基因敲除技术

基因敲除（gene knock-out)又称基因打靶，该技术通过外源 DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定位修饰和 基因改造，具有专一性强，染色体DNA可与目的片段共同稳 定遗传等特点。
基因敲除可分为两种： 完全基因敲除
条件型基因敲除 现阶段常用的四种定位重组系统：噬菌体的Cre/Loxp系统，Gin/Gix系统，酵母细胞的FLP/FRT系统和R/RS 系统。
完全基因敲除一般采 用取代型和插入型，
条件型基因敲除
高等动物基因敲除技术
胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了哺乳 动物基因敲除的技术基础
基因打靶的主要步骤
(1)重组基因载体的构建:把目的基因和细胞内靶基因特异片段同源的ＤＮＡ
分子都重组到带有标记基因的载体上,此重组载体即为基因打靶载体,载体要包括 外源目的基因、同源基因片段及标记基因;
除了基因敲除 法，还有人用 基因捕获的方 法通过随机插 入突变破坏靶 基因表达。
除了研究基因功能外，基因敲除技术还被广泛应用于 建立人类疾病的转基因动物模型，为医学研究提供遗 传学数据，为遗传病的治疗，为生物新品种的培育奠 定新基础。
(2)导入受体细胞:用电穿孔、显微注射等方法把重组ＤＮＡ转入受体细胞核
内;
(3)筛选:用选择性培养基筛选已击中的细胞，筛选方法有Southern杂交，PCR
扩增，正负选择; (4)检测:观察被击中细胞的生物学特征,将已击中的胚胎干细胞转入胚胎使其生 长,对转基因动物进行形态学及分子生物学检测。
（a）利用neo基因 替换目的基因外显 子Ⅳ指外显子Ⅵ区 段，得到IAP基因 敲除的ES细胞。 （b） Southern印迹 实验
基因敲除技术
基本原理
高等wenku.baidu.com物基因敲除技术 植物基因敲除技术
基本原理
经典遗传学（forward genetics，正向遗传学）
即从一个突变体的表型出发，研究其基因型，进而找出 该基因的编码序列。
现代遗传学（reverse genetics，反向遗传学） 即从基因序列出发，推测其表型，进而推导出该基 因的功能。 基因敲除技术就是现代遗传学研究中的一个重要的技术手段。