超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展
超广谱β-内酰胺酶研究进展论文
超广谱β-内酰胺酶研究进展【摘要】超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, esbls)是一类主要由革兰氏阴性杆菌产生，表现为对β-内酰胺类抗生素具有高度水解能力的特异性酶。
现阶段产esbls细菌引起的感染已趋于流行性，并且其耐药率逐年增高，为临床治疗带来极大的困难。
本文就近几年超广谱β-内酰胺酶及中药酶抑制作用的研究进展做一综述。
【关键词】esbls；细菌；研究进展【中图分类号】r446.5 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）08-0571-03the research progress on extended-spectrum β-lactamasesguo wei-hua,ma yong-bin,chen si-min（1. panzhihua central hospital of sichuan, panzhihua 610075, china,;617067）2.pharmacy college，chengdu university of traditional chinese medicine；the ministry of education key laboratory of standardization of chinese herbal medicine；state key laboratory breeding base of systematic research, development and utilization of chinese medicine resources, chengdu 610075, china）【abstract】extended-spectrum is a kind of composed mainlyof gram negative bacillus produces, for the performance of beta lactam antibiotics have a high degree of hydrolysis ability of the specificity of the enzyme, and the production of esbls infections caused by bacteria has become popular and its resistant rate increased year by year, brings great difficulties for clinical treatment. in recent years extended-spectrum review the progress in the research of.【key words】esbls；bacterium；research progreess超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,esbls)是一类主要由革兰氏阴性杆菌产生，表现为对β-内酰胺类抗生素有高度水解能力的特异性酶。
ESBLS的鉴定
超广谱β-内酰胺酶（ESBL）测定作者：陈东科文章来源：《2005细菌耐药性监测培训班》点击数：更新时间：2005/9/19 单纸片扩散法（初筛试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、氨曲南(Aztreonam,ATM)、头孢泊肟(Cefprozil,CPD)纸片，置35℃过夜培养，若抑菌环直径CAZ≤22mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm、ATM≤27mm、CPD≤22mm时可疑为产ESBLs菌株。
双纸片协同法（初筛试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，把含10μg/片克拉维酸纸片（Clavulanic Acid，CLA）贴于MH平板中央，于克拉维酸纸片周围分别贴上头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、头孢泊肟纸片（纸片中心距离为20~24mm），置35℃过夜培养，观察有无协同现象，CLA与任何一种ESC（超广谱β-内酰胺类抗生素）有协同现象者可疑为产ESBL菌株。
双纸片协同法（初筛试验）双纸片增效法（确认试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、头孢曲松/克拉维酸、氨曲南/克拉维酸、头孢泊肟/克拉维酸纸片，置35℃过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径≥5mm，即为ESBL阳性。
双纸片增效法（确认试验）（续上）双片增效法（确认试验）（续上）稀释法（确认试验）琼脂稀释法：（略）肉汤稀释法：（略）Etest法：稀释法判断标准：加克拉维酸MIC值较未加克拉维酸MIC值小8倍以上（即<3个稀释度），即为ESBLs阳性。
以下图片为Etest法三维纸片法（初筛试验）方法：将0.5麦氏单位的标准大肠杆菌A TCC 25922菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，贴一片三代头孢菌素纸片（为待检菌耐药）于MH平板中央，用无菌纸片沾取待检菌贴在距抗生素纸片5mm处，置35℃过夜培养。
超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展
超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,且能被克拉维酸抑制。
ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生,以肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希菌为代表。
