19脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围脑脊液培养。
3.标本3.1标本类型脑脊液。
3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。
脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。
因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本未用无菌试管留取。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
．4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。
根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。
必要时可作生化反应进一步鉴定。
分离培养6.2．6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。
脑脊液检验标准操作程序SOP文件
文件编号：ABCD-SOP-07-25版序：2005-01页码：第1 页，共7 页[标本采集]1．标本送检必须及时，收到标本后应即将检验。
久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或者溶解。
2．细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用 EDTA 盐抗凝。
[操作步骤]一、常规检验：1、 (CSF)颜色检查[正常参考值] 无色水样液体。
[临床意义](1)红色：常见于蛛网膜下腔出血、脑出血、硬膜下血肿等。
如腰椎穿刺时观察到流出的脑脊液先红后转无色，为穿刺损伤性出血。
(2)黄色：见于陈旧性蛛网膜下腔出血及脑出血、包囊性硬膜下血肿、化脓性脑膜炎、脑膜粘连、脑栓塞；椎管梗阻；脑、脊髓肿瘤及严重的结核性脑膜炎；各种原因引起的重症黄疽；心功能不全、含铁血黄素沉着症、胡萝卜素血症、早产儿等。
(3)乳白色：见于化脓性脑膜炎。
(4)微绿色：见于绿脓假单胞菌性脑膜炎、甲型链球菌性脑膜炎。
(5)褐色或者黑色：见于中枢神经系统的黑色素瘤、黑色素肉瘤等。
2、透明度检查[正常参考值] 清晰透明。
[临床意义](1)微混：常见于乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑脓肿(未破裂者)。
(2)混浊：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等。
(3)毛玻璃状：常见于结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。
(4)凝块：见于化脓性脑膜炎、脑梅毒、脊髓灰质炎等。
(5)薄膜：常见于结核性脑膜炎等。
3、细胞计数[正常参考值]成人： (0-8) × 106/L；儿童：(0-15)×106/L；新生儿：(0-30)×106/L。
文件编号：ABCD-SOP-07-25版序：2005-01页码：第2 页，共7 页[临床意义](1) 细胞数明显增高(＞200×106/L)：常见于化脓性脑膜炎、流行性脑脊髓膜炎。
(2)中度增高(＜200×106/L＝：常见于结核性脑膜炎。
(3)正常或者轻度增高：常见于浆液性脑膜炎、流行性脑炎(病毒性脑炎)、脑水肿等。
脑脊液检测流程
脑脊液检测流程脑脊液检测流程标本采集：脑脊液标本主要由临床医师采集，一般行腰椎穿刺，必要时丛小脑延髓池或侧脑室穿刺采集。
采集后无特殊处理要求，应立即送检，不超过1小时。
操作步骤：1）认真观察并记录脑脊液颜色、透明度及是否有凝块。
颜色：正常为无色，病理情况下可有红色、黄色、米汤样、棕色、绿色、褐色或黑色透明度：正常为清澈透明；病理情况下可有不同程度的浑浊，脑脊液中细胞数大于300X106/L或含大量细菌、真菌时呈不同程度浑浊。
结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊；化脓性脑膜炎时呈脓性浑浊；正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而成轻度浑浊。
2）潘式试验：取潘氏试剂2-3ml。
置于小试管内，用毛细滴管滴入经5分钟2000转离心的脑脊液上清液1-2滴，衬以黑背景，立即观察结果。
