糖类的提取分离与薄层层析分析实验步骤
薄层色谱糖类 -回复
薄层色谱糖类 -回复
薄层色谱（Thin-layer chromatography, TLC）是一种常用于分
离和检测化合物的色谱技术。
薄层色谱可以应用于各种不同类型的化合物，包括糖类物质。
在薄层色谱分析中，首先将待测试的样品溶解在适当的溶剂中，并通过玻璃棒或微量注射器在薄层色谱板上均匀地涂布一层薄层吸附剂，常用的吸附剂是硅胶或氧化铝。
然后将薄层色谱板置于槽中，其中槽中的混合溶液或气相通过上升或下降的方式进行色谱分离。
当混合物中的化合物在薄层吸附剂上被分离后，可以使用物理、化学或者生物方法进行检测。
对于糖类的分析，薄层色谱可以用于确定糖类的种类、结构和含量。
糖类在薄层色谱中的分离依赖于它们在薄层吸附剂上的亲和性差异，通过改变溶剂的组成、浓度和涂布的方式等条件，可以优化糖类的分离效果。
常用的糖类检测方法包括利用显色剂的染色法、利用特定反应的显色反应法、利用尺寸分离的色谱法等。
总之，薄层色谱是一种有效的用于分离和检测糖类的色谱技术，可以被广泛应用于糖类的分析。
糖苷提取分离实验报告
一、实验目的1. 熟悉糖苷类化合物的提取和分离方法；2. 学习利用色谱技术进行糖苷的分离纯化；3. 掌握糖苷的鉴定和结构分析。
二、实验原理糖苷是一类重要的天然有机化合物，广泛存在于植物界。
提取糖苷的方法有水提法、醇提法、超声波提取法等。
本实验采用醇提法提取糖苷，利用薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）对提取的糖苷进行分离纯化，并通过核磁共振波谱（NMR）和质谱（MS）对分离纯化的糖苷进行结构鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物样品、乙醇、丙酮、石油醚、正己烷、无水硫酸钠、硅胶、薄层板、色谱柱、核磁共振波谱仪、质谱仪等。
2. 实验仪器：旋转蒸发仪、恒温水浴锅、分析天平、磁力搅拌器、分光光度计、紫外灯等。
四、实验步骤1. 糖苷的提取（1）将植物样品干燥、粉碎，过40目筛；（2）取适量粉末，加入适量乙醇，在室温下搅拌提取1小时；（3）过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，得到糖苷提取物。
2. 糖苷的分离纯化（1）薄层色谱法（TLC）分离①点样：将糖苷提取物点在薄层板上，用石油醚-乙酸乙酯（V/V=8:2）为展开剂；②展开：将薄层板放入展开缸中，展开至前沿；③显色：用紫外灯照射薄层板，观察糖苷的Rf值，并标记出斑点；④刮取：刮取Rf值相同的斑点，进行下一步分离。
（2）高效液相色谱法（HPLC）分离①制备糖苷样品：将刮取的糖苷斑点溶解于甲醇中，制成糖苷样品；②进样：将糖苷样品进样至HPLC仪；③分析：通过比较保留时间，确定糖苷的纯度。
3. 糖苷的鉴定（1）核磁共振波谱（NMR）分析①将分离纯化的糖苷溶解于DMSO-d6，制成溶液；②将溶液滴在NMR样品管中，进行核磁共振波谱分析；③分析糖苷的结构，确定其化学位移和耦合常数。
（2）质谱（MS）分析①将分离纯化的糖苷溶解于甲醇，制成溶液；②将溶液进样至质谱仪；③分析糖苷的分子量和碎片信息，确定其结构。
五、实验结果与讨论1. 实验结果（1）糖苷的提取：根据薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）的结果，从植物样品中成功提取出糖苷。
实验二十五细胞中糖类化合物的提取及成分鉴定
实验二十五 细胞中糖类化合物的提取及成分鉴定糖类是一类多羟基的醛或酮及其缩合物或衍生物的总称，可分为单糖、寡糖、多糖、复合糖及糖的衍生物如糖胺、糖酸等。
糖类是生物界分布极广，含量十分丰富的一类有机化合物，几乎所有的动物、植物、微生物体内都含有糖类，其功能也是多样的。
过去认为糖类在生物体内的作用主要是作为能量来源及结构物质，但近20年以来发现糖的复合物在细胞识别、细胞间物质的运输和免疫调节等方面有重要的作用。
糖复合物的信息量非常大，是生物的另一类重要生物大分子化合物。
因此糖的分离、纯化、结构测定、结构与功能的研究也受到科学家广泛的关注。
糖的提取分离方法很多，主要是依据不同糖分子的物理化学性质、溶解度的差异进行 分离提取。
近年也发展了许多新的分离、纯化方法，如薄层层析法、各种柱层析法、气相色 谱及高效液相色谱法等。
糖的定量分析方法也很多，有化学计量法如次亚碘酸法和非化学计量法如铜试剂法、 硝基试剂法等方法可供选择。
本实验主要介绍单糖、蔗糖及淀粉的分离提取、鉴定和测定的一般原理和方法。
实验原理1．单糖及多糖的提取单糖：凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。
单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。
由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。
而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。
因此单糖和双糖一般可用热水或乙醇将之提取出来。
多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。
在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有更复杂的生理功能，在动植物的生理活动中起重要作用。
多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。
因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。
样品中的蛋白质、色素等杂质可通过加入醋酸铅、氢氧化钡、铁氰化钾等清洁剂将之除去。
糖类硅胶G薄层层析实验方法
糖类硅胶G薄层层析实验方法【目的和要求】1、了解并初步掌握吸附层析的原理。
2、学习薄层层析的一般操作及定性与定量鉴定的方法。
【原理】薄层层析是一种广泛应用于氨基酸，多肽，核苷酸，脂肪类，糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
由于层析是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，所以称之为薄层层析。