ESBLs基因由质粒介导,可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散,给临床抗感染治疗造成极大的困难。
目前,ESBLs已成为细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要原因。
1.ESBLs类型自1983年德国学者首次从臭鼻克雷伯菌中发现了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)SHV-2[1]以来,ESBLs种类已超过200多种。
其类型可以分为TEM 型、SHV型、OXA 型、CTX-M 型、其它型等5类。
其中TEM 和SHV型酶是临床较常见的。
1.1 TEM 型ESBLs:最早发现的TEM-3型对头孢噻肟耐药[2]2005年发现的TEM-94[3]对头孢泊肟和头孢噻肟耐药。
还有小部分是抑制剂耐药性酶(IRT)。
2005年F.Robin等[6]报道了一种新型的抑制剂耐药性酶TEM-109(CMT-5),它同时具有TEM-6的特性和TEM-33(IRT-5)对抑制剂的耐药性它代表了一种新型ESBLs的出现。
1.2 SHV 型ESBLs:SHV家族中第一个SHV型ESBLs是SHV-2。
SHV-2发生了Gly-238-Ser位点的突变,增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力。
卢月梅等[4]同对新型β-内酰胺酶SHV-59的研究发现,其发生了A1a 134-Val和Pro 269-ku位点的变化,携带SHV-59基因的菌株对氨苄西林／舒巴坦耐药,对头孢噻肟中介,对其他药物均敏感。
1.3 OXA 型ESBLs:对酶抑制剂均耐药或仅低度敏感,特别是对青酶烷类抗生素（包括苯唑西林及相关复合制剂）有高度水解活性[5],主要涉及铜绿假单胞菌[6]和鲍氏不动杆菌[7-8]。
产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展
产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展【摘要】产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌是一种临床常见多重耐药菌，可引起呼吸系统、泌尿系统等感染，在我国，大肠埃希菌的产ESBLs发生率约为45%左右，不同国家及地区存在明显差异性。
有研究显示，产ESBLs大肠埃希菌是导致易感人群感染的关键因素，同时也是医院内传播的主要病原菌，应引起广大医务工作者广泛重视。
为此，本院将具体对产ESBLs大肠埃希菌的流行病学特点、耐药现状、耐药机理、治疗药物做如下综述，以期为临床提供参考。
【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;治疗进展DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2019.23.103产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum β-lactamase， ESBLs）大肠埃希菌是指能够产生灭活β-内酰胺类抗菌药物的大肠埃希菌，该菌可水解青霉素类、头孢菌素类、氨曲南等抗菌药物，有着较快通过质粒传播耐药基因的速度，为临床治疗带来较大困扰。
本文将对相关内容具体作如下综述。
1 产ESBLs大肠埃希菌的流行病学特点产ESBLs大肠埃希菌可通过尿液标本、血液标本、呼吸道标本检测出。
在医院中诸多科室均有分布，包括重症加强护理病房（ICU）、儿科、妇产科、泌尿外科等。
通常来说，高龄、免疫力低下、住院时间长、长时间应用广谱抗菌药物以及长时间应用糖皮质激素者与有创呼吸机辅助呼吸者是产ESBLs大肠埃希菌的高危感染人群。
因此，基于以上高危因素分布特征，需要结合具体情况尽早建立并实施耐药菌防控策略。
2 产ESBLs大肠埃希菌的耐药现状相关研究显示，产ESBLs大肠埃希菌对不同药物有着不同的耐药率，其中对第3代头孢菌素的耐药率为55.4%，对喹诺酮类药物的耐药率为50.0%，对碳青霉烯类药物的耐药率较低，即1.3%[1]。
因此，上述数据表明了产ESBLs大肠埃希菌对临床常用的抗菌药物均有较高的耐药水平。
超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析
超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析莫志航;宁炎【摘要】目的了解临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的发生率、耐药性,以便于对ESBLs进行监测和治疗.方法对102株E.coli和78株K.pneumoniae采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)规定的ESBLs表型筛选和确证试验确定ESBLs的发生率,并检测产ESBLs的E.coli 和K.pneumoniae的耐药性.结果 13.7％ (14/102)的大肠埃希菌和26.9％ (21/78)的肺炎克雷伯菌产ESBLs;产ESBLs菌株对亚胺培南耐药率为0％,除对阿米卡星、头孢西丁、替卡西林/克拉维酸联合酶抑制剂耐药率较低外,对三代头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类药物均出现较高耐药.结论对产ESBLs菌株引起的感染,亚胺培南为首选.