生化试验课件实验六：胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响
血糖的测定及激素对血糖浓度的影响
通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变 化情况。
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五 分析
(1) 对家兔而言血糖正常值：2.8－5.2 mmol/L， 验证是否在此范围。 (2) 从实验结果来验证胰岛素降低血糖以及肾上 腺素升高血糖的作用。
按表操作：
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加入物（ml） 测定管（注射前） 测定管（注射后） 标准管
去蛋白血滤液
0.5
0.5
处理后的葡萄糖
0.5
空白管
标准应用液
蛋白沉淀剂
酶酚混合试剂
3
0.5
3
3
3
混匀，置37℃水浴15分钟调波长为505nm，
以空白管调零，分别读取A测A标,根据标准管法求
测定管血糖浓度。
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四 结果与计算
葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜 色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡 萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法）
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三 操作
1．准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂 （草酸钠）。
2．分组。称重：Kg，共有四只兔子，两只注射 胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法： 一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放 在天平上称重。
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二 原理
(2) 显色原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡
萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧 化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对 与色原性氧受体4－氨基安替比林偶联的酚氧 化，并与4－氨基安替比林结合生成红色醌类 化合பைடு நூலகம்。
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葡萄糖＋O2+H2O GOD 葡萄糖酸＋H2O2 4－氨基安替比林＋酚＋H2O2 POD 红色醌类 化合物 +4H2O
血糖的影响实验报告
一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 研究胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。
3. 了解血糖浓度与人体健康的关系。
二、实验原理血糖是人体内重要的能量来源，维持在一定范围内对身体健康至关重要。
胰岛素和肾上腺素是两种重要的激素，它们对血糖浓度具有调节作用。
胰岛素可以降低血糖，而肾上腺素则可以升高血糖。
本实验通过观察胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响，进一步了解血糖调节的机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：家兔两只（体重2-3公斤）。
2. 实验试剂：胰岛素（5单位/ml）、肾上腺素（0.5mg/ml）、碘酒、消毒酒精、棉球、血糖测定仪、标准葡萄糖溶液等。
3. 实验器材：注射器、剪刀、烧杯、试管、试管架、温度计等。
四、实验步骤1. 准备实验动物：选取健康家兔两只，分别称重并记录体重。
2. 实验分组：将两只家兔随机分为甲、乙两组，甲组为实验组，乙组为对照组。
3. 实验操作：a. 将甲组家兔禁食14-16小时，乙组家兔正常饮食。
b. 分别从甲、乙两组家兔的耳缘静脉抽取10ml血液，分别测定血糖浓度。
c. 将甲组家兔注射胰岛素（5单位/kg体重），乙组家兔注射等量生理盐水。
d. 注射后30分钟，再次从甲、乙两组家兔的耳缘静脉抽取10ml血液，分别测定血糖浓度。
e. 比较甲、乙两组家兔注射前后血糖浓度的变化。
五、实验结果1. 甲组家兔注射胰岛素前血糖浓度为X1，注射后血糖浓度为Y1。
2. 乙组家兔注射生理盐水前血糖浓度为X2，注射后血糖浓度为Y2。
实验结果显示，甲组家兔注射胰岛素后血糖浓度明显降低，乙组家兔注射生理盐水后血糖浓度无明显变化。
六、实验分析1. 胰岛素具有降低血糖的作用。
注射胰岛素后，家兔体内胰岛素水平升高，促进葡萄糖进入组织细胞，从而降低血糖浓度。
2. 肾上腺素具有升高血糖的作用。
注射肾上腺素后，家兔体内肾上腺素水平升高，促进糖原分解，使血糖浓度升高。
