肝素钠的检测方法
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
肝素钠效价方法
肝素钠效价方法2. 1 羊血浆的制备取冷冻贮藏的绵羊血浆,置于不超过37 ℃的水浴融化,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用。
取血浆1 mL 置试管内,加入0. 25 %氯化钙溶液0. 8mL ,混匀,在(37 ±1) ℃水浴中保温,若在5 min 内凝结,则血浆可用于实验。
2. 2 标准品溶液的制备取肝素钠标准品(204 u/ mL) 适量,用煮沸放冷的纯化水稀释至100 u/ mL ,置4 ℃冷藏备用。
临用前用生理盐水精确稀释至7 u/ mL 。
2. 3 供试品溶液的制备称取肝素钠原料或量取肝素钠注射液适量,按估计效价用生理盐水稀释至与标准溶液相当的效价浓度。
2. 4 血浆半凝固度剂量(V1/ 2) 的测定取具塞试管3 支,分别于各试管中加入梯度剂量(170 ,200 ,230μL) 的标准溶液,再按顺序准确加入血浆1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶液0. 8 mL ,立即加塞,倒置混合3 次,置(37 ±0. 5) ℃恒温水浴中保温,准确记录1 min ,判断每管凝结程度,结果判定V1/ 2在200μL 左右。
以此为中点,左右各以10μL 为一级,同法操作,测定V1/ 2为190μL 。
2. 5 肝素钠及其制剂的效价测定取具塞试管若干支,分别于各试管中加入梯度剂量的标准溶液和供试品溶液,以190μL 为中点,每隔10μL 为一级,同2. 3 项下方法操作,记录每管凝结程度,按式(1) 计算。
供试品的效价单位= V std ×C std ×VV sam ×W sam(1)式中:V std. 标准品1/ 2 凝固度的肝素加入体积(μL) ;C std. 标准品溶液的浓度(u/ mL) ; V sam. 供试品1/ 2 凝固度时的加入体积(μL) ;W sam. 供试品称取的重量(mg) ; V. 测定样品的总体积(mL)。
肝素钠实验报告
一、实验目的1. 学习肝素钠的提取方法。
2. 掌握肝素钠的鉴定方法。
3. 了解肝素钠的药理作用和应用。
二、实验原理肝素钠是一种具有抗凝血作用的物质，主要由猪肠黏膜或牛肺中提取。
其分子结构中含有大量的硫酸基团，具有强大的抗凝血活性。
本实验采用酸碱沉淀法提取肝素钠，并通过硫酸铜法进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 猪肠黏膜- 醋酸- 硫酸铜- 碘化钾- 氢氧化钠- 乙醇- 无水硫酸钠- 蒸馏水2. 实验仪器：- 研钵- 烧杯- 烧瓶- 漏斗- 滤纸- 酒精灯- 铁架台- 移液管- 容量瓶- 滴定管- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 提取肝素钠（1）将猪肠黏膜剪成小块，放入研钵中，加入适量的醋酸，研磨至糊状。
（2）将糊状物倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水，煮沸30分钟。
（3）用滤纸过滤，收集滤液。
（4）将滤液加入适量的氢氧化钠，调节pH值至7-8，静置过夜。
（5）次日，用滤纸过滤，收集沉淀。
（6）将沉淀用乙醇洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，得到肝素钠粗制品。
2. 鉴定肝素钠（1）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（2）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的碘化钾溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 提取结果经过提取，得到了肝素钠粗制品，颜色呈淡黄色。
2. 鉴定结果（1）加入硫酸铜溶液后，溶液呈蓝色，证明肝素钠中含有硫酸基团。
（2）加入碘化钾溶液后，溶液呈棕红色，进一步证明肝素钠中含有硫酸基团。
六、实验结论1. 成功提取了肝素钠粗制品。
2. 通过硫酸铜法和碘化钾法鉴定，证明肝素钠中含有硫酸基团。
七、实验讨论1. 在提取过程中，酸碱沉淀法能够有效提取肝素钠，但提取率较低。
2. 在鉴定过程中，硫酸铜法和碘化钾法能够快速、简便地鉴定肝素钠。
3. 肝素钠作为一种重要的抗凝血药物，在临床应用中具有重要意义。
八、实验总结本次实验通过学习肝素钠的提取与鉴定方法，掌握了肝素钠的基本知识。
在实验过程中，注意了操作细节，确保了实验结果的准确性。
肝素检验细则
肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。
精确加入蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
64-0015 肝素钠抗FIIa效价检测EP方法与USP方法对比验证方案0000
365：美国标准品浓度USP U/ml。
6.4.1.3.用滴管加入质量为W的新鲜放冷的注射用水到50ml比色管中，盖紧瓶塞轻摇混合，待全部溶解混匀后，按1ml/支的装量，分装于2ml的洁净安瓿中，火焰封口；放入冰箱内2~8℃下保存3个月，使用时放至室温。
