Rh血型鉴定操作规程

抗D血型鉴定操作规程

1.目的：

定性鉴定患者Rh（D）血型

2.适用范围：

适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。

3.方法及原理;

该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。其鉴定方法，由抗血清的性质而定。如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。

4.试剂及设备:

4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠

4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱

5.样本的采集与处理:

5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。

5.2标本储存：

2℃-8℃保存。

5.3标本运输：

室温运输

5.4.标本拒收标准：

细菌污染、溶血标本不能作测定。

6.操作步骤：

6.1试管法

6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。

6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。

6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。

6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。

6.2玻片法

6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。

6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。

6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。

6.2.4记录结果

6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。

8.干扰因素:

8.1假阳性因素

8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。

8.1.2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。

8.1.3当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。

8.1.4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染. 8.2假阴性因素

8.2.1看错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶上的标签。

8.2.2试管中漏加抗血清，在加入红细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。

8.2.3某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。

8.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。

8.2.5未遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。

8.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。

9.质量控制;

9.1抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。

9.2由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。

9.3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。

9.4对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。

9.5.3~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。

9.6应该使用新鲜的、非溶血的血标本，可以是未加抗凝剂的血标本，或是加入抗凝剂EDTA的血标本。必要时应使用经过加入等渗盐水离心（1000g，2分钟）洗涤后的标本所制备的红细胞悬液。推荐在制备红细胞悬液前，洗涤红细胞两遍，或洗涤上清至清澈。高脂肪性、黄疸性或微生物污染的标本可能会导致检测结果错误，因此应尽量避免使用。

9.7判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

10.医学解释:

10.1RHD抗原检测原则:对受血者一般只测RHD抗原,而对献血者不仅要检查RHD抗原,并在其为阴性的前提下,必须进一步确定是否为RH弱D型。

10.2RHD抗原阴性患者的输血原则:正常情况下除了供、受

双方ABO血型相同外,还要求RHD抗原阴性相同。

10.3RH新生儿溶血病（HDN）患儿输血或换血的原则：ABO血型同患儿血型相同，RH血型同母亲血型相同。

10.5RH弱D型妇女与RH阳性丈夫生育的婴儿可能产生新生儿溶血病。

10.6RHD抗原阴性患者血小板输注原则:尽管血小板表面无RH抗原但制品中含有一定量的红细胞,可使患者致敏,故RHD 抗原阴性生育期的女患者(包括女童)应输RHD阴性血小板。

11.最常见的误差来源:

11.1标本采集错误

11.2标本信息登记错误

11.3红细胞和血清比例不当

11.4离心过度或不足

11.5阳性反应产生溶血现象或弱凝集未能识别

11.6漏加试剂

11.7结果记录或者判断错误

11.8其他原因导致的血型鉴定困难