三种乳酸菌混合培养的研究
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mixed cultivation
乳酸菌是重要的食品酿造微生物及益生菌来 源［１－２］，在许多酿造食品及益生菌制剂中常用到了 混合乳酸菌［１，３－４］，但乳酸菌混合培养的研究报道却 很少。因此，研究各种乳酸菌的混合培养对于更 好地生产乳酸发酵食品及益生菌制剂具有重要的 参考意义。本文以 ３ 种常用的乳酸菌，保加利亚 乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌作为研究对象， 对乳酸菌的混合培养进行研究，为相关应用研究 提供参考。
mophilus in 5 L fermentor. The results showed that Lactobacillus acidophilus and Streptococcus thermo philus inhibited the growth of Lactobacillus bulgaricus in mixed cultivation, Lactobacillus bulgaricus and Lactobacillus acidophilus might promote the growth of Streptococcus thermophilus, Streptococcus thermophilus might promote the growth of Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus have no effects on growth of Lactobacillus acidophilus. These results provided a foundation for further studies on mixed cultivation of these three lactic acid bacteria.
培养保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 为 ３．２；由图 ６ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基 混合培养嗜酸乳杆菌和嗜热乳链球菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 值为 ４．２；由图 ７ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养 基混合培养保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热 乳链球菌，最大的 Ｏ Ｄ ６００ 值为 ３．５。
1806-1812 [7] Juana Perez, Thomas W Jeffries. Rols of manganese and
organic acid chelators in regulating lignin degradation and biosythesis of peroxidases by Phanerochaete chrysospori － um. Applied and Environmental Microbiology,1992,58:24022409 [8] 陈洪章.纤维素生物技术.北京:化学工业出版社,2005:
ＳＷ －Ｃ Ｊ－１２ＦＤ 型净化工作台：上海浦东伟净 化设备净化厂；ＴＤ Ｌ－４０Ｂ 型普通台式离心机：上 海安亭科学仪器；Ｙ Ｘ Ｑ －ＬＳ－３０Ｓ１１ 立式压力蒸气灭 菌器：上海博迅医疗设备厂；ＦＡ １００４ 电子天平： 上海精科天平；２００６－Ａ 紫外可见分光光度计：上 海尤尼柯仪器有限公司；Ｎ Ｂ Ｓ Ｂ ｉｏｆｌｏ－１１０ 型 ５ Ｌ 发 酵罐：Ｎ ｅｗ Ｂ ｒｕｎｓｗ ｉｃｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃ ｏｍ ｐａｎｙ。 1.3 试验方法 １．３．１ 菌种活化及种子制备 吸取菌种 １ ｍ Ｌ （－２０ ℃，甘油管保存）于 １０ ｍ Ｌ 种子活化培养基的 １８× １８０ 的试管中，放入干燥器中，用焦性没食子酸及 氢氧化钠反应去除氧气后［６］，于 ３７ ℃恒温培养箱 中静置培养 ２ ｄ 后吸取 ５ ｍ Ｌ 转接于装有 １５０ ｍ Ｌ 培 养基的三角瓶中，在同样的条件下培养 ３０ ｈ。
metabolism by Phanerochaete chrysosporium. Arch Mi－ crobiol,1978,117:277-285
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生物工程
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010 年 第 35 卷 第 3 期
Key words: Lactobacillus bulgaricus; Lactobacillus acidophilus; Streptococcus thermophilus; pure cultivation;
收稿日期： 2009-06-10
＊ 通讯作者
基金项目： 福建省科技计划重点项目(2006H0033)。
作者简介： 伍菱(1974—)，女，助理实验师，研究方向为微生物学。
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3 讨论与结论