6.4.1.4.配制/分装记录填写附件3。
8.00
7.65
总体积（ml）
10.00
10.00
10.00
6.5.2.1.7.样品检测
取12支试管，标记为S1、S2、S3、S1、S2、S3、T1、T2、T3、T1、T2、T3每个浓度做2平行管。做将试管置于冰水浴中，用100-1000ul可调式微量移液器分别加入绵羊血浆1.0ml和相应浓度的标准品溶液、样品溶液1.0ml，混匀，避免产生气泡。将试管按S1、S2、S3、T1、T2、T3的顺序放入恒温水浴箱中，37℃下恒温水浴15分钟；向每支试管中加入1.0ml脑磷脂溶液，37℃下恒温水浴2分钟两分钟后，加入3.7g/L (w/v)氯化钙溶液1.0ml，混匀后以秒计时，记录绵羊血浆凝固所用时间。
质量控制部
刘家全
会审批准签名表
姓名
部门/职务
签名
日期
许万玲
质量控制部
生测Ⅰ组检验员
钱欣
质量保证部经理
李坦
质量总监
注：参加会审的人员：
1.海普瑞公司验证委员会的成员；
2.与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。
1.
1.1.对肝素钠抗FⅡa效价检测一般有两种方法：
1.1.1.按照《美国药典》（现行版）中“肝素钠专论”提供的方法，以USP的标准品为基准标准品，其检测结果的单位用USP U/mg表示；
肝素钠含量检测操作规程
肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
HPLC法测定肝素钠原料中EDTA―2Na的残留共5页文档
HPLC法测定肝素钠原料中EDTA―2Na的残留肝素钠是从猪小肠黏膜中提取精制的含有硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属于不均一的多糖分子，通常分子量在3000～30000道尔顿，临床常作为注射剂使用。
肝素钠本身带负电荷，能干扰血凝过程的许多环节，其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。
具体涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。
肝素钠作为原料药，中国药典中明确规定了其重金属限度的检测，但由于其来源于动物组织提取，实际生产工艺中均要增加去除重金属的工艺。
目前多采用添加EDTA-2Na来螯合重金属，形成水溶物后，经分级沉淀步骤去除螯合物。
EDTA-2Na收载于FDA《非活性组分指南》，可用于非注射和注射给药制剂，会与人体内的钙离子形成螯合物，引起低血钙等症状。
由于肝素钠生产过程中使用EDTA-2Na去除重金属，所以在终产品中可能残留EDTA-2Na，对其进行检测有重要的意义。
1仪器与材料11仪器TG332A型分析天平（湘仪天平仪器设备有限公司）；LC-15C 型高效液相色谱仪（日本岛津）；LC-20AD型紫外检测器（日本岛津）；1.2材料硫酸铜（分析纯，天津市永大化学试剂有限公司）；EDTA-2Na （分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；肝素钠（注射级，批号：HM120401、HM120402、HM120403，石家庄市协和药业有限公司）。
水为自制纯化水（二级反渗透法）。
2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料WondaSilC18（200mm×46mm×5μm）；流动相：0025mol/l硫酸铜溶液（用稀硫酸调节pH至30）；检测波长：254nm；流速：10ml/min；检测温度：室温；进样量：20μl。
2.2溶液的制备2.2.1空白溶液的制备精密量取004mol/l硫酸铜溶液10ml，置50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
肝素钠简介检测及生产精制工艺流程
肝素钠简介检测及生产精制工艺流程一、肝素分类肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，它与蛋白质结合在一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显效药物。
(1) 普通(标准)肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子量为15000，相当稳定。
(2) 通常把分子量小于6000的称为低分子肝素。
低分子肝素与普通肝素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代普通肝素的趋势。
近年临床常用的有：达肝素钠(法安明)、依诺肝素钠(克赛)、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙)。
(3) 目前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素、改构型肝素、类肝素等, 这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用时间长和出血作用少的优点，很有开发前途。
