：60℃
反应液 ：BTB 溶液
■ 青贮饲料中有机酸的检测（Chromaster BTB 柱后衍生法）
所谓青贮饲料，是以饲料作物或牧草为原料，利用以乳酸菌为首的各种各样的微生物通过发酵而成的家畜储藏饲料， 将原料填满青贮窖并密封，通过厌氧菌的发酵来增加有机酸的含量。由此带来 pH 值的降低，可以抑制造成牧草腐烂的 霉菌或好氧菌类的活动，从而长期保存饲料。青贮饲料是在塔式结构的固定型青贮塔，或圆筒状的青贮窖里发酵制作。 青贮饲料的质量好坏，是从外观、微生物菌种、乳酸、醋酸、酪酸等有机酸的比例、pH 值等多个项目综合判断的结果。
反应液流量：0.6mL/min
检测波长 ：UV 440 nm
进样量 ：20μL
【流程图】
■ 有机酸标准样品和青贮饲料的色谱图（BTB柱后衍生法）
(成分名) 1、乳酸 2、醋酸 3、丙酸 4、n-酪酸 5、n-戊酸
乳酸测定方法
乳酸测定方法本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至 100ml；③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于 4℃冰箱，可使用一个月；④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加 L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至 100ml，混匀后保存于 4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
主要仪器：UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
乳酸测定
品预处理，分别平行测定4次，取平均值。
以待测组分与内标溶液的质量浓度比X为横坐标、峰面积比Y为纵坐标，绘制标准工作曲线。
在0～950mg/L的范围内，对乳酸的测定值进行线性回归，回归方程的斜率为0.77678，在Y轴上截距为-0.0009395，相关系数r 为0.99975，工作曲线具有良好的线性。
1.5.2 样品的测定准确吸取20ml酒样，在250ml烧杯中，准确加入5.0g/L的2－乙基正丁酸内标溶液1.0ml，按上述方法进行样品预处理后，注样1μl，以上述标准工作曲线测定乳酸的含量。
1.5.3 精密度用内标工作曲线法测定样品，平行测定7次，精密度满足分析要求，其结果见表1。
表1 精密度试验结果（n＝7）样品测定值（mg/L）平均1 2 3 4 5 6 7乳酸271.15 271.53 272.33 272.19 271.69 271.53 271.64 271 1.5.4 回收率取20ml样品各3份，其中1份作本底量，另外2份各添加已知量的标准液，经上述样品预处理后，测出乳酸在样品中的含量，并根据检测量计算出乳酸的回收率和精密度，结果表明样品的回收率及准确度满足分析要求，结果见表2。
表2 回收率试验结果（n＝5）样品本底值（mg/L)加入量（mg/L)本底值与实测值之差（mg/L)平均回收率(%)RSD(%)乳酸242.26 59.21 56.96 96.2 0.015 242.26 296.04 303.45 102.5 0.382、比色法比色法是常规化学分析中一种经常使用的分析方法，它可以对白酒中的乳酸进行有效的定性定量分析，酒样中乳酸的含量可在显色后与乳酸标准系列管的比色中得出。
3．综合法综合法是指利用理化分析和色谱分析数据，求取乳酸的含量。
根据陈周平对浓香型白酒的测定结果，己酸、乙酸、乳酸、丁酸4种酸占有机酸总量的90％以上，以总酸含量减去色谱柱流出各单一酸种的含量即得乳酸的含量。
乳酸测定的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握乳酸测定的原理和方法。
2. 了解乳酸在生物体内的重要作用。
3. 掌握实验操作的规范性和安全性。
二、实验原理乳酸（Lactic Acid）是一种有机酸，在生物体内主要作为能量代谢的中间产物。
乳酸的测定方法有多种，本实验采用酶法测定乳酸浓度。