由图 １￣ 图 ７ 可知，用浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培 养不同组合的乳酸菌，Ｏ Ｄ ６００ 值都具有较大的差异。 Ｏ Ｄ ６００ 是生物量的表征参数，这说明培养基浓度和 乳酸菌的组合对乳酸菌培养过程中的生物量具有 重要的影响，这种结果可以从以下 ３ 个方面进行 解释。一方面乳酸生长需要大量的营养物质，营 养物质在一定范围的提高有利于增加生物量；另 一方面，乳酸菌的生长又会导致大量的有机酸及 对代谢产物积累，当有机酸及代谢产物积累到一 定程度时就会抑制乳酸菌的生长；乳酸菌的生长 实际是受营养物浓度、酸度和代谢副产物浓度所 制约，营养物越充足，酸度越低，代谢副产物的 浓度越低，所获得的生物量可能就越大。此外， 不同的乳酸菌对营养物质的要求不同，产酸能力 及所代谢的副产物的种类也不相同，因此用相同 的培养基培养不同的乳酸菌，生物量的变化可能 并不相同，混合培养乳酸菌时除了培养基浓度外， 不同乳酸菌的产酸能力、耐酸能力及副产物的种 类等构成的复杂生态关系也是制约混合过程中各 乳酸菌生长的重要因素。
由图 ４ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基混合 培养保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 为 ３．８；由图 ５ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基混合
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图 7 保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌混合 培养的生长曲线
107-113 [9] Frederick S, Archibald. A New Assay for Lignin -type
Peroxidase Employing in the Dye Azure B[J]. Applied and Environmental Microbiology,1992,58(9):3110-3116 [10] T K Kirk, et al. Influence of culture parameters on lignin
中图分类号： TS 201.3 文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2010)03-0007-04
Study on mixed cultivation of three lactic acid bacteria
WU Ling1,2, XIAO An-feng1,2, LI Li-jun1,2, NI Hui1,2﹡
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图 3 嗜热链球菌生长曲线图
培养基培养嗜热链球菌时的 Ｏ Ｄ ６００。 2.2 混合培养
2 实验结果
2.1 单独培养 保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌
单独培养的试验结果，见图 １、图 ２ 和图 ３。
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培养时间/h 图 1 保加利亚乳杆菌单独培养时的生长曲线
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究。实验结果表明，嗜酸乳杆菌及嗜热链球菌会抑制保加利亚乳杆菌的生长，保加亚利乳杆菌
与嗜酸乳杆菌可能对嗜热链球菌的生长具有促进作用，嗜热链球菌对嗜酸乳杆菌具有促进作用，
保加利亚乳杆菌对嗜酸乳杆菌的生长没有促进作用。这种实验结果为混合培养益生菌提供的实
验参考。
关键词： 保加利亚乳杆菌；嗜酸乳杆菌；嗜热链球菌；纯培养；混合培养
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图 2 嗜酸乳杆菌生长曲线图
由图 １ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培养 保加利亚乳杆菌，Ｏ Ｄ ６００ 值大于用其他浓度培养基 培养保加利亚乳杆菌时的 Ｏ Ｄ ６００；由图 ２ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培养嗜酸乳杆菌，Ｏ Ｄ ６００ 值 大于用其他两种浓度的培养基培养嗜酸乳杆菌时 的 Ｏ Ｄ ６００；由图 ３ 可知，用 ３ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基 培养嗜热链球菌，Ｏ Ｄ ６００ 值大于用其他 ３ 种浓度的
1 材料与方法
1.1 材料 德氏乳杆菌保加利亚亚种（俗称保加利亚乳杆
菌 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、嗜酸乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ－ ｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、嗜 热 链 球 菌 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒ－ ｍ ｏｐｈｉｌｕｓ）：中国工业微生物菌种保藏管理中心。