%Objective To investigate the prevalence of strains producing extended spectrum beta-lactamases (ESBLs) among Escherichia coil and Klebsiella pneumoniae, and to determine the drug resistance of the strans for better control and treatment of ESBLs. Methods One hundred and two strains of E. coli and 78 strains of K. pneumoniae were investigated for production of ESBLs by phenotypic screening and confirmatory test provided by the NCCLS. The drug resistance of ESBLs-producing strains was also investigated. Results 13.7% (14/102) of E. coli and 26.9% (21/78) of K. pneumoniae investigated were found to produce ESBLs. All ESBLs-producing strains were found to be susceptible to imipenem, relatively lowly resistant to of amikacin, cefoxitin, cefoperazone/β-lactamase inhibitor com-binations, and highly resistant to third generation cephalosporins, sulfonamides and quinolones. Conclusion Imipen-em isthe premium antibiotics for the treatment.of infection caused by ESBLs-producing strains.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)018【总页数】2页(P78-79)【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;肺炎克雷伯菌;耐药性【作者】莫志航;宁炎【作者单位】增城市新塘医院检验科,广东增城511340;增城市新塘医院检验科,广东增城511340【正文语种】中文【中图分类】R446超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生，能水解青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素，从而使之失效[1]。
两种筛选超广谱β-内酰胺酶方法的比较
两种筛选超广谱β-内酰胺酶方法的比较超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是指由质粒介导产生的能赋予细菌对多类β-内酰胺类抗生素水解的一类酶，该酶能被棒酸等抑制剂抑制。
由于许多产生ESBLs菌株为革兰阴性杆菌，临床以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出ESBLs较高。
我们采用双纸片协同试验和E-test法对产生ESBLs大肠埃希菌进行了比较测定，现报告如下。
1．材料与方法1.1材料1.1.1 菌株实验用大肠埃希菌50株，其中产生ESBLs25株，ESBLs阴性25株。
菌株鉴定和药敏实验确认均采用 Vitek32系统，为生物梅里埃公司产品，大肠埃希菌(Ecoli)质控菌株为ATCC25922、产ESBLs酶Ecoli为ATCC35218。
1.1.2 药敏纸片头孢三嗪、舒普深、头孢他啶、阿莫西林/棒酸(20μg／10g)、氨曲南、头孢噻肟、头孢哌酮。
1.1.3 MH肉汤和MH琼脂1.2方法1.2.1 抗生素敏感性试验纸片扩散法按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐标准实施。
1.2.2 双纸片协同试验按常规氏片扩散法在MH上涂布好受试菌，先在平板中心贴上阿莫西林／棒酸纸片，而后在其上下左右贴30μg片头孢三嗪、头孢哌酮、头孢他啶和氨曲南纸片，各纸片中心距复合剂纸片中心为30mm或20mm，35℃卵育18～20h。
结果解释，如周围4个药敏纸片中有任何一个抑菌环在靠近复合剂纸片一侧的边缘出现扩大或加强，说明该菌产ESBLs。
1.2.3 E-test法E-test法试剂条含有两个梯度浓度，一端是头孢他啶(0．5～32μg/ml)，另一端是头孢他啶(0．125～8μg/ml)+4μg/ml棒酸。
如单独头孢他啶MIC与头孢他啶+棒酸MIC比值>提示菌株产ES- BLs。
4种方法检测结果菌株有差异，重复试验，仍是相同结果，才作为统计数据。
2．结果2.1双纸片协同试验25株中检出23株产ESBLs的菌株，有2株产ESBLs菌株未被检出，25株ESBLs阴性株中，有1株假阳性结果。
产超广谱β-内酰胺酶细菌的检测及耐药性分析
［３］ 郑于剑．我院胆道感染和术后腹腔感染的病原菌及
其药物敏感性［ Ｄ］ ．广州：南方医科大学，２００９：４９．
［４］ 王雷．五倍子等 １１ 味中药对产 ＥＳＢＬｓ 大肠埃希菌体
苷类、喹诺酮类、青霉素族、磺胺药的敏感率为 ７５％ ～ ９６％ ，抗
外抗菌效果研究［ Ｄ］ ．西安：陕西中医学院，２００９：１－３４．
［６］ 李世文，康满珍．当代骨伤科妙方［ Ｍ］ ． 河南：河南科
学技术出版社，２０１７：２０９．
［７］ 李非，李丽，许强强． 悬吊运动联合弹拨经筋治疗腰
可以促进和协调机体脏腑的功能活动。 《 素问·上古天真
背肌筋膜炎的临床观察［ Ｊ］ 康复学报，２０１７，２７（３） ：１８－２２．
蠹。”均强调运动的重要性。 五禽戏属古代导引术之一，它要
伯菌和大肠埃希菌的耐药性［ Ｊ］ ． 中华检验医学杂志，２０００，
院分离的产 ＥＳＢＬｓ 细菌多重耐药现象比较严重，对庆大霉
阿米卡星耐药较高；对呋喃妥因耐药性较低；对亚胺培南全
部敏感如上表所示，２５ 株产 ＥＳＢＬｓ 细菌药敏结果。 本组资
料中未测出伊米配能耐药株，但目前临床使用伊米配能较为
广泛，应继续雅尼检测，警惕伊米配能耐药株的出现。