七、实验结论1. 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度具有明显的调节作用。
实验五激对血糖浓度的影响-PPT精品文档
5.注射前取血
拔毛
耳缘静脉取血法：
三棱针刺破 静脉放血
制备去蛋 白血滤液
酒精擦拭 (用手弹动）
收集于抗凝管中（约1-2mL) 边取血边摇动抗凝管
6.注射激素
胰岛素
1h
腹腔 注射
0.75U/Kg 肾上腺素
0.5h
取血（2mL） 制备去蛋白血滤液 取血（2mL） 制备去蛋白血滤液
0.5mg/Kg
抓住兔子，腹部朝上，提起腹 部皮肤，刺入皮下时有落空感，然 后缓慢注入激素
胰岛素（1U/mL）
0.75U/Kg 0.75mL/Kg 1kg兔子准备胰岛素0.75mL
肾上腺素（1mg/mL） 0.5mL/Kg 0. 5mg/Kg
1kg兔子准备胰岛素0. 5mL
4、去蛋白质血滤液制备
取2支试管，每管中取蛋白沉淀剂4mL,其中1管标
注实验前，另外1管标注实验后。 去蛋白质血滤液制备（待第5和6步结束，取全血 制备）：取全血0.2mL，加入上述管混匀，室温 放置7分钟过滤。
测定血糖的意义
临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病 的主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某 些药物的研究中，也涉及血糖的测定。
注意事项
抓取兔子时小心被兔子抓伤
试管一定要标记清楚
用漏斗过滤时，不要水润湿
用加样枪加取量要准确
无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法
测定方法
酶法：葡萄糖氧化酶法
二、实验原理
葡萄糖氧化酶法
标准管法
红色的醌类化合物颜色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在 505nm处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。
A标=C标KL
胰岛素和肾上腺素对血糖的调节
胰岛素和肾上腺素对血糖的调节（葡萄糖氧化酶法）实验目的：1.了解血糖浓度测定的原理和方法。
2.了解并验证胰岛素和肾上腺素对血糖的调节。
3.在实验中培养严谨的作风和准确进行实际操作的能力，提高分析问题的能力。
实验原理：胰岛素和肾上腺素是体内对血糖调节的激素，胰岛素是唯一降低血糖的激素。
通过对实验动物分别注射不同的激素，了解激素对血糖的调节影响。
测定血糖的原理：在PH7.0条件下,葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖生成葡萄糖酸和H2O2，后者在H2O2酶的作用下与苯酚、4-氨基安替吡啉生成红色醌类物质，在505nm处有最大吸收峰,吸光度与葡萄糖含量成正比。
实验器材：[器材]：10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴、沸水浴、冰浴、蜡笔、721-分光光度计、兔台、注射器、手术刀片。
[试剂]1.酶酚混合试剂主要成分：①葡萄糖氧化酶②H2O2酶③苯酚④4-氨基安替吡啉2.葡萄糖标准储存液（100mmol/L）3.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）取葡萄糖标准储备液5ml，置于100ml容量瓶中，加苯甲酸溶液至刻度。
4.胰岛素注射液5.肾上腺素注射液实验内容与方法：一、注射药物并取血：1.分别取2只兔子，称量体重，从耳缘静脉采血2ML 。
2.2只兔子按体重分别注射肾上腺素和胰岛素，从注射药物时开始计时，每隔30分钟取血一次，一共取血4次，每次2ML 。
二、血糖的测定1．取16×150mm 试管3支按下表进行操作：试剂（ml ） 测定管 标准管 空白管血清或血浆 0.1 — —葡萄糖标准应用液 — 0.1 —蒸馏水 — — 0.1酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.02．将上述各管混匀放入37℃水浴中加热15分钟，用波长505nm 分光光度计进行比色，空白管调零点读取测定管与标准管吸光度。
3．计算血糖（mmol/L ）= ×标准管浓度测定管吸光标准管吸光4．计算注射药物前后血糖变化情况。
实验注意事项：血清加量要准，否则会影响到结果的准确性。
实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
实验⼗⼆胰岛素、肾上腺素对⾎糖浓度的影响实验⼗⼆胰岛素、肾上腺素对⾎糖浓度的影响⾎糖是指⾎液中糖，由于正常⼈⾎液中糖主要是葡萄糖，所以⼀般认为，⾎糖是指⾎液中的葡萄糖。
正常⼈空腹⾎糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～120mg/100ml）。
⾎糖是糖在体内的运输形式。
全⾝各组织都从⾎液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视⽹膜等组织合成糖原能⼒极低，⼏乎没有糖原贮存，必须不断由⾎液供应葡萄糖。
当⾎糖下降到⼀定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从⽽影响它们的功能。