阴性：清晰透明，不显雾状极弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。
阳性：（+）为白色云雾状；（2+）为白色浑浊；（3+）为白色浓絮状沉淀；（4+）为白色凝块。
3）细胞计数非血性标本：小试管内加入冰醋酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰醋酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按血液白细胞计数法计数。
血性标本：将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按血液白细胞计数法稀释后进行计数。
4）细胞分类直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。
若白细胞少于100个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字。
染色分类法：将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常上清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，行瑞士染色后用高倍镜或油镜分类。
脑脊液常规检查标准操作程序
脑脊液常规检查标准操作程序1 检验目的鉴别诊断及预后观察神经系统疾病及其并发症。
2 检测原理一般性状检查采用目测法；细胞学检查采用显微镜手工检查法。
3 性能参数脑脊液常规检查是手工试验，目前还没有试验性能指标。
4 标本采集与接收4.1 脑脊液标本由临床医生进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
第一管作细菌学检查，第二管作化学或免疫学检查，第三管作常规检查。
4.2 标本采集后要立即送检，因为放置时间过久，其性质可能发生改变，可能影响检验结果。
采集的脑脊液标本应尽量避免混入血液。
5 设备和试剂5.1 仪器：复星公司 ACT-2000 超高倍显微镜系统，Sysmex XT-4000i 分析仪。
5.2 试剂：冰醋酸。
5.3 设备：血细胞计数池。
6 容器和添加剂脑脊液常规检查试验的容器为消毒的玻璃试管，一般情况下无任何添加剂(如遇高蛋白标本时，可用 EDTA 盐抗凝)。
7 操作步骤7.1 检验申请单及标本的审核整理脑脊液常规检验申请条码及标本，审核合格后，对脑脊液检验申请单姓名和标本标识进行复查，确认一致后进行检测。
7.2 一般性状检查：脑脊液的颜色和透明度测量采用目测法。
7.3 细胞计数7.3. 1 手工法：对澄清的脑脊液混匀后用滴管直接滴入一次性计数板，用低倍镜计数全部方格内细胞数；混浊或带血的脑脊液可用细胞稀释液或者生理盐水稀释后加入事先准备好的管壁带有冰乙酸的小试管中，混匀后滴入一次性计数板内，用低倍镜计数全部方格内细胞数。
7.3.2 仪器法：取混匀好的标本直接在 XT-4000i 上用体液模式进行检测，并记录结果。
7.3.3 有核细胞分类计数7.3.3.1 直接分类法：如果白细胞数不超过 0.015×109/L，可不分类计数；如超过 0.015×109 /L 应分类计数。
在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)与多核细胞，计数100 个白细胞，以百分比表示。
脑脊液检验操作规程
脑脊液检验操作规程湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第1页共5页脑脊液常规检验操作程序1．目的保证脑脊液常规检测结果准确、可靠、及时。
2．适用范围脑脊液常规检测，标本类型为脑脊液。
3．职责3..1脑脊液标本由临床医护人员采集检验人员向临床提供脑脊液标本量、保存条件、注意事项、生物参考范围及临床意义等。
3.2脑脊液标本的运送由临床卫生员运送。
3.3收集与处理检验后脑脊液标本由检验卫生员统一送到医院垃圾处理站按相关程序进行处理。
4. 检验程序4.1脑脊液理学检验:4.1.1颜色正常脑脊液为无色液体。
当有病变时可出现红色、黄色、绿色、乳白色、黑色等颜色。
4.1.2透明度正常脑脊液清晰透明,当脑脊液中有形物增加时,透明度降低,透明度可按清晰透明,微浑、浑浊三级报告。
4.1.3凝固或薄膜正常脑脊液没有凝块,化脓性脑膜炎时可出湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第2页共5页现，脑膜炎时可出现薄膜,可用无凝块、胶冻样、有薄膜形成、有凝块等方式报告。