薄层层析的主要原理是，根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。
当展层溶剂移动时，会带着混合样品中的各组分一起移动，并不断发生吸附与解吸作用以及反复分配作用。
根据各组分在溶剂中溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
如果把标准样品在同一层析薄板上一起展开，便可通过在同一薄板上的已知标准样品的Rf值和未知样品各组分的Rf值进行对照，就可初步鉴定未知样品各组分的成分。
薄层层析根据所支持物的性质和分离机制的不同包括吸附层析，离子交换层析和凝胶过滤等。
糖的分离鉴定可用吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄析上的移动距离为戊糖>已糖>双糖>三糖。
若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高高糖的分离效果。
如对已分开的斑点显色，而将与它位置相当的另一个未显色的斑点从薄层上与硅胶G 一起刮下，以适当的溶液将糖从硅胶G上洗脱下来，就可用糖的定量测定方法测出样品中各组分的糖含量。
薄层层析的展层方式有上行，下行和近水平等。
一般常采用上行法，即在具有密闭盖子的玻璃缸(即层析缸)中进行，将适量的展层溶液倒于缸底，把点有样品的薄层板放入缸中即可(如图1所示)。
保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸气是实验成功的关键。
与纸层析，柱层析等方法比较，薄层层析有明显的优点：操作方便，层析时间短，可分离各种化合物，样品用量少(0。
[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法
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[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法糖类硅胶G薄层层析实验方法一、实验目的本实验旨在学习和掌握糖类化合物在硅胶G薄层上的分离和分析方法，了解糖类化合物的分离原理、操作技巧和鉴定方法。
二、实验原理糖类硅胶G薄层层析是一种常用的分离和分析糖类化合物的方法。
硅胶G薄层具有较高的分离效率和良好的选择性，可用于分离和鉴定各种糖类化合物，如单糖、低聚糖和多糖。
在层析过程中，糖类化合物在硅胶G薄层上的移动速度与它们的极性、分子量和官能团有关。
通过控制展开剂的极性和组成，可以实现对不同糖类化合物的有效分离。
三、实验步骤1.硅胶G薄层的制备：按照硅胶G薄层层析板的说明书，制备一定规格的硅胶G薄层板。
2.点样：用毛细管或微量注射器将标准糖样品点在硅胶G薄层的适当位置。
每个样品点应间隔一定距离，以便后续的定性分析。
3.展开：将点好样品的硅胶G薄层板放入展开槽中，注入展开剂。
展开剂的极性和组成应根据实验要求进行选择。
一般情况下，糖类化合物在极性较大的溶剂中移动速度较快。
4.显色：在展开后的硅胶G薄层板上，喷洒适当浓度的显色剂，使糖类化合物显色。
常见的显色剂包括硝酸银溶液、苯胺-二苯胺溶液和溴酚蓝溶液等。
根据需要选择合适的显色剂和显色条件。
5.定性分析：通过观察硅胶G薄层板上各糖类化合物的Rf值（相对移动距离）和显色情况，对各糖类化合物进行定性分析。
标准糖样品可作为参照对比。
6.定量分析：采用合适的测量方法，如光密度法或荧光法等，测定硅胶G薄层板上各糖类化合物的含量。
根据标准曲线或标准样品，对未知样品进行定量分析。
四、注意事项1.在制备硅胶G薄层时，应选择合适的硅胶G品牌和规格，确保层析板的分离效果和质量。
2.点样时应注意样品的浓度和上样量，避免样品过载对分离效果的影响。
3.在选择展开剂时，应根据实验要求和糖类化合物的性质进行选择，以获得最佳的分离效果。
注意控制展开剂的极性和组成，避免对层析板和样品的损害。
4.在进行定性分析时，应注意观察各糖类化合物的Rf值和显色情况，避免误判。
糖的层析_实验报告
一、实验目的1. 了解层析技术在糖类化合物分析中的应用。
2. 掌握糖类化合物的分离和鉴定方法。
3. 熟悉薄层层析的操作技术。
二、实验原理层析是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数差异而实现分离的技术。
薄层层析（TLC）是一种常用的层析方法，其固定相为薄层板，流动相为有机溶剂。
糖类化合物在薄层层析过程中，由于分子量、极性等差异，会在固定相和流动相之间发生不同的分配，从而实现分离。
三、实验材料1. 实验试剂：葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、硼酸、硅胶G、丙酮、正己烷、无水乙醇、氨水、浓硫酸、苯酚、莫氏试剂等。
2. 实验器材：薄层层析板、展开缸、滴管、吹风机、紫外灯、天平等。
四、实验步骤1. 准备薄层层析板：将硅胶G均匀涂布于薄层板上，晾干后备用。
2. 制备样品：将葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉分别配制成一定浓度的溶液。
3. 点样：用滴管将各样品溶液滴加于薄层板上，点样点间距约2cm。
4. 展开层析：将薄层板置于展开缸中，加入适量溶剂，使溶剂液面略高于点样点。
待溶剂展开至适当位置后，取出薄层板晾干。
5. 显色：将薄层板置于紫外灯下观察，观察各糖类化合物在紫外光下的荧光特性。
6. 鉴定：根据各糖类化合物在薄层板上的荧光颜色和位置，进行鉴定。
7. 数据处理：计算各糖类化合物在薄层板上的Rf值，分析其分离效果。
五、实验结果与分析1. 展开层析结果：葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在薄层板上分离效果良好，形成四个明显的斑点。
2. 显色结果：葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在紫外光下均呈现荧光，颜色分别为蓝色、黄色、红色、绿色。
3. 鉴定结果：根据各糖类化合物在薄层板上的荧光颜色和位置，可以鉴定出葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉。
4. 数据处理结果：计算各糖类化合物在薄层板上的Rf值，分别为0.25、0.40、0.50、0.75。