捷、准确地 检 测 出 产 ＥＳＢＬｓ 菌， 有 助 于 控 制 其 播 散 与 暴 发
［５］ 戴玮，罗鹏，张莉萍．７２６ 株肺炎克雷伯菌的分布特征
尕藏加，青海省果洛州玛沁县拉加镇中心卫生院主管检
四、 结语
综上所述，产 ＥＳＢＬｓ 的细菌具有较高的交叉耐药性和多
（ 上接第 ７４ 页）
效明显高于对照组，差异有统计学意义（ Ｐ＜０．０５） ，见表 １。
ＥＳＢＬｓ 菌株，探讨其耐药性是非常重要的。 为了对防止产超
产超广谱β—内酰胺酶大肠埃希菌感染的预防与控制
产超广谱β—内酰胺酶大肠埃希菌感染的预防与控制目的：分析产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌感染情况，为临床预防控制ESBLs大肠埃希菌感染提供可参考的依据。
方法：分析产ESBLs大肠埃希菌患者情况，根据卫生部门制定的医院感染诊断标准判断，并按照感染患者抗菌药物临床的使用分类。
结果：检出ESBLs大肠埃希菌主要分布科室为重症医学科、泌尿外科，感染部位主要为泌尿道、下呼吸道，医院感染病例33例，占ESBLs大肠埃希菌检出率31.7%。
结论：为了有效防控感染发生，应根据ESBLs 大肠埃希菌感染情况，采取相应措施，有效减少病菌感染。
标签：超广谱β-内酰胺酶；大肠埃希菌；预防与控制大肠埃希菌是临床感染常见病原菌，近年来随着抗菌药物广泛和不规范的使用，产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-lactamase，ESBLs）的大肠埃希菌在医院内引起感染日益增多，增加了医院感染防控的困难。
本研究分析了ESBLs大肠埃希菌感染情况，并提出了相应的防控措施，现总结如下。
1资料与方法1.1临床资料分析研究我院2013年血液科、呼吸内科、普外科、泌尿科、重症医学科检出的产ESBLs大肠埃希菌的104例患者，回顾性分析临床资料。
1.2方法通过我院自制ESBLs大肠埃希菌感染病例调查表，收集患者的一般临床资料、侵入性操作、手术情况、抗菌药物应用情况，并统计2013年ESBLs 大肠埃希菌感染情况。
1.3评价标准根据卫生部门制定的医院感染诊断标准判断，并按照感染患者抗菌药物临床的使用分类。
2结果2.1产ESBLs大肠埃希菌检出情况医院微生物室检出产ESBLs大肠埃希菌104例，男性64例，女性40例，年龄为6～80岁。
检出产ESBLs大肠埃希菌主要分布科室为：重症医学科32例（308%），泌尿外科29例（279%），普外科24例（23.1%）。
感染部位主要为：泌尿道32例（308%），下呼吸道30例（288%），结果见表1。
大肠埃希菌耐药性研究进展
大肠埃希菌耐药性研究进展摘要：综述了大肠埃希菌耐药性研究进展，分析其生物学特性、分布规律、实验研究进展、细菌耐药机制、药敏结果及抗菌药物使用情况。
总结细菌主要耐药机制：抗菌药物作用靶位改变；产生灭活酶使抗菌药物失活；降低细菌外膜通透性；影响主动外排系统；细菌生物被膜耐药屏障。
在抗菌药物的临床应用中，应以药敏实验结果为基础，结合相关抗菌药物的代谢动力学特点与PK/PD参数制定合理的给药方案，对防止耐药菌的产生，降低不良反应的发生率，减轻患者的医疗负担具有重要作用。
关键词：大肠埃希菌；细菌耐药；感染因素[Abstract]This is a review of research progress in STEC’s drug resistance and makes analysis of its biological characteristics，regularities of distribution，research progress of experiment，bacterial resistance mechanisms，drug susceptibility results，service condition of antibacterial agents，etc.The main resistance mechanism include following tips：Antibacterial drugs targeted to change，produce inactivated enzyme inactivation antimicrobial drugs，reduce bacterial outer membrane permeability，affect the active efflux system，bacterial biofilm resistance barrier.In the clinical application of antibacterial agents，the dosage regimen should be based on the drug sensitive experiment results and combined with the kinetics characteristics of related antibacterial agents and its PK/PD parameters.Then，the generation of drug-resistant bacteria could be well prevented，the incidence of adverse reactions could be reduced，and so does the medical burden of patients.[Keywords]STEC（Escherichia coli），Drug-resistance，Infection factors大肠埃希菌（EC0）是临床感染中最常见的革兰阴性杆菌，也是医院感染最常见病原菌，可引起人体各部位感染，以尿路感染为主。
ESBLs的研究进展
