Transwell实验-超详细
(完整版)transwell实验原理与步骤
一、Transwell小室制备1. 无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60-80 µl (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 ℃30 min 使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300 µl 预温的无血清培养基，室温下静置15－30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24 h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
transwell实验原理与步骤
一、 Transwell 小室制备1.无基质胶 Transwell 小室制备① 包被基底膜：用 50 mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面， 4 ℃风干。
假如需要在下室面铺FN 的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,汲取 FN 平均涂抹在小室的下边。
用胶原（ collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：吸出培育板中节余液体，每孔加入50ul 含 10g/LBSA的无血清培育液，37℃，30min。
还有 tianjin_glioma战友供给的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9ug/ul) 60- 80μ l (注意体积不可以太大，以刚把聚碳酸酯膜浸润为最好)，置37℃ 30 min 使 Matrigel 聚合成凝胶。
2.有基质胶的 Transwell 小室制备Chemicon 企业的 ECM550 系列说明书要求，将小室放入培育板中，在上室加入300 μl 预温的无血清培育基，室温下静置15 － 30 min ，使基质胶再水化。
再吸去节余培育液。
二、制备细胞悬液① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 － 24 h ，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是一定的。
② 消化细胞，停止消化后离心弃去培育液，用 PBS 洗 1－ 2 遍，用含 BSA 的无血清培育基重悬。
调整细胞密度至1-10 ×10 5，个人以为不要超出 5 ×10 5。
详细实验时采纳密度要自己探索，因为不一样细胞，其侵袭能力是不一样的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，假如最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，全部的细胞都已穿过，所以最少也要保证在收样的时候，上室内还要有必定量的细胞存在。
个人以为，比较组和办理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差别会严重影响实验结果。
Transwell侵袭实验全面情况总结
Transwell侵袭实验全面总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1．Transwelltrans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable suppo rts）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
细胞增殖抑制实验操作步骤 (Transwell)
细胞增殖抑制实验操作步骤 (Transwell)实验目的本实验旨在通过Transwell方法研究细胞增殖的抑制效果。
实验器材和试剂- Transwell孔板- 细胞培养基- 细胞悬液- PBS缓冲液- MTT试剂盒- 无菌滤纸盘实验步骤1. 采集需要进行实验的细胞，并进行细胞悬液的制备。
2. 使用PBS缓冲液洗涤Transwell孔板，保持孔板内部湿润。
3. 在Transwell孔板的每个孔中加入适量的细胞悬液。
确保每个孔内的悬液量一致。
4. 将Transwell孔板放置在含有适当培养基的培养皿中，确保培养基能够覆盖住Transwell孔板。
5. 将培养皿放入恒温培养箱中，以适当的温度和湿度进行培养。
根据需要的实验时间，确定培养的时间。
6. 在实验结束时，将细胞培养基从Transwell孔板中取出。
7. 添加MTT试剂至每个孔内，保持无菌操作。
8. 将Transwell孔板放入恒温培养箱中，以适当的温度和湿度进行孵育。
9. 孵育一段时间后，将Transwell孔板取出，倒掉孔板内的MTT试剂。
10. 使用PBS缓冲液洗涤Transwell孔板，去除多余的MTT试剂。
11. 将无菌滤纸盘放入Transwell孔板内，使其吸收残留的液体。
12. 使用适当的溶剂，将滤纸盘上的MTT溶解。
13. 测量溶解液的吸光度，以评估细胞的增殖抑制效果。
注意事项- 所有操作均应在无菌环境下进行，以避免污染。
- 实验器材应提前清洗和消毒，确保无菌状态。
- 在进行MTT试剂添加和溶解液测量时，要确保操作准确，并遵循相关的操作步骤。
- 实验结果的解读应结合实验设计和其他相关数据进行分析。
以上为细胞增殖抑制实验操作步骤（Transwell）的简要指南，希望对您有所帮助。
如有任何疑问，请随时与我们联系。
transwell实验原理与步骤
