TM-OT-000-V00 除菌过滤前溶液微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查仪操作规程
微生物限度检查仪操作规程一、目的本操作规程旨在规范微生物限度检查仪的使用，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有使用微生物限度检查仪进行微生物检测的实验室。
三、设备准备1.检查仪器：确保检查仪器处于正常工作状态，且已经进行了日常的校准和验证。
2.试剂准备：准备好所需要的试剂和培养基，并按照说明书进行储存和使用。
四、操作流程1.样品准备-将待测样品进行预处理，如稀释、过滤等操作，以确保检测结果的准确性。
-按照要求取样品，确保样品的代表性，并且避免外部污染。
-将样品转移至无菌容器中，避免交叉污染。
2.检测操作-打开检查仪器的电源，确保所有参数显示正常。
-设置检测参数，包括样品体积、培养基类型等。
-在无菌条件下，将样品转移到培养基中，确保样品均匀分布。
-在培养基上绘制分类孔，确保每个样品有足够的空间生长。
-关闭培养皿，确保培养皿与培养基接触紧密，并有利于微生物的生长。
-将培养皿放入检查仪器中，确保培养皿的摆放位置正确。
-启动检查仪器，按照仪器的要求进行检测。
-检测结束后，关闭检查仪器，将培养皿取出并妥善处理。
五、数据分析与记录1.对于生长的微生物，根据标准方法进行鉴定，并记录鉴定结果。
2.对于未生长的微生物，根据标准方法进行计数，并记录计数结果。
3.对于得到的结果，根据相关标准进行数据分析，并判断样品是否符合微生物限度要求。
4.将检测结果和分析记录在相关的数据表格或文件中，确保数据的可追溯性。
六、设备维护与清洁1.检查仪器的日常维护工作包括：定期校准、保养和维修。
2.定期清洁检查仪器的内部和外部部件，确保检查仪器的清洁和卫生。
3.根据仪器的使用说明书，进行规定的维护和保养工作。
七、风险控制1.在操作过程中，严格遵守相应的操作规程和安全要求，确保个人和环境安全。
2.如发现异常情况或设备故障，应立即停止操作，并及时报告相关人员进行处理。
3.定期开展培训和教育，提高操作人员的专业知识和操作技能。
微生物限度检查法-检验标准操作规程
——————————文件类别：技术标准 1/25文件名称微生物限度检查法(二部)检验标准操作规文件编号：09T-I636-01 起草人审核人批准人日期：日期：日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：质量控制科1.目的：建立微生物限度检查法(二部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2.依据：2.1.《中华人民共和国药典》2010年版二部。
3.范围：适用于所有用微生物限度检查法(二部)测定的供试品。
4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5.正文：5.1.简述：5.1.1. 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
5.1.2. 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.1.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
5.1.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。
5.1.5.检验结果告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
5.2. 检验量。
5.2.1.检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2）。
5.2.2.除另有规定外，一般供试品的检验量为10 g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。
5.2.3.检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。
微生物限度检查操作流程
微生物限度检查工作流程实验前：1.对实验器皿的准备：对玻璃器皿进行清洗，将洗净干燥的平皿、乳钵、刻度吸管等用牛皮纸包裹，放入鼓风干燥箱中于160℃干热灭菌2小时或放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
2.对实验用培养基及稀释液的准备：按规定比例配制实验所需的各种培养基及稀释液，包好，放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
3.洁净服的准备：将当天实验所用洁净服放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
实验中：1.将实验所需器皿、培养基、洁净服、样品、稀释液放入相应的传递窗中，打开紫外灯，照射30分钟。
2.打开洁净室的通风设备1小时以上，观察洁净室各个规定区域的压差是否符合相应规定范围，若不符合，则因通知设备部门及时进行调整。
3.进入洁净室，换上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，换上洁净服，戴上口罩、手套，并与喷手器下用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对双手进行消毒。
4.进入万级洁净走廊，观察各个规定房间的温度、湿度、压差是否符合规定，并与传递窗中将经紫外灯照射后的样品、器皿稀释液及培养基，放入相应的实验室（如微生物限度检查室或无菌检查室）。
并将培养基的温度控制在45℃以下（若培养基出现凝固现象时，因微波炉加热融化；若温度太高时，则因用纯化水降温至不烫手背宜。
5.打开超净工作台的紫外灯，照射30分钟，然后再打开超净工作台的通风设备。
用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对实验所用工作台面进行擦拭消毒（消毒时应遵循由里到外，由上到下，由洁净要求高到洁净要求低的原则）。
6.按照适宜的次序于超净工作台内摆放好稀释液、天平、消毒液、集菌仪、剪刀、镊子等物品，用75%酒精棉球进行消毒，将样品内包装表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次进行消毒。
将营养琼脂平板与超净工作台的做、中、右各置一个（平板需经下预培养48小时且无菌生长），开盖暴露30min，测定的沉降菌每平板不得超过1cfu，则符合百级超净工作台的沉降菌标准（注：在洁净工作台进行操作时，为防止污染，应用酒精棉球对双手反复消毒）。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物限度检查法标准操作规程完整
范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