ES BLs 的研究进展张 剑1 杜英姿1 王能一1 刘永杰2 胡志东31(山东省淄博市临淄区人民医院检验科,淄博255400)2(陕西省出入境检验检疫局,陕西710068)3(天津医科大学总医院检验科,天津300203) 超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta -lactamases ,ES BLs )是由质粒介导的能赋予细菌对多种β-内酰胺类抗生素和单酰环类抗生素耐药的一类酶,它主要由革兰阴性细菌产生,可来源于T BM 和SHY 酶(由于其固有序列的基因点突变导致),该酶最早发现于肺炎克雷伯菌中[1],可水解头孢菌素及单酰胺类抗菌药物,特别表现在对头孢噻肟、头孢他啶利氨曲南的耐药[2],并可引起对氨基糖苷类等抗菌药物的多重耐药.产ES BL 要的医院耐药问题之一,本文就其分型及耐药机制作一综述。
1 β-内酰胺酶分类 β-内酰胺酶种类较为复杂,几乎所有的肠杆菌细菌其β-内酰胺酶阳性,到目前已发现有二百多种。
对它的分类方法有多种,而主要分类方法有二种:一种为分子生物学的分类,根据末端氨基酸序列及编码基因的位点来分,可分为四类:A 类,丝氨酸酶,由质粒编码。
B 类,金属酶,由染色体编码。
C 类,丝氨酸酶,由染色体编码。
D 类,丝氨酸酶,由质粒编码[3]。
另一种为临床上较为实用的分类方法,即1989年Bush 创建的方法[4],此分类方法是根据各种酶的等电点、水解底物、是否被克拉维酸抑制及酶的分子结构类别来分,分成五类:①CEP -N 酶,②PE N 叫酶,③BS D -Y 酶,④E BS Y 酶ES 2BLS (超广谱酶),⑤金属酶。
表1 两种分类方法间关系及酶的主要作用底物如下表β-内酰胺酶种类Bush 方法分子生物方法水解底物种类①CEP -N 酶(头孢曲素酶)C 类酶(G roupl )能水解头孢菌素,对青霉素水解作用很弱,不能被棒酸等抑制②PE N -Y 酶(青霉素酶)A 类酶(G roup 2a )主要水解青霉素,能被棒酸(克拉维酸)所抑制③BS D -Y 酶(广谱酶)A 类酶(G roup2b )能水解青霉素类和头孢菌素类,能被克拉维酸抑制④E BS -Y 酶(超广谱酶)A 类酶(G roup 2b )能水解耐酶的头孢菌素、单酰胺菌素等,能被克拉维酸、舒巴坦所抑制⑤金属酶(金属β-内酰胺酶)B 类酶(G roup 3)能水解包括碳青霉烯类的一大类β-内酰胺类抗菌素,对酶抑制剂敏感性差2 ES BL 的分类及分型 超广谱β-内酰胺酶(ES BLs )是以能灭活窄谱和广谱头孢菌素、单酰环类抗生素及革兰阴性细菌等抗生素为特征的β-酰胺酶,属于Ambler 分类的A 类,按Bush 分类属2be 群[3]。
CTX—M型超广谱β-内酰胺酶研究进展
CTX—M型超广谱β-内酰胺酶研究进展冯建昆;吕婧玉;冯建英;张海清【摘要】近年来，由于第三代头孢菌素和单环β-内酰胺抗菌药物的开发和广泛使用，许多细菌产生质粒介导的能水解头孢噻肟等第三代头孢及氨曲南等单胺类抗生素的超广谱β-内酰胺酶（extended—spectrum D—lactamases，ESBLs），尤其是CTX-M型ESBLs，呈逐年增加的趋势，目前在世界各地广泛、快速地传播，甚至在局部地区出现爆发流行。
本文就CTX-M型ESBLs的起源、流行病学、遗传特性和遗传背景进行综述。
【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2012(037)006【总页数】4页(P4-6,17)【关键词】CTX-M型ESBLs;流行病学;遗传特性;遗传背景【作者】冯建昆;吕婧玉;冯建英;张海清【作者单位】河南农业大学牧医学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医学院,河南郑州450002;鹤壁市畜牧局,河南鹤壁458030;鹤壁市畜牧局,河南鹤壁458030【正文语种】中文【中图分类】S816.73CTX-M型ESBLs的结构基因有876个核苷酸，编码291个氨基酸，分子量为28kD（Toho-2除外，它由289个氨基酸残基组成）。
已发现的这些CTX-M型ESBLs的等电点(pI)范围为7.4～9.0[1]。
另外，TEM型和SHV型ESBLs是在广谱酶TEM-1、2和SHV-1的基础上发生1～4个氨基酸的突变而来，而CTX-M型ESBLs没有相应的广谱酶基础，目前认为其超广谱活性可能是其本质特征而不是几个位点突变的结果。
据有关报道，CTX-M型和TEM型或SHV型的同源性较低，仅为40%[2]。
目前发现的的CTX-M型ESBLs种类超过107种，根据其氨基酸序列的差异（大于94%的相同序列认为是一个群，小于90%的相同序列认为是不同的群）分为5个群[3]：CTX-M-1 群包括 CTX-M-1、CTX-M-3、CTX-M-10、CTX-M-12、CTX-M-15、FEC-1、CTX-M-22、CTX-M-23、CTX-M-28、CTX-M-55 和 CTX-M-79；CTX-M-2 群包括CTX-M-2、CTX-M-4、CTX-M-4L、CTX-M-5、CTX-M-6、CTX-M-7、CTX-M-20 和 Toho-1；CTX-M-8 群包括CTX-M-8；CTX-M-9 群包括 CTX-M-9、CTX-M-13、CTX-M-14、CTX-M-16、CTX-M-17、CTX-M-19、CTX-M-21、CTX-M-27、Toho-2 和 CTX-M-24；CTX-M-25 群包括CTX-M-25和CTX-M-26。
产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药分析
产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药分析摘要】目的监测并分析我院2010年1月至2012年12月间临床分离的2341株大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及耐药变化,为临床合理使用抗菌药物提供依据。
方法对分离的2341株大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,用筛选和确证试验确认产ESBLs菌株,用WHONETS.5软件进行数据分析。
结果 1807株大肠埃希菌产ESBLs的有982株,占54.3％; 534株肺炎克雷伯菌产ESBLs的有206株,占38.6％.产ESBLs菌株的耐药性显著高于非产ESBLs菌株(P＜0.05),产ESBLs菌株呈多重耐药。