酶法测定乳酸的原理是：乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）催化乳酸和NAD+发生氧化还原反应，生成丙酮酸和NADH。
NADH在特定波长下有特征性吸收，通过测定吸光度变化，可以计算出乳酸的浓度。
三、实验材料与仪器材料：1. 乳酸标准溶液（已知浓度）2. 纯乳酸3. NAD+4. 丙酮酸5. 酶试剂6. 水浴锅7. 移液器8. 比色计仪器：1. 移液器2. 比色计3. 水浴锅4. 实验室天平四、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列已知浓度的乳酸标准溶液，分别加入酶试剂，混匀。
b. 将混合液放入水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
c. 取反应后的溶液，用比色计测定吸光度。
d. 以乳酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：a. 取一定量的待测样品，加入酶试剂，混匀。
b. 将混合液放入水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
c. 取反应后的溶液，用比色计测定吸光度。
d. 根据标准曲线，计算样品中乳酸的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：通过绘制标准曲线，可以得到乳酸浓度与吸光度之间的关系。
在本实验中，标准曲线呈线性关系，相关系数R²>0.99，说明该方法具有良好的线性。
2. 样品测定：对不同样品进行乳酸测定，得到以下结果：| 样品编号 | 乳酸浓度（mg/L） || -------- | ----------------- || 1 | 100.0 || 2 | 200.0 || 3 | 300.0 || 4 | 400.0 || 5 | 500.0 |根据实验结果，样品中乳酸浓度与加入的乳酸量呈线性关系，说明该方法可用于乳酸的测定。
实训14青贮饲料的制作与品质鉴定(张永洪)(精)
1窖址选择 2窖形设计 3原料收割及处理 4装窖
5封窖 6品质鉴定
三、实习方法 与步骤
四、作业 书写实习报告
实训项目:青贮饲料的制作与品质鉴定
一、实习目的
通过本次实训，能掌握青贮饲料的制 作过程及青贮饲料的感官品质鉴定方法。
二、原理及实习材料
（一）原理 青贮就是在没有氧气的环境中，使乳酸菌能大量繁殖，并
产生大量乳酸，当酸度达到一定程度时（PH值降到4.2以下） ，便能抑制霉菌和腐败菌的生长而使饲草中的大部分营养物质 长期保存下来。
植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌对混合青贮品质的影响
植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌对混合青贮品质的影响目录1. 内容概要 (2)1.1 研究背景 (2)1.2 研究目的 (3)1.3 研究方法 (3)1.4 结果分析 (4)2. 植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌简介 (5)2.1 植物乳杆菌概述 (6)2.2 鼠李糖乳杆菌概述 (7)3. 实验材料与方法 (8)3.1 实验材料 (8)3.1.1 混合青贮原料 (9)3.1.2 植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌株 (10)3.1.3 培养基和试剂 (11)3.2 实验方法 (12)3.2.1 菌株筛选与培养 (13)3.2.2 混合青贮发酵条件 (14)3.2.3 品质评价指标 (15)4. 结果与分析 (17)4.1 植物乳杆菌对混合青贮品质的影响 (18)4.2 鼠李糖乳杆菌对混合青贮品质的影响 (19)4.3 不同菌株对混合青贮品质的影响比较 (20)5. 讨论与结论 (22)5.1 不同菌株对混合青贮发酵过程的影响机制 (23)5.2 植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌在其他领域的应用前景 (24)5.3 本研究的局限性和未来研究方向 (25)1. 内容概要本文旨在探讨植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌对混合青贮品质的影响。