4.2脑脊液化学检验:(一)潘氏(pandy)定性试验4.2.1【原理】蛋白质与石碳酸结合成不溶性蛋白盐而下沉,产生白色浑浊或沉淀。
4.2.2【试剂】5-7%石碳酸溶液。
4.2.3【方法】取试剂2－3毫升置于小试管内,用毛细滴管滴入脑脊液1－2滴,衬以黑色背景下观察结果,出现白色浑浊为阳性。
4.2.4【结果判断】透明无变化(一)阴性微呈白雾状(〒)极弱阳性灰白色云雾状(+)弱阳性白色浑浊(++)阳性白色浓絮状沉淀(+++)强阳性湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第3页共5页白色凝块(++++)最强阳性4.3【注意事项】试剂和脑脊液应按一定比例进行试验,若脑脊液浑浊,应离心沉淀后取上清液试验。
脑脊液送检规范标准最新
脑脊液送检规范标准最新脑脊液（Cerebrospinal Fluid, CSF）是存在于脑室和蛛网膜下腔的无色透明液体，其送检对于诊断多种神经系统疾病具有重要意义。
以下是脑脊液送检的最新规范标准：一、样本采集1. 采集前应确保患者处于平静状态，避免情绪波动或身体活动影响样本质量。
2. 采集应在无菌条件下进行，使用一次性无菌腰椎穿刺针。
3. 采集量一般为10-20毫升，分装至两个无菌试管，一个用于生化和细胞学检查，另一个用于微生物学检查。
二、样本处理1. 采集后立即送检，避免样本暴露于室温过长时间，以免影响细胞活性和生化成分。
2. 如不能立即送检，应将样本置于2-8°C冷藏，但不宜超过2小时。
3. 避免剧烈摇晃或离心，以免破坏细胞形态。
三、样本检测1. 细胞计数：评估红细胞、白细胞的数量和分类。
2. 生化分析：检测蛋白质、葡萄糖、氯化物等含量。
3. 微生物学检查：包括细菌培养、病毒检测等。
4. 免疫学检测：如有必要，进行脑脊液免疫球蛋白检测。
四、结果解读1. 结果应结合患者的临床表现、病史及其他辅助检查结果综合分析。
2. 注意区分生理性变化和病理性变化，避免误诊。
五、质量控制1. 实验室应建立严格的操作规程和质量控制体系。
2. 定期对设备进行校准和维护，确保检测结果的准确性。
3. 对操作人员进行专业培训，提高检测技能和质量意识。
六、安全措施1. 严格遵守生物安全规范，防止交叉感染。
2. 处理样本时，工作人员应穿戴适当的个人防护装备。
3. 废弃物应按照医疗废物处理规定进行处置。
七、记录和报告1. 详细记录样本信息，包括患者姓名、年龄、性别、采集时间等。
2. 报告应清晰、准确，包含所有检测项目的结果及必要的解释说明。
八、患者指导1. 向患者解释脑脊液检查的目的、过程及可能的风险。
2. 提供术后护理指导，如需要时指导患者如何缓解穿刺部位的不适。
以上规范标准旨在确保脑脊液送检的准确性和安全性，为临床提供可靠的诊断依据。
脑脊液标本细菌学检验
脑脊液标本细菌学检验1. 检验目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围脑脊液培养3. 标本采集与运送3.1 标本采集：由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml,盛于无菌容器中送检。
3.2 标本运送3.2.1 采集标本后立即送到细菌室，不能及时送检可置室温或保温，放置时间不应超过2h。
切勿放冰箱，否则影响检出率。
3.2.2 非细菌室工作时间，标本应送急诊化验室进行标本保温。
4. 检验步骤4.1 涂片检查：外观浑浊或脓样脑脊液直接涂片。
无色、透明的脑脊液，应3000rpm/min离心10-15min后取沉淀物涂片。
涂片后革兰染色、墨汁染色、抗酸染色。
镜检阳性应立即以电话的方式将镜检结果告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.2 接种：在生物安全柜中用一次性无菌接种环挑取浑浊脑脊液或离心沉淀的沉淀物按照分区划线的方法接种血平板和巧克力平板。
血平板和巧克力平板需要预先置于室温平衡30min。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 培养结果观察4.4.1 培养24h无菌生长需继续培养24h,如仍然无菌生长，则报告“无菌生长”。
4.4.2 培养出细菌，挑取单菌落革兰染色镜检，将镜检结果以电话方式告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.4.2.1 血平板上菌落呈浅灰色、不溶血，或者菌落呈粘稠状，菌落附近呈灰绿色。
在巧克力平板上的菌落光滑整齐、圆形凸起、半透明、露滴状菌落。