一、Tran swell 小室制备1. 无基质胶Tran swell 小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8 稀释液包被Tran swell小室底部膜的上室面， 4 C风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原(collagen )的话，一般配成0.5 mg/ml ，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 C, 30min。
另有tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60- 80卩l (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 C 30 min使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Tran swell 小室制备Chemicon 公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300卩1预温的无血清培养基，室温下静置15 - 30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 - 24 h ,进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1 - 2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10 X10 5,个人认为不要超过 5 X105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
Transwell实验-超详细
Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
（完整版）transwell实验原理与步骤
（完整版）transwell实验原理与步骤一、Transwell小室制备1. 无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60-80 μl (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 ℃30 min 使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300 μl 预温的无血清培养基，室温下静置15－30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24 h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
Transwell试验方法
Transwell细胞侵袭实验与移动实验一、试剂和耗材1)细胞及细胞培养基：KYSE150细胞、含10%FBS的RPMI1640培养基及无血清RPMI1640培养基。
2)10×PBS (pH7.0)：Na2HPO4·12H2O （MW 358.4） 2.87gKH2PO4（MW 136.09）0.2gNaCl（MW 58.44）8.0gKCl（MW 74.55）0.2g去离子水至100 ml高压灭菌后，室温保存。
使用液为1×PBS(用无菌水进行1：9 稀释)。
3)冰乙酸:甲醛（1:3）4)Transwell小室(BD, Bioscience)5)Matrigel基质胶（BD, Bioscience，50ug/ml）：商品化，保存-20°。
6)各种规格的枪头、1.5ml离心管及10ml玻璃离心管：高温灭菌后备用，其中准备一些枪头与1.5ml的离心管于-20o C预冷，备用。
7)5810R台式高速冷冻离心机（Eppendorf），TC10全自动细胞计数仪（Bio-Rad）8)细胞计数板、6孔板二、实验步骤（一）侵袭实验1.润化：在无菌台上取出Transwell小室，置于24孔培养板内，小室内和放小室的孔内均用加少量无血清培养基，润化5-15min。
2.细胞准备：在做实验前12h，弃去培养基，用PBS洗三次，每瓶细胞加入5ml无血清培养基，常规培养24h。
3.细胞的接种：1)弃去无血清培养基，常规胰酶消化细胞，若室温过低可置于37℃培养箱中消化，消化时间不宜过长，控制在1min以内。
3)弃除上清，适量无血清洗涤细胞并离心；4)弃除上清，加入适量无血清培养基重悬细胞（根据细胞消化前满度进行初步稀释，建议初步稀释至细胞密度大于1.5×105/ml），轻轻吹打均匀后，取10ul细胞悬液用于Bio-Rad TC10细胞计数；亦可取15ul细胞悬液与等体积台盼蓝染液混合后取10ul用于Bio-Rad TC10活细胞计数；5)计数后，取无血清培养基重悬一定体积的细胞悬液，将细胞密度调整至1.25×105/ml；6)将一定数量Transwell小室放入BD公司24孔板，取上述细胞悬液400μl（含5×104细胞）逐滴加入小室；取500μl含10%血清的培养基沿小室侧壁与孔壁的空隙处加入到孔中，并保证小室膜与培养液之间无气泡。
(完整word版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans—这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架(permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12。
0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔.我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响.应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3。
0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择3。