二、肝素钠简介拼音名：Gansuna英文名：Heparin Sodium本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物质，通过激活抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)而发挥抗凝作用。
它对凝血过程的三个阶段均有影响，在体内外均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。
口服不吸收，皮下、肌肉或静脉给药均吸收良好。
三、肝素钠检测（药典版）拼音名：Gansuna英文名：Heparin Sodium本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，具有延长血凝时间的作用。
按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于150 单位。
【性状】本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。
本品在水中易溶。
【比旋度】取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含40mg 的溶液，依法测定（附录Ⅵ E），比旋度应不小于＋35°。
【鉴别】 (1) 取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照电泳法（附录Ⅴ F第三法）试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。
肝素钠测定数据以及标准曲线
肝素钠的提取与检测摘要本实验主要是对肝素钠提取工艺的研究。
对国内外肝素钠的提取和纯化方法进行研究和分析，建立以牛内脏（肝、肺、心）为原料，采用盐解、离子交换的方式与乙醇沉淀相结合提取肝素钠。
利用天青A染色法检测肝素钠的效价，测定波长是505nm，与标准曲线对比可得到样品中肝素钠的效价。
利用浓硫酸氧化法，在波长为298nm处的吸光度来确定肝素钠的浓度。
利用双缩脲法，在波长为540nm处的吸光度来确定蛋白质的含量。
试验测得肝素钠的效价平均值为139.483U/mg，肝素钠的浓度平均值为200.8752mg/kg，去除蛋白质效果良好，均在99%以上。
关键词：肝素钠，盐解，树脂，天青A，纯化，蛋白质1.1研究背景和意义1.1.1研究背景肝素钠又称肝素，是重要的生物药品，作为天然的抗凝血物质而受到世界各国的重视。
我国是世界上肝素钠主要出口国之一，但是出口产品以低效价的粗品肝素为主。
肝素广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。
肝素在体内多以与蛋白质结合以糖蛋白复合物的形式存在[1]。
这种复合物没有抗凝血活性，但在去除蛋白质后，这种活性逐渐表现出来。
肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。
中国具有丰富的畜产品副产物资源，但我国生产的肝素产品效价低，提取率低的问题很突出，这种情况下，只有提出肝素提取纯化新工艺，才能提高畜产品加工副产物的附加值，拓宽利用领域，增加国民收入，提高中国在国际上的地位。
1.1.2研究意义肝素主要分布于哺乳动物的肺、肝、小肠粘膜细胞内。
目前，国内外制取肝素的原料多以猪小肠粘膜、牛肺、猪肺为主，在提取工艺中都必须经过肝素蛋白质复合物的提取、肝素蛋白质复合物的分解和粗品肝素的精制三个过程。
国内每年猪牛屠宰量极大，副产物产量极高，但是目前利用率却很低。
一种简单的肝素钠效价检测方法
肝素钠效价测定方法肝素钠效价测定步骤：准确称取0.035-0.05g样品，放入小烧杯中，加入35-50ml0.9%Nacl，配成0.1%的样品溶液；吸取0.5ml上述样品溶液至小瓶中；根据估计效价，加入适量0.9%Nacl,其量为估计效价除以标准品效价（即8），减去1，除以2，即：[（估计效价/8）-1]/2 摇匀；取5个试管，分别吸取上述3的溶液140ul、150ul、160ul、170ul、180ul；分别加入1ml血浆，再加入0.8ml0.25%Cacl2,盖上塞子，摇匀；放入37℃±1水浴箱中1小时，1小时后观察结果结果判定，实际效价=估计效价*标准品凝固点/样品凝固点；废液残留测定试验目的为了加强生产监控力度，在过程中进行检测吸附废液残留，从而根据废液残留量，在后道工序进行调整，最大程度的提高肝素钠效价和出率。
试验原理肝素钠是具有抗凝血活性的一类物质，在溶液中肝素钠含量越高，抗凝血作用越强，吸附废液中肝素残留量的高低，直接跟血浆的凝固程度有关，含量越高，凝固程度越大。