所以维持⾎糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。
⾎糖浓度的调节⾎糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在⼀整套⾼效率的调节机制，精细地控制着⾎糖的来源与去路，使之达到动态平衡。
神经系统的调节作⽤神经系统对⾎糖浓度的调节作⽤主要通过下丘脑和⾃主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响⾎糖来源与去路关键酶的活性来实现。
神经系统的调节最终通过细胞⽔平的调节来达到⽬的。
下丘脑⼀⽅⾯通过内脏神经作⽤于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另⼀⽅⾯也作⽤于胰岛α-细胞，使其分泌胰⾼⾎糖素；同时还可以直接作⽤于肝。
三⽅⾯共同作⽤的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异⽣关键酶的活性增加，糖异⽣作⽤增加，从⽽使⾎糖浓度升⾼。
下丘脑还可通过兴奋迷⾛神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作⽤于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异⽣途径，促进糖的氧化和转化，总体上使⾎糖的去路增加，来源减少，最终达到使⾎糖浓度降低的⽬的。
激素使⾎糖浓度降低的激素 :胰岛素使⾎糖浓度升⾼的激素:胰⾼⾎糖素、肾上腺素、肾上腺⽪质激素、⽣长素、甲状腺素它们对⾎糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。
在激素发挥调节⾎糖浓度的作⽤中，最重要的是胰岛素和胰⾼⾎糖素。
肾上腺素在应激时发挥作⽤，⽽肾上腺⽪质激素、⽣长激素、甲状腺素等都可影响⾎糖⽔平，但在⽣理性调节中仅居次要地位。
实验五激素对血糖浓度的影响
相对血糖浓度
光吸收法测定
7.朗伯-比尔定律
当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时， 在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度 与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。
Ａ=ＫＣＬ
标准管法测定未知样品含量
A标=KC标L A测=KC测L
A测 C 测= × C 标 A标
722G型分光光度计的使用
1. 接通电源，打开开关，调整波长。
四、实验操作
1.准备：正常家兔两只，实验前预先饥饿16h，称体重,并记录 （kg）。兔子抓取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。 2.制备抗凝管：在洁净、干燥的试管中放入一小勺抗凝剂（草 酸钠）。 3.注射前取血：一般以耳缘静脉取血，拔毛，用乙醇擦洗，使 血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧远心端用三棱针扎 破放血，将血液滴入抗凝管中，约取1~2ml，边收集边混匀， 以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。
4.注射激素：取血后，一只注射胰岛素，0.75U/kg，60min。 另一只注射肾上腺素，0.5mg/kg，30min。
注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽 无血，缓慢注入激素。
5.制去蛋白血滤液：这是注射前的血液。 制备方法：蛋白沉淀剂4ml＋全血0.2ml，混匀，室温放置7 分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血 滤液。 6.注射后取血并制备血滤液：方法同前，选择另一只耳朵，注 意做好标记。注射胰岛素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注 射25%葡萄糖注射液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克。
7.GOD-POD法测血糖：按下表操作
加入物(ml) 去蛋白血滤液
测定管 (注射前)
0.5
测定管 (注射后)
0.5
激素对血糖浓度的影响
激素对血糖浓度的影响实验四激素对血糖浓度的影响[目的]学习对家兔进行采血和注射方法，了解血糖浓度测定方法，验证激素对血糖浓度的调节作用。
[原理]激素是调节血糖浓度恒定的重要因素，其中胰岛素起降低血糖的作用，肾上腺素起升高血糖的作用。
将实验动物——家兔进行空腹采血后，分别注射胰岛素和肾上腺素，作用一段时间后再分别采血，同时观察注射激素前后的家兔血糖浓度变化，以验证激素的调节作用。
本实验测定血糖的方法采用：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶（god）将葡萄糖水解为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶（pod）和色素原性氧受体存有下，将过氧化氢水解为水和氧，同时并使色素原性氧受体5-氨基安替比林和酚回去氢酯化为红色醌类化合物，即trinder反应。