0µm以下孔径。
常用0.4、3。
0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
Transwell实验超详细
Transwell实验超详细Transwell侵袭实验总结第⼀节概念这⾥想明确两个概念，⼀个是Transwell，另⼀个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有⼩室的意思，可以从字⾯上理解，这是⼀类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是⼀种膜滤器（Membrane filters），也可认为是⼀种有通透性的⽀架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是⼀种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell⼩室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为⼀个可放置在孔板⾥的⼩杯⼦，不同⼚家对Transwell会有不同的命名，⽽不同型号也可有不同形状，不同⼤⼩，根据实验需要，可有不同选择。
但⽆论是何种外形，其关键部分都是⼀致的，那就是杯⼦底层的⼀张有通透性的膜，⽽杯⼦其余部分的材料与普通的孔板是⼀样。
这层膜带有微孔，孔径⼤⼩有0.1－12.0µm，根据不同需要可⽤不同材料，⼀般常⽤的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是⼀个Transwell装置的纵切⾯将Transwell⼩室放⼊培养板中，⼩室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从⽽可以研究下层培养液中的成分对细胞⽣长、运动等的影响。
应⽤不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进⾏共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种⽅⾯的研究。
下⾯参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖⼦具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞⼤⼩。
细胞迁移抑制实验操作步骤 (Transwell)
细胞迁移抑制实验操作步骤 (Transwell)该实验旨在研究细胞迁移的抑制效果，以下是操作步骤的简要说明：1. 准备实验材料：- Transwell细胞迁移板- 细胞培养基- 细胞培养物- PBS缓冲液- 1% 无菌牛血清白蛋白2. 处理Transwell板：- 将Transwell板放入96孔培养板中- 在每个孔中加入100 ___的PBS缓冲液，并孵育15分钟- 弃去PBS缓冲液，但不要让Transwell板干燥3. 细胞处理：- 取出需要进行迁移实验的细胞培养物- 用培养基洗涤细胞两次，以去除血清成分- 将细胞培养基排出，用PBS缓冲液洗涤细胞一次，以去除残留的培养基成分- 加入适量的细胞培养基，使细胞浓度适宜4. 细胞孵育：- 将处理好的细胞均匀分配到Transwell板的上室孔中（通常为每个孔加入100 ___）- 对于空白对照，将相应的孔中只加入细胞培养基而不加入细胞- 确保Transwell板的下室孔中加入足够的细胞培养基，以保持湿润环境- 将96孔培养板放入背倒式组织培养箱中，以37°C条件下孵育所需时间（通常为24小时）5. 固定和染色：- 孵育结束后，可将上室孔中的未迁移细胞用棉签轻轻擦去- 将Transwell板放入4% 巯基乙酸缓冲液中固定细胞，孵育30分钟- 弃去固定液，用PBS缓冲液洗涤Transwell板两次- 加入适量的染色液（一种常用的染色液为1% 结晶紫染液），孵育10分钟- 弃去染色液，用琼脂糖缓冲液洗涤Transwell板两次，使板面干燥6. 分析和计数：- 用显微镜观察Transwell板的下室孔中迁移的细胞- 根据需要，可以将下室孔中的细胞收集下来进行进一步的实验- 使用图像分析软件或手动计数方法计算迁移细胞的数量和密度这些操作步骤可帮助您进行细胞迁移抑制实验，根据实验要求和具体情况，您可以进行适当的调整和优化。
Transwell侵袭实验
Transwell 侵袭实验一、实验原理将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
二、实验步骤1.将基质胶、Ep管、培养基、已放Transwell小室的24孔板提前放4℃预冷。
2.在冰上，基质胶：培养基= 1:8，预冷Ep管分别加106µl培养基+13.3µl基质胶（100µl/孔，配120µl）。
3.小室上孔迅速加100µl稀释的胶（垂直加入，铺平），37℃孵育1h，待胶凝固。
4.取适量细胞，离心后用无血清培养基重悬，上室加100µl。
（细胞接种数应该通过预实验确定）5.下室加入600µl含10% FBS的培养基。
6.37℃孵育24 h。
7.弃去上室内培养基，用棉签拭去上室残留的细胞，特别是边缘，棉签弄尖沿壁转一圈。
8.下室加600µl 4%多聚甲醛固定20min，PBS洗1-2遍，干燥。
9.下室加入400µl 0.1%结晶紫，染色10min10.PBS洗去残留染液。
11.将小室置于倒置显微镜下，观察拍照，取上、下、左、右、中五个视野计数，求平均值。
注：1.提前30min开制冰机。
2.拿小室时拿边缘，加基质胶时垂直加。
禁止在实际上方操作，准备好东西再配胶。
3.0.1%结晶紫：2.5%结晶紫配制成0.1%结晶紫溶液，400µl至10mL。
上室：采用无血清培养基，为维持细胞活性，可加入低浓度培养基，如2%或者5%。
下室：5%-10%FBS培养基，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。
