饲料中磷酸氢钙含量检测

饲料中磷酸氢钙含量的检测

1 适用范围

1.1本方法规定了用钒钼黄显色光度法测定饲料中磷酸氢钙添加量的方法。

1.2本方法适用于饲料中磷酸氢钙（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氢钙含量的测定。1.3本方法不适用于饲料中中总磷、植酸磷等测定。

2 原理

将试样中的磷酸氢钙等磷酸盐有稀盐酸提取出来，经离心分离出残渣，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波长400 nm下进行比色测定。

3 试剂

3.1 盐酸溶液：c(HCl)=1mol/L

取90mL浓盐酸（37%）于500mL水中。搅匀后，加水到1000mL。

3.2 钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25 g，加水200 mL加热溶解，冷却后再加入250mL硝酸，另称取钼酸铵25 g，加水400 mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容1000 mL。避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用；

3.3 磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1 h，在干燥器中冷却后称取0.2195g 溶解于水，定量转入1000 mL容量瓶中，加硝酸3 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为50 µg/mL的磷标准液。

4 仪器和设备

4.1 实验室用样品粉碎机或研钵；

4.2 分样筛：孔径0.45 mm(40目)；

4.3 分析天平：感量.0.0001g；

4.4 分光光度计：可在400nm下测定吸光度；

4.5 比色皿：1cm；

4.6 容量瓶：50、100 mL；

4.8 移液管：1.0、2.0、3.0、

5.0、10 mL；

5 试样制备

5.1 一般样品

取代表性样品，经四分法制得试样250g，粉碎全过0.42mm(40目)筛，装入样品瓶内。

5.2 问题样品

直接取给动物饲喂的饲料250g，粉碎全过0.42mm(40目)筛，装入样品瓶内。

5.3空白样品的制备

按对应饲料配方的比例，将各种原料（除去磷钙外）用分析天平（千分之一）称取对应的量，并将配方中磷钙的量用等量玉米粉代替，将上述各种原料充分混合，粉碎全过0.42mm(40目)筛，空白样品至少制备50g。

6 测定步骤

6.1样品中磷钙的提取

称取空白样品（5.3）和待测样品（5.1或5.2）各3.00g（准确到0.0002g）分别放于100mL容量瓶中，同时各加70mL盐酸（3.1），室温下振荡10min±0.5min，立刻用水定容到100.00mL，再静置5min±0.5min，然后干过滤。收集滤液于干燥的三角瓶中。

6.2提取液的显色与测定

取空白与待测样品滤液（6.1）各5.00mL于50mL容量瓶中，加钒钼酸铵显色剂（3.2）10.00mL，室温下显色15min，用4500r/min的速度将显色液离心3min，然后以空白样品液为参比液，400nm下测定样品液的吸光度。

7 测定结果的计算及表述

样品中磷钙的含量（以P计）%=P×100×100/(m×5×1000000)=P1/m×500

式中：m-----待测样品的质量，g；

P1-----由磷标准曲线（或回归方程）查的磷含量，μg。

8 注意事项

8.1 此法测定的磷为磷酸一二三钙的总和。

8.2 步骤6.2只能离心,不能过滤。

8.3 用磷酸氢钙中枸溶性磷的测定方法，测饲料中的磷钙不准，原因为：植酸铵与金属离子（铜、铁、锌、锰、钙）形成的沉淀干扰大。

8.4 用饲料中总磷的含量来判断磷酸氢钙是否添加足量，也不可靠，原因：0.5%的磷酸氢钙提供的磷=0.085%，已在总磷法误差内，GB/T18823-2002规定

P=0.5%，P误差=±0.1%。

8.5 此法也可作为定性判断的方法，如果样品显色后黄色明显深于空白，则样品中加了磷钙，反之，二者颜色相近，则样品中没加磷钙。

8.6 每一品种都要单独做空白，不可通用，原因：配方的差异。

8.7 植酸酶不会干扰此法，强酸性(pH＜2)下植酸酶失活。