其色泽厚薄在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
其反应式如下：[试剂]1．胰岛素注射液(41单位／ml)。
2．肾上腺素注射液(1：1001)。
3．251g／l葡萄糖溶液。
4．二甲苯及凡士林。
5．肝素抗凝剂(硝酸锶2500单位／m2)。
6．葡萄糖氧化酶试剂。
7．葡萄糖标准应用液(6.6mmol／l)。
吸管，滴管，沸水浴。
[器材]1ml及10ml注射器，台式磅秤，兔紧固箱，刀片，酒精棉球及干棉球，试管及试管架，0.5ml及6ml[操作]1．动物准备及空腹采血取试管4支，编号(1)、(9)、(3)、(4)，分别加入肝素抗凝剂0.0lml。
取空腹家兔两只，分别编号1和2，过磅称重，记录体重。
可用耳静脉采血法：先剪去耳静脉处毛，再用二甲苯擦拭兔耳部静脉，使其充血，在其周围抹上凡士林以防止溶血，用刀片纵行割破边缘耳静脉，放血入抗凝管（1）和（2），约需2ml，边滴边摇，以防凝固。
或者用兔心脏采血法：将10ml注射器用肝素抗凝剂淋洗后，置家兔于兔固定箱中，固定四肢，在心尖搏动处插入，采血4ml左右，抗凝。
2．口服激素并再献血。
将l号兔皮下注射已酿制不好的胰岛素稀释液(按1.5单位／kg排序吸收至lml。
胰岛素对血糖浓度的影响实验报告
胰岛素对血糖浓度的影响实验报告实验五胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验六胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验五葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖课程名称：生物化学与分子生物学实验课年级：2004专业、层次：临床医学本科授课教师：汪宗桂职称：助教学时：3学时基本教材：自编《生物化学与分子生物学实验指导》教学目的与要求：1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。
2、掌握血糖浓度的测定方法。
3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。
4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的临床意义。
大体内容与时间安排：1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理5min2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项5min3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理5min4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项5min5、学生做实验100min教学方法：讲授式+启发式教学重点、难点：重点：1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项难点：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项一、实验原理（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响激素是调节机体血糖浓度的重要因素。
胰岛素能降低血糖，肾上腺素等激素能升高血糖。
本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后兔的静脉血，测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化，从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。
（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖本实验是葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD) 相偶联发生的偶联反应。
第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。
二、操作步骤（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响1、动物准备：取正常家兔两只，实验前预先饥饿16小时，称体重(—般为2-3kg)。
胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定刘峡汛11. 武汉科技大学医学院临床1105班湖北武汉430065[摘要]目的：观察家兔注射肾上腺素或胰岛素前后血糖水平的变化方法：采用邻甲苯胺法测血糖浓度。
结果：注射胰岛素的家兔空腹血糖含量为182mg/dL，药后血糖含量为129mg/dL；注射肾上腺素的家兔空腹血糖含量为81mg/dL，药后血糖含量为119mg/dL。
结论：胰岛素会使血糖浓度降低，肾上腺素会使血糖浓度升高。
[关键词]血糖浓度胰岛素肾上腺素引言：正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定，但现如今糖尿病可谓是医学界的一大顽症，目前并无良药可医，对于此种病当以预防为主。