Transwell小室实验
Transwell小室实验Transwell小室实验：(1) 在转染前一天，在6孔板内铺上5-8F、HONE1和HNE2细胞，2ml无抗生素完全培养基培养过夜，到转染时使细胞达到60-80%的融合度。
(2) 将pIRESneo3（对照组）和pIRESneo3 Flag-LPLUNC1（过表达组）重组质粒分别溶于50ul Opti-MEM 培基中，加入3ul p3000，混合均匀。
每组设置两个重复孔。
(3) 将适量3ul Lipofectamine 3000溶于50ul Opti-MEM 培基中，混合均匀。
在室温下孵育5min。
(4) 将上述两种混合物混合（总体积约100ul），并在室温下静置10min。
(5) 6孔板中每孔加入100ul的复合物，混合均匀。
(6) 37℃、5%CO2培养箱中继续培养36-48h。
(7) 将冻存于-20℃的BD Matrigel胶取出于4℃过夜，使其融化成液态，稀释胶用的tip、EP管放在-20 ℃过夜已备用。
(8) 基质胶的稀释：取10ul Matrigel胶，加入80ul无血清培养基，充分混匀，(4℃条件下操作)，加入各Transwell板上室中，10ul ／室，放入37℃培养箱中，孵育2-3h。
当出现“白色层”时，说明Matrigel胶已经变为固态。
注：基质胶和无血清培养基按1:8 稀释（也有1:2稀释后，10ul/室）(9) 消化转染后的实验细胞，用无血清培基洗涤2 次，再用无血清培基重悬细胞，细胞计数，调整细胞数为2×104 ~ 1×105/ml。
(10) 下腔室中加入800ul含有20％FBS条件培养基，将上室放入不能产生气泡，每孔上室中加入200ul细胞悬液。
37℃培养箱中，孵育约24~48h。
(11) 取出Transwell板，用生理盐水洗两遍，10％甲醛浸洗10min，用清水洗3遍。
(12) 用0.1%结晶紫染色或Giemsa染色，室温5min，生理盐水洗两遍。
transwell实验原理与步骤
transwell实验原理与步骤Transwell实验是一种常见的细胞迁移和侵袭性研究的方法。
它广泛用于评估细胞的迁移能力、侵袭能力以及药物对这些能力的影响。
Transwell实验基于孔板中半透膜的整体设计，使得细胞可以在孔板上的上下两侧进行迁移和侵袭。
下面将详细介绍Transwell实验的原理和步骤。
1. Transwell实验的原理Transwell实验中使用的是Transwell孔板，该孔板由上下两个室组成，通过半透膜分隔开。
半透膜通常由聚碳酸酯或聚膠（polyethylene terephthalate）制成，具有特定的孔径。
孔板上室称为上室，下室称为下室。
上室用于装载待测的细胞，下室则添加诱导迁移或侵袭的化学物质。
Transwell实验的原理是利用孔板的半透膜，使得细胞可以通过孔板上下两侧进行迁移和侵袭。
细胞在上室中培养，通过半透膜向下室中迁移和侵袭。
迁移和侵袭的细胞数量可以通过染色或其他方法来定量。
同时，可以添加不同的化学物质于上室或下室，以评估这些化学物质对细胞迁移和侵袭能力的影响。
2. Transwell实验的步骤Transwell实验的步骤主要包括预处理Transwell孔板、细胞培养、细胞处理、迁移或侵袭实验、染色和结果分析。
(1) 预处理Transwell孔板将Transwell孔板放入含有适当的细胞培养基的无菌培养皿中，在37℃的恒温培养箱中预温30分钟。
然后，将细胞培养基完全移除并在烘箱中干燥。
(2)细胞培养将需要进行迁移和侵袭实验的细胞培养至合适的数量和状态。
注意要保持细胞处于对下一步实验的最佳状态，例如在对照组、实验组之间生长均匀。
(3)细胞处理将预处理后的Transwell孔板放入一个无菌培养皿中。
然后，向上室中加入适当数量的细胞悬液。
根据实验要求，可以在上室中添加不同浓度的细胞。
(4)迁移或侵袭实验在下室中加入化学物质，例如诱导剂或特定药物。
这些化学物质可以模拟体内环境，刺激细胞的迁移或侵袭能力。
细胞融合实验操作步骤 (Transwell)
细胞融合实验操作步骤 (Transwell)本文档旨在提供细胞融合实验操作步骤，以帮助研究人员在实验室中进行Transwell细胞融合实验。
实验材料准备- Transwell细胞培养板- 高血压膜过滤器- 静脉血清- 细胞培养基- 针头（18G）- 自动移液器- 温度恒定的培养箱- 表示细胞数量的显微镜- 光镜实验步骤1. 准备培养基：根据试验需求制备适当的培养基，确保含有必要的营养物质和血清。
2. 细胞应悬浮在含有10％静脉血清的培养基中，以稀释初始细胞浓度至所需浓度。
确保细胞悬浮均匀。
3. 取出Transwell细胞培养板，并将膜过滤器插入上部。
4. 向下部加入适量的培养基，确保液体不超过膜过滤器底部。
5. 使用18G针头在上部加入约50μL的细胞悬浮液。
确保液体在膜过滤器上均匀分布。
6. 将细胞培养板轻轻放入温度恒定的培养箱，并以合适的温度和时长进行培养。
7. 培养结束后，用自动移液器将上部液体移除。
8. 将Transwell细胞培养板放在显微镜下观察细胞融合情况。
9. 使用光镜检查细胞融合效果和细胞存活情况。
注意事项：- 进行实验前，请确保实验仪器设备已经彻底清洁，并且培养基和细胞悬浮液已经准备好。
- 在操作过程中，请注意细胞悬浮液的均匀分布和液体添加的准确性。
- 实验后请及时清理实验台，妥善处置实验废液和废弃物。
以上提供的是Transwell细胞融合实验的基本操作步骤，具体实验参数和条件可根据实际需求进行调整。
请确保在实验过程中遵守实验室安全操作规程，并根据实际情况进行相应的优化和改进。
Transwell侵袭实验
一、背景分析随着生活水平的提高，消费者对厨房用品的需求日益增长，尤其是在每年的节假日和换季时节，锅具市场呈现出明显的销售旺季。
为了抓住这一有利时机，提高销售业绩，特制定以下工作计划。
二、工作目标1. 提高锅具产品在市场上的占有率。
2. 实现销售业绩同比增长20%。