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图 6 嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌混合培养的生长曲线图
图 ４￣ 图 ７ 分别的保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆 菌、嗜热链球菌混合培养的试验结果，由图 ４ 可 知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基混合培养 ３ 种乳酸 菌，Ｏ Ｄ ６００ 大于用其他浓度培养基混合培养这 ３ 种 乳酸菌的 Ｏ Ｄ ６００。
2010 年 第 35 卷 第 3 期
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生物工程
三种乳酸菌混合培养的研究
伍 菱 1,2， 肖安风 1,2， 李利君 1,2， 倪 辉 1,2* (1.集美大学生物工程学院，厦门 361021；2.厦门市食品工程中心，厦门 361021)
摘要： 在 5 L 罐中对保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌进行了单独培养及混合培养研
(1.School of Bioengineering, Jimei University, Xiamen 361021; 2.The Research Center of Food Biotechnology, Xiamen 361021)
Abstract: We have cultured Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus and Streptococcus ther -
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图 5 保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌混合培养的生长曲线
１．３．２ 培养方法 分别在 ５ Ｌ 罐中配制 １ 倍浓度、２ 倍浓度、３ 倍浓度和 ４ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基，按 １０％ 的接种量接入乳酸菌种（混合培养时，各乳酸 菌的菌种按等比例混合），通入氮气使溶氧维持为 ０，控制发酵温度为 ３７ ℃进行培养，定时取样， 测定生物量。 １．３．３ 生物量测定 取发酵液 １０ ｍ Ｌ 于 ３５００ ｒ／ｍ ｉｎ 离心 ５ ｍ ｉｎ，收集上清液作为空白对照，在波长为 ６００ ｎｍ 处，测定发酵液吸光度，每个样品平行测 定 ３ 次，取平均值［７］。
蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、Ｋ ２Ｈ ＰＯ ４、柠 檬 酸 二 铵 、 乙 酸 钠 、 吐 温 ８０、 Ｍ ｇＳＯ ４·７Ｈ ２Ｏ 、 Ｍ ｎＳＯ ４·４Ｈ ２Ｏ 、焦性没食子酸、氢氧化钠、葡萄糖 等均为国药集团生产的试剂。
Ｍ Ｒ Ｓ 培养基［５］：１０ ｇ／Ｌ 蛋白胨，１０ ｇ／Ｌ 牛肉膏， ５ ｇ／Ｌ 酵母提取物，２ ｇ／Ｌ Ｋ ２Ｈ ＰＯ ４，２ ｇ／Ｌ 柠檬酸二 铵 ， ５ ｇ／Ｌ 乙 酸 钠 ， １ ｍ Ｌ／Ｌ 吐 温 ８０， ０．５８ ｇ／Ｌ Ｍ ｇＳＯ ４·７Ｈ ２Ｏ ，０．２５ ｇ／Ｌ Ｍ ｎＳＯ ４·４Ｈ ２Ｏ ，２０ ｇ／Ｌ 葡萄 糖，ｐＨ ６．３。 1.2 主要仪器
乳酸菌是重要的食品酿造微生物及益生菌来 源［１－２］，在许多酿造食品及益生菌制剂中常用到了 混合乳酸菌［１，３－４］，但乳酸菌混合培养的研究报道却 很少。因此，研究各种乳酸菌的混合培养对于更 好地生产乳酸发酵食品及益生菌制剂具有重要的 参考意义。本文以 ３ 种常用的乳酸菌，保加利亚 乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌作为研究对象， 对乳酸菌的混合培养进行研究，为相关应用研究 提供参考。
mophilus in 5 L fermentor. The results showed that Lactobacillus acidophilus and Streptococcus thermo philus inhibited the growth of Lactobacillus bulgaricus in mixed cultivation, Lactobacillus bulgaricus and Lactobacillus acidophilus might promote the growth of Streptococcus thermophilus, Streptococcus thermophilus might promote the growth of Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus have no effects on growth of Lactobacillus acidophilus. These results provided a foundation for further studies on mixed cultivation of these three lactic acid bacteria.