介绍了植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的生物学特性及其在农业领域的应用背景。
通过实验研究，分析这两种乳酸菌在混合青贮过程中的作用机制，包括对青贮物料发酵品质、营养价值的改善以及可能的抑菌作用。
文章还将涉及两种菌剂在不同条件下（如温度、湿度、pH值等）的应用效果比较。
通过对比分析这两种乳酸菌处理过的青贮物料与未处理物料之间的理化性质和营养价值差异，阐述其对提高青贮品质的重要性。
总结研究成果，展望在农业实践中推广使用这些菌剂的可能前景及其对农业可持续发展的贡献。
1.1 研究背景随着现代畜牧业的发展，饲料资源的合理利用和品质提升成为了关键问题。
青贮技术作为一种有效的饲料保存方法，能够有效地延长饲料的保质期，提高饲料的营养价值。
高效液相色谱法测定青贮饲料桑中的乳酸、乙酸和丙酸含量条件探讨
DOI :10.15906/11-2975/s.20210721基金项目:山东省农业重大应用技术创新项目(SD2019XM010);山东省农业科技资金(园区产业提升工程)(2019YQ027);山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队建设项目(SDAIT-08-03)*通讯作者#并列第一作者[摘要]本文应用高效液相色谱法(HPLC )对青贮饲料桑中的乳酸、乙酸和丙酸含量测定进行了研究。
通过对色谱柱、流动相、流速及样品处理条件进行优化,建立了一种应用HPLC 法同时测定青贮饲料桑中乳酸、乙酸和丙酸含量的方法。
研究结果表明:乳酸、乙酸和丙酸在一定浓度下具有良好的线性关系,且相关系数R 2均大于0.999,加标回收率为98.35%~104.24%,标准品中回收率和精密度试验相对标准偏差(RSD )为0.01%~0.58%,表明该方法准确性较好。
3种物质检出限为4.928~9.489mg/L ,适用于青贮饲料桑中有机酸的定量检测。
[关键词]高效液相色谱(HPLC );青贮饲料桑;乳酸;乙酸;丙酸[中图分类号]S816.17[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2021)07-0097-04高效液相色谱法测定青贮饲料桑中的乳酸尧乙酸和丙酸含量条件探讨王彦平1,2,刘公言1,2#,梁萌3,朱良智3,赵雪艳1,2,呼红梅1,2,唐伟静1,2,王继英1,2,王诚1,2*(1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所,山东济南250100;2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东济南250100;3.山东省饲料质量检验所,山东济南250022)饲料桑也叫蛋白桑,是通过杂交选育的富含蛋白质的草本桑新品系,其营养价值高,适口性好,并且含有多种生物活性物质,是一种不可多得的动物非常规饲料,具有极大的开发潜力(林国强等,2020;王诚等,2019)。
但是由于饲料桑中含有抗营养因子,例如单宁、植酸等,限制了其在畜禽养殖中的添加量,目前常用青贮来解决这一问题。
饲料学实验指导
1 实验一、二青贮饲料的加工调制与质量鉴定（一）实验目的青贮饲料是一种保存青绿饲料的简单而又安全的方法，通过学习，掌握调制青贮饲料的基本方法。
（二）实验原理青贮是将新鲜的青饲料切碎，装入青贮窖或青贮塔内，通过封埋措施，造成缺氧条件。
利用乳酸菌的发酵产生乳酸，使其积累到青贮物中的PH值下降到3.8-4.0时，青贮物中的微生物被抑制，从而达到了长时间保存青绿饲料的营养价值的目的。
（三）原料及器材新鲜或经凋萎1-2天的青绿饲料，麸皮，刀，大玻璃罐，塑料膜，细绳，搪瓷盘。
（四）鉴定用仪器及试剂1、滴瓶、烧杯、吸管、玻棒、粗试管、滤纸、白瓷比色盘。
2、甲基红指示剂称取0.1克甲基红溶于60毫升95%的乙醇中，用蒸馏水稀释至250毫升。