因此身为医学生，掌握激素对血糖浓度的影响及如何测量血糖浓度显得有为重要。
原理：1.血糖浓度即指血液中的葡萄糖浓度。
血糖水平相当恒定，维持在80—120mg/dL之间。
空腹血糖水平的相对恒定是在神经激素调节下血糖的来路和去路达到动态平衡的结果，其中激素调节站主导地位。
调节血糖的激素有：胰岛素，肾上腺素，胰高血糖素，肾上腺皮质激素，生长素和甲状腺激素。
胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.葡萄糖在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫氏碱，其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。
1.材料与方法1.1材料仪器：722型分光光度计试剂：1.正常家兔(实验前预先使其饥饿14—16小时)两只。
称体重，一只为2.55kg，另一只为1.8kg。
2.肾上腺素（1mg/1ml）3.胰岛素（5单位/ml）4.碘酒,消毒酒精5.饱和硼酸溶液：取硼酸6g,溶于100ml蒸馏水中，摇匀，放置过夜后过滤，即可应用。
6.邻甲苯胺试剂：取冰醋酸（AR）940ml,加入硫脲（AR）1.5g，溶解后加入邻甲苯胺60 ml混匀，置棕色瓶中，室温保存。
新配试剂应放置24小时后（待老化）使用。
此试剂腐蚀性极强，应避免与皮肤接触而造成灼伤。
动物实验-胰岛素、肾上腺素及情绪对动物血糖的影响
通过cAMP激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，还有诱导肝中磷酸烯醇式丙酮酸激酶及果糖二 磷酸酶的合成促进糖异生作用，使氨基酸转化为葡萄糖，从而使血糖升高。
应激——血糖上升
实验性应激可促使家兔血糖水平显著升高，并稳定地维持在较高水平，情绪会影响血糖，情绪过于激动或者经 常波动会导致体内交感神经兴奋性增强，肾上腺素等升糖激素分泌就会增多，会拮抗胰岛素的降糖作用使血糖 水平升高。
制去蛋白血滤液 这是注射前的血液
5
制备方法:蛋白沉淀剂4m1+全血0.2m1，混匀，室温放置7分钟后， 在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血滤液。
6
注射后取血并制备血滤液
方法同前,选择另一只耳朵，注意做好标记。注射胰岛素的家 兔，取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖注射液10m1，以免 家兔发生胰岛素性休克。
实验原理
（二）有机化学 法：邻甲苯胺法
（O-T法）
葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成 葡萄糖基胺，再脱水生成希夫氏（Schiff）碱， 然后经分子重排，生成一组蓝绿色化合物，在 630nm处有一吸收峰，吸光度大小与血糖浓度成 正比。
实验试剂及器材
1
实验动物
2
实验试剂
3
其他
正常家兔4只
• 胰岛素，肾上腺素 • 酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂 • 酶酚混合试剂，苯甲酸溶液 • 葡萄糖标准贮存液(100mmo1/L) • 葡萄糖标准应用液(5mmo1/L)
适量规格注射器、台式磅 秤、兔手术台、刀片、干 棉球、纱布、试管、试管 架、沸水浴
实验步骤
动物准备
正常家兔两只， 实验前预先饥 饿16h，称体
重,并记录
制备抗凝管
实验七-激素对家兔血糖浓度的影响
作用机制：
• 胰岛素：使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入 组织进行代谢。诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加 速细胞内葡萄糖的分解利用。
• 通过时细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷 酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂 肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血 糖来源减少，最终使血糖浓度降。
血糖测定
取酶板条，标号1-6，按下表加入试剂
空白管（1） 标准管（2） 胰前（3） 胰后（4） 肾前（5） 肾后（6）
血清/μL
—
—
2
2
2
2
葡萄糖标准液/μL
—
2
—
—
—
—
生理盐水/μL
2
—
—
—
—
—
酶酚混合液/μL
200
200
200
200
200
200
混匀后置于37℃生化培养箱保温20min，用空白空调零，在波长492nm 的酶标仪中进行比色测定
静脉，取1mL血液收集于草酸钠抗凝管内，立刻摇匀避免血液凝固。取血完毕，用棉球压迫兔 耳止血。 • 注射激素：家兔1皮下注射胰岛素，家兔2皮下注射肾上腺素，分别记录注射时间。 • 再取血：注射肾上腺素20min，胰岛素30min后，分别按上述取血方法再次取血。 • 制备血浆：取10mL离心管4个，标号，分别加入注射肾上腺素前、后和胰岛素前、后的全血， 以3000r/min离心8min,上清液即为淡黄色血浆。 • 血糖测定：用葡萄糖氧化酶法测定血浆血糖浓度。
激素对血糖浓度的影响 实验设计PPT