革兰染色镜检为肾形或咖啡豆装的革兰阴性双球菌，应怀疑为脑膜炎奈瑟菌，常见于脓性脑脊液。
4.4.2.2 血平板上呈现草绿色溶血、灰色、圆形、略扁的菌落，同时革兰染色为革兰阳性链球菌，疑为肺炎链球菌。
4.4.2.3 镜下可见革兰阴性小杆菌，多形性，巧克力平板可见较多的透明、湿润革兰阴性杆菌，做卫星试验。
血平板卫星+，MH卫星-，报告“流感嗜血杆菌”。
4.4.2.4 新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。
细菌室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
细菌室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
l、标本采集以无菌方法采集脑脊液2～5ml，盛于无菌瓶中送检。
2、直接检查脑脊液可直接涂片、革兰染色或抗酸染色等，然后镜检。
无色透明的脑脊液，应作离心取沉淀物涂片、染色镜检。
3、检验步骤：
3.1、一般细菌涂片检查除结核性脑膜炎外，由其它细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液明显混浊，可直接涂片，革兰染色镜检。
无色透明的脑脊液，应离心后涂片、染色、镜检，根据染色及形态特征可初步提示细菌的种类。
结核分枝杆菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物(3000r／min。
30min)作抗酸染色。
新型隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色。
3.2、分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血平板、巧克力平板，巧
5、脑脊液培养常见病原菌
革兰阳性菌革兰阴性菌
金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟菌
A、B群链球菌卡他布兰汉菌
肺炎链球菌流感嗜血杆菌
结核分支杆菌
肠杆菌科菌种
产单核李斯特菌脑膜败血性黄杆菌
新型隐球菌假单胞菌
白色念珠菌
6、报告结果
无论是涂片还是培养，一但见到阳性菌应立即通知临床医师。
培养并经鉴定的结果报告“××菌”，同时报告药敏试验结果。
脑脊液细菌学检查
脑脊液细菌学检查
1、显微镜检查
脑脊液涂片革兰染色或碱性亚甲蓝染色检查致病菌。
革兰染色用于检查肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌、大肠埃希菌等;碱性亚甲蓝染色用于检查脑膜炎球菌。
显微镜检查对化脓性脑膜炎诊断的阳性率为60%～90%。
如果怀疑为结核性脑膜炎，可采用抗酸染色，油镜下寻找抗酸杆菌。
新生隐球菌检查常采用印度墨汁染色法，若呈假阳性，可采用苯胺墨染色法。
2、细菌培养
主要适用于脑膜炎奈瑟菌、链球菌、葡
萄球菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌等。
同时，也要注意厌氧菌、真菌的培养。
3、ELISA法
检测结核杆菌抗体：结核杆菌感染时，可产生特异性的抗结核抗体，可采用最简便、灵敏度高的ELISA法检测此抗体。
如果脑脊液中抗结核抗体水平高于血清，这对结核性脑膜炎的诊断及鉴别诊断具有特殊价值。
医院检验中心脑脊液检验操作规程
医院检验中心脑脊液检验操作规程（1）标本处理1．标本送验必须及时，收到标本后应立即检验。
久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。
2．细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。
（2）一般性状检查主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。
脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基。
1）红色：如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：(1)将血性脑脊液试管离心沉淀(1500r／min)，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过4h。
如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。