六、实验讨论1. 层析分离效果：本实验中，葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在薄层板上分离效果良好，说明薄层层析是一种有效的糖类化合物分离方法。
多糖薄层色谱
多糖薄层色谱多糖薄层色谱，是一种常用的分离和分析多糖混合物的方法。
多糖是一类由多个单糖单元组成的生物大分子，包括淀粉、糖原、纤维素、果胶、唾液酸等等。
多糖的结构、含量和分布对于生物体的生长、发育、代谢等方面至关重要，因此多糖的研究备受关注。
下面将从多糖薄层色谱的基本原理、实验步骤以及应用领域三个方面进行介绍。
一、多糖薄层色谱的基本原理多糖薄层色谱是一种分离和分析多糖混合物的方法，其基本原理是根据多糖分子在一定条件下的化学性质和物理性质的差异进行分离和鉴定。
多糖的化学性质和物理性质包括大小、形状、电荷、水溶性、易降解性等方面，这些性质的不同使得多糖在分离柱上的滞留时间和移动距离不同，从而实现多糖混合物的分离和鉴定。
二、多糖薄层色谱的实验步骤1. 根据不同多糖的特点选取合适的分离柱和色谱条件，如氨基硅胶、正相色谱、离子交换色谱等；2. 将多糖混合物加入样品槽中，以恒定的流速将样品注入分离柱中；3. 调节移动相和固定相的比例和流速，通过分离柱，将多糖混合物分离开来，得到多个单糖峰；4. 通过色谱检测器检测不同单糖峰的吸收峰值，获取单糖的含量和结构信息。
三、多糖薄层色谱的应用领域多糖薄层色谱广泛应用于食品科学、生物医学、环境科学等领域。
在食品科学领域中，多糖薄层色谱可用于分离和鉴定不同来源的多糖混合物，如豆浆中的异黄酮糖苷和牛奶中的乳糖等。
在生物医学领域中，多糖薄层色谱可用于分离和纯化不同来源的多糖，如草药中提取的多糖和人体内分泌系统分泌的多糖等。
在环境科学领域中，多糖薄层色谱可用于分离和鉴定水环境中含有的多糖，如污水中的多糖和地表水中的藻类多糖等。
综上所述，多糖薄层色谱是一种常用的分离和分析多糖混合物的方法，其基本原理是根据多糖分子在一定条件下的化学性质和物理性质的差异进行分离和鉴定。
多糖薄层色谱广泛应用于食品科学、生物医学、环境科学等领域，有着广泛的研究和应用前景。
第一章实验三糖的分离_薄层层析法
1cm 0.8cm
实验3 糖的薄层层析
一、实验背景
新冠疫情防控——中医药 中药鉴定、真假判断
食品安全 食物中毒——中毒物的野外鉴定
薄层层析技术
薄层层析是一种将固定相均匀涂在薄板上， 以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、 鉴定和定量的一种层析分离技术。
主要有吸附薄层层析和分配薄层层析。
硅胶：
硅胶H（不含黏合剂）（能用腐蚀性显色剂检测）、 硅胶G（含黏合剂）、 硅胶HF254（含荧光物质)、 硅胶GF254（含荧光物质)。
三、实验步骤
1. 玻璃板的准备：取表面干净、平整、光滑的玻璃板， 酒精棉球擦拭，吹风机吹干，备用。
2.硅胶H薄板的制备：2.5 g硅胶H加8.0 ml0.5%CMC溶 液，研磨数分钟后，倒在预先准备好的玻璃板上，铺 开，使浆液分部均匀，放在水平台上，自然晾干。
3. 薄板的活化：105℃,60 min。 4. 薄板的刮分：按图刮去阴影部分的硅胶。
4cm 2cm
糖与硅胶分子的吸附能力取决于糖的分子 量和羟基数目。
不同糖分子在硅胶薄层上展开过程中移动的 距离不同，各种糖移动的速率可用 Rf值表示。
通过不同糖的Rf值不同，即可分离。
二、实验仪器、材料、试剂
玻璃板（5*10cm），层析缸，烘箱，喷雾器。 硅胶H，展开剂，显色剂，混合糖（鼠李糖C6H12O5分子 量164、葡萄糖C6H12O6分子量180）溶液。
薄层色谱法鉴定果汁中的糖-孙文斌-113202F118
薄层色谱法鉴定果汁中的糖班级：11级应生（1）班姓名：孙文斌学号：113202F0118一．实验目的了解薄层色谱法的分离原理，掌握薄层色谱法鉴定果汁中的糖的操作技术。
二．实验原理对多组分的复杂混合物，无论是有机物或无机物，薄层色谱法是有效的分离手段之一。
硅胶是常用的吸附剂，使用与酸性和中性物质的分离，在一定条件下，硅胶对各种糖分的吸附能力不同。
同时，选择适当的展开剂，利用各种糖分的分配系数的差异，从而达到分离。
显色后得到色谱图，与在相同条件下已知糖分的色谱图比较就能鉴定果汁中的糖分。
未知物组分的鉴定是通过在同一块薄层板上分别点上标准样品和未知样品，通过比较斑点的比移值来定性鉴定。
其中比移值Rf计算公式为：Rf原点至斑点中心的距离/ 原点至展开剂前沿的距离由于在相同条件下，物质的Rf值是一定的，因而比移值Rf可以进行物质的定性分析。
分离之后，可以用适当的方法定量测定，如刮下有色斑点。
将被测物浸取后用比色法测定其含量，或用薄层扫描仪扫描直接测出被测物的含量。
三. 实验器材层析缸（筒）（10cm×10cm）；微量注射器，若仅作定性鉴定，则可用玻璃毛细管来替代；薄层板：用10×10cm玻璃板制作硅胶板、可剪截型薄层层析板（10 cm × 10 cm，0.2-0.25 mm铝基硅胶G板，天津市天河医疗有限公司）；吸附剂：硅胶G（(青岛海洋化工有限公司生产，200～260 目，化学纯）展开剂1：正丁醇：丙酮：水＝4：3：1显色剂1：苯胺－二苯胺磷酸（临用时配制：2g二苯胺、2ml苯胺、20ml85％磷酸，与200ml丙酮混溶）显色剂2：：把10ml硫酸缓慢倒入90rnl乙醇中混合冷却，制得10％的硫酸溶液标准糖溶液：麦芽糖、果汁、蜂蜜、果糖、葡萄糖，分别溶于10％异丙醇中，使其浓度为100mg/ml新鲜果汁、蜂蜜、无水乙醇四. 实验步骤（1）制作薄层板将玻璃板洗净至不挂水，晾干后置于干燥洁净处备用。
实验三糖的硅胶G薄层层析
实验三 糖的硅胶 G 薄层层析一． 目的糖类是自然界存在的数量最多的有机化合物，它既是植物躯体和细胞的结构成份，又是 生命活动能量的主要来源，并且与植物体内各类物质的代谢密切相关，分离鉴定植物组织中 可溶性糖的种类及其变化，对了解植物体内的组织代谢和农产品的品质，具有重要意义。
本实验采用硅胶 G 薄层层析法，分离鉴定植物组织中可溶性糖的种类，要求通过本实验， 学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法，掌握吸附薄层层析的原理，操作及其在糖类鉴定 中的作用。
二． 原理植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来，经除去杂质，即可获得较纯的可 溶性糖混合物。