责任微生物限度检验人员内容本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。
微生物计数法一、计数方法1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验。
菌液制备按规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
培养基适用性检查按照表规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查法标准操作规程3篇
微生物限度检查法标准操作规程第一篇：微生物限度检查法标准操作规程概述1.引言微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品质量控制检验的重要手段之一。
它的意义在于保证制品中微生物污染的可控性，保障产品的安全有效性。
本篇文章将围绕微生物限度检查法的标准操作规程，对其概述进行介绍。
2.主要内容2.1 微生物限度检查法的定义微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是指对药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中细菌和真菌等微生物数量进行检查的方法和标准。
它是评价产品质量与卫生安全性的重要方法。
2.2 微生物限度检查法的目的微生物限度检查法的目的在于评价药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中的微生物数量是否在规定的限度范围内，以保证产品的安全性和有效性。
同时，微生物限度检查法也可为制品的生产、质量控制和质量管理提供有效依据。
2.3 微生物限度检查法的适用范围微生物限度检查法适用于药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品的质量控制检验。
其中，针对药品类，在我国《药典》中有详细规定。
3. 微生物限度检查法的标准操作规程3.1 样品处理样品处理过程应密闭、无菌且保持无菌状态。
洗手、穿戴无菌工作服及手套等工艺应符合规定，以避免二次污染。
3.2 检验方法微生物限度检查法主要分为计数法和筛选法，具体方法可根据制品的特性进行选择使用，并符合规定的国家标准。
对于细菌，常用的检验方法包括菌落计数法、薄膜过滤法等；对于真菌，常用的检验方法包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
3.3 限度对于不同的制品，在药品中通常采用菌落计数法，在制品中微生物的限度规定一般标准分别为：细菌总数不超过10^3CFU/g或/mL，霉菌和酵母菌总数不超过10^2CFU/g或/mL。
3.4 结果判定若检测出的微生物数目符合规定限度，则判定结论为合格；若其中一个指标不符合规定，则判定为不合格。
TM-OT-000-V00除菌过滤前溶液微生物限度检查标准操作规程
TM-OT-000-V00除菌过滤前溶液微⽣物限度检查标准操作规程1、⽬的建⽴除菌过滤前药液微⽣物限度检查标准操作规程，使操作标准化，检验数据准确化。
2、适⽤范围适⽤于除菌过滤前头孢呋⾟酸溶液、头孢呋⾟钠洗液、头孢呋⾟钠混合溶媒、丙酮、头孢地嗪溶液、头孢地嗪钠钠盐溶液、头孢呋⾟钠钠盐A溶液、头孢西丁酸溶液、头孢西丁钠钠盐溶液、盐酸头孢吡肟溶液以及乳糖溶液的微⽣物限度检验。
3、依据及参考⽂件3.1 SOP-QA-074《微⽣物负荷监测标准操作规程》3.2 SOP-QC-0213《微⽣物限度检查法》4、职责4.1 QC检验员：按照此操作规程执⾏。
4.2 QC主管：保证此操作规程的执⾏。
4.3 QC经理：保证此操作规程的执⾏。
5、内容5.1取样⽅法按《取样操作规程》取样。
5.2检验仪器及⽤具洁净⼯作台脉动真空灭菌柜不锈钢铁桶⼲热灭菌箱冰箱⽣化培养箱霉菌培养箱薄膜过滤器酒精灯量筒平⽫刻度吸管试管蓝盖瓶⽣物安全柜0.45µm微孔滤膜5.3试剂、试液胰酪胨⼤⾖琼脂培养基pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液头孢菌素酶5.4检验⽅法5.4.1 标准规定：细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10cfu。
5.4.2检验⽅法：5.4.2.1丙酮、头孢呋⾟钠洗液、头孢呋⾟钠混合溶媒的检验⽅法：取本品50ml，加⼊450mlpH7.0氯化钠-蛋⽩胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml过滤，滤⼲，再⽤pH7.0氯化钠-蛋⽩胨缓冲液分次冲洗（100ml/次，冲洗3次），⽤薄膜过滤器滤⼲，将滤膜菌⾯朝上贴于胰酪胨⼤⾖琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移⾄30～35℃培养2天。
逐⽇点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml溶液（原液）计，结果项下以100ml溶液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋⽩胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平⾏做2⽫，阴性对照不得长菌。
微生物限度检查操作规程(中国药典2015版四部通则)
菌总数、控制菌的检查。
二、引用标准：《中国药典》2015年版(通则1105-1106)非(2)．目测霉变者以不合格论。
单）、分度小时，除再用刷和肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净，晾干备用。
容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流试管及培养皿：先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内，经121℃灭菌30 分钟。
趁热倾出培养物，再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗，最后以流水涮净。
吸管：全部直立浸没于清洁液的长筒形容器中，筒底应衬有棉或橡皮垫，以防管尖损坏。
24小时后，逐支用流水反复冲洗洁净，晾干后包扎灭菌备用。
载、盖玻片：应分别浸泡于清洁液12~24小时后，取出用流水冲洗，再放入3%~5%肥皂水或5%碳酸钠液内煮沸10~15 分钟，待自然冷却后，再用流水冲洗。
沥干后置95%乙醇中浸泡，晾干备用。
2，3，3玻璃器皿用前应洗涤干净，无残留抗菌物质。
吸管口上端距0.5 cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋中。
锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞（以免振荡时供试液污染瓶塞），再用牛皮纸包扎。