结论三年来产ESBLs菌的检出率与耐药率呈总体上升趋势,在抗感染治疗过程中,临床应根据药敏结果合理选择抗菌药物,特别是加强对产ESBLs菌株及其耐药性监测,以减缓细菌耐药性的产生。
【关键词】大肠埃希菌肺炎克雷伯菌 ESBL 耐药性大肠埃希菌和肺炎克雷伯氏是社区和医院获得性感染常见的致病菌，临床抗生素的不合理使用往往导致其在抗生素的选择性压力作用下获得并维持耐药性，通过质粒、整合子等多种介质在相同或不同种属之间传播转移，感染的多重耐药情况日益严重，对β-内酰胺类、氨基糖普类、哇诺酮类抗生素的耐药尤其明显，给临床治疗带来很大困难。
现将本院3年来分离的株大肠埃希菌氏和肺炎克雷伯氏的耐药情况和产ESBLs作一分析,以期为临床感染治疗提供有效的实验依据,报告如下：1 材料与方法1.1标本来源：取自2010年1月～2012年12月本院门诊及住院患者各类标本,包括痰液、尿、脓液、胆汁、血液、白带等。
1.2采用法国生物梅里埃ATP细菌分析仪和配套ID32E鉴定卡。
1.3 药敏实验：18种抗生素纸片由英国Oxoid公司提供。
用纸片扩散法(K-B)法进行常规药敏检测, 药敏结果判断及质量控制采用美国NCCLS2012年标准。
ESBLs及AMPC的检测及研究进展
ESBLs及AMPC的检测及研究进展一、ESBLs及AMPC的定义及分类（一）定义：ESBLs：超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是一类新的β-内酰胺酶（BLA），属Bush分类中的2be类酶，主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属，能水解三代头孢如头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟和单环酰胺类氨曲南，并被克拉维酸抑制。
AmpC酶：是染色体或质粒介导的头孢菌素酶，能水解三代头孢及单环酰胺类，不被CLA 抑制剂和头霉素类抑制，能被四代头孢、碳青霉烯类抑制。
产ESBLs+AmpC酶株对三代头孢、单环酰胺类、头霉素类及含酶抑制剂、四代头孢均高度耐药，可用碳青霉烯类及在药敏试验敏感的氨基糖苷类或氟喹诺酮类。
（二）分类：ESBLs：按照BUSH的分类方法分为1-4组：一组由染色体编码的头孢菌素酶（C类酶）；二组由质粒介导的A类酶；三组由染色体介导的金属酶及四组由染色体介导的青霉素酶。
AmpC酶按其产生的方式3类:诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶二、全国及宁波市感染状况全国30-40%，宁波市66%多，宁波市真实数据应没有这么高。
三、ESBLs及AMPC的检测ESBLS的检测（一）筛选试验头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或头孢曲松（每片含量均为30微克），用M-H琼脂标准纸片扩散法测试抑菌环直径，按NCCLs（美国标准临床试验室标准委员会）标准进行判读，头孢泊肟和头孢他啶的抑菌圈均<=22毫米、氨曲南或头孢噻肟<=27毫米或头孢曲松<=25毫米，应高度怀疑为ESBLS菌株，进一步做确证实验。
（二）确证试验头孢他啶（30微克）、头孢他啶加克拉维酸（30微克和10微克）、头孢噻肟（30微克）头孢噻肟加克拉维酸（30微克和10微克），分别测量两种纸片单独及加克拉维酸的抑菌圈直径，大于等于5毫米可确认为ESBLs菌株。
AMPC的检测（一）表型筛选试验：采用K-B法，用头孢西丁检测受试菌，抑菌圈直径<18毫米为AMPC酶可疑阳性。
CTX-M型β-内酰胺酶的研究进展
CTX-M型β-内酰胺酶的研究进展李金钟;刘利平【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2007(028)006【摘要】CTX-M型酶是流行最广泛的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),迄今已发现64种.其特点是主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对头孢噻肟的水解活性高于头孢他啶,对他唑巴坦的敏感性高于克拉维酸和舒巴坦.但近年已发现一些对头孢他啶高水平耐药的CTX-M型酶,如CTX-M-15、-16、-23、-27和-32型等.应用头孢他啶治疗产CTX-M型ESBLs菌株引起的感染可能导致失败,并可能对产生新的耐头孢他啶CTX-M型酶起到促进作用.因此,了解CTX-M型β-内酰胺酶的特点,对指导临床抗感染治疗、研究耐药菌株的流行特征、探讨其耐药机制等均具有重要意义.【总页数】4页(P543-545,548)【作者】李金钟;刘利平【作者单位】050700,河北省新乐市医院检验科;050700,河北省新乐市医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.9【相关文献】1.肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β-内酰胺酶基因型的关系 [J], 蔡琰;范昕建;吕晓菊;陈文昭;俞汝佳;戚超2.肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性 [J], 应华永;徐瑞龙;胡付品;卜黎红;朱德妹;王明贵3.肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β内酰胺酶基因型的关系 [J], 蔡琰;范昕建;吕晓菊;陈文昭;俞汝佳;戚超4.产ACT-2型头孢菌素酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及携带Ⅰ类整合子的大肠埃希菌 [J], 叶英;高建国;李家斌5.CTX-M型超广谱β-内酰胺酶研究进展 [J], 刘保光; 栗俞程; 汪保英; 白明; 苗明三; 许二平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
革兰阴性杆菌耐药性检测进展