薄层层析是层析法的一种，层析法是利用被分离样品混合物中各组分的物理，化学差别， 使各组分以不同程度分布在两个¡ 相¡ 中，这两个相通常使一个被固定在一定的支持物上的， 称为固定相；另一个是移动的，称为流动相；当流动相流过固定相时，在移动过程中由于各 组分在两相中的分配情况不同，或吸附性质不同，或电荷分布不同，或离子亲和力不同等， 而以不同速度前进，从而达到分离的目的。
薄层层析是一种快速而微量的层析方法，它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上，对 物质进行层析的方法，本实验只讨论吸附薄层层析，即所有支持物是吸附剂（如硅胶粉）， 层析时，主要是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同，因此个组分的移动速度不同， 从而达到分离混合物的目的。
糖为多羟基化合物，具有较强的极性，在硅胶 G 薄板上展层时，糖与硅胶分子有一定的 吸附力。
硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量和羟基数目，不同的糖分子由于分 子量及羟基数的不同，因而它与硅胶分子间的吸附力不同。
造成各种糖分子在展层过程中移 动的距离不同，从而将各种糖分离出来，一般吸附力的大小为：三糖>双糖>己糖>戊糖。
其 中各种糖移动的速率可用 Rf 值表示。
通过与标准糖的 Rf 值比较。
糖的聚酰胺薄层层析
糖的聚酰胺薄层层析一、实验目的1.熟悉掌握薄层层析的实验操作。
2.了解聚酰胺薄层层析法测定糖的原理和方法。
二、实验原理用于层析的聚酰胺有两类，一类是锦纶66(尼龙)，另一类是锦纶6。
在这两类材质中，都含有大量酰胺基团，故统称聚酰胺。
聚酰胺以其－CO－或－NH－与极性化合物的－OH 或＝O 之间形成氢键，从而发生吸附作用。
不同物质与聚酰胺之间形成氢键的能力不同。
在聚酰胺膜上做层析分离时，流动相从薄膜表面流过，被分离物质在溶剂和薄膜之间按分配系数的大小，发生不同速率的吸附与解吸过程，从而使混合物得到有序的分离，使用显色剂显色，得到不同的Rf 值。
三、仪器和试剂仪器带密封盖的层析缸、聚酰胺板、毛细管、100℃的烘箱、电吹风、试管以及试管架等。
试剂1. 糖的标准溶液：木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10mg/mL 水溶液。
2.样品液：多糖的水溶液。
3.展开剂：⑴乙酸乙酯：乙酸：水＝2：2：1 ⑵氯仿：甲醇＝60：40(v：v)4.显色剂：⑴25％~50％硫酸⑵二甲苯1g，苯胺1mL 和85％磷酸5mL 融于50mL 丙酮中。
四、操作步骤1.将聚酰胺板于100℃烘箱活化后冷却至室温，用毛细管点样，点样位置为从聚酰胺板下端1.5cm，两侧2～3cm，每个样品点相距1～1.5cm，斑点直径2mm。
点一次吹干一次。
2.将展层剂于层析缸中平衡。
数分钟后，将聚酰胺板放入。
3.当展层剂移至距上端2～3cm 时，取出聚酰胺板吹干，均匀喷上显色剂，于100℃显色。
4.15～30min 后从烘箱取出，测量Rf 值。
【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
提取多糖的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握多糖提取的原理和操作流程；2. 了解不同提取方法对多糖提取率的影响；3. 学习多糖的鉴定方法；4. 熟悉实验仪器的使用。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、免疫调节等。
多糖的提取方法主要有热水提取法、酸提取法、碱提取法等。
本实验采用热水提取法提取多糖，并利用苯酚-硫酸法对提取的多糖进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：干燥的植物原料（如香菇、大枣、紫菜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、NaOH、HCl、苯酚、硫酸、乙醇、DPPH、卡拉菲指示剂等；3. 实验仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计、容量瓶、移液管、烧杯、漏斗等。
四、实验步骤1. 多糖提取（1）将干燥的植物原料粉碎，过筛，取适量粉末；（2）将粉末加入一定量的蒸馏水中，加热至80℃，保持2小时；（3）冷却后，过滤得到滤液；（4）将滤液加入适量的乙醇，静置过夜，离心，收集沉淀；（5）将沉淀用95%乙醇洗涤，干燥，得到多糖粗品。
2. 多糖鉴定（1）苯酚-硫酸法鉴定①取一定量的多糖粗品，加入苯酚溶液，振荡均匀；②加入硫酸溶液，观察溶液颜色的变化；③与标准溶液进行比较，确定多糖的存在。
（2）DPPH自由基清除法①配制一定浓度的DPPH溶液；②取一定量的多糖粗品，加入DPPH溶液，振荡均匀；③在一定时间后，测定溶液的吸光度；④计算DPPH自由基清除率，评估多糖的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 多糖提取实验结果表明，热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖，提取率较高。
2. 多糖鉴定（1）苯酚-硫酸法鉴定实验结果显示，多糖粗品与苯酚-硫酸溶液反应后，溶液颜色变为深棕色，说明多糖的存在。
（2）DPPH自由基清除法实验结果显示，多糖粗品对DPPH自由基具有清除作用，清除率随着多糖浓度的增加而增加，表明多糖具有一定的抗氧化活性。
六、实验结论1. 热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖，提取率较高；2. 多糖具有抗氧化活性，可作为天然抗氧化剂；3. 本实验为多糖的提取和鉴定提供了一种简单、实用的方法。
糖的薄层层析
本实验是以硅胶G为支持物的薄层层析。在铺 有吸附剂的薄层上，样品经过连续反复的被吸附剂 吸附及展开剂解吸附的过程后，不同的糖因其分子 量不同，羟基数目及醛基、酮基性质的差异，故而 在薄层上以不同速度移动而得以分离。被吸附剂吸 附强及被展开剂解吸附弱的在薄层上移动速度慢， 展开距离短；反之则移动速度快，展开距离长，于 是混合糖液中的各种糖就被分离开来。糖在薄板上 的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。 在相同条件下，对照已知糖的Rf值可对未知糖 进行定性分析。