(2)红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到。
因脑脊液渗透压较血浆高所致。
2）黄色：除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。
黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。
但前者呈黄色透明的胶冻状。
3）米汤样：由于白(脓)细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。
4）绿色：可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。
5）褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。
（3）潘氏(Pandy)球蛋白定性试验[原理]脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。
[试剂]5％苯酚溶液：取纯苯酚25m1，加蒸馏水至500m1，用力振摇，置37℃温箱内1—2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。
[操作]取试剂2—3m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。
[结果判断]阴性：清晰透明，不显雾状。
极弱阳性(土)：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。
弱阳性(十)：灰白色云雾状。
阳性(2十)：白色浑浊。
强阳性(3十)：白色浓絮状沉淀。
最强阳性(4十)：白色凝块。
[临床意义]正常时多为阴性。
160410脑脊液标本的微生物学检验
2019/11/8
1
主要内容
中枢神经系统感染病常见病原微生物 与主要临床特征
脑脊液标本的采集、运送与外观观察 脑脊液标本的细菌学检验程序
病毒性脑炎病原学检查原则
2019/11/8
2
主要内容
化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌 性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义
18
中枢神经系统感染病
一般实验室检查
血常规 白细胞计数
明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为 主，可出现核左移
正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染
2019/11/8
19
中枢神经系统感染病
实验室检查
脑脊液
一般性状检查 细胞计数检查 化学检查 病原生物学检查
2019/11/8
20
中枢神经系统感染病
可出现意识障碍、抽搐、瞳
孔改变等。若脑神经受损则
可有眼睑下垂、面瘫等。
2019/11/8
12
新生隐球菌性脑膜炎 常见临床特征及其细菌
新生隐球菌性脑膜炎亚急性起病， 病初可表现为轻度间歇性头痛，此 后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有 恶心、喷射性呕吐、多数患者有发 热、精神异常。1/3患者有意识障 碍，表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。 脑膜刺激征明显，常有多颅神经受 损的表现，以视神经受累最多。少 数患者有脑疝形成最后死亡。
真菌学检查
（一） 标本采集
采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。用 碘伏进行局部皮肤消毒，在第三、四腰椎 或第四、五腰椎间隙插入带有管芯针的空 针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收 集脑脊液5ml～10ml，分装于3支无菌小瓶 中立即送检。取第2支或最混浊的1支做微 生物学检查，做脑脊液培养时应同时采集 病人血液标本进行血培养。
脑脊液标本细菌学检验
脑脊液标本细菌学检验关键词：分枝杆菌淋巴细胞脑膜炎奈瑟菌细胞菌种保藏中心 ATCC一、检验程序脑脊液标本的细菌学检验程序见图35-1。
二、检验方法(一)显微镜检查实验室应尽快进行涂片检查以防标本凝固，影响细胞计数和涂片结果。
1．一般细菌涂片如脑脊液标本外观为明显红色或混浊，可直接涂片，如果标本量超过1ml，应以相对离心力20000g离心10分钟，取沉淀物涂片，涂片作革兰染色。