玻璃器皿，均于160℃干热灭菌2小时或高压蒸汽121℃灭菌30 分钟，烘干备用。
2.4用具2.4.1大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%~75%乙醇溶液浸泡）。
2.4.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。
也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。
2.4.3接种环（白铱金或镍铬合金，环径4~5mm、长度6~10cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、。
500ml。
100ml；。
变色3.1.11．亚甲蓝指示液：取亚甲蓝0.5g，加水使溶解成100ml。
3.1.12．溴麝香草酚蓝指示液：取溴麝香草酚蓝0.4g，加1mol/L氢氧化钠溶液0.64ml使溶解，再加水至100ml。
变色范围 pH6.0~7.6（黄→蓝）。
3.1.13．酸性品红指示液：以酸性品红0.5g，加水100ml使溶解，再逐渐加1mol/L氢氧化钠溶液16ml，每加1滴均应将溶液充分摇匀后再加第二滴，直至溶液呈草黄色；于沸水内保持15分钟，再静置2小时，滤过，即得。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠1.目的微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。
微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠2.范围微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。
微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠3.责任者微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠QC微生物限度检查人员；质量管理部微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.内容微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.1检测准备微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。
微生物限度检验标准操作规程
微生物限度检验标准操作规程1 目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。
2 依据《中国药典》20XX年版。
3 范围本标准适用于微生物限度检验。
4 责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。
中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。
5 程序5.1 执行标准：《中国药典》20XX年版。
5.2 抽样：照《取样标准操作规程》进行。
6 细菌、霉菌及酵母菌计数计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。
检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。
6.1 设备、仪器及用具6.1.1 设备微生物限度检测室室、净化工作台、生化培养箱（30-350C）、生化培养箱（23-280C）、电热恒温水浴锅、烘箱、电冰箱、灭菌柜、紫外灯等。
6.1.2 仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、薄膜过滤器等。
6.1.3 用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6.2 试液6.2.1 消毒液A．0.1% 新洁尔灭溶液：供手消毒、擦拭操作台面用。
B．75%乙醇溶液6.2.2 稀释液、试剂及配制A．PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g，加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。
B．聚山梨酯80C．吐温80D．单硬脂酸甘油酯6.3 培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.4 操作方法6.4.1 试验前准备6.4.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至传递窗内。
每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
6.4.1.2 开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。
6.4.1.3 操作人员进入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程1.目的建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。
2.范围适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。
3.责任者QC微生物限度检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
微生物限度检查标准操作规程
10.供试液的制备
10.1.液体供试品：取供试品10ml，加入稀释剂90ml，混匀，作为1：10供试液。
10.2.固体供试品：取供试品10g，置于匀浆杯适当灭菌容器中，加入0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀后，作为供试液。
11.对照试验：
取玫瑰红钠琼脂培养基30g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌20分钟。
5.3.胆盐乳糖培养基（BL）
取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌20分钟。
6.试液
6.1.无菌对氨基苯甲酸试液
6.1.1.配制：取对氨基苯甲酸0.1g，加入含10ml水的具塞试管中，121℃灭菌20分钟。
取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。
7.2.无菌磷酸盐缓冲液（PH7.2）
取磷酸氢二钠25.8g与磷酸二氢钠4.4g，加水稀释至1000ml，121℃灭菌20分钟。
8.指示液
8.1.甲基红指示液