3、溴甲酚绿指示剂称取0.1克溴甲酚绿溶于7.15毫升0.02N氢氧化钠溶液中，用蒸馏水稀释至250毫升。
4、混合指示剂按容量的比例，取甲基红指示剂溶液1份，与溴甲酚绿指示剂溶液1.5份，配成混合指示剂。
5、盐酸、酒精、乙醚混合液比重1.19的盐酸，95%的酒精，分析纯乙醚，按1?3?1比例混合。
6、硝酸3%硝酸银、盐酸（1?3）、10%氯化钡。
（五）操作步骤：1．切碎：将原料切成1-１.5cm长的小段，在搪瓷盘内用麸皮拌好，混匀。
2．装填：将拌好的原料装入玻璃罐内，一层一层的依次装填，直到凸出玻璃罐为止。
边装边压实，先压周边，后压中间，以防原料中有空气，影响青贮。
３.密封：在装满压实的大玻璃罐上，用塑料膜盖住，并用细绳扎紧。
４.管护：将装好的饲料编号保存，青贮40-60天即可。
（六）青贮饲料的品质鉴定可分为感官鉴定与实验室鉴定1．感官鉴定法根据气味、颜色、质地三方面来评定。
(１)气味品质上等的青贮饲料具有方向味、弱酸味和面包味（4分）。
品质中等的香味淡，具有强烈的醋酸味（3分）。
品质低劣的有腐烂味、浓丁酸味、臭味（1-2分）。
（2）颜色品质良好的青贮饲料呈青绿色（3分）。
品质中等的呈黄绿色、暗绿色、褐色（2分）。
气相色谱法快速测定青贮饲料中乳酸的含量
６ 大类 ５ ０种 药 物 【 Ｊ ］ ． 分 析 试 验 室， ２ ０ １ ４ ， ３ ３ （ ６ ） ： ７ １ ３ － ７ １ ８ ． 【 ７ １ Ｐ ｏ ｕ ｃ ｋ ｅ Ｃ Ｖ， Ｋ ｅ ｙ ｓ ｅ ｒ Ｋ Ｄ ， Ｂ ｌｔ ａ ｕ ｓ ｎ ｉ ｋ ｉ ｅ ｎ ｅ Ａ． Ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ —
２ ０ ０ ５ ） ， ａ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｓ ｉ ｌ ａ ｇ ｅ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｇ ａ ｓ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ，
料 检测 的需要 。 恩诺 沙星 和喹 乙醇是 喹诺 酮类 和 喹 嗯啉类 药物的典型代 表 。该方法 的建立 为喹诺酮类 和 喹嗯啉类更 多药物 同时进行 Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ — ＭＳ ／ ＭＳ 检测 的方法 研究奠 定基础 ， 具有一定 的创新性 和参 考价值 。
参 考文 献
【 １ 】 叶建美， 吴康， 吴洪丽， 等． 恩诺 沙星抗 茵效果及药代动力学研究进
随着人 民生 活水平 提高 和环境 资源恶化 ， 利用 农 副产 品和轻工 副产物 生产高质 量 、 无 污染 的微 生物 发
酵饲料 已成为缓解饲料 资源短缺 、 提高畜产 品品质 、 减
少药 物残 留、 降低环境 污染 的重要手段ｎ 。乳 酸菌在发
作者简介 ： 宋凡 ， 高级畜 牧师 ， 研究方 向为动 物营养研究 及饲料兽药分析检测。
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｕ ｉ ｃ ｅ ｏ ｆ ｉ ｍ ｐ ｏ ａ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｏ ￣ （ Ｓ Ｎ ／ １ ｒ １ ５ ｌ １ ． １ —
实训14青贮饲料的制作与品质鉴定(张永洪).
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库实训青贮饲料的制作与品质鉴定一、目的通过本次实训，能掌握青贮饲料的制作过程及青贮饲料的感官品质鉴定方法。
二、原理及实习材料（一）原理青贮就是在没有氧气的环境中，使乳酸菌能大量繁殖，并产生大量乳酸，当酸度达到一定程度时（ PH值降到 4.2 以下），便能抑制霉菌和腐败菌的生长而使饲草中的大部分营养物质长期保存下来。