实验讨论： 1) 家兔正常体温39.0(38.5～39.50)℃、皮肤温度 33.5～36℃，心跳频率258±2.8次/分，动脉血压110 （95～130）mmHg，循环血量59±2.3ml/Kg体重，呼吸 频率51（38～60）次/分。家兔耳大、血管清晰，便于注 射和取血。设置四只为了在纵向比较的同时也作横向对比。 2）耳缘静脉操作简单、动物不需特别固定和麻醉。 3）因为不同激素的作用机理不同，作用效果和时间也 就不尽相同，详情参考各激素作用具体机理。 4）胰高血糖素 主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节目的。细胞内 的cAMP可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白 的共价修饰改变细胞
临床意义： 1.血糖升高：病理性主要见于糖尿病，其他内分泌疾 病如肾上腺皮质机能亢进，垂体前叶机能亢进等。 2.血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤、胰岛素分泌过多， 过量胰岛素治疗，肾上腺皮质功能减退等。 问题讨论： 1）实验对象为什么选择家兔？取四只的理由是什么？ 2）对家兔取血为什么选择耳缘静脉？ 3）加不同的激素之后取血的时间为什么不一样？ 4）三种激素的作用机理分别是什么？ 5）除了实验设计的三种激素，还有哪些激素可以有相 关作用？
实验试剂： 胰岛素注射液（40单位/ml）、胰高血糖素注射液、 肾上腺素注射液（1︰1000）、生理盐水、肝素抗凝剂 （配成2500单位/ml）、凡士林、二甲苯、葡萄糖标准应 用液（5.55mmol/L）、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 、 酶试剂、 酚溶液、酶酚混合试剂、 12mmol/L苯甲酸溶液、 100mmol/L葡萄糖标准贮存液 实验器材： 适量规格注射器、台式磅秤、兔手术台、刀片、干棉 球、纱布、试管、试管架、沸水浴
参考文献： 全国高等学校教材《生理学》（第7版） 李燕俊、计融、李玉伟等，高丽红参对小鼠抗疲劳作 用的研究中国公共卫生，2003：19（6）：712-713. 查锡良《生物化学》（第7版）第四章糖代谢 第八节 血糖及其调节Fra bibliotek谢谢观赏！
实验五激素对血糖浓度的影响
一、实验目的
1.掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。
2.观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。
3.了解家兔耳缘静脉取血的方法。
二、实验原理
1.血糖是指血液中的葡萄糖。
人体生理血糖水平维持在3.89~6.11mol/l。
2.血糖的来源与去路
3.血糖的激素调节
降低血糖：胰岛素 升高血糖：肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。
2.准确吸取0.2ml的全血。
3.采血后要立即制备去蛋白血滤液。
4.测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应同时测定，比 较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。
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2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度 计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的3/4。
3. 调模式为“T（透射比）”，对空白对照进行调 “0”（开盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“A（吸光度）”，测定待测样品的吸光 度值。
三、主要仪器与试剂
试剂：胰岛素，肾上腺素
酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂 酶酚混合试剂，苯甲酸溶液 葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 葡萄糖标准应用液（5mmol/L）
相对血糖浓度
光吸收法测定
7.朗伯-比尔定律
当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时， 在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度 与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。
Ａ=Ｋ A测=KC测L
A测 C 测= × C 标 A标
722G型分光光度计的使用
1. 接通电源，打开开关，调整波长。
激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定
生物化学实验实验名称：激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定时间：2014年6月9日星期一姓名：学号：201312201202003指导老师：毛水龙老师一，实验目的掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。