取甲基红0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml，即得。
不得检出
颗粒剂
1000
100
不得检出
4.3.保健食品微生物限度检查法总则
4.3.1.抽样
4.3.1.1.供试品一般按批号随机抽样。
4.3.1.2.抽样量一般检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
4.3.1.3.抽样时，凡发现有异常可疑的样品，取有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品。凡已能从保健食品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的保健食品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。
微生物限度检查法标准操作规程
微生物限度检查法标准操作规程一、目的：建立一个微生物限度检查标准操作规程，规范质检员的操作，保证实验的安全性、准确性。
二、范围：适用于微生物限度检查的产品。
三、责任：QC部质检员对本规程实施负责。
四、内容1.检验依据：《中国药典》2010年版二部。
2. 简述2.1.微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌数检查。
2.2.微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
2.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
2.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃2.5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
3.设备、仪器3.1.设备：3.1.1.洁净实验室：微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。
结构和要求：洁净室应采光良好，避免潮湿、远离厕所及污染区。
操作间与缓冲间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。
洁净实验室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处无缝隙，不留死角。
操作间不应安装下水道。
洁净实验室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300LX。
●温度、湿度：洁净实验室内温度应控制在18～26℃，相对湿度最好在40％～60％。
●操作间：操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
微生物限度检查法操作规程
2023 WORK SUMMARY
微生物限度检查法操 作规程
REPORTING
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目录
• 介绍 • 微生物限度检查法操作规程 • 注意事项 • 常见问题及解决方法 • 未来展望
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培养条件
设定适宜的培养温度、湿 度、pH等条件，以保证微 生物的正常生长。
培养时间
根据不同微生物的生长周 期和特点，确定适宜的培 养时间，以保证微生物充 分生长。
微生物培养
培养基选择
根据待检测微生物的种类 和数量，选择适宜的培养 基，确保能够满足微生物 生长的需求。
培养条件
设定适宜的培养温度、湿 度、pH等条件，以保证微 生物的正常生长。
实验环境防护
实验过程中应保持室内空气流通，避 免尘埃、细菌等污染。
实验器材防护
实验器材应保持清洁、干燥、无菌， 使用前应进行灭菌处理。
实验试剂防护
实验试剂应妥善保管，避免污染和交 叉污染。
实验后的清理与消毒
实验器材清理
实验结束后，应对实验器材进行 清洁、灭菌处理，并妥善保管。
实验环境清理
实验结束后，应对实验环境进行清 洁、消毒处理，保持室内空气流通。
行微生物检测和控制。
PART 02
微生物限度检查法操作规 程
PART 02
微生物限度检查法操作规 程
样品采集与处理
01
02
03
采样原则
在无菌条件下进行，避免 交叉污染和环境对样品的 污染。
采样方法
根据不同样品类型，采用 适宜的采样方法，如随机 采样、分层采样等。
样品处理
将采集的样品进行预处理， 如粉碎、混合、稀释等， 以便进行后续的微生物培 养和计数。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查标准操作规程正文：一、目的：规范微生物限度检查的标准操作，确保所采用的微生物限度检验方法准确，试验结果可靠。
二、范围：适用于本公司各种样品的微生物限度检查。
三、职责：质量中心化验员负责本规程的执行。
质量中心管理人员负责本规程执行情况的监督检查。
四、内容：1.试验条件1.1试验环境检验必须在环境洁净度C级下的局部A级的单向流空气区域内进行。
1.2试验仪器、用具、培养基按照3.1.1 与3.2.1项下准备。
2.供试液的制备供试液若需加热时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
常用供试液制备方法如下：2.1.液体供试品取供试品10ml，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液，例如：纯化水、注射用水、饮用水、药液类、各验证项下微生物样品。
2.2.固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加入PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀(例如无水葡萄糖、氯化钠、乳酸钠溶液等)。
2.3内包材供试品供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.3.1内包膜、塑料输液袋取单层膜50cm2，剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.2 软管取软管26cm（表面积100cm2），剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.3加药塞、输液塞、口管、口盖、聚异戊二烯塞芯取供试品按表面积100cm2（加药塞9个、输液塞4个、口管4个、口盖9个、聚异戊二烯塞芯17个），置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
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1、目的
建立除菌过滤前药液微生物限度检查标准操作规程，使操作标准化，检验数据准确化。