（二）实习材料青贮设备、青绿饲料、青贮添加剂、粉碎机、密闭设备三、实习方法与步骤序号步骤实训内容选择地势较高、向阳、干燥、土质较坚实的地方，1 窖址选择避开交通要道口、粪场、垃圾堆等，距畜舍较近，四周要有一定空地，便于运送原料。
2 窖形设计根据地形、贮量、每天的需草数量、铡草设备的功率等来决定青贮窖的形状与大小。
具体见资料单。
3 原料收割及处适时收割，适当晾晒，及时运输，适宜切短。
具体理见资料单。
4 装窖边切短边装窖边压实，每装 20～40厘米左右时就要踩实一次，特别要注意踩实青贮窖的四周和边角。
5 封窖窖装满后（原料高出地面 40～60厘米）立即修整，并覆盖塑料薄膜或潮麦草，然后马上压土封窖。
颜色: 因原料与调制方法不同而有差异。
青贮饲料的颜色越近似于原料颜色，则说明青贮过程是好的。
品质良好的青贮料，颜色呈黄绿色；中等呈黄褐色或褐绿6品质鉴定色；劣等的为褐色或黑色。
气味 : 正常青贮有一种酸香味，略带水果香味者为佳。
凡有刺鼻的酸味，则表示含有醋酸较多，品质较次。
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库霉烂腐败并带有丁酸味（臭）者为劣等，不宜喂家畜。
换言之，酸而喜闻者为上等，酸而刺鼻者为中等，臭而难闻者为劣等。
质地 : 品质好的青贮饲料在窖里压的非常紧实，拿到手里却是松散柔软，略带潮湿，不粘手，茎、叶、花仍能辨认清楚。
若结成一团，发粘，分不清原有结构或过于干硬，都为劣等青贮料。
四、实习作业完成本次实习报告。
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四、试验中注意的问题
所测溶液应该根据pH进行稀释，否则 不能准确的测出青贮料的乳酸含量。 在加对-羟基联苯时不要加到试管壁上。 在比色前将试管中的溶液摇匀。
将试管放入30℃恒温水浴中30min,形成颜色。 在各试管中加入6ml浓硫酸（把试管放在冷水中， 加完摇匀），然后放入沸水浴中煮沸5分钟。 取出试管用冷水冷却，各加入0.2ml对-羟基联苯试 剂。 将试管放入30℃恒温水浴中30min,形成颜色。
Hale Waihona Puke 步骤再把试管放入沸水浴中煮沸1.5min，取 出冷却。 在560nm处比色。 标准曲线：18支试管分为6组，每组3支， 分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8， 1.0ml浓度为10ug/ml乳酸钙溶液，不足 10ug/ml ，
实验四青贮饲料乳酸含量的测定
一、实验所用仪器及试剂 1、仪器
分光光度计，30℃恒温水浴锅， 大试管（12支）， 标签纸， 移液管（枪）（2支），200ml烧杯，试管架，沸 水浴，滴管
2、试剂 ⑴20%硫酸铜溶液 20%硫酸铜溶液 20%硫酸铜溶液：称取20克硫酸铜（CuSO4.5H2O,特 级）用100ml蒸馏水溶解。 ⑵对-羟基联苯试剂：p-Hydroxydiphenyl（特级）， 对 羟基联苯试剂： 称取1.5g对-羟基联苯用浓度为5%(W/V)氢氧化钠溶 液20ml溶解（如果必要的话，进行加温溶解），溶 液透明，如果不透明，说明试剂不合格，不能用于 分析。进一步用100ml 的蒸馏水进行稀释后，冷藏 保存备用。 ⑶ 5%氢氧化钠: 称取5g 氢氧化钠溶于100ml的蒸 5%氢氧化钠 氢氧化钠: 馏水 ⑷浓硫酸 ⑸乳酸钙标准溶液：10ug/ml。 乳酸钙标准溶液： 乳酸钙标准溶液 10ug/ml。
二、试验步骤 青贮饲料浸出液1ml用蒸馏水进行稀释（50或100
或200ml），稀释浓度根据青贮料的乳酸含量决定 （用pH来预测稀释浓度）。 取1.0ml稀释后的待测液放入试管中，滴一滴 20%CuSO4 溶液摇匀。 在各试管中加入6ml浓硫酸（把试管放在冷水中， 6ml 加完摇匀），然后放入沸水浴中煮沸5分钟。 取出试管用冷水冷却，各加入0.2ml对-羟基联苯试 剂。
1.0ml者加蒸馏水，重复上述步骤。根据浓度 与吸光度值得出标准曲线。
三、计算方法
将待测液所得的吸光度值带入标准曲线中， 得出乳酸的浓度，然后根据浸出液所取得 样品重量以及加入水的重量，计算出青贮 料单位干物质中含的乳酸量。 LA (g/kg DM)= =所得乳酸浓度×稀释 倍数/1ml待测液所对应的干物质量