二，实验原理家兔动物实验。
获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。
邻苯甲胺方法测定血糖浓度。
实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。
1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。
胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。
胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。
3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。
后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。
其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。
与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。
三，实验材料1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。
2.试剂：①肾上腺素(1mg／lml)②胰岛素(20单位／ml)③碘酒、消毒酒精④饱和硼酸溶液⑤邻甲苯胺-硼酸⑥5％三氯醋酸溶液⑦饱和苯甲酸溶液⑧标准葡萄糖贮存液⑨标准葡萄糖应用液四，实验方法1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿14~16h左右，称体重。
2.耳缘静脉采血。
小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。
实验五、六 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
1、最后加酶酚混合试剂，各管反应时间应一致；
2、因用血量甚微，操作中应直接加样本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠；
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达10g/L，黄疽标本胆红素浓度达342μmol /L，维生素C小于30mg/L，均不影响测定结果。氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46.7mmol/L，尿酸浓度达2.95mmol/L，肌酐浓度达4.42mmol/L。半胱氨酸浓度达3.30mmol/L，甘油三酯浓度达5.6mmol/L，胆固醇4.40 mmol/L，对测定结果均无显著影响。
3、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量；
4、严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
5min
示意图
5min
化学反应式
流程图
5min
示教
5min
示教
实验+示教
100min
小结
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的线性范围至少可达22.24mmol/L，回收率94%～105%，批内CV为0.7%～2.0%。批间CV为2%左右，日间CV为2%～3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本葡萄糖氧化酶法均值为8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相关系数为0.9986，回归方程y=1.0026x－2.29。
实验五激素对血糖浓度的影响
3.准备激素
胰岛素（1U/mL）
0.75U/Kg
0.75mL/Kg
1kg兔子准备胰岛素0.75mL
肾上腺素（1mg/mL）
0. 5mg/Kg
0.5mL/Kg
1kg兔子准备胰岛素0. 5mL
4、去蛋白质血滤液制备
取2支试管，每管中取蛋白沉淀剂4mL,其中1管标 注实验前，另外1管标注实验后。
去蛋白质血滤液制备（待第5和6步结束，取全血 制备）：取全血0.2mL，加入上述管混匀，室温 放置7分钟过滤。
实验五激素对血糖浓度的影响
1、动物准备
（1）分组
每一列用一只兔子 第1、3列做胰岛素对血糖浓度的影响 第2、4列做肾上腺素对血糖浓度的影响
（2）称重与固定
称重
四肢向上固定
记录体重
2、制备抗凝管
每列取2只洁净且干燥的试管，标好“实验前”和“实验 后”，
草酸钠在讲台上，用药匙加一平匙的抗凝剂（草酸钠）， 晃动试管使管壁上沾有抗凝剂。
实验结果与计算
计算： 标准管葡萄糖浓度：5mmol/L
C测= AA标测×C标
测定管吸光度
测定管血糖浓度 ＝
×5 mmol/L
（mmol/L）
标准管吸光度
实验结果与计算
通过计算比较家兔注射激素前、后血糖浓度的 变换 正常人血糖浓度：3.89～6.11mmol/L 验证胰岛素降血糖，肾上腺素升血糖 结合理论课的内容分析激素影响血糖的机制
7. GOD-POD法测血糖
按表配液
试剂(ml)
测定管
测定管
（注射前） （注射后）
去蛋白血滤液