六、思考题： 显色时，是否可以采用其他的糖显色剂？
薄层层析的种类:
1 吸附薄层层析：化学结构不同的物质，在同一吸附剂上具有 强弱不同的吸附性。薄层层析是利用吸附剂在各种溶剂中对不 同化合物的吸附能力的强弱不同而进行分离。如硅胶G、硅胶H 氧化铝等都属于此类。 2 分配薄层层析：其基本原理与纸层析相同，即由支持剂、固 定相、流动相组成整个层析系统。如纤维素、硅藻土等均属于 此类。 3 离子交换薄层层析：一般采用离子交换纤维素来制作层析薄 板。
5、 记录各斑点的位置、颜色，绘出层析图谱。计算 各标准糖及混合糖中各组分斑点的Rf值，以鉴定混合 糖中糖的组分。 移动速率(比移值)： 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离
五、注意事项
1、 制板时糊状物稀稠合适，铺板迅速，以 保证薄板薄而均匀，表面平整。 2、 样品不宜过浓或过稀。 3、 点样点直径≤3mm，样点间距离≥1cm。 4、 用0.02mol/L 醋酸钠（也可用0.02mol/L 硼酸）代替水来调制硅胶板，可使Rf值较接 近的糖得到更好的分离。
三、实验材料、仪器和试剂
1．实验材料和仪器：玻璃板、天平、电热烘箱、电吹风、 毛细管、层析缸、喷雾器。 2. 试剂 (1)、1%标准糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各 100mg ,分别用75%乙醇定容至10ml。 (2)、混合糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各1g 溶于50ml蒸馏水。 (3)、糖显色剂（苯胺－二苯胺－磷酸显色剂）：称取1g二 苯胺，加入1 ml苯胺。待溶解后加入50ml丙酮，最后加入5 ml H3PO4，边滴加边搅拌。此溶液应透明、无浑浊。 (4)、展开剂：用前配制。 1、正丁醇︰乙酸乙酯︰异丙醇︰冰乙酸︰水=2︰6︰6︰4︰1 2、氯仿︰甲醇=60︰40（V/V） (5)、0.02 mol/L 醋酸钠（含有0.5%的CMC-Na）。
糖类的提取分离与薄层层析分析实验步骤
实验1 糖类的提取分离与薄层层析分析实验简介：薄层层析(thin layer chromatography, TLC)是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪酸、脂肪类、糖类、磷脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
本实验是从水果中提取单糖、双糖和多糖组分，采用硅胶G薄层层析法分析糖类成分。
一、实验目的1．了解并初步掌握从水果中分离提取单糖、蔗糖及淀粉的原理。
2．学习薄层层析的一般操作及定性鉴定的方法。
二、实验原理1．单糖及多糖的提取凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。
单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。
由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。
而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。
因此，单糖和双糖一般可用热水或乙醇将其提取出来。
多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。
在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有复杂的生理功能。
多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。
因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。
2．薄层层析薄层层析的主要原理是根据各组分在溶剂中的溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
糖的分离鉴定可用吸附层析或分配层析，吸附层析常用的吸附剂为硅胶，分配层析常用的支持剂是硅藻土。
在吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂—石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄板上的移动距离为戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。
可溶性糖的提取和薄层层析分离
可溶性糖的提取和薄层层析分离（综合型）一、实验的目的：1、糖类是自然界存在的数量非常多的有机化合物。
它是构成植物躯体和细胞的必要物质，又是生命活动能量的主要来源，与植物体内各类物质代谢密切相关。
分离鉴定植物组织中可溶性糖的种类及其变化，对于了解植物体内物质代谢和农产品的品质，具有重要意义。
2、掌握薄层层析的操作技术。
本实验通过薄层层析法，分离鉴定植物组织中可溶性糖的种类。
通过本实验，学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法，掌握薄层层析的原理、技术及其在糖类定性鉴定中的应用。
3、了解薄层层析的原理、方法及应用。
二、实验原理薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。
这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层分离。
植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来，经去杂质手续除去糖提取液中的蛋白质等干扰糖测定的物质，获得较纯的可溶性糖的混合液。
糖为多羟基化合物。
具有较强的极性，在硅胶G层上展层时，与硅胶分子间有一定的吸附力。
各种糖羟基多少不同，造成吸附力的差异。
该吸附力的大小顺序为：三糖＞二糖＞已糖＞戊糖。
根据吸附层析原理，极性不同的糖在硅胶G层上展层时，具有不同的R f值，通过比较，即可分离开极性不同的糖并且鉴定植物样品提取液中糖的种类。
三、器材与试剂（1）硅胶（2）乙酸乙酯（3）石油醚（4）苯胺——二苯胺——磷酸显色剂：2g二苯胺，加2mL苯胺，10mL85％磷酸，1mL浓盐酸，100mL丙酮，溶解后摇匀，置于棕色瓶中备用。