3. 提升客户满意度，增加老客户复购率。
4. 加强团队建设，提高员工综合素质。
三、工作措施1. 市场调研与产品规划（1）针对不同消费群体，进行市场调研，了解消费者需求。
（2）根据市场调研结果，优化产品结构，推出符合市场需求的新产品。
（3）对现有产品进行升级，提高产品质量和性价比。
2. 营销策略（1）制定线上线下相结合的营销策略，扩大宣传范围。
（2）利用社交媒体、短视频平台等新媒体渠道进行宣传推广。
（3）举办各类促销活动，如限时折扣、满减优惠、赠品等，吸引消费者购买。
（4）与知名电商平台合作，扩大销售渠道。
3. 渠道拓展（1）加强与各大商超、家电卖场的合作，争取更多销售点。
（2）拓展线上销售渠道，如天猫、京东、拼多多等。
（3）发展加盟商，扩大销售网络。
4. 客户服务（1）设立客户服务中心，提供24小时咨询服务。
（2）对客户进行分类管理，针对不同客户需求提供个性化服务。
（3）开展客户满意度调查，及时了解客户需求，改进服务。
5. 团队建设（1）组织员工参加专业培训，提高业务能力。
（2）开展团队建设活动，增强团队凝聚力。
（3）设立激励机制，激发员工工作积极性。
四、时间安排1. 第一阶段（1-2月）：完成市场调研，优化产品结构，制定营销策略。
2. 第二阶段（3-4月）：开展线上线下宣传推广，拓展销售渠道。
3. 第三阶段（5-6月）：举办各类促销活动，提高销售业绩。
4. 第四阶段（7-8月）：总结经验，调整策略，为下一销售旺季做准备。
五、工作总结1. 定期召开销售会议，总结经验，分析问题，调整策略。
2. 对销售业绩进行跟踪分析，确保各项措施落实到位。
Transwell实验-超详细
Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
transwell实验步骤及方法
TranSWen实验具体步骤及方法1.取对数生长期的细胞，常规消化（可以无血清饥饿12~24h ,去除血清对Cell侵袭能力的影响）2.用含1%FBS的培养基重悬细胞，调整细胞密度为（2~5 ）*10 5∕ml ,细胞要多一点3.取IOOUl细胞悬液接种于transwell小室的上室,下室加入600Ul含10%FBS 的培养基（避免小室下面产生气泡）4.培养细胞24h∕48h后取出小室置烧杯内涮洗24孑中加入800Ul甲醇/孔。
5.吸干上室液体,4%多聚甲醛室温固定10~30min ,另一24孔板中加入800ul染色液/孔涮洗后，吸干上室固定液，移入0.1 %结晶紫染色液,室温染色20min （结晶紫：常规工作液浓度0.1%）6.小室用流动水轻轻冲洗浸泡3次进行脱色染色7.吸干上室液体,用棉签（棉花扯松一点再擦）轻轻擦掉上室底部膜表面未迁移细胞8.显微镜下随机观察5个视野细胞,并进行照相9.数据处理撤血清：换无血清培养基培养细胞，清除血清的影响铺基质胶：将基质胶适当稀释，铺在上层小室中，胃细胞培养箱中聚合过夜 J 加入上室后■等待30min铺下室培养基：含20% FBS的培养基，I制备细胞悬液：胰酶消化细胞,制备细胞悬液I铺细胞：将上层小室放入下层小室，细胞计数后将细胞铺在上层小室中，I继续培养：细胞培养箱中培养，具体时间视不同细胞而定I擦去上层细胞：用棉签擦去上层小室里的细胞和基质胶I固定细胞：甲醇固定细胞5nnirτI染色与拍照：吉姆萨染色液染细胞后拍照’使用软件分析迁移的细胞数（可以使用image PrO PlUS或mage j几将?次独立重复的数据都分析完后逬行统计分析并绘制柱状图NegCtrt TAp63TAp63 inhibits CeIlmigratiOrTLin CW.et al. Br.J.Cancer.2014.APiCalChamberBaSOlateralChamber使用软件分析侵袭卿胞数（可以使用Inldge PrO PlUS^Image j）将3次独立重复的数据都分析詰进微时析并鞠默图AES influences CanCer CeIlinvasion. The invasive abilityOf(A) MDA-MB- 231 and (B) HepG2CelIS 48 h after IranSfeCted WithSiAES Or SiRND3, WaSSiCOntrOlIassayed USing a MatrigeI-COatedTranSWelL The CeIIS thatSUCCeSSfUIIy invaded into theMatngel Were quantified 48 h afterplating. Data are represented asthe means ± SD for threeindependent experiments, t p<0.05, aSignifieant difference from theCOntrOl oligotransfected cells.。
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Transwell侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A 的影响。
（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。
计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