2、三维试验
• 什么叫三维？ • 纸片上的药物向培养基中扩散为一维。 • 琼脂平板上的细菌产生的抗药性酶向培 养基中扩散是二维。 • 在纸片旁边的琼脂刻一裂缝，在其中加 入受试菌液，该菌产生的抗药性酶向四 周的琼脂中扩散是第三维。
2、三维试验有2种方法
• 直接法（用同一菌株）
• 间接法（用不同菌株）
（四）ESBLs种类
• ESBLs现有TEM、SHV、CTX酶，CTX 酶为一种新型酶。 • 1、TEM酶有90多种其中ESBLs63种， IRT23种，有些TEM酶有替代名称，如 TEM-5为CAZ-1，TEM-8为CAZ-2， TEM-16为CAZ-7，TEM-25为CTX-2， TEM-35为IRT-4等。
ESBLs菌株的检测方法
• 目前检测ESBLs菌株有几种方法（除外 分子学方法）都共同应用一个原理，即 头孢类抗生素与ß-内酰胺酶抑制剂克拉 维酸联合应用，克拉维酸抑制ESBL，细 菌对头孢类抗生素减少耐药性。具体检 测方法有：
1、双纸片协同法
• 按照标准纸片扩散法操作，在测试菌涂布在M-H 琼脂平版上后将含克拉维酸（棒酸）的阿莫西林 纸片贴在平板中央，然后在其周围分别贴上头孢 他定（CAZ）、头孢噻肟（CTX），氨曲南 （AZT）纸片，与含棒酸纸片距离为15mm-20mm （纸片边缘到边缘），放置35℃18h，出现协同现 象为ESBLs菌株。在检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯 菌时用CTX和AZT较CAZ易于观察结果，试验中 发现阴沟肠杆菌中产ESBLs菌株用CAZ优于CTX。 因此检测产ESBLs菌株时最好同时使用CAZ和CTX 以利于提高检出率。
• 3.外膜存在着药物泵出系统（Tet膜蛋白 介导）使进入菌体内的药物主动泵出导 致菌体内药物浓度降低，如对四环素类 和喹诺酮类耐药等。
产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展
产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展内酰胺酶（β-lactamases）是一类具有广泛生物学功能的酶，可以水解含有β-内酰胺环的抗生素，例如青霉素类和头孢菌素等。
β-内酰胺酶产生的主要来源是细菌基因的水平转移和突变，已经成为临床使用的β-内酰胺类抗生素（β-lactam antibiotics）效果的主要制约因素之一。
大肠杆菌（Escherichia coli）是一种持续造成严重卫生问题的革兰氏阴性菌，其产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）已成为全球性的问题。
ESBLs可耐受目前临床使用的头孢菌素类、氨基酚甲氨苄、氟喹诺酮类等多种抗生素，极大地限制了临床治疗方案的选择。
ESBLs引起的感染主要包括尿路感染、呼吸道感染、腹泻、败血症和外伤感染等，并常常引起严重的医院感染。
治疗多依赖于碳青霉烯β-内酰胺酶类抗生素，如头孢他啶/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南等，这仅仅是改善了治疗效果，而不是根治疾病。
对ESBLs大肠杆菌感染的治疗正面临着巨大的挑战。
近年来，产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展主要集中在四个方面。
一是合理应用抗生素。
良好的医疗卫生措施是预防感染和控制感染的最佳策略，然而如遭遇感染，合理用药也是有效的防治方法。
避免不必要的抗生素使用，将有效的抗生素应用于针对感染病原菌的敏感性检测，严格遵守抗生素的使用药理学原理，可以减少抗生素产生的选择压力，从而减少细菌的耐药性产生。
二是探寻新型抗生素。
目前，在产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗中，除了碳青霉烯类抗生素，还有其他的抗生素类别可以应用。
如氨糖苷类抗生素、磺胺类、四环素类等，虽然这些药物在治疗ESBLs感染时使用的机会较少，但它们对细菌产生的选择压力也比碳青霉烯类抗生素要小。
此外，还有一类叫生物制剂的治疗手段，如细菌溶解素（lysin）和噬菌体（phage）等，它们可分别通过降解细胞壁和杀死感染细胞来达到控制感染的效果。
但这些治疗方法还在研究阶段，其成果尚需进一步验证。
超广谱β-内酰胺酶检测方法研究进展
后， 外不断有ESBb 流行情况的报道问。 国内 目 前， 大肠埃希氏菌、 肺炎克雷伯菌是最常见的产 ESBL 的细菌， S 其次是阴沟肠杆菌、 粘质沙雷氏 菌、 弗劳地构椽酸菌、 铜绿假单抱菌也可出现产 ES L 的菌株。 Bs 近年来， 由于三代头抱的广泛应 用， 产ESB玩菌株的发生率越来越高， 成为革兰 阴性菌耐药的最危险因素之一， 给临床治疗感
ESBU nowada ， y
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ESBL (ex nded 叩 r m p一 a s s)即 s t e - eet u t c a m e 超广谱卜内 胺酶， 质粒介导的 酞 是由 能赋予细
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方法作一综述。
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， 双纸片协 同试验 (double disk s ner y y g test ， ) DDS 双纸片协 同试验是由法国研究者 Ja ie l r r
性杆菌一个至关重要的耐药机制， 给临床抗感染治疗带来了沉重的负担。准确、 快速地检测 E乐
B压 对指导临床抗菌治疗和控制感染尤为重要。 本文就目 前常用的 ESB肠 的检测方法进行概述。
[关键词】 ESB肠;检测
D 6 t e Ct io n o f