（5）CMC（6）0.1mol/L 硼酸溶液：称6.18g溶解后定容至 1000mL；每组30mL。
（7）氯仿：冰乙酸：水=30：35：5 （8）1％标准糖溶液（10mg／mL）：葡萄糖，蔗糖，麦芽糖，木糖（9）毛细管（10）碾钵（11）载玻片（12）搅拌棒（13）称量勺（14）电吹风（15）展开缸（16）量筒：100mL （17）恒温水浴（18）涂布器（19）烘箱（20）喷雾器（21）吹风机（22）小麦面粉四、实验步骤1、铺板硅胶G薄板的制备称取硅胶G粉10g，羧甲基纤维素钠0.1g，加入0.1mol/L硼酸溶液35mL，于研钵充分研磨，进行涂布制作，薄层的厚度大约为0.25mm。
糖类分离实验报告
一、实验目的1. 了解糖类分离的基本原理和方法。
2. 熟悉使用纸层析法分离混合糖类。
3. 掌握观察和记录实验现象的方法。
二、实验原理糖类是一类有机化合物，根据其分子结构的不同，可分为单糖、双糖和多糖。
在纸层析法中，利用不同糖类在层析液中溶解度、吸附力以及分子大小等因素的差异，实现混合糖类的分离。
三、实验材料1. 实验试剂：葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、层析液、蒸馏水、碘液。
2. 实验仪器：层析柱、滤纸、镊子、滴管、烧杯、酒精灯、显微镜。
四、实验步骤1. 配制混合糖溶液：分别称取葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉各0.1g，溶于适量蒸馏水中，混合均匀。
2. 制备滤纸：取一张滤纸，剪成与层析柱内径相同的圆形，折叠成锥形。
3. 层析液制备：将适量层析液加入烧杯中，加热至沸腾，待冷却后备用。
4. 层析：将制备好的滤纸锥形插入层析柱，使滤纸尖端低于层析液面。
用滴管将混合糖溶液沿滤纸尖端边缘滴加，控制液滴大小，使液滴均匀分布在滤纸上。
5. 层析液展开：将层析柱放置在水平位置，让层析液自然上升。
观察层析液上升过程中，不同糖类在滤纸上的分离情况。
6. 观察与记录：观察并记录不同糖类在滤纸上的分离距离，以及各糖类的颜色。
7. 碘液染色：将层析后的滤纸取出，滴加碘液，观察并记录不同糖类的染色情况。
8. 清洗与晾干：用蒸馏水冲洗滤纸，去除多余的碘液。
将滤纸晾干，观察并记录各糖类的颜色和分离情况。
五、实验现象1. 葡萄糖、果糖、蔗糖在滤纸上分离明显，其中葡萄糖和果糖的分离距离较近，蔗糖的分离距离较远。
2. 淀粉在滤纸上没有明显的分离，颜色较深。
3. 滴加碘液后，葡萄糖、果糖、蔗糖呈现蓝色，淀粉呈现深蓝色。
六、实验结论1. 纸层析法可以有效地分离混合糖类。
2. 葡萄糖、果糖、蔗糖在层析液中的溶解度、吸附力以及分子大小存在差异，导致其在滤纸上的分离。
3. 淀粉在层析液中的溶解度较低，吸附力较强，导致其在滤纸上没有明显的分离。
七、实验讨论1. 实验过程中，不同糖类在滤纸上的分离距离可能与层析液的选择、滤纸的质地、实验条件等因素有关。
天然产物中多糖的提取、纯化与鉴定
实验三、天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定第一部分多糖的提取、纯化1、目的要求了解多糖提取和纯化的一般方法。
2、实验原理多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。
早在60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。
它可以调节免疫功能，促进蛋白质和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤、抗疡和抗爱滋病(AIDS)等功效。
由于高等真菌多糖主要是细胞壁多糖，多糖组分主要存在于其形成的小纤维网状结构交织的基质中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有机溶剂的特点，通常采用热水浸提后用酒精沉淀的方法，对多糖进行提取。
影响多糖提取率的因素很多，如：浸提温度、时间、加水量以及脱除杂质的方法等都会影响多糖的得率。
多糖的纯化，就是将存在于粗多糖中的杂质去除而获得单一的多糖组分。
一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。
常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀，其中Sevag方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。
本实验采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合摇匀)进行脱蛋白，用DEAE Sepharose 层析柱进行纯化，然后合并多糖高峰部分，浓缩后透析，冻干，得多糖级分。
3、试剂和器材一、试剂平衡缓冲溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。
洗脱液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。
氯仿、正丁醇、乙醇(95％)等，均为分析纯。
二、材料灰树花子实体。
三、器材DEAE Sepharose Fast Flow，旋转真空蒸发仪，摇床，离心机，层析柱：26×10。
4、操作方法一、粗多糖的提取将多糖子实体切碎烘干后称量，采用热水浸提法，每次原料和水之比均为1：5，浸提温度为70℃－80℃，浸提时间3－5h，共提取4次，合并4次浸提液。
多糖提取分离实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取分离的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能。
3. 通过实验，了解不同多糖的提取分离效果。
二、实验原理多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等。
本实验采用水提醇沉法提取分离多糖，利用多糖在水中的溶解度与醇溶液中的溶解度差异，实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：香菇粉末、蒸馏水、95%乙醇、NaOH、HCl、无水硫酸钠、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、电子天平、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、层析缸、薄层层析板、显色剂等。