培养保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 为 ３．２；由图 ６ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基 混合培养嗜酸乳杆菌和嗜热乳链球菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 值为 ４．２；由图 ７ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养 基混合培养保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热 乳链球菌，最大的 Ｏ Ｄ ６００ 值为 ３．５。
1806-1812 [7] Juana Perez, Thomas W Jeffries. Rols of manganese and
organic acid chelators in regulating lignin degradation and biosythesis of peroxidases by Phanerochaete chrysospori － um. Applied and Environmental Microbiology,1992,58:24022409 [8] 陈洪章.纤维素生物技术.北京:化学工业出版社,2005:
ＳＷ －Ｃ Ｊ－１２ＦＤ 型净化工作台：上海浦东伟净 化设备净化厂；ＴＤ Ｌ－４０Ｂ 型普通台式离心机：上 海安亭科学仪器；Ｙ Ｘ Ｑ －ＬＳ－３０Ｓ１１ 立式压力蒸气灭 菌器：上海博迅医疗设备厂；ＦＡ １００４ 电子天平： 上海精科天平；２００６－Ａ 紫外可见分光光度计：上 海尤尼柯仪器有限公司；Ｎ Ｂ Ｓ Ｂ ｉｏｆｌｏ－１１０ 型 ５ Ｌ 发 酵罐：Ｎ ｅｗ Ｂ ｒｕｎｓｗ ｉｃｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃ ｏｍ ｐａｎｙ。 1.3 试验方法 １．３．１ 菌种活化及种子制备 吸取菌种 １ ｍ Ｌ （－２０ ℃，甘油管保存）于 １０ ｍ Ｌ 种子活化培养基的 １８× １８０ 的试管中，放入干燥器中，用焦性没食子酸及 氢氧化钠反应去除氧气后［６］，于 ３７ ℃恒温培养箱 中静置培养 ２ ｄ 后吸取 ５ ｍ Ｌ 转接于装有 １５０ ｍ Ｌ 培 养基的三角瓶中，在同样的条件下培养 ３０ ｈ。
metabolism by Phanerochaete chrysosporium. Arch Mi－ crobiol,1978,117:277-285
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Key words: Lactobacillus bulgaricus; Lactobacillus acidophilus; Streptococcus thermophilus; pure cultivation;
收稿日期： 2009-06-10
＊ 通讯作者
基金项目： 福建省科技计划重点项目(2006H0033)。
作者简介： 伍菱(1974—)，女，助理实验师，研究方向为微生物学。
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3 讨论与结论
由图 １￣ 图 ７ 可知，用浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培 养不同组合的乳酸菌，Ｏ Ｄ ６００ 值都具有较大的差异。 Ｏ Ｄ ６００ 是生物量的表征参数，这说明培养基浓度和 乳酸菌的组合对乳酸菌培养过程中的生物量具有 重要的影响，这种结果可以从以下 ３ 个方面进行 解释。一方面乳酸生长需要大量的营养物质，营 养物质在一定范围的提高有利于增加生物量；另 一方面，乳酸菌的生长又会导致大量的有机酸及 对代谢产物积累，当有机酸及代谢产物积累到一 定程度时就会抑制乳酸菌的生长；乳酸菌的生长 实际是受营养物浓度、酸度和代谢副产物浓度所 制约，营养物越充足，酸度越低，代谢副产物的 浓度越低，所获得的生物量可能就越大。此外， 不同的乳酸菌对营养物质的要求不同，产酸能力 及所代谢的副产物的种类也不相同，因此用相同 的培养基培养不同的乳酸菌，生物量的变化可能 并不相同，混合培养乳酸菌时除了培养基浓度外， 不同乳酸菌的产酸能力、耐酸能力及副产物的种 类等构成的复杂生态关系也是制约混合过程中各 乳酸菌生长的重要因素。
由图 ４ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基混合 培养保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌，最大 Ｏ Ｄ ６００ 为 ３．８；由图 ５ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基混合
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107-113 [9] Frederick S, Archibald. A New Assay for Lignin -type
Peroxidase Employing in the Dye Azure B[J]. Applied and Environmental Microbiology,1992,58(9):3110-3116 [10] T K Kirk, et al. Influence of culture parameters on lignin