如果脑脊液标本有薄膜形成，则应取薄膜涂片染色和培养可提高阳性检出率。
2．结核分枝杆菌涂片取脑脊液的离心沉淀物涂片(如果脑脊液标本有薄膜形成，则应取薄膜涂片)，抗酸染色镜检。
3．隐球菌涂片取脑脊液的离心沉淀物涂片，墨汁或优质碳素墨水负染色，镜检。
(二)培养和鉴定1．一般细菌培养取混浊脑脊液或经离心的沉淀物接种5％的血琼脂平板、不含抗生素的巧克力色琼脂平板、麦康凯或中国蓝平板，含无菌血清的增菌环境培养18～24小时，若无可见生长，继续培养肉汤。
置35℃、5％～10％CO248小时，增菌肉汤需转种于血琼脂平板和不含抗生素的巧克力色琼脂平板上作次代培养。
根据菌落特点、形态、染色及生化反应进行鉴定，并进行药敏试验。
2．真菌培养取混浊脑脊液或经离心的沉淀物接种沙保弱培养基，35℃环境培养2～5同，根据菌落特性、涂片染色镜检进行初步鉴定，必要时可做进一步鉴定。
3．分枝杆菌培养除了从艾滋病患者采集的标本外，一般只在脑脊液淋巴细胞增多或蛋白、葡萄糖水平异常而脑脊液为无色透明或毛玻璃样时进行分枝杆菌培养。
脑脊液标本先以相对离心力20000g离心30分钟，取沉淀接种罗氏培养基或商品化的分枝杆菌培养瓶，35～37℃环境培养6～8周。
一般情况下，脑脊液培养可使用肉汤增菌，也可采用商品化的血培养瓶进行增菌，但临床怀疑为脑膜炎奈瑟菌引起的感染(社区感染)时不能使用血培养瓶增菌，因为其中含有的聚茴香胺硫酸钠(SPS)对脑膜炎奈瑟菌有毒性，此时应接种于无SPS的培养基上。
脑脊液样本采集操作程序和评分标准
脑脊液样本采集操作程序和评分标准操作程序1. 准备工作- 检查采集器材是否完好，包括穿刺针、导管、采集管等。
- 确保采集现场整洁且符合无菌要求。
- 患者需要在体位上保持舒适。
2. 无菌操作- 医生和护士应进行洗手，并佩戴无菌手套、口罩和帽子。
- 采集器材应提前消毒并保持无菌。
3. 穿刺准备- 选择合适的穿刺点，并进行消毒。
- 确保穿刺针锋利并完好无损。
4. 穿刺操作- 医生应将穿刺针低速推进到合适的深度，同时注意控制进针方向。
- 当感觉到颅底膜囊被穿透时，应停止推进针管。
- 抽取所需的脑脊液样本。
5. 采集完成- 缓慢地将穿刺针拔出，同时压迫穿刺点，防止脑脊液外溢。
- 根据需要，进行必要的处理，如分装、标记和送检。
评分标准在脑脊液样本采集过程中，可以根据以下指标进行评分：1. 操作部位清洁度（10分）- 无菌巾覆盖操作区域。
2. 操作者的手部清洁度（10分）- 操作者双手洗净并穿戴无菌手套。
3. 穿刺点选择（20分）- 穿刺点选择准确，无血管和神经损伤。
4. 穿刺针的使用（20分）- 穿刺针锋利度好，无明显损伤。
5. 采集效果（40分）- 采集成功，脑脊液样本充足。
每个指标的满分为10分，根据操作者的实际操作情况，综合评定得分，并将得分记录在评分表中。
注意事项：- 采样前要充分告知患者采集的目的和可能的不适症状。
- 采集过程中要与患者进行有效的沟通和协作。
以上为脑脊液样本采集操作程序和评分标准，操作者应严格按照相关规定执行，以确保采集过程的安全和有效性。
脑脊液标本采集技术操作标准(最新考核表)
脑脊液标本采集技术操作标准(最新考核表)引言脑脊液标本采集是临床诊断和研究中常用的重要操作。
准确的脑脊液标本采集技术能够确保标本的质量，提高疾病的诊断准确性。
本文档旨在制定脑脊液标本采集技术操作标准，以供临床医务人员参考和遵循。
1.脑脊液标本采集前的准备工作1.1.准备必要的器械和材料，包括脑脊液采集针、试管、消毒液等。
1.2.清洁操作区域，保持一定的无菌环境。
1.3.检查患者的相关信息，包括病史、药物使用情况等。
1.4.与患者及家属沟通并解释脑脊液采集的目的和注意事项。
2.脑脊液标本采集技术操作步骤2.1.患者取体采血压、脉搏、呼吸、体温等必要的生命体征检查。
2.2.定位脊髓腔，常用的位置是腰椎4-5椎间隙。
2.3.消毒处理，将操作区域进行无菌消毒，常用酒精或碘酒消毒。
2.4.局麻麻醉，将局部麻醉药物用于脊髓腔穿刺位点。
2.5.脊髓腔穿刺，操作者利用脑脊液采集针进行脊髓腔的穿刺。
2.6.脑脊液采集，须根据需要采集一定量的脑脊液标本，一般为3-4mL。
2.7.采集完成后，将脑脊液标本放入试管中，并封闭试管以防止污染。
2.8.清洁消毒，对操作区域进行再次消毒，以预防感染的发生。
2.9.通知患者注意事项，如卧床休息、注意观察等。
3.脑脊液标本采集后的处理3.1.将采集完成的脑脊液标本送往实验室进行相应的检查。
3.2.在送检过程中要确保标本的安全性和完整性，避免交叉污染。