四、实验步骤1. 香菇多糖提取（1）称取4g香菇粉末，加入200mL蒸馏水，加热至80℃，保持2h。
（2）冷却至室温，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（3）离心分离，取上清液。
（4）将上清液加入适量的无水硫酸钠，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
2. 香菇多糖分离纯化（1）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的NaOH溶液，调节pH至7.0。
（2）加入适量的HCl溶液，调节pH至4.5。
（3）静置过夜，离心分离，取沉淀。
（4）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
（6）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的苯酚，显色后进行薄层层析。
3. 香菇多糖鉴定（1）根据薄层层析结果，鉴定香菇多糖的纯度。
（2）根据苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 香菇多糖提取实验中，香菇多糖的提取率为8.50%，表明水提醇沉法能够有效提取香菇中的多糖。
2. 香菇多糖分离纯化通过调节pH和醇沉，成功分离纯化了香菇多糖，纯度达到90%以上。
3. 香菇多糖鉴定根据薄层层析结果，香菇多糖主要成分为β-葡聚糖。
苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度为1.20mg/mL。
六、实验结论1. 本实验采用水提醇沉法成功提取分离了香菇多糖，提取率为8.50%，纯度达到90%以上。
寡糖提取的实验报告
一、实验目的1. 了解寡糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握从植物材料中提取寡糖的实验操作步骤。
3. 学习使用薄层层析法对提取的寡糖进行定性分析。
二、实验原理寡糖是一类由2-10个单糖分子通过糖苷键连接而成的糖类物质。
它们广泛存在于植物、动物和微生物中，具有多种生物活性，如调节肠道菌群、增强免疫力、降低血糖等。
本实验采用热水提取法从植物材料中提取寡糖，并通过薄层层析法对提取的寡糖进行定性分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：玉米、高粱、大麦等植物原料。
2. 仪器设备：电热恒温水浴锅、天平、研钵、漏斗、抽滤瓶、蒸馏装置、薄层层析装置、紫外灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 植物材料预处理将植物原料洗净，晾干，剪成小块，称取一定量的原料。
2. 寡糖提取（1）将预处理好的植物原料放入研钵中，加入适量的蒸馏水，研磨成浆状。
（2）将浆状物倒入漏斗中，通过抽滤瓶进行抽滤，得到滤液。
（3）将滤液倒入电热恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态30分钟。
（4）将沸腾后的滤液静置冷却，取上清液备用。
3. 薄层层析定性分析（1）将提取的寡糖溶液用适量的蒸馏水稀释，得到一定浓度的样品溶液。
（2）将薄层层析板用铅笔在起始线上标记，用微量进样器将样品溶液点在薄层层析板上。
（3）用适宜的展开剂（如氯仿、丙酮等）进行展开，展开剂前沿距离薄层层析板底部约2cm。
（4）将展开后的薄层层析板取出，晾干，用紫外灯照射，观察样品斑点。
（5）与标准样品斑点进行比较，确定提取的寡糖种类。
五、实验结果与分析1. 实验结果通过薄层层析法，观察到提取的寡糖溶液在薄层层析板上呈现出特定的斑点，与标准样品斑点相符。
2. 结果分析实验结果表明，从植物原料中提取的寡糖成功，且提取的寡糖种类与标准样品相符。
六、实验总结本实验通过热水提取法从植物材料中提取寡糖，并利用薄层层析法对提取的寡糖进行定性分析。
实验结果表明，提取的寡糖种类与标准样品相符，证明实验成功。
在实验过程中，应注意以下几点：1. 植物原料预处理要充分，以提高提取率。
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实验1 糖类的提取分离与薄层层析分析实验简介：薄层层析(thin layer chromatography, TLC)是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪酸、脂肪类、糖类、磷脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
本实验是从水果中提取单糖、双糖和多糖组分，采用硅胶G薄层层析法分析糖类成分。
一、实验目的
1．了解并初步掌握从水果中分离提取单糖、蔗糖及淀粉的原理。
2．学习薄层层析的一般操作及定性鉴定的方法。
二、实验原理
1．单糖及多糖的提取
凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。
单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。
由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。
而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。
因此，单糖和双糖一般可用热水或乙醇将其提取出来。
多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。
在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有复杂的生理功能。
多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。
因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。
2．薄层层析
薄层层析的主要原理是根据各组分在溶剂中的溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