三、试验器材及试剂1、试验器材：-18度冰箱1个，吸耳球2个，10ml吸量管3个，1ml吸量管1个，试管架1个，恒温水浴箱1个，锥形漏斗1个，脱脂棉；2、试验所需试剂：血浆，标准品，0.9%的Nacl,0.25%的Cacl2；四、试验方法1、吸附结束后，关闭搅拌电机，静置2分钟，用瓶子取半瓶吸附废液，盖上瓶盖，放冷水中冷却备用；2、取1个试管架，装试管4排，第一排装5支，后面3排各装3支；3、在第1排试管中分别按顺序加入吸附废液1400ul、1600ul、1800ul、2000ul、2200ul,后3排分别按顺序加入标准品150ul、160ul、170ul；4、分别在上述4排试管里加入1ml血浆，然后再加入0.8ml0.25%的Cacl2，盖上试管塞，摇匀；5、放入37℃±1 的恒温水浴箱中1小时，1小时后观察每1管的凝固程度；五、试验结果1、观察每一排试管中血浆的凝固程度，以第1排血浆的凝固程度作为吸附废液的血浆凝固点，后3排中凝固程度相同的两排的凝固程度作为标准品的凝固点；凝固程度判断：1）、完全凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块不从管壁脱落；2）、3/4凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块有气泡产生，能从管壁脱落；3）、1/2凝固：倒转管子，大约有一班体积的溶液凝固；4）、1/4凝固：倒转管子，只有很少溶液凝固；5）、0凝固：倒转管子，溶液无凝固现象，并完全流动；2、废液残留量的计算方式：废液残留量=8*标准品凝固点/样品凝固点。
肝素钠标准品的鉴别检查
肝素钠（标准品）的鉴别检查
本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。
本品在水中易溶。
比旋度取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中含2.5mg的溶液，照琼脂糖凝胶电泳法试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比为0.9～1.1。
鉴别检查
1、取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照电泳法试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。
2、本品的水溶液显钠盐的鉴别反应。
酸碱度取本品0.10g ，加水10ml 溶解后，依法测定，pH 值应为5.0 ～7.5 。
溶液的澄清度与颜色取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，照分光光度法（附，在640nm 的波长处测定，吸收度不得大于0.018；如显色，与黄色1 号标准比色液比较，不得更深。
吸收度取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法测定，在260nm 的波长处，其吸收度不得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸收度不得大于0.15。
肝素钠二糖结构高效液相检测方法的研究
肝素钠二糖结构高效液相检测方法的研究
肝素钠是一种抗凝血药物，其结构中的二糖单位是药物活性的重要组成部分。
为了了解肝素钠的二糖组成，进而解析其微观结构和作用机理，高效液相检测方法被广泛应用于肝素钠二糖结构的检测。
高效液相检测方法通常涉及以下几个步骤：
1.样品制备：将肝素钠样品进行适当的处理，以便进行后续的酶解反应。
2.酶解反应：采用肝素酶对肝素钠进行酶解，得到二糖及寡糖。
由于二糖和寡糖的磺酸化程度不同，它们在阴离子交换柱上的保留程度也不同，从而实现分离。
3.液相色谱分析：将酶解后的样品通过高效液相色谱进行分析，根据保留时间和峰面积等信息，对二糖及寡糖进行定性和定量分析。
4.数据处理：将液相色谱分析得到的数据进行处理，得到肝素钠二糖的结构信息。
在高效液相检测方法中，需要注意以下几个方面：
酶解条件的选择：酶解反应的条件（如温度、pH值、酶浓度等）会影响酶解效率和产物的生成，因此需要选择合适的条件以获得最佳的酶解效果。
液相色谱条件的优化：液相色谱条件的优化可以提高分离效果和检测灵敏度，从而获得更准确的结构信息。
样品处理过程中的注意事项：样品处理过程中需要注意避免样品的污染和损失，以保证检测结果的准确性。
总之，高效液相检测方法是一种有效的手段，可以用于肝素钠二糖结构的检测和分析。
通过不断优化方法和技术，我们可以更深入地了解肝素钠的微观结构和作用机理，为药物研发和临床应用提供有力的支持。
肝素钠注射液检验操作规程_概述说明以及解释
肝素钠注射液检验操作规程概述说明以及解释1. 引言：1.1 概述肝素钠注射液是一种常用的抗凝血剂，广泛应用于临床医学中。
其作用是通过抑制凝血过程中的凝血酶形成，防止血栓的生成和扩展。
为了确保肝素钠注射液的质量和安全性，需要对其进行检验操作规程的制定与执行。
1.2 文章结构本文主要分为引言、肝素钠注射液检验操作规程的重要性、内容与要点、执行中常见问题及解决方案以及结论五个部分。
通过这些内容的阐述，旨在全面介绍肝素钠注射液检验操作规程，并提出相应建议和措施。
1.3 目的本文旨在概述肝素钠注射液检验操作规程并解释其重要性。
通过明确检验操作规程的意义与价值，强调制定该规程所带来的实际效益。
同时，也将介绍操作规程所包含的内容与要点，以及执行过程中可能遇到的问题和对应解决方案。
最后，总结表达对该操作规程的完善与推广建议，为相关领域的从业人员提供参考。
2. 肝素钠注射液检验操作规程的重要性：2.1 肝素钠注射液的用途和作用：肝素钠注射液是一种常用的抗凝血药物，通常用于预防和治疗血栓性疾病，如深静脉血栓、肺栓塞等。