0.5
0.5
处理后的
–
–
葡萄糖标准液
胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
实验目的
1、掌握胰岛素和肾上腺素对血糖水平的调节 作用
2、熟悉分光光度计的使用。
二、实验原理
❖ 人和动物体内，血糖浓度受各种激素调节 而维持恒定。胰岛素能降低血糖；其他很 多激素则具有升高血糖的作用，其中以肾 上腺素作用较为迅速而明显。胰岛素促进 肝和肌将葡萄糖合成糖原，又加强糖的氧 化利用，故可降低血糖；肾上腺素促进糖 原分解而增高血糖。
磷钼酸试剂
2ml
2ml
2ml
2ml
混匀后放置2min，临比色前加水至25ml
比色测定
将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在620nm 处测定吸光值。
操作注意
❖ 1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准 确8分钟。
❖ 2、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧 化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。
❖ 3、加入磷钼酸后迅速比色。 ❖ 4、分光光度计的使用。
4、依次拉出第三、第四个比色皿，分别读取吸收度。
5、测定完毕，先打开比色皿盖，再断电源。
结束语
渴望梦想的光芒，不要轻易说失望
Write in the end, send a sentence to you, eager to dream of light, don't easily say disappointed
分光光度计的使用
1、接通电源，打开比色皿盖，预热20-30分钟后，调 节波长至所需波长。
2、将盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其 余放测定溶液。将比色皿盖盖上，此时空白溶液在光 路上。将光点调到“T”，调节 T为100%。
3、将光点调到“A”，轻轻拉动比色架固定拉杆，使 第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液 的吸收度。
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邻甲苯胺法测定血糖浓度
（参考Page 80 实验24 邻甲苯胺法测定血糖）
实验步骤：邻甲苯胺法测定血糖浓度（4只大试管）
Hale Waihona Puke 试剂（ ml ）空白管 测定管
标准管
胰-1、2，肾-1、2
血浆
-
0.1ml
-
葡萄糖标准液
-
（0.2mg/ml）
蒸馏水
1.0ml
邻甲苯胺试剂 6.0ml
-
0.9ml 6.0ml
0.5ml
0.5ml 6.0ml
混匀各管，沸水浴中加热15min后取出，用流水冷却。 波长620nm，以空白管调吸光度零点，读取各管的吸光度。
实验结果及讨论：
m测定管中葡萄糖含量 =
A测定管 A标准管
m × 标准管中葡萄糖含量
m标准管中葡萄糖含量 = V标准管×C标准管 ( 0.5 ml × 0.2 mg / ml )
胰高血糖素瘤 3、妊娠高血糖 4、胰腺疾病：坏死性胰腺炎、胰腺手术、原发胰腺癌 5、应激性高血糖
血糖降低
1、胰岛β细胞瘤或增生 2、内分泌疾病：垂体前叶功能减退症、肾上腺皮质功能减低 3、肝源性低血糖，各种肝病致肝功能衰竭
快速血糖测定仪
* 测试时间: 5~15秒 * 测试范围: 1.1~33.3 mmol/L * 试纸条自动吸血（1~10μl） * 自动显示血量是否合适 * 试纸条芯块自动识别试纸编码 * 温度范围: 10~35℃
血糖（mg/100ml）=
100
m测定管中葡萄糖含量 ×
0.1
注意事项：
1 注射针管5ml，9号针头 2 心脏内取血、皮下注射 3 离心机，微量移液器，分光光度计 4 沸水浴时注意安全。 5 生理盐水润洗针管、针头、三角烧杯
血糖测定的临床意义
血糖升高
1、糖尿病 2、内分泌疾病：甲亢、肾上腺皮质功能亢进、嗜铬细胞瘤、
糖皮质激素和生长激素
实验原理P 80 ：
血样中的葡萄糖
酸性 加热 羟甲基糠醛
- 3H2O
邻甲苯胺
醛亚胺（蓝色）
颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，用比色法测定待测血样 光密度值（Optical density， OD值），与经同样处理标准葡萄 糖溶液比较(标准管法)，即可求得血中葡萄糖的含量.
实验步骤： 家兔2只，禁食16h，称其体重并记录。 心脏内取血2-3ml，抗凝，标明胰-1，肾-1。 皮下注射胰岛素和肾上腺素，记录时间，胰1h，肾30min。 心脏内取血2-3ml ，抗凝，标明胰-2，肾-2。 胰-1，胰-2，肾-1 ，肾-2，移入离心管，
实验六 胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度
的影响
刘向华
南京医科大学
Nanjing medical university
生化与分子生物学系
Department of biochemistry and molecular biology
实验原理：
人与动物体内的血糖浓度受各种激素的调节而维持恒定， 影响血糖浓度的激素分为两类： 降低血糖的激素：胰岛素 升高血糖的激素：肾上腺素、胰高血糖素、