3.3.根据实验室的需求，做好标本的保存和运输。
4.脑脊液标本采集中的注意事项4.1.操作者必须具备相关的专业知识和操作技巧，并严格按照操作标准进行采集。
4.2.对于有出血风险的患者，应慎重考虑脑脊液采集的必要性和安全性。
4.3.患者应该配合操作者的指引，保持合适的体位，以利于采集的顺利进行。
4.4.每个脑脊液标本采集针只能使用一次，并在使用后进行消毒和处理。
4.5.操作过程中应注意规范的无菌操作，避免细菌感染和交叉污染的发生。
结论本文档介绍了脑脊液标本采集的操作标准，包括前期准备工作、采集技术操作步骤、采集标本后的处理以及注意事项。
脑脊液常规检查标准操作手册
脑脊液常规检查标准操作手册1.目的：建立脑脊液常规检查的标准化操作；2.范围：适用于脑脊液的常规检查( 物理检查、蛋白定性、细胞检查)；3.标本采集：3.1标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
3.2标本要求：将脑脊液分别收集于3 个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。
每管收集1-2 毫升。
3.3遇高蛋白标本时可采用EDTA K2 抗凝。
4.标本储存：立即送检。
5.标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：污染，久置标本。
6.器材试剂：5%苯酚溶液：取纯苯酚25ml,加蒸馏水至500ml ,用力振摇，置37 C温箱内1-2 天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。
细胞计数板；显微镜。
7.物理检查：7.1目测脑脊液颜色与透明度:(1)观察颜色。
(2) 观察透明度。
(3) 观察凝块或薄膜：收集脑脊液于试管内，静置12-24 小时，正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。
7.2结果判断与分析：7.2.1颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。
在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变:(1)红色：常由于各种出血引起。
脑脊液中出现多量的红细胞，主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血引起。
前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次减少，经离心后上清液呈无色透明。
当蛛网膜下腔或脑室出血时，三管呈均匀红色，离心后上清液显淡红色或黄色。
红细胞在某些脑脊液中5分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈旧性或新鲜出血。
(2)黄色：可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。
陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血，由于红细胞缺乏蛋白质和脂类对膜稳定性的保护，很易破坏、溶解，出血4-8 小时即可出现黄色。
停止出血后，这种黄色仍可持续3周左右。
椎管梗阻如髓外肿瘤，格林- 巴利综合征，当脑脊液蛋白质量超过1.5g/L 时，颜色变黄，其黄色程度与蛋白质含量呈正比。
脑脊液标本的细菌学检验ppt课件
根据初步分群的结果进行种的鉴定
19
标本的验收、培养、分离和鉴定
标本的培养、分离和鉴定（5） 也可根据革兰染色结果直接将分离株种
入各种商业鉴定板进行鉴定
20
报告及解释
阳性结果报告 初级报告
涂片或培养阳性应立即电话报告
12
抗酸染色
13
标本的验收、培养、分离和鉴定
标本的显微镜检查（3）
墨汁染色
3000rpm离心10~15min，沉淀物涂片墨汁 染色
14
墨汁Байду номын сангаас色
15
标本的验收、培养、分离和鉴定
标本的培养、分离和鉴定（1）
需氧培养
血琼脂、巧克力琼脂、麦康凯或EMB、营养 肉汤
5~10%CO2孵育
革兰阳性菌(3) 新型隐球菌
假丝酵母菌属
6
标本的采集和运送
标本采集指征
发热 头痛 恶心 呕吐 颈项强直和反射增强
7
标本的采集和运送
采集方法
经腰椎穿刺获得 从Ommaya管采集
8
标本的采集和运送
标本的运送
采集标本后在常温下 立即送检
不可置冰箱冷藏或低 温保存
9
第二十章 脑脊液标本的细菌学检验
.