它通过抑制凝血酶的活性，降低凝血过程中纤溶酶原被激活并导致纤维蛋白降解产物析出，从而发挥抗凝作用。
由于肝素钠注射液的应用广泛，其质量和安全性至关重要。
2.2 检验操作规程的意义和价值：肝素钠注射液检验操作规程是保证产品质量和使用安全的重要保障。
通过制定标准化的操作规程，可以确保检验过程的严谨性、可复现性和快速高效性。
合理的操作规程能够有效识别潜在问题或错误，并及时采取纠正措施，提高产品质量稳定性及使用安全。
2.3 为什么需要制定肝素钠注射液检验操作规程：制定肝素钠注射液检验操作规程的主要目的是确保产品质量的一致性和稳定性，以及使用安全性。
这样可以预防低质量肝素钠注射液的使用和销售，并减少由于药物缺陷引起的不良事件和患者风险。
操作规程还可以指导操作人员正确进行样品采集、保存、处理和测试等环节，降低人为因素对结果的影响。
肝素钠效价测定步骤
肝素钠效价测定步骤准确称取0.035-0.05g样品，放入小烧杯中，加入35-50ml0.9%Nacl 盐，配成0.1%的样品溶液；吸取0.5ml上述样品溶液至小瓶中；根据估计效价，加入适量0.9%Nacl,其量为估计效价除以标准品效价（即8），减去1，除以2，即：[（估计效价/8）-1]/2 摇匀；取5个试管，分别吸取上述3的溶液140ul、150ul、160ul、170ul、180ul；分别加入1ml血浆，再加入0.8ml0.25%Cacl2,盖上塞子，摇匀；放入37℃±1水浴箱中1小时，1小时后观察结果结果判定，实际效价=估计效价*标准品凝固点/样品凝固(1L(升)=1000ML（毫升）\1ML=1000UL（微升）)废液残留测定试验目的为了加强生产监控力度，在过程中进行检测吸附废液残留，从而根据废液残留量，在后道工序进行调整，最大程度的提高肝素钠效价和出率。
试验原理肝素钠是具有抗凝血活性的一类物质，在溶液中肝素钠含量越高，抗凝血作用越强，吸附废液中肝素残留量的高低，直接跟血浆的凝固程度有关，含量越高，凝固程度越大。
三、试验器材及试剂1、试验器材：-18度冰箱1个，吸耳球2个，10ml吸量管3个，1ml吸量管1个，试管架1个，恒温水浴箱1个，锥形漏斗1个，脱脂棉；2、试验所需试剂：血浆，标准品，0.9%的Nacl,0.25%的Cacl2；四、试验方法1、吸附结束后，关闭搅拌电机，静置2分钟，用瓶子取半瓶吸附废液，盖上瓶盖，放冷水中冷却备用；2、取1个试管架，装试管4排，第一排装5支，后面3排各装3支；3、在第1排试管中分别按顺序加入吸附废液1400ul、1600ul、1800ul、2000ul、2200ul,后3排分别按顺序加入标准品150ul、160ul、170ul；4、分别在上述4排试管里加入1ml血浆，然后再加入0.8ml0.25%的Cacl2，盖上试管塞，摇匀；5、放入37℃±1 的恒温水浴箱中1小时，1小时后观察每1管的凝固程度；五、试验结果1、观察每一排试管中血浆的凝固程度，以第1排血浆的凝固程度作为吸附废液的血浆凝固点，后3排中凝固程度相同的两排的凝固程度作为标准品的凝固点；凝固程度判断：1）、完全凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块不从管壁脱落；2）、3/4凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块有气泡产生，能从管壁脱落；3）、1/2凝固：倒转管子，大约有一班体积的溶液凝固；4）、1/4凝固：倒转管子，只有很少溶液凝固；5）、0凝固：倒转管子，溶液无凝固现象，并完全流动；2、废液残留量的计算方式：废液残留量=8*标准品凝固点/样品凝固点新树脂处理方案1、用60度的热水浸泡4小时，沥干。
肝素钠检测试剂盒(天青A微板法)
肝素钠检测试剂盒(天青A 微板法)简介：肝素钠是一种黏多糖，在多糖链上带有很多阴离子基团如磺酸基、羧基等，因此肝素具有强负电性，能与阳离子或带正电荷的分子结合，形成复合物。
天青A 是一种碱性燃料，其正电荷与肝素的阴离子结合，生成肝素-天青A 复合物。
肝素钠检测试剂盒(天青A 微板法)检测原理是肝素阴离子与天青A 阳离子结合，形成肝素-天青A 复合物，并能表现因光异色现象，即产生一种颜色反应，该反应程度与肝素的结合量具有一定比例关系，通过酶标仪检测吸光度，在碱性条件下，肝素浓度与吸光度值符合郎伯-比耳定律，通过检查标准曲线，获得肝素(钠)的效价。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管或试管3、 酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 稀释标准品： 取肝素标准(100U/ml)，按肝素标准(100U/ml)：蒸馏水混合，即得的肝素标准。
2、 配制天青显色工作液：取适量的天青显色液，按天青显色液：蒸馏水混合，即为天青显色工作液。
4℃保存，1周有效。
显色工作液最好现配现用。
3、 制作标准曲线：取干净离心管或试管，按下表进行操作，以0号管为空白对照，加入显色液后均应混匀，酶标仪检测吸光度。
可重复检测，测定结果求平均值，以效价为横坐标，吸光度为纵坐标作图得标准曲线。