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超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展发表时间：2013-04-25T09:14:06.890Z 来源：《医药前沿》2013年第8期供稿作者：刘瑞菡1,2 董亮3 [导读] 产ESBLs的菌株可造成严重的医院交叉感染和院外耐药菌的扩散,甚至引起爆发流行。
刘瑞菡1,2 董亮3(通讯作者)(1武汉大学医学院湖北武汉 430000)(2孝感市中心医院检验科湖北孝感 432000) (3孝感市中心医院输血科湖北孝感 432000) 【中图分类号】R9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）08-0044-01 超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,且能被克拉维酸抑制。
ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生,以肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希菌为代表。
ESBLs基因由质粒介导,可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散,给临床抗感染治疗造成极大的困难。
目前,ESBLs已成为细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要原因。
1.ESBLs类型自1983年德国学者首次从臭鼻克雷伯菌中发现了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)SHV-2[1]以来,ESBLs种类已超过200多种。
其类型可以分为TEM 型、SHV型、OXA 型、CTX-M 型、其它型等5类。
其中TEM 和SHV型酶是临床较常见的。
1.1 TEM 型ESBLs:最早发现的TEM-3型对头孢噻肟耐药[2]2005年发现的TEM-94[3]对头孢泊肟和头孢噻肟耐药。
还有小部分是抑制剂耐药性酶(IRT)。
2005年F.Robin等[6]报道了一种新型的抑制剂耐药性酶TEM-109(CMT-5),它同时具有TEM-6的特性和TEM-33(IRT-5)对抑制剂的耐药性它代表了一种新型ESBLs的出现。
1.2 SHV 型ESBLs:SHV家族中第一个SHV型ESBLs是SHV-2。
SHV-2发生了Gly-238-Ser位点的突变,增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力。
卢月梅等[4]同对新型β-内酰胺酶SHV-59的研究发现,其发生了A1a 134-Val和Pro 269-ku位点的变化,携带SHV-59基因的菌株对氨苄西林／舒巴坦耐药,对头孢噻肟中介,对其他药物均敏感。
1.3 OXA 型ESBLs:对酶抑制剂均耐药或仅低度敏感,特别是对青酶烷类抗生素（包括苯唑西林及相关复合制剂）有高度水解活性[5],主要涉及铜绿假单胞菌[6]和鲍氏不动杆菌[7-8]。
2004年Poirel L.等首次在肠杆菌科的肺炎克雷伯菌中发现了OXA型ESBLs[9],该菌对包括碳青霉烯类在内的几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药。
1.4 CTX-M 型ESBLs：Bauerufeind等[10-11]首次报道CTX-M 型ESBLs,对头孢噻肟高水平耐药,对头孢他啶相当敏感，周建英等[12]用头孢他啶治疗产CTx-M-l4型ESBLs大肠埃希菌造成的细菌性腹膜炎时发现其治疗效果明显好于头孢噻肟,而与哌拉西林／他唑巴坦相当。
这为利用头孢他啶治疗产CTX-M型ESBLs的细菌的感染提供了试验依据。
1.5 其它类型的ESBLs：如VEB、GES、BES、CME、PER等，大多数容易水解头孢他啶,且呈区域性流行。
GES型对头孢他啶和头孢西丁耐药,BES对氨曲南、头孢噻肟和头孢他啶高度耐药,PER型主要在地中海沿岸国家流行。
2.ESBLs的检测方法产ESBLs的菌株可造成严重的医院交叉感染和院外耐药菌的扩散,甚至引起爆发流行。
所以准确检测ESBLs至关重要,及早检测ESBLs 有助于制定相应的抗感染措施,为其他的治疗和预防打下基础。
目前检测方法主要分为表型确认试验和分子生物学检测两大类。
2.1 表型确认试验：最经典的为肉汤稀释法和纸片扩散法。
二者是美国临床试验室标准化委员会（NCCLs)推荐检测ESBLs的标准方法，其主要原理是ESBLs水解第三代头孢菌素的活性可被酶抑制剂所抑制。
此后又研究出了Etest法、Vitek法、三维实验法(TD)双纸片、协同扩散法等快速简便的方法，特别是Etest法、Vitek法已经商品化，在临床上得到了广泛的应用。
2.2 分子生物学的检测：主要有PCR、核酸杂交、DNA指纹和基因序列分析。
PCR法是目前常用的检测方法；核酸杂交法过于繁复，费时费力，目前已较少应用；DNA指纹法是检测SHV变种的一种快速检测基因突变的方法，但不能确定SHV 型ESBLs的存在；基因序列分析法是基因型鉴定的标准方法,目前已可方便地进行全长基因检测。
3.对ESBLs的治疗与预防3.1 对产ESBLs菌株引起的感染的治疗:可选用碳青霉烯类抗生素,轻、中度感染町选头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／三唑巴坦，也可根据药敏结果选用头霉素类、氨基糖苷类或喹诺酮类抗菌药物。
疗效不佳时可改用碳青霉烯类抗生素，头孢他啶、头孢吡肟体外敏感性较高或感染部位浓度较高时可以选用，但需密切观察。
3.2 对ESBLs的预防:1.提高标本的送检率,早期发现多重耐药菌株,及早合理使用抗生素。
2.加强对ICU的监控,调查各科室感染ESBLs的情况,对感染产ESBLs菌的患者进行隔离,严格消毒,控制产ESBIs菌在医院内的扩散。
临床微生物实验室应快速准确检测产ESBLs菌株,及时与临床联系，减少经验用药和盲目用药,合理使用抗菌药物。
对有效地治疗疾病和控制ESBLs菌株感染具有重要意义。
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