糖的分离鉴定可用吸附层析或分配层析，吸附层析常用的吸附剂为硅胶，分配层析常用的支持剂是硅藻土。
在吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂—石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄板上的移动距离为戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。
若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高糖的分离效果。
薄层层析的展层方式有上行、下行和近水平等。
一般常采用上行法，即在具有密闭盖子的玻璃缸(即层析缸)中进行，将适量的展层溶剂倒于缸底，把点有样品的薄层板放入缸中即可(如图1所示)。
保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸汽是实验成功的关键。
图1 密闭式展层缸
1．缸盖 2．层析缸3．薄层板
4．点样处5．展层溶剂
三、实验用品
1．实验材料：新鲜葡萄或苹果。
2．实验试剂
(1) 标准糖溶液：取果糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖，分别用75％乙醇配制成10mg/mL 溶液。
(2) 标准糖混合溶剂：取上述各种糖，混合后用75％乙醇配制成10mg/mL溶液。
(3) 0.1mol/L硼酸(H3BO3)溶液。
(4) 展层溶剂：①乙酸乙酯：乙酸：水＝2：1：1；②氯仿：甲醇=60：40(V/V)。
(5) 苯胺-二苯胺显色剂：1g二苯胺，1mL苯胺和85%5mL磷酸溶于50mL丙酮。
(6) 1mol/L H2SO4
(7) 1％碘-碘化钾(I-KI)溶液：将碘化钾20g及碘10g溶于100 mL蒸馏水中，使用前需稀释10倍。
(8) BaCO3
3.实验器材
电吹风，层析缸(带密封盖)，烘箱，硅胶G，毛细管(Ф0.5mm)，喷雾器，干燥器，玻璃板(5×10cm)，玻璃棒，烧杯，直尺，铅笔。
四、实验操作
1．糖类的提取：
(1) 还原糖及蔗糖的提取
称取25g新鲜葡萄(去核)或苹果，将其磨碎后转入250mL三角烧瓶中，加入80％乙醇50mL，放在50℃水浴中抽提30min。
5000 r/min离心10 min，收集上清液，沉淀用85％乙醇适量再提取1～2次(视样品不同而定反复抽提的次数)。
收集合并所有上清液，沉淀部分烘干留待提取测定淀粉等多糖用。
(2) 淀粉的水解
取乙醇提取后的沉淀物0.5g，放入三角烧瓶中，加20mL1mol/L H2SO4，盖上表面皿，在沸水浴锅中加热水解，并经常摇动，1.5～2 h后，取一滴水解液放在白瓷板上，加1滴1％I-KI溶液，检查淀粉是否水解完全，如为紫蓝色，则说明水解不完全，再继续水解0.5h，直至水解液对I-KI不显色为止。
样品冷却后，小心将三角烧瓶中的水解液转移至100mL烧杯中，并用蒸馏水冲洗三角烧瓶3次，加BaCO3中和至中性，过滤或离心，上清液水浴蒸发浓缩后用于TLC分析。
2．硅胶G薄层层析分析
(1) 硅胶G薄层板的制备：将制备薄层用的玻璃板预先用洗液洗干净并烘干，玻璃板要求表面光滑。
称取硅胶G粉6g，加入12mL 0.1mol/L硼酸溶液，用玻棒在烧杯中慢慢搅拌至硅胶浆液分散均匀、黏稠度适中，然后倾倒在干净、干燥的玻璃板上，倾斜玻璃板或用玻棒将硅胶G由一端向另一端推动，使硅胶G铺成厚薄均匀的薄层。
待薄板表面水分干燥后置于烘箱内，待温度升至110O C后活化30min。
冷却至室温后取出，置于干燥器中备用(注意：避免薄板骤热、骤冷使薄层断裂或在展层过程中脱落)。
制成的薄层板，要求表面平整，厚薄均匀。
(2) 点样：取制备好的薄板一块，在距底边1.5cm处划一条直线，在直线上每隔1.5～2cm作一个记号(用铅笔轻点一下，不可将薄层刺破)。
用管口平齐毛细管吸取标准样(葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露糖)及糖的提取和水解液量约5～50μg，点样体积约1～5μl,可分次滴加，控制点样斑点直径不超过2mm。
在点样过程中可用吹风机冷热风交替吹干样品。
(3) 展层：将已点样的薄板点样一端放入盛有展层溶剂的层析缸中，展层溶剂液面不得超过点样线，层析缸密闭，自下向上展层，当展层溶剂到达距薄板顶端约lcm处时取出薄板，前沿用铅笔或小针作记号。
60℃烘箱内烘干或晾干。
(4) 显色：将苯胺-二苯胺显色剂均匀喷雾在薄层上，电吹风加热至层析斑点显现，此显色剂可使各种糖显现出不同的颜色。
五、结果
样品中糖的定性鉴定，薄层显色后，根据各显色斑点的颜色相对位置，测算R f值。
将混合样品图谱与标准样品图谱相比较或通过混合样品与标准样品R f值的比较，确定混合样品中所分离的各个斑点分别为何种糖。
六、注意事项
1．自植物中提取糖类时，一般都是利用水和醇进行抽提。
因此能溶于水的色素、蛋白质、丹宁、果胶、有机酸等也会随同糖二起被提取出来，从而干扰糖的分析。
为了除去干扰物，常需使用澄清剂，如中性醋酸铅、碱性醋酸铅、氢氧化钡等。
2．植物体内有许多能水解糖的酶，因此在分离糖时必须适当地破坏或抑制酶的活性，方能提取天然状态下的糖类。
比如采集的新鲜材料应迅速加热干燥或冷冻保存等，使用新鲜材料提取时，宜用沸水和提高乙醇的浓度至85％；如果材料的脂类和色素很高，可用石油
醚浸提除去脂和色素。
3．由于糖是多羟基化合物，极性强容易吸附，故多采用含无机盐水溶液制备硅胶薄板，使硅胶薄层吸附能力降低，斑点集中，对分离有所改善，样品承载量也可有显著提高。
4．制备薄板时，薄板的厚度及均一性对样品的分离效果和R f的重复性影响很大，普通薄层厚度以250μm为宜。
若用薄层层析法制备少量的纯物质时，薄层厚度可稍大些，常见为500～750μm，甚至1～2mm。
5．活化后的薄层板在空气中不能放置太久，否则会因吸潮降低活性。
6．用于薄层层析的样品溶液的质量要求非常高，样品中必须不含盐，若含有盐分则会引起严重的拖尾现象，甚至有时得不到正确的分离效果。
7．样品溶液应具有一定的浓度，一般为1～5μg/μl,样品太稀，点样次数太多，就会影响分离效果，所以必须进行浓缩处理。
七、作业
1．薄层层析与其他层析法比较有哪些优点？
2．本实验在操作过程中有哪些方面是实验成功的关键?
3．分析本实验的层析图谱。