1
概述
正常人体脑脊液是无菌的 细菌性脑膜炎属于临床医学急症 引起脑脊液感染的常见菌有
革兰阴性菌 革兰阳性菌
2
引起脑脊液感染的常见菌
革兰阴性菌
脑膜炎奈瑟菌
卡他布兰汉菌 流感嗜血杆菌 肠杆菌科 非发酵菌 类杆菌属 多杀巴斯德菌
脑脊液常规操作规程
症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学
检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治
疗和预后判断提供依据。
脑脊液（CSF常规测定内容包括：颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘
8
单核细胞（MO
4
脑脊液有核细胞计数（CS—NUCL）
9
潘氏试验（pandys test）
5
脑脊液红细胞计数（CSF-RBC）
和特
4.标本类型
标本类型：新鲜CSF
标本拒收条件：拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。
标本保存与稳定性：一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数
及分类检查。
5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统
氏试验、细困等。
潘氏（pandys）试验：CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白
色混浊或沉淀。
3.方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度
1
颜色（COLOR）
6
中性粒细胞（NE）
2
透明度（clearity）
7
淋巴细胞（LY）
3
凝固性(coagulability)
标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。
试剂
生理盐水
%Nacl溶液
白细胞稀释液
1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml）
刘氏快速瑞氏染色液
A液：曙红、甲醇
B液：亚甲蓝
潘氏试剂
10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml）
脑脊液检查采集送检顺序规范、采集注意事项、细菌培养局限性及寡克隆区带应用
脑脊液检查采集送检顺序规范、采集注意事项、细菌培养局限性及寡克隆区带应用
脑脊液检查采集送检顺序规范
由于穿刺伤，第一管可能含有血碎片、组织液和污染的皮肤微生物，可能在培养中产生错误的结果，第一管不应该被用于微生物学检查，它最适合用于化学和免疫学检测。
如果仅获得少量脑脊液病情必须使用单个管收集，必须首先用于微生物检测，以确保无菌培养，再进行细胞计数，如果有足够的剩余量，可以做化学和免疫学检测。
脑脊液采集注意事项
1）采集顺序
第一管：化学和免疫学检查
第二管：细菌性检查
第三管：细胞计数和分类（常规检查）
如疑有肿瘤可再留一管：脱落细胞学检查。
2）送检时间
最好于抗生素使用之前，收集标本后，常温下 15 分钟至 1 小时内送到实验室，脑脊液标本不可放置冰箱保存。
脑脊液细菌培养局限性
细菌培养是诊断中枢神经系统感染的金标准，但是也有很多的局限性，主要表现为两个方面：假阴性和假阳性。
造成假阴性和假阳性的原因，首先细菌培养和鉴定药敏试验与检查者的经验能力直接相关；
假阴性主要影响因素：培养标本放置时间过长，培养条件不正确
等；
假阳性的结果：主要是由于污染，污染来源两个方面，一是临床采取标本时，由于操作的不严格造成附近正常菌群的污染，另外一种是实验室操作时造成的污染。
寡克隆区带应用
临床上对于中枢神经系统疾病，特别是脱髓鞘病的诊断主要依赖影像学检查和临床表现进行分析，但由于脱髓鞘性疾病在早期病理学改变并不明显，影像学检查和常规并不能有效的及时发现。
脑脊液 IgG 增加发生较早，对患者血清和 CSF 同时进行电泳以检测寡克隆区带是否存在，也是早期诊断脱髓鞘疾病检测指标。
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直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。
编 写： 审 核： 批 准：
日 期： 年 月 日
1
规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
脑脊液培养。
3
3.1
3.2
3.2.1
3.2.2
3.3
4
4.1
4.2
4.3
5
参见《质量管理程序》。
6
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1
6.1.1
6.1.2
6.1.3
6.2
6.2.1
6.2.2
7
8
无论是徐片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48小时，仍无细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。
9
9.1
9.2
10
正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌,B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。.结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85脑脓肿病人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。