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文章编号： 1005-9989(2010)03-0007-04
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图 3 嗜热链球菌生长曲线图
培养基培养嗜热链球菌时的 Ｏ Ｄ ６００。 2.2 混合培养
2 实验结果
2.1 单独培养 保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌
单独培养的试验结果，见图 １、图 ２ 和图 ３。
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与嗜酸乳杆菌可能对嗜热链球菌的生长具有促进作用，嗜热链球菌对嗜酸乳杆菌具有促进作用，
保加利亚乳杆菌对嗜酸乳杆菌的生长没有促进作用。这种实验结果为混合培养益生菌提供的实
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关键词： 保加利亚乳杆菌；嗜酸乳杆菌；嗜热链球菌；纯培养；混合培养
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由图 １ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培养 保加利亚乳杆菌，Ｏ Ｄ ６００ 值大于用其他浓度培养基 培养保加利亚乳杆菌时的 Ｏ Ｄ ６００；由图 ２ 可知，用 ２ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基培养嗜酸乳杆菌，Ｏ Ｄ ６００ 值 大于用其他两种浓度的培养基培养嗜酸乳杆菌时 的 Ｏ Ｄ ６００；由图 ３ 可知，用 ３ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基 培养嗜热链球菌，Ｏ Ｄ ６００ 值大于用其他 ３ 种浓度的
1 材料与方法
1.1 材料 德氏乳杆菌保加利亚亚种（俗称保加利亚乳杆
菌 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、嗜酸乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ－ ｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、嗜 热 链 球 菌 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒ－ ｍ ｏｐｈｉｌｕｓ）：中国工业微生物菌种保藏管理中心。
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图 6 嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌混合培养的生长曲线图
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三种乳酸菌混合培养的研究
伍 菱 1,2， 肖安风 1,2， 李利君 1,2， 倪 辉 1,2* (1.集美大学生物工程学院，厦门 361021；2.厦门市食品工程中心，厦门 361021)
摘要： 在 5 L 罐中对保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌进行了单独培养及混合培养研
(1.School of Bioengineering, Jimei University, Xiamen 361021; 2.The Research Center of Food Biotechnology, Xiamen 361021)
Abstract: We have cultured Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus and Streptococcus ther -
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图 5 保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌混合培养的生长曲线
１．３．２ 培养方法 分别在 ５ Ｌ 罐中配制 １ 倍浓度、２ 倍浓度、３ 倍浓度和 ４ 倍浓度的 Ｍ Ｒ Ｓ 培养基，按 １０％ 的接种量接入乳酸菌种（混合培养时，各乳酸 菌的菌种按等比例混合），通入氮气使溶氧维持为 ０，控制发酵温度为 ３７ ℃进行培养，定时取样， 测定生物量。 １．３．３ 生物量测定 取发酵液 １０ ｍ Ｌ 于 ３５００ ｒ／ｍ ｉｎ 离心 ５ ｍ ｉｎ，收集上清液作为空白对照，在波长为 ６００ ｎｍ 处，测定发酵液吸光度，每个样品平行测 定 ３ 次，取平均值［７］。
蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、Ｋ ２Ｈ ＰＯ ４、柠 檬 酸 二 铵 、 乙 酸 钠 、 吐 温 ８０、 Ｍ ｇＳＯ ４·７Ｈ ２Ｏ 、 Ｍ ｎＳＯ ４·４Ｈ ２Ｏ 、焦性没食子酸、氢氧化钠、葡萄糖 等均为国药集团生产的试剂。
Ｍ Ｒ Ｓ 培养基［５］：１０ ｇ／Ｌ 蛋白胨，１０ ｇ／Ｌ 牛肉膏， ５ ｇ／Ｌ 酵母提取物，２ ｇ／Ｌ Ｋ ２Ｈ ＰＯ ４，２ ｇ／Ｌ 柠檬酸二 铵 ， ５ ｇ／Ｌ 乙 酸 钠 ， １ ｍ Ｌ／Ｌ 吐 温 ８０， ０．５８ ｇ／Ｌ Ｍ ｇＳＯ ４·７Ｈ ２Ｏ ，０．２５ ｇ／Ｌ Ｍ ｎＳＯ ４·４Ｈ ２Ｏ ，２０ ｇ／Ｌ 葡萄 糖，ｐＨ ６．３。 1.2 主要仪器