12345编号 名称TC1331 100T Storage试剂(A): 肝素标准(100U/ml) 1ml -20℃ 试剂(B): Heparin assay buffer 5ml 4℃ 避光 试剂(C): 天青显色液 1ml4℃ 避光 使用说明书1份肝素标准(1U/ml) 0 0.04 0.08 0.12 0.16 0.2 蒸馏水/μl 200 160 120 80 40 0 Heparin assay buffer/μl 50 50 50 50 50 50天青显色液/μl 50 50 50 50 50 504、还原糖测定：准确称取一定量的待测肝素钠样品，用蒸馏水溶解成溶液。
肝素钠_中国药典2015版公示标准
肝素钠GansunaHeparin Sodium■本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，是由不同分子量的糖链组成的混合物，由α-D-氨基葡萄糖（N-硫酸化，O-硫酸化，或N-乙酰化）和O-硫酸化糖醛酸（α-L-艾杜糖醛酸或β-D葡萄糖醛酸）交替连接形成聚合物，具有延长血凝时间的作用。
按干燥品计算，每1mg中抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为0.9～1.1。
■[修订]■核酸取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在260nm的波长处，吸光度不得大于0.10。
■[增订]■蛋白质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含30mg的溶液，作为供试品溶液；另取牛血清白蛋白对照品适量，分别加水制成每1ml中各含0、10μg、20μg、30μg、40μg与50μg的溶液，作为对照品溶液，照蛋白质含量测定法（附录ⅦM 第二法）测定。
按干燥品计，含蛋白质不得过0.5%。
■[增订]■有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，涡旋混合至完全溶解，取0.5ml，加入1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加入1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为供试品溶液；取肝素对照品250mg，加水2ml，涡旋混匀至完全溶解，作为对照品溶液（1）；取对照品溶液（1）1.2ml，加2%硫酸皮肤素对照品0.15ml与2%多硫酸软骨素对照品0.15ml，作为对照品溶液（2）；取对照品溶液（2）0.1ml，加水稀释至1ml，作为对照品溶液（3）；取对照品溶液（1）0.4ml，加水0.1ml，混匀，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（4）；取对照品溶液（2）0.5ml，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（5）。
肝素检验细则
肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。
精确加入蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
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肝素钠的检测方法
德晟肝素钠检测方法如下：
一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。
F=标品微升数*预估效价/样品微升数
1.1试剂：
1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）
28IU/mg肝素钠标准品
30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。
40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。
58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。
1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：
取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制：
M=20/样品预估效价（g）
称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。
2.2测定：
标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
二．PH值
精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。
三．吸光度
精确称取0.2g样品(精确至0.01g)溶于50ml去离子水中，分别测定在260nm和280nm 的吸光度。
四．澄清度
称取1.00g样品溶于25ml去离子水中，测定640nm的吸光度。
五．比旋度
称取1.00g样品溶于25ml去离子水中，旋光仪测定其比旋度，取其三次均值。
注意：检测前所有试验仪器均用生理盐水清洗二至三遍。