2、适用范围
适用于除菌过滤前头孢呋辛酸溶液、头孢呋辛钠洗液、头孢呋辛钠混合溶媒、丙酮、头孢地嗪溶液、头孢地嗪钠钠盐溶液、头孢呋辛钠钠盐A溶液、头孢西丁酸溶液、头孢西丁钠钠盐溶液、盐酸头孢吡肟溶液以及乳糖溶液的微生物限度检验。
3、依据及参考文件
3.1 SOP-QA-074《微生物负荷监测标准操作规程》
3.2 SOP-QC-0213《微生物限度检查法》
4、职责
4.1 QC检验员：
按照此操作规程执行。
4.2 QC主管：
保证此操作规程的执行。
4.3 QC经理：
保证此操作规程的执行。
5、内容
5.1取样方法
按《取样操作规程》取样。
5.2检验仪器及用具
洁净工作台
脉动真空灭菌柜不锈钢铁桶
干热灭菌箱
冰箱
生化培养箱
霉菌培养箱
薄膜过滤器酒精灯
量筒
平皿
刻度吸管
试管
蓝盖瓶
生物安全柜
0.45µm微孔滤膜
5.3试剂、试液
胰酪胨大豆琼脂培养基
pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
头孢菌素酶
5.4检验方法
5.4.1 标准规定：细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10cfu。
5.4.2检验方法：
5.4.2.1丙酮、头孢呋辛钠洗液、头孢呋辛钠混合溶媒的检验方法：
取本品50ml，加入450mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml过滤，滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗（100ml/次，冲洗3次），用薄膜过滤器滤干，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天。
逐日点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml溶液（原液）计，结果项下以100ml溶液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
5.4.2.2头孢地嗪钠钠盐溶液、头孢呋辛钠钠盐A溶液、头孢西丁钠钠盐溶液的检验方法：取溶液（原液）50ml，加入450mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml过滤，滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗（100ml/
次，冲洗7次），用薄膜过滤器滤干，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天。
逐日点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml溶液（原液）计，结果项下以100ml药液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
5.4.2.3头孢呋辛酸溶液和头孢西丁酸溶液的检验方法：
取溶液（原液）50ml，加入450mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml用薄膜过滤器过滤，滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗（100ml/次，冲洗7次），在最后100ml冲洗液中加入50万单位头孢菌素酶中和5min，中和后滤干，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天。
逐日点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml溶液（原液）计，结果项下以100ml溶液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
5.4.2.4头孢地嗪溶液的检验方法：
取溶液（原液）50ml，加入450mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml过滤，滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗（100ml/次，冲洗7次），在最后100ml中加入100万单位头孢菌素酶中和5min，中和后滤干，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天。
逐日点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml药液（原液）计，结果项下以100ml 溶液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
5.4.2.5盐酸头孢吡肟溶液的检验方法：
取盐酸头孢吡肟溶液50ml，加入450mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，同法制备2份。
取制备好供试液250ml过滤，滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗（100ml/次，冲洗7次），在最后100ml中加入210万单位头孢菌素酶中和10min，中和后滤干，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上。
同法操作，共制备4张膜，在23～28℃培养3天，培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天。
逐日点计菌数。
备注：24h、48h、72h、96h、120h观察结果以相当于25ml溶液（原液）计，结果项下以100ml溶液（原液）计。
阴性对照：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
5.4.2.5乳糖溶液的检验方法：
取乳糖溶液100ml过滤，滤干，再用100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，滤干后将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上培养。
细菌、霉菌及酵母菌置23～28℃倒置培养3天，培养结束后，转移至30～35℃培养2天，逐日点计菌数。
注：乳糖溶液浓度为8%或低于8%的乳糖溶液可以采用此方法进行日常检查，若浓度高于8%的乳糖溶液须加无菌注射用水稀释成等于或低于8%的乳糖溶液进行日常检查。
阴性对照：取相应稀释液，不过滤供试液，其它操作同上，平行做2皿，阴性对照不得长菌。
6、附件
附件一：《检验记录-除菌过滤前溶液微生物限度》TM-OT-000/BTR01
附件二：《检验记录-除菌过滤前乳糖溶液微生物限度》TM-OT-000/BTR02
7、修订记录
检验记录-除菌过滤前溶液微生物限度
检验记录-除菌过滤前乳糖溶液微生物限度。