2.肿瘤细胞侵袭模型用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）：2.1 体内癌细胞侵袭模型2.1.1 皮下移植侵袭模型2.1.2 肌肉内移植侵袭模型2.1.3 腹腔内移植侵袭模型2.1.4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型2.1.5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型2.1.6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型2.1.7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型2.1.8 视网内界膜侵袭模型2.2 体外癌细胞侵袭模型2.2.1 体外静止器官培养法2.2.1.1 半固体培养基单细胞器官培养法2.2.1.2 液体培养基单细胞器官培养法2.2.2 半体外半体内器官培养法2.2.3 单层细胞器官培养法2.2.4 瘤细胞球体器官培养法2.2.4.1 静止球体器官培养法2.2.4.2 旋转摇动球体器官培养法2.2.5 单层细胞侵袭实验模型2.2.6 Transwell侵袭小室测定法可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。
所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。
由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
第二节Transwell侵袭实验我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。
1.实验用品：① Transwell小室：多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，24孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。
BD也有已包被好的，价格不清楚。
Coster 和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。
linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB,8µm，用于肿瘤的侵袭实验。
iceyxy 战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB,0.4µm的2000多,是一次性的。
梅林战友提供的BD价格：240RMB一块（6.5um,24孔,12instert），好像是没胶的。
liguofan说国产的boyden30块一个。
jjyy提供的价格是：corning cat No.3422. 6.5mm transwell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。
平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。
不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。
我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。
sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。
以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
victoh战友对Millipore公司的millicell有比较详细的讲解，链接如下：/bbs/actions/archive/post/2082166_1.html本人没见过，有兴趣的可以自己研究一下。
另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。
Transwell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。
maojianwen战友的使用方法：trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。
再照紫外。
②上层培养液：上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③细胞：值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。
另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④基质胶：常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。
CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。
同样的东西在sigma叫ECM。
zhangyong1036战友提供的价格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。
⑤下层培养液：下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。
下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥细胞培养板：常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。
细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。
但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白(fibronectin，FN，Sigma有售)，这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。
很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。
如果贴壁不好的话可以试试看。
linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。